Введение к работе
Актуальность проблемы. Лихорадка Марбург является тяжелым высококонтагиозным заболеванием с высокой смертностью. Отсутствие средств быстрой диагностики, профилактики и лечения при расширении международных связей создают угрозу проникновения вируса на неэндемичные территории. Кроме того, существует целый ряд вирусных геморрагических лихорадок, клиника и патогенез которых имеет общие черты с геморрагической лихорадкой Марбург и которые достаточно широко распространены в некоторых районах мира. Специфические средства лечения и профилактики геморрагических лихорадок, как правило, отсутствуют. В настоящее время очень мало известно об иммунопатогенезе лихорадки Марбург и филовирусных геморрагических лихорадок в целом. Однако, не вызывает сомнения что иммунологические факторы играют важную роль в патогенезе этих заболеваний. Поэтому при создании профилактических препаратов важно изучить механизмы взаимодействия иммунной системы организма с живым и инактивированным вирусом, а также механизмы формирования иммунного ответа и факторы, влияющие на этот процесс.
Цели и задачи исследования. Целью настоящего исследования было определение подходов к созданию протективного инактивированного препарата вируса Марбург, оценки его иммуногенных свойств, изучение иммунопатогенеза экспериментальной лихорадки Марбург у иммунизированных этим препаратом животных, а также исследование возможности лечения этого заболевания в эксперименте.
В связи с этим в задачи исследования входило:
1. Получение инактивированного препарата вируса Марбург.
2. Оценка протективных и иммуногенных свойств
инактивированного препарата вируса Марбург.
3. Исследование динамики изменения иммунологических
показателей у животных при моделировании лихорадки Марбург.
-
Изучение показателей неспецифического и специфического иммунного ответа у животных, иммунизированных инактивированным препаратом вируса Марбург, после заражения их гомологичным вирусом.
-
Изучение возможности лечения экспериментальной лихорадки
і Марбург некоторыми противовирусными препаратами и препаратами
-антагонистами фактора некроза опухоли.
Научная новизна. Показано, что иммунизация животных инактивированным препаратом вируса Марбург приводит к формированию специфического клеточного и гуморального иммунного ответа. Исследование иммуногенных свойств инактивированного препарата вируса Марбург на морских свинках и обезьянах позволило установить различную динамику изменений показателей иммунного ответа у зараженных иммунных погибших и выживших животных. Впервые показано,' что процесс развития лихорадки Марбург у морских свинок и обезьян сопровождается повышением активности неспецифических факторов иммунитета (ФНО, интерферона, НК) на 5-7 сутки после заражения, которое продолжается вплоть до момента гибели животных. Показано, что препараты интерлейкина-2 оказывают негативное влияние на течение лихорадки Марбург. Впервые показано, что применение препаратов -антагонистов фактора некроза опухоли при лихорадке Марбург оказывает терапевтический эффект в экспериментах на животных.
Практическая ценность работы. Получен патент Российской Федерации "Способ получения концентратов вирусов, вызывающих геморрагические лихорадки и обладающих иммунологической и протективной активностью" (RU 2029561 О). Получен протективный препарат против геморрагической лихорадки Марбург, который
прошел доклинические исследования согласно РД 42-28-8-89 (отчет о
"Доклинических испытаниях..." прилагается). Препарат удовлетворяет
по своим характеристикам требованиям иммунологической
безопасности. Для углубленного изучения качества
инактивированного препарата вируса Марбург были проведены исследования показателей иммунитета у привитых животных после заражения. У части иммунных животных была установлена иммунологическая реакция, потенцирующая развитие заболевания. Полученные материалы были использованы в "Отчете о доклинических испытаниях вакцины лихорадки Марбург", который был представлен в Комитет по МИБП. В своем заключении Комитет по МИБП согласен с мнением авторов о качестве инактивированного препарата против геморрагической лихорадки Марбург и важности дополнительных исследований при оценке специфической активности и безопасности вакцинных препаратов (выписка прилагается). .
Апробация работы. Материалы, вошедшие в диссертационную работы, докладывались или были представлены на: Международном симпозиуме "100 лет вирусологии". Санкт-Петербург, 1992. IX . Международном конгрессе по вирусологии , Глазго, 1993.
Международной конференции "Новые направления в развитии вакцин" (NAVD'95). Вена, 1995. YIII Международной конференции антивирусных исследований, Санта-Фе, Нью-Мексика, США, 1995. По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, получен I патент.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения и семи глав: обзора литературных данных (глава 1), материалов и методов исследования (глава 2), результатов собственных исследований и обсуждения (главы 3-8), а также выводов и списка цитируемой литературы (178 ссылок). Работа изложена на 181 странице машинописного текста, включая 27 рисунков и 11 таблиц.
Основные результаты, изложенные в диссертации, получены в соавторстве с сотрудниками ГНЦ ВБ "Вектор" к.м.н. Игнатьевым Г.М.. к.б.н. Агафоновым А.П., Кашенцевой Е.А., н.с.лаборатории электронной микроскопии Жуковой Н.А.
Использованные сокращения: А Т- антитела; БСА - бычий сывороточный альбумин; ВМ - вирус Марбург; ГЛМ - геморрагическая лихорадка Марбург; ДФО - дефероксамин; ИАМ - инактивированный антиген вируса Марбург; ИПМ - инактивированный препарат вируса Марбург; ИЛ-1 - интерлейкин-1; ИР( - индекс резистентности; ИО -иммунный ответ; ИС - индекс стимуляции; ИФА - нммуноферментный анализ; ИФН - интерферон; Кон А - конканавалин А; НК - натуральные киллеры; РБТЛ - реакция бластной трансформации лимфоцитов; РД -регламентирующий документ: СП - спонтанная пролиферация; СПЖ -средняя продолжительность жизни павших животных; ФНО - фактор некроза опухоли.