Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1. Вирус гепатита Е 10
1.1.1. Общая характеристика ВГЕ 10
1.1.2. Структура вириона ВГЕ 12
1.1.3. Организация генома и вирусные белки ВГЕ 14
1.1.4. Репликация ВГЕ 18
1.1.5. Классификация ВГЕ и генотипы, ВГЕ животных 20
1.2. Эпидемиология ВГЕ 33
1.2.1. Эпидемиология ГЕ в гиперэндемичных регионах 34
1.2.2. Эпидемиология ГЕ в эндемичных регионах 38
1.2.3. Сравнительная эпидемиология ГЕ в Египте и в России 44
1.3. Диагностика гепатита Е 49
1.4. Профилактика гепатита Е 54
1.5 ВГЕ кроликов 56
1.5.1 Географическое распространение ВГЕ у кроликов 56
1.5.2 Генетические исследования ВГЕ кроликов 58
1.5.3 Возможные пути передачи гепатита Е от кроликов к человеку 61
1.5.4 Кролики в качестве объекта исследования ВГЕ 62
Собственные исследования 64
Глава 2. Материалы и методы исследований 64
2.1. Материалы исследований 64
2.2 Методы исследований 66
2.2.1 Определение анти-ВГЕ 66
2.2.2 Сбор образцов фекалий 67
2.2.3 Выделение РНК 67
2.2.4 Амплификация фрагментов ДНК в ПНР 67
2.2.5 Определение нуклеотидной последовательности ДНК 68
2.2.6 Анализ нуклеотидных последовательностей 69
2.2.7 Статистические методы 70
Результаты
Глава 3. Выявление анти-ВГЕ IgG среди кроликов 70
Глава 4. Определение РНК ВГЕ в образцах фекалий кроликов 71
Глава 5. Определение РНК ВГЕ в образцах фекалий свиней 75
Глава 6. Анализ нуклеотидных последовательностей ВГЕ 77
Обсуждение полученных результатов 82
Выводы 90
Практические рекомендации 90
Список литературы 91
- Организация генома и вирусные белки ВГЕ
- Сравнительная эпидемиология ГЕ в Египте и в России
- Определение нуклеотидной последовательности ДНК
- Статистические методы
Организация генома и вирусные белки ВГЕ
Нуклеотидные последовательности генотипа 2 были впервые опубликованы во время эпидемии в Мексике [70], а затем идентифицированы во время эндемичных случаев в нескольких африканских странах [130; 111]. Генотип 3 широко распространен и был идентифицирован во время спорадических случаев инфицирования человека и/или домашних свиней острым ВГЕ в ряде стран по всему миру [132]. Кроме того, штаммы генотипа 3 ВГЕ были выявлены у многих других животных - природных носителей возбудителя, включая кабанов [40] и оленей [149]. Десять различных штаммов, входящих в генотип З ВГЕ, являются наиболее распространенными по всему миру. Подтипы За и 3j были в основном выявлены в Северной Америке; Штаммы ЗЬ , 3d и 3g в Азии; Зс, Зе и 3f в Европе. Редкие подтипы 3h и Зі были идентифицированы в Италии, Австрии и Новой Зеландии [108]. Генотип 4 содержит штаммы человека и домашних свиней и идентифицирован в азиатских странах [159;80]. В последнее время также сообщалось об обнаружении штамма, выявленного у свиней в Центральной Европе [64]. Кроме того, было показано, что природными носителями возбудителя 4 ВГЕ, помимо свиней и кабанов, являются также люди [41].
