Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 11
1.1. История культуры и перспективы выращивания растений рода Rubus. L. в промышленных масштабах 11
1.2. Традиционные способы вегетативного размножения 13
1.3. Использование методов биотехнологии в системе воспроизводства растений рода Rubus L. 16
1.3.1. Этап введения в культуру in vitro 22
1.3.2. Этап мультипликации 26
1.3.3. Этап ризогенеза 31
1.3.4. Этап адаптации к нестерильным условиям 35
1.4. Методы длительного хранения in vitro растений в состоянии замедленного роста 44
1.5. Перспективы использования биологически активных веществ нового поколения в малых и свехмалых дозвах в технологии клонального микроразмножения садовых растений 53
2. Экспериментальная часть 68
2.1. Методика исследований 68
2.1.1. Этап депонирования в условиях культуральной комнаты 69
2.1.2. Последействие депонирования на этапах мультипликации, ризогенеза и адаптации 72
2.1.3. Генетическая идентификация на основе молекулярных маркеров 77
2.1.4. Этап ризогенеза 82
2.2. Результаты исследований 85
2.2.1. Применение модификаций препарата Суперстим при длительном депонировании малины ремонтантной в условиях культуральной комнаты 85
2.2.2. Рекультивация микрорастений малины ремонтантной после депонирования в условиях культуральной комнаты 104
2.2.3. Укоренение на этапе ризогенеза и приживаемость на этапе адаптации микрорастений малины ремонтантной после депонирования в условиях культуральной комнаты 124
2.2.4. Генетическая идентификация на основе молекулярных маркеров растений малины ремонтантной прошедших все этапы клонального микроразмножения после депонирования в условиях культуральной комнаты 143
2.2.5. Применение модификаций препарата Суперстим в качестве индукторов корнеобразования на этапе ризогенеза микрорастений рода Rubus L. с учетом последействия на этапе адаптации 148
3. Оценка экономической эффективности применения препарата Суперстим-1 для длительного депонирования микрорастений малины ремонтантной в условиях культуральной комнаты 157
Заключение 161
Список использованной литературы 167
Приложения 201
- Использование методов биотехнологии в системе воспроизводства растений рода Rubus L.
- Перспективы использования биологически активных веществ нового поколения в малых и свехмалых дозвах в технологии клонального микроразмножения садовых растений
- Рекультивация микрорастений малины ремонтантной после депонирования в условиях культуральной комнаты
- Оценка экономической эффективности применения препарата Суперстим-1 для длительного депонирования микрорастений малины ремонтантной в условиях культуральной комнаты
Использование методов биотехнологии в системе воспроизводства растений рода Rubus L.
Клональное микроразмножение – современный интенсивный способ массового бесполого размножения растений в культуре тканей и клеток, при этом полученные растения-регенеранты генетически идентичны исходному экземпляру [177]. При его использовании происходит освобождение тканей микропобегов от возбудителей многих заболеваний, снижающих урожайность до 30-80 % , а реювенилизация организма после культуры in vitro усиливает способность к вегетативному размножению традиционными способами [235, 267].
Клональное микроразмножение in vitro является достаточно трудоемкой технологией, которая требует наличия квалифицированного персонала и большого количества материальных затрат. Себестоимость полученных in vitro растений-регенерантов достаточно высока, но в то же время технология клонального микроразмножения in vitro позволяет круглогодично получать оздоровленный качественный посадочный материал в практически неограниченных объемах [149].
Из всех ягодных культур, представленных в средней полосе, малина наиболее сильно поражается вирусной инфекцией, которая наносит ей ощутимый урон и значительно снижает урожайность [186, 239].
Из всех ягодных культур представленных в средней полосе, малина наиболее сильно поражается вирусной инфекцией, которая наносит ей серьезный вред, ощутимый урон и снижает урожайность. Малину и ежевику поражают около 26 вирусов и вирусоподобных инфекций [239], требующих проверки для исходных и базисных растений:
1) Вирус некроза черной малины (Black raspberry necrosis virus)
2) Вирус крапчатости листьев малины (Raspberry leaf mottle virus)
3) Вирус пятнистости листьев малины (Raspberry leaf spot virus)
4) Бадкавирус желтой мозайки (Rubus yellow net badkavirus)
5) Кукумовирус огуречной мозайки (Cucumber mosaic cucumuvirus)
6) Рабдовирус хлороза жилок малины (Raspberry vein chlorosis rhabdovirus)
7) Идеовирус кустистой карликовости малины (Raspberry bushy dwarf idaeovirus)
8) Неповирус мозайки резухи (Arabis mosaic nepovirus)
9) Неповирус кольцевой пятнистости малины (Raspberry ringspot dwarf nepovirus)
10) Садвавирус латентной кольцевой пятнистости (Strawberry latent ringspot sadwavirus)
11) Неповирус черной кольцевой пятнистости томата (Tomato black ring nepovirus)
12) Неповирус скручивания листьев черешни (Cherry leaf roll nepovirus)
13) Некровирус некротического шока земляники (Strawberry necrotic shock necrovirus)
14) Иларивирус мозайки яблони (Apple mosaic ilarivirus)
15) Фитоплазма карликовости малины (израстание малины) (Rubus stunt phytoplasma) [151].
