Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕШ. Проблема вирусных поражений растений в последние годи привлекает все большее внимание исследователей в связи с тем огромным уроном, который они наносят сельскому хозяйству. Снижение урожая и ухудшение его качества определяют настоятельную необходимость изучения болезней растений.
Среди фитовирусов, вызывающих большую часть болезней растений, значительное место занимают потивируеы, которые поражают широкий круг растений, в том числе зернобобовые культуры, включая многие сорта кормового люпина. Эта культура выращивается почти на всей территории Украины, отличается высокой урожайностью на обедненных песчаных и супесчаных почвах с повышенной кислотностью. Зеленая масса люпина богата белками, содержит полный набор аминокислот. Кроме того, люпин представляет собой мощный фактор накопления биологического азота в почве, ч^о делает его уникальной агротехнической культурой, повышающей естественным путем плодородие почв / Довбан, 1987 /.
Исследованиями, проведенными в Квропе, Америке, Австралии, установлено, что наиболее распространенной болезнью люпина является узколистность, вызванная одним из представителей потивиру-сов - вирусом желтой мозаики фасоли / ВНМФ /.Известны и другие вирусы, способные поражать люпин, однако их вредоносность несколько ниже / Якушева, Шмидт, I9bb /.
Как показали исследования отечественных ученых / Краев, 1966; Сергеенко, 1982; Ровков,1989 /, пораженкость люпина вирусом желтой мозаики фасоли на территории Украины в отдельные годы составляла 80-100%, при этом потери урожая зерна к зелен й массы достигали 95.
Несмотря на то, что возбудитель узколистности люпина известен, глубокий всесторонний анализ его популяции до настоящего времени не проводился, не выяснена степень пораженнооти семян, одного из основных источников инфекции на посевах, что затрудняет осуществление контроля за распространением пЖМФ; не разработаны эффективные мет-ды экспресс-диагностики инфекции, которые можно было, бы применить в семеноводческих опытных станциях, а также при .селекции вирусоустойчивых сортов.
Сказанное определяет актуальность глубокого изучения природы возбудителя узколистности люпина, особенностей штаммов, состав-
лягощих его популяцию, что представляет интерес в общебиологическом плане и имеет прикладное значение для создания современных методов выявления ЫКМФ. Последнее, по нашем/ мнению, необходимо для разработки системы мероприятий по борьбе с вирусной болезнью люпина и служит существенным этапом в успешном решении важной народнохозяйственной задачи по обеспечению животноводства полноценной кормовой базой.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ - изучить распространенность уэколистности люпина на территории Украинского Полесья, природу его возбудителя и разработать методы иммунодиагностики, пригодные для скрининга виру соносительства в семенном материале.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
изучить степень пораженное широко районированных сортов люпина ряда областей республики возбудителем уэколистности и идентифицировать его;
отработать методы выделения, очистки и концентрации вируса;
изучить биологические и физико-химические свойства иэоля-тов выделенного вируса;
получить высокоспецифичные иммунные препараты для экспресс-диагностики вирусной инфекции люпина;
разработать методы выявления вирусоносительства в семенном материале люпина.
На территории Украины из растений люпина впервые ввделены и изучены два штамма вируса желтой мозаики фасоли. На основании сравнительного анализа биологических и физико-химических свойств установлены различия между исследуемыми штаммами и штаммами ВЖМФ, описанными в литературе. Впервые обнаружено, что вирионы одного из штаммов отличаются по характеру поражений на растениях-индикаторах, содержанию аминокислот, молекулярной массе белка и по некоторым другим физическим параметрам, что позволило отнести его к оригинальному штамму.
Доказано влияние вирусной инфекции на рост и развитие клубеньков люпина, что может свидетельствовать о снижении способности больных растений связывать азот воздуха.
Впервые для выявления семенной инфекции люпина применен имму-ноферментный анализ, который позволил определить степень вирусоно-
сительства в семенном материале.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ работы определяется тем, что выделенный нами оригинальный штамм ВЖМФ может быть использован для диагностики вирусной инфекции зернобобовых культур, поскольку свойственная ему высокая антигенная активность позволяет получать высокоспецифичные иммунные сыворотки.
Разработан оптимально щадящий метод вьзделения и очистки поти-вируеов, применение которого дает возможность сохранить целостную структуру вирионов. Усовершенствован иммуноферментный анализ путем применения нитроцеллюлозных фильтров для скрининговых исследований распространенности инфекции и пораженности семян.
Нами разработана методика получения иммунных поликлональных сывороток к ВМФ, которая как и сами сыворотки используются в селекционной и практической работе Украинского института земледелия ' ЮО ВАСХНШІ, а также Института экспериментальной биологии им.Хо Ши Мина /СРВ, акт о.внедрении от 1983г./.
Результаты исследований, составляющих предмет диссертационной -работы, включены в Методические указания к практическим занятиям по вирусологии / Киев, 1988 /, вошли в Методические рекомендации по научным основам борьбы с вирусной инфекцией люпина / Москва, 1990 /.