Помимо разделения ВГЕ на генотипы, утверждённые ICTV, были проведены исследования по классификации подтипов вируса в соответствии со сходством их геномных последовательностей. Был применены различные подходы к анализу полногеномных последовательностей, в ходе работ были использованы различные неспецифические критерии. В исследовании Zhai с соает. (2006) были проанализированы 37 полных последовательностей генома и четыре генотипа были дополнительно разделены на 12 подтипов [188]. При анализе 75 полных последовательностей генома четырех генотипов были предложены семь подкластеров или подгрупп [132]. Наиболее широко используется классификация подгрупп, предложенная Lu с соает. (2006), который изучал 49 полных последовательностей геномов и различные субгеномные последовательности. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей полных геномов штаммов ВГЕ выявил обширное геномное разнообразие, ведущее к идентификации четырех основных генотипов и нескольких подтипов в пределах каждого генотипа. Генотип 1 ВГЕ является более консервативным и подразделяется на пять подтипов: la, lb, lc, Id и 1е. Генотип 2 можно разделить на два подтипа: 2а и 2b . Генотипы 3 и 4 являются более сложными; генотип 3 разделен на десять подтипов (За, ЗЬ, Зс, 3d, Зе, 3f, 3g, 3h, Зі и 3j), а генотип 4 на семь подтипов (4а, 4b, 4с , 4d , 4е , 4f, и 4g) [108].
Тем не менее, в исследованиях последних лет, которые включают много новых полностью секвенированных последовательностей, не всегда применяется классификация, предложенная Lu и др. (2006), так как некоторые группы отвечают критериям, характерным для разных подгрупп [133]. Было высказано предположение о пересмотре разделения подгрупп и о разработке нового набора правил классификации, касающихся аналитических критериев [159]. До сих пор признается существование только одного известного серотипаВГЕ [108]. Понимание классификации генотипов и подтипов крайне важно для изучения эпидемиологических явлений - таких как географическое распространение вируса или его передача [131].
В последние десять лет было установлено, что некоторые виды животных являются естественными хозяевами ВГЕ или близких ему вирусов. ВГЕ был идентифицирован у крыс, кабанов, домашних свиней, мангустов, кроликов, кур, хорьков, форели Кларка, летучих мышей и оленей [34;66;56;44;148;121]. Антитела к ВГЕ (анти-ВГЕ) были обнаружены у других видов животных, включая крупный рогатый скот, овец и коз, у которых также возможно существование новых вариантов ВГЕ [121]. С развитием современных методов молекулярной биологии, таких как метагеномика и пиросеквенирование, ожидается, что диапазон хозяев ВГЕ будет расширяться и в ближайшем будущем будут определены новые штаммы ВГЕ у других видов животных [38].
Первый ВГЕ животных был обнаружен у свиней в США [122]. Все выявленные штаммы ВГЕ свиней принадлежат либо генотипу 3, либо 4 [165; 166]. С момента открытия у домашних свиней в США в 1997 г. ВГЕ изоляты вируса были обнаружены по всему миру, как у домашних, так и у диких свиней. Уровень обнаружения РНК ВГЕ среди животных варьирует в различных регионах мира [122]. Исследования распространенности ВГЕ в Японии показали, что антитела к анти-ВГЕ присутствуют на всех проверенных свинофермах, достигая 93% в популяции. Распространенность анти-ВГЕ у диких кабанов в Японии также широко варьирует: от 4,5% до 34,3%, а РНК ВГЕ — от 1,1% до 13,3% [166].
ВГЕ удается обнаружить в фекалиях свиней, сточных водах с свиноферм и в компостных кучах навоза [53]. Так, ВГЕ был обнаружен в четырех из пяти компостных куч, которые находились на первых этапах процесса перегнивання. Среди домашних свиней на фермах в Нидерландах зарегистрирована высокая распространенность ВГЕ. Об этом свидетельствует обнаружение РНК ВГЕ в 55% фекалий. В Канаде исследователи обнаружили вирус у восемнадцатинедельных свиней и у более взрослых особей в сыворотке крови и в фекалиях; частота их детекции соответственносоставила 86,2% и 47,1% [151].