Ситуация усугубляется тем, что малина поражается вирусной инфекцией не только путем переноса насекомыми, но и передаются нематодами в почве через корневую систему [186].
Помимо вирусных инфекций, к значительным потерям урожайности приводит также корневая гниль, мучнистая роса, микозы стеблей, пурпуровая пятнистость, малинная галлица, почковый клещ, которые распространяются с некачественным посадочным материалом [12, 212]
В связи с популярностью малины, которая является второй промышленной ягодной культурой после земляники, особенно популярны ремонтантные новые сорта, штамбового типа, дают мало побегов, в связи с чем наблюдается дефицит посадочного материала. Маточники ремонтантной малины, заложенные оздоровленным посадочным материалом, дают в разы больше побегов замещения и корневых отпрысков высокого качества, что позволяет ускоренно размножать перспективные сорта малины традиционными способами.
Разработка методов хранения растений в состоянии замедленного роста является перспективным направлением клонального микроразмножения для сохранения генофонда, так как способность растений к генетически стабильной регенерации как правило выше в культурах с замедленным ростом [32]. Главный методический подход к депонированию растений in vitro - достижение состояния максимально замедленного метаболизма, способного поддерживать жизнеспособность растительных тканей.
Существует несколько способов длительного депонирования растительного материала in vitro: криоконсервирование путем глубокого замораживания до температуры жидкого азота (-196С), покрытие поверхности питательной среды слоем минерального масла, изменение газового состава и атмосферного давления внутри культурального сосуда, изменение светового режима и фотопериода, охлаждение до температуры остановки активного роста, и модификация состава питательной среды. Чаще всего применяют последние три способа, поскольку они проще в исполнении и универсальны [95, 213, 226, 234, 253, 275, 280, 281, 287].
Широко применяется способ добавления в питательные среды для замедления роста и сохранения in vitro растительного материала органических ингибиторов роста обладающих осмотической активностью, таких как манит или сахароза, глюкоза, сорбит, или гормональной, например абсцизовая кислота (АБК) [125].
Все предложенные методы требуют специальных условий, реактивов и оборудования при создании условий для длительного депонирования стерильных культур, что требует довольно значительных материальных затрат. В этой связи очень актуальны исследования посвященные упрощению методов длительного хранения микрорастений.
Клональным микроразмножением называют массовое бесполое размножение растений в культуре тканей и клеток, при котором возникшие формы растений генетически идентичны исходному экземпляру, в основе способов микроразмножения лежит способность растительной клетки реализовывать присущую ей тотипотентность [177].
Успех микроразмножения во многом зависит от процесса реювенилизации при культивировании in vitro растительного материала, который как правило изъят со стадийно более зрелого экземпляра [61].
С помощью технологии клонального микроразмножения можно освободить ткани растений от многих патогенов (бактерии, грибы, вирусы, микоплазмы), которые снижают урожайность на 30 % и более [235]. Реювенилизация тканей растительного организма после субкультивирования in vitro усиливает способность к вегетативному размножению этих растений традиционными способами [267].
Не смотря на многочисленные преимущества данной технологии, такие как возможность получения практически неограниченного количества посадочного материала, проведения работ почти не зависимо от сезона, в настоящее время идет пересмотр концепции клонального микроразмножения.
В результате длительных субкультивирований ткани растений подвергаются воздействию синтетических регуляторов роста которые могут провоцировать привыкание тканей и сомаклональную изменчивость регенерантов.
