Введение к работе
~5;цргд^иАнтуальность проблемы. Значительное место в инфекционной патологии человека занимают заболевания, вызванные вирусами гриппа и гепатита А. Разработка средств профилактики данных инфекций - важная задача современной медицины, успешное решение которой, по ряду социально-экономических причин, наиболее актуально для Среднеазиатского региона.
Имеющиеся сведения о достаточно высокой профилактической эффективности интерферона №Н) при гепатите А и гриппе указывают на перспективкуп значимость его иедишшских препаратов, а тоххе индукторов ІІіН-а для предупреждения и лечения этих инфекций (Ф.И.Ершов и др., IS85; Л.К.Браханова и др., 1985).
Основными критериями оценю: эффективности интерфероногеков являются их интерферониндудирувдая и противовирусная активности, проявляющиеся в различных биологических системах (Н.П.Чиков и др., 1988).
Из нескольких сотен известных к настоящему времени индукторов *й11-а только немногие отвечают требованиям,выдвигаемым к данным препаратам. Выраженной интерферониядуїшрущей и противовирусной активностью обладает ряд низкомолекулярных соединений, среди которых наиболее известен тилорон (отечественный аналог амиксин) (с.ії.і&ог п rt.F.Kriiger IS70; З.Б.Тазулахова и др., IS85). ііз высокомолекулярных соединений особое место занимают природные полинуклеотиды: дронзевые и фаговые дс?НК (А.БДкак и др., IS85; И.З.Трофимов и др., 1987; В.Б.Уибрашко и др., IS87). Па основе природного полифенола госсипола были синтезированы многочи еле иные соедішения (Таш) с выраяенными интерферокиндуци-руздими и противовирусными эффектами (А.М.Сайиткулов, ISC5). Поиск иктерфероногенов среди известных фар!.іКопеііннх препаратов, -проко применяемых в клиническое практике ,1І0КгЗАЇЇ. что в пестую
групду интерфероногенов иогут быть отнесены такке вазрдилатато-ры: дибазол, папаверин, дипиридамол (A.c.Galabov, U.Hastikova 1984; С.С.Григорян И др., IS87).
Б доклинических исследованиях был определен круг наиболее перспективных отечественных индукторов ИШ-а (ларифан, рвдостин, рифастин, госсипол, ГБК, ыегасин, амиксин и др.), которые рекомендованы к фармакотоксикологическим и клиническим испытаниям. В многочисленных исследованиях показана их эффективность в от-ношеиии ряда вирусных инфекций. В частности, препараты ыегасин и госсипол используют в клинической практике при лечении герпетических инфекций и кояных заболеваний (М.А.Сашлш и др., 1982). В качестве ишунсдепрессанта при пересылке почек пршленяіот препарат ГЕК (А.С.Садыков и др., IS63), а при лечении кератитов -полудан (А.А.Каспаров, З.В.Попова, 1978; U.^.Краснов и др., 1982).
В настоящее время получены убедительные данные об эффективности препаратов дсИПС при лечении больных хроническими рецидивирующими вирусташ дерматозами (Дз.К.Бранта, Г.Я.Фелдыане, IS89) и герпетическими инфекциями (М.А.Сампш и др., 182).
До настоящего времени не изучено влияние индукторов ІШі-а на продукцию вируса гепатита А.
Данные .жтературы о влиянии отечественного препарата амиксин на экспериментальную гриппозную инфекцию и гепатит :заеЛ малочисленны. При профилактическом введении амиксила не учитывался путь проникновения возбудителя в организм .тлвотных и не предпринимались попытки защитить входные ворота инфекции.
Отсутствуют сведения о влиянии агаксика на иммунный и ш-терфероновый статус экспериментальных ;лізотнкх л человека.
Зсе вышеизложенное побудило нас провести комплекс исследо-
ваний» актуальность которых определяется необходимостью поиска эффективных при вирусных инфекциях отечественных интерфероноге-нов.
Цель и задачи исследований. Цель наших исследований заключалась в сравнительном изучении эффективности отечественных индукторов интерферона в отношении вируса гепатита А в культуре клеток и экспериментальных вирусных инфекций мышей.
Для достижения поставленной цели осуществляли реаеіше следующих задач:
-
Апробация в качестве экспериментальной модели вирусного гепатнта A in vitro культуры клеток Frhk-4 (клетки почки эмбриона макаки резус) инфицированных Еирусом гепатита А (штамм HAS-15 ).
-
Изучение влияния некоторых отечественных клинически перспективных индукторов ИФН-а (ларифана, ришастпла, ридостпна, Таш-1,2,3,4, аминсика, дибазола и папаверина) на продукцию вируса гепатита А а культуре клеток почки эмбриона макаки „резус.
-
Изучение влияния а.%таксана на йНтерфероноБіїй статус здоровых я знсгицировашсых вирусом гепатита икшей.
4. Изучение яродукции ЙОН-а в организме мышей при интрана-
іальном введении амиксина и его ашяние на экспериментальную
'ршшозную инфекцию у мышей.
Ь„ Оптимизация схем профилактического введения индукторов йН-а (амиксин, дсРНК, папаверин) при гриппе и гепатите шалей.
6, Оценка влияния амиксика на иммунную и иятерфероновую истему человека.
Научная новизна. Впервые изучено влияние отечественных ин-укто^ов УШ-& лариГака, рядостина, оис>стина„ Таш-1,2,3„4; шксияа, дибазола и падазерина на культуру клеток почки эмб-
- 4 -риона макаки резус и продукцию вируса гепатита А в этой клеточной культуре. Показана способность папаверина полностью подавлять продукцию вируса гепатита А в данной клеточной культуре.