Частота обнаружения анти-ВГЕ среди поросят колеблется в различных регионах мира, территориях и фермах. Так, в Испании распространенность антител к анти-ВГЕ на коммерческих свинофермах достигает 98%, в Новой Зеландии, Лаосе и Бразилии составляет 90%, 46% и 81% соответственно [137]. Частота выявления анти-ВГЕ у кабанов варьировала от 17% до 50,3%, РНК ВГЕ была обнаружена почти в 25% образцов сывороток кабанов в Германии, Италии, Испании, Австралии и Венгрии [40;80;149; 91]. Таким образом, генотип 3 или 4 ВГЕ у свиней широко распространен в популяции свиней по всему миру, повышая тем самым обеспокоенность по поводу зоонозной трансмиссии инфекции и инфицирования свинины [140]. Установлено, что ВГЕ может передаваться от свиней к людям. Эксперименты по межвидовому инфицированию показали, что штаммом ВГЕ человека (США) можно заразить свиней, а прототипом свиного ВГЕ человекоподобных приматов. Повышенный риск природноочагового распространения был зарегистрирован у ветеринаров и других работников свиноводческих ферм, особенно в странах, где ВГЕ считается редким заболеванием (Тайвань, США и Молдова) [65].
С помощью секвенирования было показано, что штаммы ВГЕ, выделенные от людей в разных географических регионах мира, являются гетерогенными, но и они близки ВГЕ, выделенному от свиней, идентифицированных в тех же географических районах. В качестве примера можно привести данные о штаммах ВГЕ млекопитающих США и ряда европейских стран, которые относятся к единому генотипу 3. Однако в США штаммы ВГЕ человека более тесно связаны со свиным ВГЕ. Кроме того, испанские штаммы ВГЕ человека более тесно связаны с испанским свиным ВГЕ. Человеческий ВГЕ и свиной ВГЕ в Великобритании имеют одинаковую последовательность аминокислот. Японский штамм ВГЕ, выявленный у пациента на о. Хоккайдо в 1997 г., имел 100% идентичность последовательности со свиным ВГЕ, идентифицированным у свиней на Хоккайдо в 2002г. Прямые доказательства природно-очагового распространения ВГЕ — это случаи заболевания ГЕ людей, употреблявших сырую свиную печень или сырое мясо кабана [114]. Олени также могут быть естественным резервуаром ВГЕ 3 и 4 генотипов и являться источником заражения для человека [137; 172].
Сравнительная эпидемиология ГЕ в Египте и в России
Остаётся неизвестной связь между природными носителями возбудителя заболевания и эпизодами эпидемий ВГЕ. Спорадические случаи заболевания ВГЕ в эндемичных районах могут быть достаточной базой для поддержания вируса в популяции в течение взаимосвязанных эпизодов эпидемий. Другое объяснение состоит в том, что возможно существование природного носителя возбудителя нечеловеческого происхождения. ВГЕ был выделен у свиней, а антитела к ВГЕ были обнаружены у ряда видов животных, в том числе свиней, овец, крупного рогатого скота, кур, крыс, и у содержавшихся в неволе обезьян. Кроме того, вирусы, выделенные от свиней, были определены как варианты, связанные со штаммами ВГЕ человека, найденными в тех же географических регионах [156].
Однако у животных выявляют генотипы 3 и 4 вируса. Их хозяевами могут быть некоторые млекопитающие, в первую очередь дикие и домашние свиньи, которые являются природными носителями данного вируса и могут заразить им человека [120]. ВГЕ 3 выявляется у свиней по всему миру [43, 109], также обнаружен у других млекопитающих, в том числе оленей и мангустов [33; 159; 31], хотя мало что известно о распросраненности ВГЕ среди диких животных. В отличие от животных, у людей в гиперэндемичных регионах, как привило, заболевание вызывается генотипами 1 и 2, реже генотипом 4.
