Введение к работе
Актуальность проблемы. Геморрагические заболевания вирусной этиологии играют значительную роль в инфекционной патологии человека. В настоящее время сохраняется постоянная угроза возникновения вспышек геморрагических лихорадок во многих странах. Вспышка заболевания лихорадки Эбола в 1995 - 96 годах подтверждает это. Хотя лихорадки, вызываемые возбудителями семейства Filoviridae вирусами Марбург и Эбола, эндемичны для некоторых районов Африканского континента, развитие туризма и расширение экономических связей делают эти инфекции потенциально опасными хтя территорий других стран.
О иммунопатогенезе лихорадки Марбург в настоящее время известно очень мало. Тем более для защиты медперсонала работников карантинных служб и лабораторий, проводящих работы с этими возбудителями, необходимо иметь эффективные средства профилактики. Для этого важно изучить механизмы взаимодействия иммунной системы организма'с инактивированным вирусом, препаратами вирусных белков, а также механизмы формирования специфического иммунного ответа и факторы, злияюшие на этот процесс.
Цели и задачи исследования. Целью настоящего исследования являлось изучение ' иммуногенных и протективных . свойств цельновирионных, субъединичных и рекомбинантных препаратов вируса Марбург, а также комбинации этих препаратов с веществами иммуностимулирующей природы. При решении поставленной цели решались следующие задачи:
- получение препаративных количеств очищенного вируса Марбург и изучение иммуногенных и протективных свойств инак-тивированного препарата вируса Марбург;
- исследование показателей неспецифичесхого и специфического иммунного ответа при сочетанном использовании препарата вируса Марбург с иммуномодуляторами; .
- изучение иммуногенных и протективных свойств препаратов белков NP, VP40, VP24 и GP вируса Марбург с использованием двух видов лабораторных животных;
- изучение иммунобиологических свойств синтетических пептидов -аналогов участка белка GP вирусов Эбола и Марбург.
Научная новизна работы. В результате проведенной работы получены данные о развитии специфического клеточного, гуморального , и протективного ответов при иммунизации препаратами вируса Марбург. В результате выполненных исследований были изучены показатели иммунитета при сочетанном применении очищенного инактивированного вируса Марбург с иммуномодуляторами различной природы. При проведении исследований были впервые получены препараты белков VP40 и NP вируса Марбург. Впервые были получены данные о динамике таких показателей иммунного ответа, как интерферон, интерлейкины I и 2, фактор некроза опухоли и активности натуральных киллеров при иммунизации лабораторных животных препаратами белков NP, VP40, VP24 и GP вируса Марбург, а также препаратом инактивированного вируса Марбург. Показано, что препарат белка VP40 обладает низкой иммуногенной и протективной акпшкостью. Иммунизация лабораторных животных препаратом белка NP приводила к формированию иммунного ответа, выражавшуюся в продукции вирусспецифических антител и формировании клона лимфоцитов, способных пролиферировать при повторной встрече с антигеном. Препарат белка NP обладает протективными свойствами. Были изучены иммуногенные и протективные свойства белка VP24. Показано, что препарат белка GP вируса Марбург в экспериментах in
vivo супрессирует пролиферативную активность спленоцитов при их стимуляции митогенами. С целью изучения механизма иммуносупрессии при иммунизации препаратом белка GP был изучен иммунный ответ на введение синтетических пептидов, аналогов участка белка GP вирусов Марбург и Эбола, имеющего высокий процент гомологии с иммуносупрессявным доменом белка р15Е ретровирусов. В экспериментах in vivo эти пептиды супрессировали активность натуральных киллеров и продукцию интерлейкина I.
Практическая ценность работы. Охарактеризован и депонирован з Государственную коллекцию вирусов при Институте вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН штамм "Рорр" вируса Марбург ( номер депонента 946). В результате проведенных исследований был разработан и запатентован "Способ получения концентратов вирусов, вызывающих геморрагические лихорадки и обладающих иммуногенной и протективной активностью" (номер патента RU 2029561 О).
Апробация работы. Материалы диссертации были представлены или доложены на следующих конференциях: "IXth International Congress of Virology", Glasgow, Scotland, 1993; Российской научной конференции "Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций" Саратов, 1993 г; XXVth International Conference of Comparative and Applied Virology, Montreal, Canada, 1994; "III International Congress of Immunorehabilitation", Dagomis, Russia, 1994; "New approaches of vaccine Development", NAVD'95, Vienna, 1995: "Xth International Congress of Virology", Jerusalem, Israel, 1996.
По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, получен 1
патент.
""* Объем и структура диссертации.
Диссертация состоит из введения и трех глав: обзора литературных данных (глава 1), материалов и методов исследования
(глава 2), результатов и обсуждения (глава 3), а также заключения, выводов и списка цитируемой литературы (234 ссылки). Работа изложена на 216 страницах машинописного текста, включая 28 рисунков и 19 таблиц.
Основные результаты, изложенные в диссертации, получены при в соавторстве с сотрудниками ГНЦ ВБ "Вектор к.м.н. Игнатьевым Г.М., Стрельцовой М.А., Кашенцевой Е.А., Сабировым А.Н., к.х.н. Самуковым В.В., к.б.н. Акименко З.А. и сотрудником Института Вирусологии г.Марбург д-ром Беккером С.
Использованные сокращения: БСА-бычий сывороточный альбумин; ВОВ-вирус осповакцины; ИАМ-инактивированный антиген Марбург; ИЛ-1, ИЛ-2-интерлейкины I и 2; ИНФ - интерферон; ИС-индекс стимуляции; ИФА-иммуноферментный анализ; ЛПС-.типополисахарид; НК клетки- натуральные киллеры; РБТЛ-реакция бластной трансформации лимфоцитов; СПГВМ-синтетический пептид -аналог участка гликопротеина вируса Марбург; участок имеет гомологию с иммуносупрессивным доменом белка р15Е ретровирусов; СПГЮ-синтетический пептид - аналог участка гликопротеина вируса Эбола; участок имеет гомологию с иммуносупрессивным доменом белка р15Е ретровирусов; ФГА-фитогемагтлютинин; ФНО-фактор некроза опухоли.