Введение к работе
Актуальность проблемы.— Химиотерапия - и—химиопрофилактика
вирусным инфекций - одна иэ ведущим проблем современной ивдицимы, что обусловлено широким распространением элЯолепАниЛ вирусной тиологии и еесчи* ограниченным количеством аффективным лекарст-авнник средств <В.И. Вотякоя, Г.А. Галего», 1993).
До настоящего времени в клинической практике лечения тактик нлобалчилія і-5 к&к СПН5 м грипп исгнзлыуитсч ТО«*>КП олимич— ныв противовирусные препараты» Во многом это свяаано с особенностями репродукции этим вирусов.
Эа последние годи жианеммый цикл воабудитвля СПИДа научен едва ли не глубже, чем лмбого другого вируса. Зто позволяет планомерно и целенаправленна разрабатывать сродства, действующие, на определенные стадии формирования вируса.
В инфекционном цикле возбудителей СПИДа и гриппа существуют общие мишени, блокирование которых долина ингибировлть инфекцию. Одной и> доступным мишеней для воздействии препарат* являются клеточные мембраны, с которыми вздималвйстеувт прикрепительный белок и белок слияния вирусов иммунодефиците человека и грипп* <др120 и др41] НА1 и НА2), обеспечивая проникновение вирусов в «летку. Узнавание специфическим клеточный реці тторов определяет возможность инфицирования и клеточный тропиан вирусов. Клеточные мембраны вовлечены в морфогенез оболочечныи вирусов, в алпврте 'олджи происходит созрееамме им гликопротеидов, с участием кле-гочных мембран осуществляется транспорт вирусным компонентов к -*есту сборки вирусов - плазматической мембране. Черва плазмати-«ескум мембрану происходит почкование вирусов. Таким обравон, іанние и поздние стадии инфекционного цикла тесно связаны с кле-
- 2 -томными мембранами. Блокирование рецепторних участком мембран, ивменение структуры мембранных ионных каналое, модификации активных групп мембранный структурах, взаимодействие с еирусон очи-кенных клеточных рецепторе* должно привести к нарушении» инфекционного цикла вируса, с умеетеенно не влияя на жизнеспособность клвтки-хоаяииа и организма.
Пембранотропмые препараты испытывайте» при ВИЧ-инфекции! например, декстраи сульфат, модифицирующий клеточные мембраны (ftbraraa D. et «1., 1989)| клеточный рецептор «СД4, полученный ре-комбинантмым путем и конкурирующий с природным рецептором на поверхности Т4 лимфоцит»
При гриппе А широко применяется такие иембранотропные препараты как амантадин и ремантадине гидрохлорид. Механизм их действия на гриппозную инфекции связан с повреждением ионных каналов, формируемых минорным белком М2 оболочке вируса (А. Hay, 19ВЗ).
При определенном положительном аффекте ати препараты имеют ряд существенных недостаткові обладают узким спектром действия, являются токсичными для организма, при длительном применении к ним развивается устойчивость.
Поэтому поиск новых эффективных мембранотропных препаратов, обладающих высокой антивирусной активностью, низкой токсичностью и широким спектром действия - является актуальной задачей.
Цель и задачи исследования. Целью-' настоящих исследований явилось изучение .действия новых адамантансодерхащих препаратов на
ррпликаци* вирусов иммунодефицита человека І типа и гриппа А.
В соответствии с - поставленной ишгы» в задачи исследовании
чодилої
1 Научение действия новый адамантансодвржащик препаратов на репликации) вируса иммунодефицита человека I типа при острой и хронической инфекциях.
2. Оценка новых адамаитамсодержаяих препаратов, как возможны* »иииот«і«пмтичвсіеиіі средств.
. 3. Установление зависимости проявления токсических и противовирусных свойств препаратов от их химической структуры.
4. Научение действия новый адамантансодержаеих препаратов на репродукции чувствительного и резистентного к ремантадину вариантов вируса грипп* А.
Научная новизна. Впервые изучено действие новых аданамтаисо— держащих препаратов на основе малеинопого ангидрида с фурановым циклоп на репликации ВИЧ-1 и гриппа А. Препараты раз/мчались процентным содержанием аданантанового деривата, длиной спейсерной связи, молекулярным весом.
В разделе, посвященном анализу токсикологических характеристик адамантансодеризщих препаратов определены максимальные концентрации, не токсичны* дли лимфобластоидных клчток МТ-4 на клеточном и молекулярном уровнях. Проведено сравнение с токсическим действием анантадина и ремантадина. Выявлено, что нооые препараты является малотоксичними соединениями по сравнению с традиционными адамантанани (разница в ЦТА50 практически на lg>.