Вопрос о существовании природного очага возбудителя заболевания в гиперэндемичных регионах остается нерешенным. В Китае и Вьетнаме выявленный у животных ВГЕ принадлежал к той же группе (генотип 4), что и у людей со спорадической заболеваемостью. В Индии, однако, выделяемый у животных вирус принадлежит к генотипу 4, а у людей - к генотипу 1 [23]. Считается, что генотип 4 является эндемиком Южной и Восточной Азии [132], где он впервые был обнаружен у диких и домашних свиней [105]. Генотип 1 ВГЕ, который характерен для подавляющего большинства случаев во всех эндемичных странах, никогда не был выявлен у свиней. Кроме того, в экспериментальных исследованиях, генотип 1 вируса не способен инфицировать свиней. Таким образом, природные носители возбудителя заболевания не могут быть основным путем распространения вируса в этих областях, в частности, это касается широкого распространения генотипа 1 ВГЕ.
Таким образом, вклад природного резервуара ВГЕ в поддержание заболеваемости ГЕ в гиперэндемичных регионах невелик. Предложенными гипотезами поддержания циркуляции ВГЕ в этих регионах является затянувшаяся виремия и диареи, вызванные ВГЕ [29]. Другими потенциальными источниками вируса могут быть люди с бессимптомным протеканием ВГЕ. В экспериментах на макаках-крабоедах (cynomolgus macaques), с помощью биохимических методов не было выявлено поражение печени у ВГЕ-инфицированных животных, однако во всех образцах отмечалось наличие большого количества жизнеспособного ВГЕ [18].
Таким образом, в гиперэндемичных регионах ВГЕ-инфекция является антропонозом и распространяется либо через объекты окружающей среды, либо через людей-носителей возбудителя. Основной причиной широкого распространения заболевания является плохое состояние здравоохранения, загрязнение питьевой воды и отсутствие внимания к личной гигиене [174].
В развитых странах традиционно считается, что заболевание гепатитом Е происходит нечасто и только у лиц, которые заразились во время путешествия в страны, где вирус является эндемическим заболеванием. Тем не менее, в таких странах как Северная Америка, Европа, Япония, Россия, Новая Зеландия и Австралия зарегистрированы спорадические случаи гепатита Е у людей, которые не совершали никаких поездок в другие регионы. Подобные исследования в совокупности с наличием всё более подробных молекулярных и серологических данных, привели к переоценке эпидемиологии ВГЕ и доказательствам, что автохтонный (локально приобретенный) гепатит Е является клинической проблемой в развитых странах [36].
Анализ серопревалентности в промышленно развитых странах привел к открытию локальных случаев ВГЕ и определению существенного изменения эпидемиологической картины этой инфекции в регионах, где заболевания ВГЕ являются нечастыми [36]. Частота выявления анти-ВГЕ среди в общей популяции достигает: 2,5% в США [108] и 0,4-3% в Западной Европе, в основном в европейских странах Средиземноморья (Италия, Испания, Франция и Греция), где также существует высокая интенсивность иммиграционных потоков [93;60]. Однако и в других развитых странах (Япония, Дания) была зарегистрирована высокая распространенность к анти-ВГЕ (более 20%); в этих странах данный показатель значительно превышает уровни, ожидаемые в условиях низкой регистрируемой заболеваемости ГЕ [70; 16].
Исследования количества положительных тестов на антитела класса IgG в эндемичных районах отражают частоту гепатита Е в этих областях. Распространенность IgG антител ВГЕ в популяции с низкой заболеваемостью в развитых странах составляет от 3 до 20% [36; 92]. Причина этих наблюдений была долгое время предметом дискуссий. Данные о наличии большого числа положительных результатов анализов на антитела IgG ВГЕ в популяциях, где острые приступы инфекции диагностируются редко, должны означать, что либо имеет место преобладание бессимптомного протекания заболевания, либо острый гепатит Е является недиагностированным, или, что серопозитивная реакция на IgG неспецифическая и даёт перекрестную реакцию антител. Присутствуют случаи бессимптомного протекания инфекции. Большое количество положительных тестов на антитела IgG в развивающихся странах является отражением высоких темпов клинической инфекции; в развитых странах большая часть первичной инфекции ускользает от первичной диагностики [36].
