Введение к работе
Актуальность темы. Гриппозная инфекция остается одним из наиболее распространенных и не очень контролируемых инфекционных заболеваний, приносящих существенный урон здоровью населения.
Основными причинами неудач вакцинации являются изменчи -весть антигенной характеристики вируса гриппа А и несовершен -ство вакцинального гриппозного иммунитета. Учитывая вышесказанное, во всем мире ведутся разработки вакцин, которые способны обеспечивать у иммунизированных защищенность ко всем вариантам вируса гриппа А, независимо от их антигенной характеристики.
В опубликованных за последние годы работах рассмотрены различные аспекты создания таких вакцин. Эти исследования можно условно распределить на следующие группы: создание рекомбинант-ных вакцин, генно-инженерных препаратов, пептидных вакцин и вакцин, включающих индукторы-интерферона - стимуляторы иммуно -генеза ( Петров Р.В., 1989; Aslccr\Ao ft А ., 1986; -ІУіарігл- К\ ., 1986; liLmei- ,1.6.., 1993).
Общий недостаток, который свойственен всем предложенным до сих пор генно-инженерным и полипептидным гриппозным вакци -нам - это необходимость их парентерального введения, что ограничивает возможность вовлечения в формирование защитной реак -ции механизмов иммунитета дыхательной системы, а также дороговизна подобных вакцин и трудность проведения прививок только по эпидемиологическим показаниям.
Некоторое промежуточное положение между современными вакцинами и вакцинами будущего занимают препараты, состоящие из инактивированных гриппозных вакцин и индукторов интерферона -стимуляторов иммуногенеза. Препараты вводятся интранаэально или перорально (Тлт»ій :>, ., 1992; Клїг j- ., 1992). При создании таких препаратов учитывается, что иммунитет к гриппу и вирусам других 0F3 представляет собой полифакторный феномен, в реализации которого участвуют, выраженно взаимодействуя мекду собой, факторы гуморального, клеточного иммунитета и неспецифической защиты. Поэтому наиболее перспективны вакцинные препараты, при введении которых гармонично стимулируется формирование секреторных, сывороточных антител, ЦТл и интерферона, что и достигается сочетанным введением инактивированной гриппозной вакцины и индуктора - стимулятора. Кроме этого, основной целью разработки
3.
подобных препаратов является формирование у иммунизированных гетерологичного иммунитета, что открывает перспективы реального контроля за заболеваемостью гриппом.
Учитывая вышесказанное, цель настоящего исследования, посвященная-разработке и внедрению в практику нового препарата для защиты,-от.-гриппа, безопасного, удобного для практики и обеспечивающего стимуляцию иммунитета с широким спектром активности является актуальной. В качестве препарата предлагается ис -пользовать коммерческую инактивированную гриппозную вакцину с индуктором интерферона' - стимулятором иммуногенеза. Препарат предназначен для интраназального и перорального введения.
Цель исследования. Цель исследования состоит в изучении механизмов формирования гетерологичной защиты к вирусу гриппа типа А и поиске методов направленной регуляции этого процесса как научной основы для совершенствования иммунопрофилактики гриппа.
Исходя из этого были поставлены следующие основные задачи:
-
Выяснить возможность разработки препаратов для профилактики гриппа, обеспечивающих формирование иммунитета с широким спектром активности и вводимых интраназально или перораль-но.
-
Отобрать вещество, обладающее наибольшей эффектив -ностью как стимулятора-иммуногенеза и индуктора интерферона при введении ИГВ на слизистые оболочки дыхательных и пищеварительных путей. -.«--.'
-
Изучить формирование факторов неспецифической защиты.
-
Определить влияние иммунизации ИГБ со стимулятором на слизистые оболочки дыхательного и пищеварительного трактов на устойчивость животных к гомологичной и гетерологичной инфекции.
-
Провести исследования по изучению механизмов формирования гетерологичной защиты к вирусу гриппа типа А при интра -назальной.и пероральной иммунизации.
-
Изучить иммунологическую безопасность, "острую", "хроническую" токсичность ИГВ со стимулятором иммуногенеза, вводимых на слизистые оболочки.