Технологию клонального микроразмножения принято разделять на четыре основных этапа: инициация экспланта в культуру in vitro; пролиферация, когда достигается получение максимального количества меристематических клонов; индукция ризогенеза - укоренение размножаемых побегов in-vitro; адаптация укоренившихся побегов к нестерильным условиям. Начиная с этапа ввода эксплантов в культуру in vitro существует проблема специфичности морфо- и органогенетической реакции сортов растений на активность ростовых веществ, витаминов, макро-и микроэлементов и их композиций. Как правило, сорта культурных растений нуждаются в индивидуальном подборе компонентов питательных сред и их соотношений для наиболее эффективного управления ростом и развитием эксплантов in vitro [23].
Кроме технических проблем, клональное микроразможение имеет много и чисто биологических, например, изначально, культура изолированных органов и тканей растений применялась как метод исследований клеточных процессов в физиологии растений. Большинство авторов ставили задачи длительного роста недифференцированной ткани, поэтому среды, перенесенные с физиологических исследований, стимулируют развитие каллуса.
Перспективы использования биологически активных веществ нового поколения в малых и свехмалых дозвах в технологии клонального микроразмножения садовых растений
Применение экзогенных регуляторов роста во многих странах мира вошли в комплекс мероприятий по возделыванию самых разнообразных сельскохозяйственных культур. Их действие направлено на стимулирование защитных свойств растений, заложенных в них в процессе эволюции [55, 91, 122, 135].
Вероятность физиологических расстройств при культивировании in vitro, как правило, решают снижением концентрации регуляторов роста, однако при этом снижаются темпы роста растений. В связи с этим необходимо проводить испытание новых препаратов и физических методов [266].
Существенным фактором, обусловливающим эффективность действия регуляторов роста является уровень обеспечения растений питательными веществами [17].
В середине 80-х годов прошлого века в работах многих авторов были получены весьма интересные результаты при изучении закономерностей биологических эффектов физиологически активных веществ в области малых и сверхмалых доз или массовых долей в интервале 10-5…10-17 М и менее. Было отмечено, что при уменьшении массовой доли вещества на 1-2 порядка эффект закономерно снижался, затем наступала «мертвая зона» (что означало отсутствие эффекта при более низких массовых долях), далее при последующем уменьшении массовой доли на 4-6 порядков, эффект возникал снова. Это явление получило название эффекта сверхмалых доз [30, 20].
Это явление получило название эффекта сверхмалых доз (СМД) или сверхмалых концентраций (СМК).
Известно, что такие эффекты наблюдались при исследовании влияния различных препаратов, таких как регуляторы роста растений, противоопухолевые препараты, нейропептиды и гормоны, иммуномодуляторы, антиоксиданты и другие вещества как белковой, так и небелковой природы. В то же время была опубликована работа [209], в которой описывалось воздействие физиологически активных веществ в концентрациях от 10–9 М вплоть до ничтожно малых значений. Опубликован обзор по токсикологии с обобщеными данными, которые не поддаются объяснению в рамках принятых представлений. Например, эффект, явно проявляющийся в зоне средних доз при разведении иногда проявляется ниже по сравнению с действием меньших доз. Такие эффекты имеют название «парадоксальным». Парадоксальные эффекты выглядят провалами на кривых «доза-эффект». Кривые, выражающие данную парадоксальную зависимость, могут иметь не один провал [276].
До сих пор, пока не установлено общего аналитического выражения дозовой зависимости реакции биологических объектов на химической воздействие в области эффективных доз, таким образом, все наблюдаемые варианты дозовых зависимостей (имеются в виду аппроксимационные кривые) распределены на три группы: S-образные кривые, показательные (экспоненциальные), и сложные зависимости (парадоксальные эффекты). В большинстве случаев, зависимости «доза-эффект» относится к первым двум группам [24, 96].
Если эффект воздействия существенен, погрешность в его оценке будет относительно мала. В случае низких доз изменения отдельных признаков у отдельных организмов в ответ на воздействие препарата могут быть сопоставимы. В этой области погрешность при оценке эффекта особенно ощутима [96]. В исследованиях отмечено «парадоксально, что парадоксальные эффекты не всегда поддаются воспроизведению», иногда в повторных экспериментах, проводимых с целью воспроизведения парадоксальных эффектов, выявляемые провалы на кривых «доза 55 эффект» фиксируются при разных концентрациях действующего ксенобиотика [276, 276, 261].