В последние годы в США, Европе и в развитых странах Азиатско-Тихоокеанского региона (Япония, Тайвань, Гонконг, Австралия) были описаны единичные случаи или группы случаев, связанных с автохтонным (локально - приобретенным) острым гепатитом Е [61]. Несколько случаев можно сопоставить со временем путешествий в развивающиеся страны и/или с иммиграцией, но другие произошли среди лиц, не выезжавших за рубеж и не имеющих опасных контактов (дорожных и/или контактов с иммигрантами). В то время как генотипы ВГЕ, выявленные у иммигрантов и/или путешественников, в основном относятся к 1 и 2 группам, автохтонный острый гепатит Е вызывают генотипы 3 и 4 [16].
Причина высокой степени распространённости анти-ВГЕ является до сих пор невыясненной, и, возможно, отражает прошлые случаи бессимптомного ВГЕ-инфекции, полученной в результате поездки в гиперэндемичные страны или импорта ВГЕ, связанного с иммигрантами. Спорадические случаи инфекции можно связать с загрязнениями фекалиями питьевой воды. Автохтонный ВГЕ в промышленно развитых странах объясняется главным образом контактом с животными; у людей, чьи профессии подразумевают контакты со свиньями или дикими животными, в этих регионах чаще выявляются высокие показатели распространённости анти-ВГЕ [36].
Генотипы 3 и 4 ВГЕ также широко распространены в популяциях свиней; эти данные подтверждают, что некоторые случаи автохтонного гепатита Е в развитых странах являются результатом зоонозной инфекции. Сообщается, что в Японии недостаточно прожаренное или проваренное мясо оленя может представлять собой возможный источник инфекции ВГЕ. В таких случаях геномные последовательности идентифицированного ВГЕ совпадают с выделенными из остатков замороженного мяса, таким образом имеет место передача инфекции через пищу. Как было показано, часть коммерческих упаковок свиной печени, продаваемых в Японии и США в продуктовых магазинах, содержат генотип 3 или 4 ВГЕ [77]. Заражённые моллюски также являются потенциальными переносчиками инфекции в развитых странах. Эти факты позволяют предположить, что, по крайней мере, некоторые автохтонные случаи связаны с потреблением зараженных пищевых продуктов, но степень распространения заболевания таким путём до конца не изучена.
Определение нуклеотидной последовательности ДНК
Для детекции РНК ВГЕ кроликов в ОТ-ПЦР применяли вырожденные праймеры к участку ОРС2. Для подтверждения универсальности выбранных праймеров, т.е. их комплементарности последовательностям всех известных вариантов ВГЕ, было выполнено выравнивание нуклеотидных последовательностей ВГЕ генотипов 1 -4, а также ВГЕ кроликов, совместно с последовательностями праймеров (Рис.8). Результаты выравнивания нуклеотидных последовательностей продемонстрировали, что выбранный в качестве мишени участок ОРС2 ВГЕ является консервативным для генотипов 1-4 ВГЕ, а также ВГЕ кроликов. В участках посадки праймеров, с учетом вырожденности праймеров, не выявлены несовпадения между последовательностями мишени и праймеров. Таким образом, выбранные для детекции РНК ВГЕ кроликов праймеры не содержат несовпадений с известными последовательностями ВГЕ, способных снизить чувтсвительность анализа.
Выравнивание нуклеотидных последовательностей фрагмента кодирующего участка ОРС2 ВГЕ величиной 738 нт. (нуклеотиды 5682-6419, нумерация по прототипному изоляту Burme — М73128) для изолятов ВГЕ генотипов 1, 2, 3 и 4, а также ВГЕ кроликов. Последовательности ВГЕ приведены с указанием их номеров в базе данных GenBank. Обозначения праймеров: #1 - внешний прямой; #2 - внешний обратный; #3 - внутренний прямой; #4 - внутренний обратный.
