Введение к работе
1.1. Актуальность темы. Болезнь Ауески (псевдобешенство)
регистрируется с начала текущего столетия на всех континентах , кроме Австралии, и наносит большой экономический ущерб животноводству даже развитых стран, особенно с интенсивно развитым свиноводством и пушным звероводством. Так, в Англии стоимость затрат на выполнение программ по борьбе с основными болезнями свиней за 30 летний период (1958-1989 г.) составили: по ящуру - 39,5 , болезни Ауески -28,0 , везикулярной болезни свиней -14,6 и классической чуме свиней - 5,9 млн.фунтов стерлингов (Базингер, 1990 г.).
Болезнь Ауески необходимо рассматривать, как опасное инфекционное заболевание, которое может протекать в острой, подострой, хронической и латентной формах.
Вирус болезни Ауески может быть искоренен проведением крупномасштабных серологических исследований для выявления свиней -вирусоносителей и последующей их выбраковки. Эта программа успешно используется в ряде европейских стран ( Англия, Дания и др.). При данной стратегии борьбы существует проблема дифференциации вакцинированных и инфицированных свиней.
Опосредованные оценки защищенности животных, основанные на нейтрализующей способности антисыворотки считаются наиболее важными (Thalmann et al. 1987) и в некоторых странах выступают в качестве референтного показателя иммунного статуса вакцинированных животных. В связи с этим представляют практический интерес исследования направленные на изучение сравнительной эффективности иммунного воздействия одинаковых антигенов на стадии развитого гуморального иммунитета (реакция нейтрализации).
Современные меры борьбы с болезнью Ауески в России и ряде других стран основываются на осуществлении комплекса ветеринарных мероприятий. Вакцинация является одной из наиболее эффективных мер, поскольку обеспечивает формирование иммунитета в популяции восприимчивых животных.
Процесс изготовления вакцин включает ряд этапов, таких как выбор штамма вируса, его нароботка, составление препарата н испытание его иммуногенности. Для выбора перспективного штамма, позволяющего получить эффективный конечный продукт, необходимо иметь многосторонние штаммовые характеристики .
Опыт исследовательской работы показывает, что должны учитываться
следующие параметры: і
Стабильность структурного состояния антигена (сохранение целостности вириона при воздействии различных физико-химических факторов, обусловленных технологией производства вакцины).
Эффективность гетерологичных иммунных реакций внутри данного типа вируса, т.е. свойство антигена индуцировать возможно более широкий спектр гетерологичных иммунных ответов.
Оценка защищенности животных по нейтрализующей способности антисывороток считается наиболее объективной, и в некоторых странах принята в качестве референтного показателя иммунного статуса вакцинированных животных.
В последнее время появились ряд сообщений о гетерогенности штаммов вируса болезни Ауески и несоответствия вакцинных эпизоотическим штаммам. Выделенные на территории СНГ штаммы вируса болезни Ауески недостаточно охарактеризованы с указанных выше позиций.
Поэтому, было актуально изучение иммунобиологических свойств доступных нам штаммов вируса болезни Ауески и выбор, после сравнения полученных характеристик, наиболее перспективных из них, для производства вакцин.
1.2. Цель и задачи исследований. Целью наших исследований являлся
выбор наиболее перспективного для получения эффективных вакцин штамма
вируса болезни Ауески. Принимая во внимание актуальность изучения
иммунобиологических свойств штаммов вируса болезни Ауески и
усовершенствование средств и методов диагностики болезни , перед нами были поставлены следующие задачи:
-Определить иммунобиологические свойства штаммов вируса болезни Ауески.
- Установить уровень накопления вируса болезни Ауески в органах и тканях
животных;
- Определить сроки выделения вируса болезни Ауески во внешнюю среду с
выдыхаемым воздухом;
-Изучить устойчивость штаммов вируса болезни Ауески к различным физико-химическим факторам;
-Определить диагностическую ценность различных модификаций постановки реакции нейтрализации;
- Изучить антигенное родство штаммов вируса болезни Ауески;
- Провести анализ генома штаммов вируса болезни Ауески методом
рестркционно-эндонуклеазного анализа;
-Разработать способ индикации вируса болезни Ауески .
1.3. Научная новизна. В сравнительном аспекте изучены антигенные,
некоторые физико-химические и биологические свойства штаммов выделенных на
территории СНГ. Изучены иммунобиологические свойства 9 штаммов вируса
болезни Ауески, различающихся по адаптационным, патогенным и антигенным
свойствам.
Усовершенствован метод постановки реакции нейтрализации, благодаря чему появилась возможность надежно обнаруживать небольшие колличества антител, а также более успешно дифференцировать штаммы вируса болезни Ауески.
Разработана методика выделения и очистки геномной ДНК и рестрикшгонно-эндонуклеазного анализа вируса болезни Ауески.
Получены моноклональные антитела к вирусу болезни Ауески и изучены их свойства.
Впервые изучена болезнь Ауески у верблюдов и определено накопление вируса в органах и тканях этих животных.
1.4. Практическое значение. Проведенные исследования позволили
охарактеризовать штаммы вируса болезни Ауески выделенные на территории
СНГ в сравнении с европейскими и предложить наиболее подходящий из них для
получения вакцинных препаратов.
Оптимизированная методика реакции нейтрализации, расширяет шкалу измерения антигенного спектра и позволяет более достоверно 'обнаруживать антигенные различия между штаммами.
Разработана методика выделения и очистки геномной ДНК вируса болезни Ауески для анализа полевых изолятов.
Разработан метод индикации вируса болезни Ауески в органах и тканях животных и объектах внешней среды.
1.5. Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые на зашиту :
1.5.1. Результаты сравнительных исследований антигенных свойств и некоторых признаков, характеризующих устойчивость структурного состояния вирионов штаммов вируса болезни Ауески (МК-25, БУК-628, БРАН, Женевский, Арский, "К"-ВИЭВ. УНИИЭВ-18ВС. Мараштанский. Туркменский) к воздействию физико-химических факторов. 1. 5.2. Показатели антигенного родства штаммов вируса болезни Ауески. 1.5.3. Результаты позволяющие дать оценку диагностической ценности модификаций постановки реакции нейтрализации.
1.5.4.Данные рестрикционно-эндонуклеазного анализа генома вируса болезни Ауески. свидетельствующие о существовании среди изолятов генетической гетерогенности.
1.6. Апробация работы. Основные материалы диссертации изложены на
научных конференциях ВНИИЗЖ г. Владимир (1995г), втором международном
симпозиуме по искоренению вируса болезни Ауески, Копенгаген (1995).
ІЛ.Публикашш. По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ.
1.7.0бъем и структура работы. Диссертация изложена на 110 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических предложений, иллюстрирована 17 таблицами и 6 рисунками. Список используемой литературы включает 117 наименований, из них 44 источника на русском языке. 73 работы зарубежных авторов.