Различные организмы и даже разные линии одного и того же вида, как известно, значительно отличаются друг от друга по своему биохимическому и физиологическому статусу, что находит отражение в их реакции на воздействие того или иного ксенобиотика. Например при исследовании на микроорганизмах влияния дитиокарбамата на плесень парадоксальная зависимость наблюдалась не ко всем видам, а при изучении роста бактериальных спор в условиях действия дипиколиновой кислоты парадоксальную зависимость показала только одна линия бактерий [24, 263]. Достаточно широко распространены парадоксальные эффекты в физиологии многих живых организмов, и в химических системах [75, 262, 218]. Хотя парадоксальный эффект имеет место при действии химических веществ на биологические системы разных уровней организации (организменный, клеточный, субклеточный), механизм его в большинстве случаев неясен, и в настоящее время четкое объяснение природы этого феномена отсутствует.
В целом данное явление, как признается современными исследователями, действительно существует. Однако не во всех случаях удается получить достоверное воспроизведение наблюдаемых эффектов при работе с СМД и СМК. В связи с этим, видные исследователи, работающие в этой области, весьма осторожны в трактовке данного явления [14].
В настоящее время под малыми дозами БАВ подразумевают дозы (концентрации) на 1 - 2 порядка меньшие, чем действующие (медианные, пороговые, эффективные и др.). В качестве сверхмалых доз рассматриваются концентрации в интервале 10–18-10–14 М, так как эффективность концентраций более 10–12 М возможно объяснить на основе лиганд рецепторной кинетики. При концентрациях менее 10–19 М в экспериментальном объеме порядка 1 мл может не быть даже одной молекулы вещества. Исследователи отмечают, что биоэффекты почти не наблюдаются при снижении концентрациям ниже 10–18 М [14].
Характерной особенностью действия веществ в сверхмалых дозах является то, что, проявляются определенные закономерности эффектов несмотря на различный характер контактирующих объектов и препаратов [195, 241, 256, 285]. Зависимость «доза-эффект» в интервале СМД носит сложный характер и имеет следующие особенности: полимодальность с «мертвой зоной», составляющей по концентрации 2-3 порядка; «перемена знака» активности (стимуляция-ингибирование); практически равные по величине эффекты доз, различающихся на 5-8 порядков. «Мертвая зона» обычно приходится на интервал концентраций 10–12 - 10–18 М. В больших концентрациях вещество либо не действует, либо дает эффект того же или противоположного знака, что и при действии СМД [22].
Еще одной особенностью действия СМД является возникновение значительного эффекта вещества в том случае, если в самом биообъекте эндогенно присутствует намного большая концентрация того же вещества. В обычных условиях, в соответствии с законами равновесной кинетики, добавление малой концентрации вещества к уже имеющейся в системе большой концентрации того же вещества не приводит к заметным эффектам.
Так же для эффектов СМД отмечается нестабильность наблюдаемых эффектов не только по величине, но и по знаку. При этом крайне редко встречается зависимость с насыщением при возрастающих концентрациях, обычная в экспериментах с действующими дозами.
Таким образом, ряд общих закономерностей позволяет выделить эффекты СМД в определенный класс явлений и рассматривать их в целом.
В исследованиях СМД частыми проблемами являются невоспроизводимость результатов и отсутствие систем в опытах, решение методических вопросов крайне необходимо для дальнейших исследований природы эффектов СМД, в то же время, фундаментальный аспект проблемы действия сверхмалых доз связан с выяснением природы эффектов СМД.
К настоящему времени известны следующие гипотезы механизма действия СМД:
- концентрирование действующего вещества предполагает что количество вещества в зоне эффекторов, на которые направлено действие, может оказаться на 2-3 порядка больше исходного.;
- наличие исключительно высокоэффективных систем усиления сигнала предполагают, что необходимы каскадные реакции, на каждом этапе которых на «выходе» больше активных молекул, чем на «входе», что сопровождается явлением рецепторного резерва. При наличии рецепторного резерва для достижения эффекта достаточно, чтобы лиганд связался лишь с некоторой незначительной частью рецепторов на биообъекте. За счет этого явления эффективная концентрация действующего вещества может быть на 1-2 порядка ниже константы диссоциации данного лиганд-рецепторного комплекса.
Рекультивация микрорастений малины ремонтантной после депонирования в условиях культуральной комнаты
После длительного депонирования любой растительный материал нуждается в процедурах восстановления и размножения перед следующим этапом мультипликации и длительного хранения, либо ризогенеза и адаптации. Восстановленные и размноженные после длительного хранения микрорастения используют для пополнения депонируемой коллекции, высадки в грунт, экспериментов или для передачи в другие организации [42]. Используемый способ длительного депонирования должен обеспечивать не только сохранение жизнеспособности микрорастений при депонировании, но и реализацию их регенерационного потенциала на последующих этапах микроразмножения, включая адаптацию к условиям ex vitro [178, 120].