Чувстительность ОТ-ГЩР определяли методом тестирования серии предельных разведений 1-го Международного Стандарта ВОЗ для РНК вируса гепатита Е (ВГЕ). Данный стандарт является референсным материалом, содержащий РНК ВГЕ 3 генотипа в известной концентрации, и предназначен для стандартизации тестов для выявления РНК ВГЕ, основанных на методике амплификации нуклеиновых кислот. Производится Институтом имени Пауля Эрлиха (Германия). Чувствительность выявления РНК ВГЕ с используемым нами протоколом составила 250 МЕ/мл.
При исследовании 482 образцов фекальных экстрактов кроликов РНК ВГЕ была выявлена в 26-х образцах фекальных экстрактов. У животных, содержащихся в виварии на территории ФГУП «Производство института полиомиелита и вирусных энцефалитов имени М.П.Чумакова» (Москва) и имевших возраст менее 6 месяцев, РНК ВГЕ была выявлена в 13,8% (4 из 29) образцов (Таблица 9).
Банха 0-6 мес. 52 0% На двух фермах в Московской области (г. Электрогорск), где животные были представлены в возрастах от 2 до 10 месяцев, частота выявления РНК ВГЕ составила 10,0% (4 из 40 образцов) и 2,2% (1 из 45 образцов), соответственно. Различия между показателями были статистически значимыми (р 0,05). На двух фермах в Республике Белорусь, где были обследованы животные в возрасте менее 6 месяцев, частота выявления РНК ВГЕ составила 11,0 % (8/73) и 30,0% (9/30) (Таблица 9). Различия между показателями также были статистически значимыми (р 0,05).
РНК ВГЕ в образцах фекалий кроликов из остальных регионов (Белгородская и Свердловская области РФ, Египет) выявлена не была. Поскольку в этих регионах были обследованы животные разных возрастов (от 2 до 12 месяцев), отрицательный результат поиска РНК ВГЕ отражает скорее истинное отсутствие циркуляции вируса на этих фермах, а не ошибки в сборе образцов.
Для того чтобы установить, в каком возрасте у кроликов преимущественно регистрируется ВГЕ-инфекция, было проанализировано распределение позитивных случаев в зависимости от возраста животных. Животные разных возрастов были обследованы на трех фермах, где был выявлен ВГЕ кроликов - двух в Московской области и одной в Республике Беларусь. Распределение случаев выявления РНК ВГЕ среди кроликов разных возрастов приведено в Таблице 10.
Большинство обследованных животных имело возраст 4-6 месяцев, и среди них частота ВГЕ-инфекции варьировала от 0% до 25%. Между обследованными фермами существовали различия не только по частоте выявления ВГЕ-инфекции, но и по возрасту животных, в котором чаще выявляется ВГЕ. Таблица 10. Частота выявления РНК ВГЕ у кроликов в зависимости от возраста. Ферма Возраст животных Частота выявления РНК ВГЕ(%)
Так, на ферме 1 в Московской области РНК ВГЕ не была выявлена у животных моложе 6 месяцев, хотя встречалась у более старших животных (6-10 месяцев). В то же время на второй ферме в этом регионе и на ферме 1 в Республике Беларусь ВГЕ-инфекция выявлялась преимущественно у животных в возрасте до 4 месяцев. Выявленные различия, по-видимому, отражают разные подходы к содержанию животных. Таким образом, большинство случаев ВГЕ-инфекции у кроликов происходит в возрасте до 6 месяцев. На это же указывает и высокая частота выявления анти-ВГЕ IgG у животных этого возраста.