.. 7. Подготовить и отправить научно-техническую документа -цию на препарат в Фармкомитет РФ.
4.
Научная новизна работы. Впервые обоснована возможность создания гетерологичного иммунитета к вирусу гриппа типа-А' при введении ИІБ с индуктором-стимулятором на слизистые оболочки дыхательного и пищеварительного тракта. Впервые показана воз -можность стимуляции системы общего и местного иммунитета при пероральной иммунизации НТВ со стимулятором. Выявлены принци -пиальные различия в динамике антителогенеза при интранаэальной и пероральной экспериментальной иммунизации ИЕВ со стимулято -ром. Впервые проведено комплексное изучение-механизмов форми -рования гетерологичной устойчивости животных;к вирусу гриппа типа А. Впервые установлена возможность переноса гетерологич -ного иммунитета к вирусам гриппа типа А пулами смывов с дыха -тельных путей и сывороток крови крыс, иммунизированных комплексным противогриппозным препаратом, мышам. Показано значение интерферона и ЦТЛ в формировании гетерологичной защиты. Доказана роль антител к внутреннему белку М вируса гриппа в формирова -нии этой защиты.
Практическая ценность. -;
Основным практическим результатом исследования является разработка и усовершенствование метода профилактики гриппа с помощью препарата, состоящего из ИГВ и индуктора-интерферона -стимулятора иммуногенеза, вводимого на слизистые оболочки да -хательного и пищеварительного тракта..Проведено доклиническое изучение препарата для профилактики гриппа, включающее исследование иммунологической безопасности, а также "острой" и "хронической" токсичности. Подготовлена и отправлена в Фармкомитет РФ научно-техническая документация на препарат.
Положения, выносимые на защиту.
-
Добавление к ИГВ веществ, обладающих активностью не -специфических стимуляторов иммуногенеза, сопровождается повы -шением антителогенеза при введении этих препаратов в дыхательные и пищеварительные пути. Помимо этого индуцируется синтез интерферона.
-
Наиболее важное различие ответной иммунной реакции организма на интраназальное и пероральное введение препаратов' ИГВ со стимулятором состоит в том, что при интраназальном введении указанных препаратов для комплексной стимуляции местного и общего иммунитета требуется использовать на порядок меньшую
5.
дозу антигена и стимулятора, чем при пероральном введении.
., 3. У мышей, иммунизированных ИГВ со стимулятором иммуногенеза да слизистые оболочки дыхательного и пищеварительного тракта формируется выраженная гомологичная устойчивость. Помимо этого формируется гетерологичная устойчивость к летальной инфекции различными вариантами вируса гриппа типа А, но не вируса гриппа В. .,
Опыты пассивного переноса показали важное значение антител секретов дыхательных путей и сыворотки крови в формирова -нии гетерологичной,устойчивости. У мышей, иммунизированных ИГВ со стимулятором иммуногенеза на слизистые оболочки, помимо антител к гемагглютинину;И.нейраминидазе вируса гриппа формируются антитела к внутреннему белку гетерологичного вируса гриппа - М-белку. Показана роль интерферона и ЦТЛ в формировании гетерологичной устойчивости.
4. Иммунизация ИГВ со стимулятором на слизистые оболочки дыхательного и пищеварительного тракта безвредна. Она не оказывает депрессивного воздействия на основные показатели гуморального и клеточного иммунитета. Препарат, предлагаемый для такого способа иммунизации, обладает низкой токсичностью и может при -меняться по эпидемиологическим показаниям.
Апробация работы. Материалы диссертации представлялись и обсуждались на конференциях молодых ученых НИИ гриппа ( Спб., 1991, 1992, 1993 гг.), на международном Симпозиуме "Интерферон-90" ( Спб., 1990), на отчетной научной конференции НИИ гриппа ( Спб., 1993).
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 159 с. машинописного текста. Состоит из введения, обзора литерату -ры, включающего 4 раздела, трех глав собственных исследований, заключения и выводов. Материалы диссертации иллюстрированы 33 таблицами и рисунками. Библиографический список включает 219 работ, в том числе 134 статей иностранных авторов.