Впервые установлено, что аииксин в субтоксичёской дозе стимулирует продукцию вируса гепатита А в клетках почки эмбриона макаки резус.
Показано .влияние энтерально введенного амиксина на динамику продукции сывороточного интерферона и интерфероновый статус у мышей,энтерально инфицированных вирусом гепатита мышей.
На модели энтерального гепатита мышей показан пролонгированный защитный эффект амиксина при однократном пероральном его введении.
Установлено влияние папаверина на штерферониндуцирующую и противовирусную активность амиксина и дсРНК при сочетанном профилактическом их введении (на-модели энтерального гепатита и энцефаломиокардита мышей).
Впервые исследованы закономерности синтеза эндогенного интерферона в крови и органах (мозг, легкие) мышей при кнтраназаль-ном введении амиксина. Получены новые данные о развитии состояния гилореактивности в тканях легкого в ответ на иытраназ&тьное введение амиксина. Показана зависимость динамики продукции сывороточного ЖК-а от дозы и кратности введения амиксина в верхние дыхательные пути.
На модели экспериментальной гриппозной инфекции у мышей впервые показан профилактический эффект амиксина при интрана-зальнои его введении.
Впервые изучено влияние длительного приема амиксина на иммунный и интерфероновый статус ладей.
Практическая значимость оаботы. Выявление в эксперименте эффективных в отношение гепатита А индукторов Ш1-а (разрешенных Фармкомитетом для клинического испытания)в качестве профилактического н лечебного средства при вирусном гепатите А у людей.
Экспериментальное изучение природных индукторов ІШі-а, полученных на основе госсипола (Таш-1,2,3,4), обладающих низкой токсичностью и проявляющих тенденцию подавлять продукцию вируса гепатита А в клеточной культуре, дает возкоаюсть рекомен-ховать их для дальнейшего углубленного доклинического и фарма-м-токсикологического исследования.
Выявленная в экспериментах in vitro способность субток-:яческой дозы аїлаксина значительно стимулировать продукцию вдру-:а гепатита А дает основание рекомендовать его в качестве аген-а. повышающего накопление вируса гепатита А при производстве пецифических диагностикумов и вакцины.
Установленная на модели экспериментальной гриппозной ип-екпии профилактическая эффективность аыиксина при интраназаль-ом введении позволяет рекомендовать его для клинических ИСПЫ-угл'л в качестве средства экстренной профилактики гриппа у одей.
Учитывая результаты углубленного клинического изучения піяшія амиксина на систему интерферона у людей, считаем целе-юбразным ограничить его пероральное применение 4-5 кратным іенедельннм приемом.
Изменения,внесенные нами в методику определения инторте-новэго статуса у людей и составленные на основании их мето-ческие рекомендации: "Определение интерферояового статуса в льно.1 крови у лэдей при массовьж обследованиях",-позволяют
-6 - '
проводить массовые клинические и эпидемиологические исследования с большей эффективностью и с меньшими материальными затратами о Особый интерес представляет возможность использования данного метода в педиатрии, поскольку исключав? необходимость забора крови из вены.
Разработанные нами рекомендации нашли практическое применение в клинической практике и научно-исследовательской pa-. боте0 что подтвервдено актами об использовании предложения, полученными из Детской городской клинической больницн й 2 HM.U.e.FycaKOBa, г„Ыосква; Института педиатрии ЫЗ PCSCP; Львовского IEK эпидемиологии и гигиены КЗ УССР.
Полодения выносимые на зашиту.
-
Для целенаправленного поиска препаратов эффективных при-вирусном гепатите А шает быть использована культура клеток почки эмбриона макаки резус (линия prhic-4 ) инфицированных вирусом гепатита А (штамм has-15 )
-
Отечественные индукторы интерферона ридостин, рифастин, дибазол и папаверин обладают противовирусной активностью в отношении вируса гепатита А и достоверно подавляззт ародукцию этого Вируса В КуЛЬТуре КЛеТОК Prhk-4
-
Амиксин наиболее эффективен как средство экстренной . профилактики при однократной пероральноц введении мышам, икфи-цпроБанным вирусом гепатита.
Экспериментально установлено, что профилактическое введение амиксина приводит к коррекции интерферокового статуса у ин-фицировашшх вирусом гепатита мышей.
4. Для профилактики острых респираторных зирусных цнг.ек-
ций шиксш целесообразнр^водить иктраназалько. "/роаень и ди
намика накошіешш гштерферона при это;л ь сыворотке крови зав::-
сят от дозы и кратности введения препарата.
5. Чувствительность лвдей к деііствіга амихспна различна и зависит от исходного состояния пьглункоЛ и иктерфероновой системы организма. Профилактическое введение амикскна влияет на ди-камш;у продукции сывороточного интерссерона и антерфероновый статус ЛВДЄЙ.
Продолжительное введение амикгсша (до 10 недель) не вызывает выходящих за рыки нормальных значений изменений количественных показателей иммуноглобулинов классов ie A, ig м, ig с, Т- и 3-лпмоцптов крови.
Апробация работы. Результаты исследований были долояены !ia объединенном заседании научішх сотруднш;ов Каучно-исследователь-ского института вирусологии Ііинистерства здравоохранеїшя УзССР . (г.Ташкент, ISSOr.), на научной конференции отдела Интерферона Научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиоло-гии им.Н.а.Гамалеи АІШ СССР (г.Москва, 190г.).
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 173 страницах машинописного текста и состоит аз введеная, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, списка литературы. Включает 22 таблицы, иллюстрирована гЗ рисунками.