Одновременно с поиском РНК ВГЕ кроликов нами была определена распространенность ВГЕ среди поголовья свиней в Белогородской области -регионе РФ, где регистрируется самая высокая в РФ заболеваемость ГЕ. Так, в 2013 году в Белгородской области заболеваемость ГЕ составила 2,15 случаев/100 000 человек, а в 2014 году - 1,1/100 000 человек. В то же время Белгородская область является цетром свиноводства в РФ. Целью этого раздела работы являлось определение вклада двух видов животных -кроликов и свиней в поддержание циркуляции ВГЕ в регионе и поиск связи между случаями заболевания людей и вирусами животных. Для достижения этой цели необходимо было получить нуклеотидные последовательности ВГЕ не только кроликов, но и свиней, и сравнить их с последовательностями ВГЕ, выделенными от заболевших людей. Для создания рабочей базы данных свиных изолятов ВГЕ нами было протестировано 811 образцов фекальных экстрактов от свиней разных возрастов, содержащихся на фермах 8 районов Белгородской области. РНК ВГЕ была выявлена в 241 образце.
Статистические методы
Существуют три основных подхода к контролю за ВГЕ. Это решение вопросов водоснабжения, пассивная иммунопрофилактика и вакцинация.
Поскольку основным путем передачи ВГЕ является фекально-оральный путь, для профилактики необходимо обеспечить целостность водоснабжения, улучшение санитарных условий путем надлежащей утилизации отходов жизнедеятельности человека, улучшить личную гигиену, способы приготовления пищи и избегать потребления полуфабрикатов и сырых мяса и овощей [127].
Кроме того, важным является соблюдение санитарных норм при термической обработке пищи. Как было показано, вирус является термолабильным. Во время самого начала эпидемии меры по улучшению качества воды, даже такие простые, как кипячение, приводят к предотвращению числа новых случаев. Хлорирование водоснабжения может быть полезно для ликвидации вируса. Во время эпидемии в Индии отказ от хлорирования привёл к увеличению числа случаев заболевания. В не гиперэндемичных районах, где выявляются отдельные случаи ВГЕ-инфекции, источником которой являются животные, могут оказаться полезными превентивные меры, направленные на пресечение алиментарной передачи вируса (в частности, запрет употребления в пищу свинины и оленины) [16].
Самые ранние исследования рациональности индивидуальной защиты от ВГЕ путём пассивной иммунопрофилактики не увенчались успехом. Разовая иммунизация человека сывороточным иммуноглобулином не смогла предотвратить передачу ВГЕ [86]. Позднее было показано, что высокие дозы анти-ВГЕ значительно сокращают продолжительность выделения вируса с фекалиями и предотвращают заболевание приматов, зараженных высокой дозой ВГЕ. В другом исследовании моноклональные антитела к ВГЕ были смешаны с гомологичным штаммом ВГЕ в пробирке и затем введены макакам-резусам, чтобы определить их способность к нейтрализации. В то время как все контрольные животные заболели гепатитом, те, кто получил дозу ВГЕ смешанную с моноклональными анти-ВГЕ, не были инфицированы. Эти данные позволяют предположить, что препараты иммуноглобулинов эффективны против ВГЕ. Подобные моноклональные антитела к ВГЕ были получены и охарактеризованы [67].
Общепризнано, что успешное производство эффективной вакцины ВГЕ возможно благодаря существованию только одного серотипа ВГЕ. Признанию этого факта способствовали предварительные экспериментальные исследования вакцины несколькими исследовательскими группами, которые использовали разные подходы и методы к созданию вакцины против ГЕ. Среди них были ДНК-вакцины [42]; рекомбинантные вирусоподобные частицы ВГЕ [98] и рекомбинантные капсидные белки ВГЕ [145].
