Введение к работе
Актуальность темы: Развитие промышленного животноводства обострило проблему так называемых "малых вирусных инфекций" крупного рогатого скота, к которым относятся заболевания, вызываемые аденовирусами (АдКРС), вирусом'инфекционного ринотрахеита (вИРТ), вирусом парагриппа-3 (ПГ-3), рота- и тогавирусами. Высокая конта-гиозность, разнообразие путей передачи инфекции, экономический ущерб, наносимый этими заболеванями - все это потребовало разработки методов их диагностики и профилактики. АдКРС и вИРТ играют значительную роль в этиологии инфекционных заболеваний крупного рогатого скота в условиях промышленного животноводства Заболевания, вызываемые аденовирусами, приводят к снижению привесов и часто служат "входными воротами" для других инфекций. Вирус ИРГ вызывает тяжелые респираторные заболевания животных, а также способен передаваться через сперму быков-производителей, являясь одной из причин абортов и яловости коров.
Принятые в практике ветеринарии методы иммунодиагностики АдКРС и вИРТ не могут в полной мере удовлетворить потребности современной ветеринарной вирусологии и эпизоотологии.
Необходимость разработки новых методов обнаружения вирусов во внешней среде отражена в задании 22Ш всесоюзной научно-технической программы 0. 74. 05 на 1985-1990 г.
Цель работы состояла в разработке -методов обнаружения антигенов АдКРС и вИРТ и антител к ним на основе гистохимического им-муноферментного метода (гИФМ) и реакции латексагглютинации (РЛА). В соответствии с поставленной целью сформулированы следующие задачи исследования:
-
Разработать метод выделения и очистки в препаративных количествах основного структурного белка АдКРСЗ - гексона как антигена, перспективного для иммунодиагностики АдКРС. Выбрать схему иммунизации и получить гипериммунные сыворотки к гексону и Еирио-нам АдКРСЗ и вИРТ.
-
Разработать гИФМ обнаружения антигенов АдКРС и вИРТ в инфицированных клетках, провести его сравнение гИФМ с традиционными методами (иммуноферментный анализ - ИФА, реакция иммунофдуорее-ценшш - РИФ) обнаружения вирусных антигенов и с методом обнаружения вирусной ДНК в инфицированных клетках (точечная молекулярная гибридизация - тМП и изучитиь возможности использования гИФМ в качестве метода экспресс-диагностики вирусных заболеваний, вызываемых АдКРС и вИРТ.
- *> -
-
Разработать метод обнаружения антител к АдКРС и бИРТ на основе реакции латексаггліотинации (РЛА) с использованием окрашенных полиакролеиновых латексов и провести сравнение РЛА с ИФА, реакцией непрямой гемагглютинации (РИГА) и реакцией нейтрализации (РН).
-
Разработать основы технологии производства РЛА-диагности-кума для обнаружения антител к вИРТ.
Научная новизна работы: Разработан и применен метод выделения и очистки гексона АдКРСЗ на основе гидрофобной и эксклюзшн-ной высокоэффективной жидкостной хроматографии, позволяющий получать очищенный гексон АдКРСЗ в препаративных количествах.
Разработан гистохимический иммуноферментный метод обнаружения антигенов АдКРС и вИРТ в инфицированных клетках. Проведена оптимизация техники постановки анализа и интерпретации результатов.
Разработан способ получения латексных частиц, сенсибилизированных антигенами АдКРС и вИРТ. Разработан метод обнаружения антител к АдКРС и вИРТ в сыворотках крови животных на основе реакции латексаггліотинации.
Практическая ценность работы: ГИФМ может <5^ть использован для экспресс-диагностики и ускоренной лка«-;:оотики АдКРС и вИРТ.
Метод обнаружения антител к АдКРС и вИРТ на основе реакции латексагглютинащш рекомендован Главным управлением ветеринарии Государственной комиссии по продовольствию и закупкам СМ СССР к практическому использованию в ветеринарной практике. Разработана технология изготовления РЛА-диагностикума и подготовлена нормативно-техническая документация на его изготовление.. Материалы исследований внедрены в учебный процесс и на их основе проводятся практические занятия на' курсах повышения квалификации ветеринарных специалистов Московской ветеринарной академии.
. Апробация работы: Основные положения диссертации изложены на конференциях молодых ученых мБА в 1987, 1938 и 1989 г., на отчетных научных конференциях МВА в 1987 и 1989 г., на конференции мо-
лодых ученых социалистических стран в г. Братислава (ЧССР.) в 1983 г., на Всесоюзном семинаре руководителей вирусологических отделов областных и республиканских ветеринарных лабораторий (г. Косино Моск. обл.) в 1989 г. и в 1990 г.
Публикации: По теме диссертации опубликовано 5 статей, имеется положительное решение на выдачу авторского свидетельство.
Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 116 страницах, включая введение, обзор литературы, материалы и методы собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы и приложения. Список использованной литературы включает 104 источника. Работа содержит 16 таблиц и 8 рисунков.