В разделе работы, посвященном изучении) действия новых ада-нантансодержащих препаратов на репликации ВИЧ-1, определены их аффективные инг ибирукнаме концентрации при острой инфекции клетках МТ-4 (диапазон ИД^О 32-71 мкс/нл)і установлено, что уязвимой
_ 4 -стадией инфекции яэляются ранние событии в репяикативиом иикле вирус*. Показано отсутствие ингибирующего действия препаратов на ВИЧ-I-инфекции в культуре иронически инфицированный клеток Юркат-т*т.
Установлено, что новые аданантансодврхашив препараты обладает более выраженной ингибируюшей актипностьм н< репликации ВИЧ-1 при острой инфекции по сравнению с традиционными адамаытамами.
В целям вasможного испольаования новых препаратов рассчитан индекс селективности для каждого препарата (диапазон ИС 16,6 -35,9), что свидетельствует о перспективности дальнейшей работы с данным классом соединений.
Статистически выявлены особенности химического строения новым препаратов, влияющие на проявление токсических и противовирусных свойств. Установлено, что фактором, усиливающим анти-ВИЧ активность и токсичность адамамтансодерхаших препаратов, япляется молекулярная масса; тогда как процент содержания аданантана в препарате и длина спейсермой связи существенно не алияли на токсичность и противовирусную активность препаратов.
В раздело работы, посажменнон изучении действия ноонк ада-мантансодерхащих препаратов на чувствительный и резистентный к ремантадину варианты вируса гриппа А показано, что новые препараты обладают менее выраженным ингибируюшим действием на репродукции чувствительного к реї іантадину варианта вируса гриппа А по сравнению с ремантадином и не оказывают действия на резистентный вариант вируса.
Практическое значение работы. Проведенные нами исследования по изучения свойств новых адамантансодержаиіих препаратов важны для лучшего понимания морфогенеза ВИЧ, еозмозгмых аналогий с гриппозной инфекцией, для поиска новых уязвимых мишеней на ранних
- Э -Стадиях ршликатианого цикла вируса.
Выяснение механизма действий атик препаратов на рспликвтив-мыА цикл вируса иммунодефицита человека нож*т открыть пут», новому поколению эффективный иимиопрофилакгических и химиотерапевтичее-«еих средств борьбы с раалмчмымм вирусными заболев **»<ями.
Основные полтпнагя, вгымоемпме на «нмаиту.
1. Новые адамантансодвржавдие препараты являются малотоксичними со«дщ«>»<»'«' а срг=;~і»м с Іплміддинон и реэта«т«яимо~,
. 2. Выраженное ингибируюіиее действие новых препаратов на роп— ликаш-ю ВИЧ-1 проявляется на ранних стадиях острой инфекции, но отсутствует при хронической. Анти-ВИЧ эффект новых адамантаисо-дархлщих препаратов несравнимо' выше йен у ремантадина.
3. Токсические проявления и «ирусингибЧфукшая активнеcrw
препаратов саяханы с особенностями их химической структуры.
4. Новые адамамтансодержащие препараты оказывают слабый им-
гиоируххуий эффект на репродукцию вирус* гриппа А по сравнению с
ремантадинон.
АгфоОаиия работы. Основные положения работы били представлены на 6-я международной конференции по антивирусным исследованиям (Венеция, 1993) j на 2-ой нвхаународной конфервииі-аі "AIDS, Cancer and Human Retroviruses" (С.-Петербург, 1993)j доложены на совместной конференции кафедры вирусологии РНАЛО и лаборатории Дио-синтеза вирусов НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН 27 июня 1994 года.
Основное содержание работы отражено о 4 научных публикациях.
Объем и структура работы. Диссертационная работа состоит и» введения, обзора литературы, 2 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка цитируемой литературы-(31
отечественных и ЇМ аарубекных источников). Общий объем работы 120 страниц машинописного текста, вклмгчаишего 6 таблиц, 16 рисунков .
* « *
Автор пользуется случаен выразить искреи -ною благодарность своему неумному руководите/-* член—корреспонденту РАМН, профессору Букринской А.Г.; сотрудникам НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАЖ - д.в.и. ВоркуновоЛ Г.К., к.м.н. Гиттельман А.К. и Руднеиой И.А., а также ассистенту кафедры вирусологии РМАПО Богдан О.П. и директору НИЦ синтетических биомодулятаров объединения "Градоэко-логия", к.хим.н. Сербину А.В а* окаяаинуи помощь выполнении диссертационной работы, ценные советы и рекомендации.