Вакцина, разработанная GSK и Walter Reed Army Institute, которая была успешно опробована в исследовании II фазы, не получила дальнейшего развития. Группа из Китая представили данные очень большого числа успешных испытаний вакцины в III фазе [196]. Эти исследования включали почти ПО тысяч лиц, которые получали либо вакцину, содержащую рекомбинантный капсидный белок ВГЕ ("ВГЕ 239") либо плацебо. Эффективность вакцины после трех доз составила 100%. Эта вакцина была одобрена в Китае в начале 2012 года. В настоящее время не известно, когда эта вакцина станет доступной за пределами Китая. Кроме того, эффективность этой вакцины должна быть оценена на наличие возможных рисков у таких групп, как пациенты с терминальной стадией заболевания печени или с ослабленным иммунитетом. Неизвестно также, защищает ли ВГЕ 239 от генотипа 3 ВГЕ. Тем не менее, было показано, что либо полученные в результате вакцинации, либо естественно приобретенные после заболевания антитела способны предотвратить симптоматическое появление гепатита Е, но не бессимптомную инфекцию. Кроме того, было показано, что эта вакцина может безопасно применяться для вакцинации беременных женщин [190].
В последнее время проводится изучение эффективности вакцины ВГЕ 239 на кроликах в экспериментах с гомологичными и гетеро логичными штаммами ВГЕ с целью исследования возможности применения ВГЕ 239 для природных носителей возбудителя заболевания [107]. Также предстоит определить рациональную тактику применения этой вакцины в развивающихся странах для снижения заболеваемости и смертность от гепатита Е [115]. 1.5 ВГЕ кроликов
В нескольких географических районах Китая у выращиваемых на фермах кроликов был выявлен ВГЕ [192]. В недавних исследованиях также сообщается о случаях инфицирования кроликов в США [34]. Позднее анти-ВГЕ и РНК ВГЕ были обнаружены у различных пород кроликов на двух фермах в провинции Ганьсу в Пекине (Китай) и на двух фермах в штате Вирджиния (США). Общая распространенность анти-ВГЕ у кроликов из США (36%) была ниже, чем у кроликов из Ганьсу в Пекине (Китай) (57% и 55% соответственно). Напротив, преобладание ВГЕ РНК в сыворотке и образцах фекалий у кроликов в Соединенных Штатах (16,5% и 15,3% соответственно) было выше, чем в Ганьсу и в Пекине (Китай) (7,5% и 7,0% соответственно) [3; 30]. Наблюдаемые различия могут быть объяснены возрастом кроликов, а также различиями в условиях содержания животных [30].
Исходя из результатов исследования, проведенных в США, распространенность антител была выше у кроликов, живущих в клетке группами по 2-9 особей, чем у кроликов, живущих в клетке индивидуально [150]. Поскольку для ВГЕ характерен фекально-оральный механизм передачи, вирус, скорее всего, распространяется легче между соседями по клетке, тем самым увеличивая количество ВГЕ-положительных кроликов.
По-видимому, ВГЕ распространен среди кроликов широко. В США анти-ВГЕ были выявлены у 40% кроликов на одной ферме, и у 50% - на другой, при этом на последней занималась выращиванием свободных от специфичных патогенов (SPF) животных [79].
Недавние исследования продемонстрировали естественное инфицирование диких кроликов в Европе [76]. Во Франции, где, как правило, сообщается о спорадических случаях ГЕ у людей, недавно было зафиксировано увеличение случаев ВГЕ-инфицирования как в сельскохозяйственных, так и в диких популяциях кроликов. ВГЕ РНК была обнаружена у 7,0% сельскохозяйственных кроликов и у 23% особей из диких популяций [95]. Наблюдаемое отличие в частоте выявления ВГЕ может быть объяснено как различиями возрастных групп (менее 3 месяцев — для сельскохозяйственных кроликов, более 6 месяцев — для диких особей), так и тканей, взятых на анализ (желчь — у сельскохозяйственных кроликов и печень — у диких кроликов). Хотя большая распространенность ВГЕ среди диких кроликов может быть обусловлена их возрастом, однако, зависимость между распространенностью и возрастом не могла быть рассчитана достоверно, так как точный возраст животных не был известен [94].