Известно, что часто проявляющиеся парадоксальные эффекты при экспериментах с СМД проявляются гораздо чаще, чем фиксируются в научной литературе [276]. И их не всегда удается наблюдать только потому, что они появляются ниже или выше границ изучаемых концентраций или в области промежуточных концентраций, которые не рассматривались. Либо происходит иначе, когда парадоксальные эффекты казались совершенно очевидными по экспериментальным данным, их просто не учитывают. Кроме того, парадоксальные эффекты могут выявляться в более отдаленное время, чем это определено рамками конкретного эксперимента. В результате они могут быть просто упущены. Однако, если увеличить время наблюдения за биообъектом, сравнимый эффект может быть достигнут при действии значительно более низких концентраций [22].
После проведенных экспериментов с модификацией методов длительного депонирования микрорастений малины ремонтантной в условиях культуральной комнаты, нам было важно изучить регенерационный потенциал опытных растений по сравнению с регенерантами тех же сортов, но не подвергавшихся депонированию. Для чистоты эксперимента возраст культуры был одинаковым.
На этапе мультипликации были произведены два последовательных пассажа на питательную среду по прописи MS, с добавлением 6-БАП в концентрациях 0,25 и 0,5 мг/л, длительность субкультивирования составила 60 дней, в течение которых были произведены два учета коэффициента мультипликации на 30 и 60 день субкультивирования.
В целом, следует отметить, что при оценке последействия депонирования микрорастений в условиях культуральной комнаты на питательных средах с добавлением препарата Суперстим-1 на регенеративный потенциал регенерантов малины ремонтантной сорта Бриллиантовая было выявлено явное преимущество опытных вариантов по сравнению с контролем без длительного хранения.
Оценка последействия влияния препарата Суперстим-1 на коэффициент размножения сорта Бриллиантовая при первом пассаже на 30 день субкультивирования показала достоверные различия с контролем всех вариантов опыта не зависимо от концентрации 6-БАП, который колебался в пределах 2,4-6,0 ед. против 1,5-2,0 ед. в контроле (таблица 8, рисунок 24, приложения В1-В8).
На 60 день субкультивирования так же были выявлены достоверные различия с контролем по всем вариантам опыта, не зависимо от концентрации 6-БАП, и коэффициент размножения колебался в пределах 4,0-9,6 ед. против 1,5-3 ед. в контроле (таблица 9, приложения Г1-Г8).
После второго пассажа, на 30 и 60 день субкультивирования, также было выявлено преимущество опытных вариантов с применением препарата Суперстим-1. Не зависимо от концентрации 6-БАП, коэффициент мультипликации на 30 день составил 2,6-6,6 ед. против 1,5-3,0 ед. в контроле; на 60 день субкультивирования - 4,4-10,4 ед. против 2,5-3,0 ед. в контроле (таблицы 10, 11, рисунок 24, приложения Д1-Д8, Е1-Е8).
Как и следовало ожидать, с увеличением количества пассажей увеличивался и коэффициент размножения микрорастений (первый пассаж – 4,0-9,6 ед., второй пассаж – 4,4-10,4 ед.) (таблица 11, рисунок 26).
Что касается управления процессами формообразования, то эффективно применять препарат 6-БАП в концентрации 0,25 мг/л, так как в данном случае наблюдается широкий диапазон активных концентраций 110-3% …110-18% (60 день: первый пассаж – 6,0-7,6 ед., второй пассаж – 7,2-8,0 ед. против 1,5-3 ед. в контроле). Следует отметить, что 6-БАП в высокой концентрации 0,5 мг/л проявляет ингибирующее влияние на рост микрорастений в большинстве вариантов опыта, за исключением вариантов 110-9 и 110-12, которые и имеют самый высокий коэффициент размножения в эксперименте на обоих этапах мультипликации (первый пассаж – 8,8-9,6 ед., второй пассаж – 8,8-10,4 ед. против 1,5-3 ед. в контроле).
При оценке последействия депонирования микрорастений в условиях культуральной комнаты на питательных средах с добавлением препарата Суперстим-2 следует отметить, что в целом результаты уступают показателям, полученным при оценке последействия применения препарата Суперстим-1 (рисунок 25, рисунок 27). Однако, во всех вариантах опыта также выявлены достоверные различия с контролем без длительного хранения не зависимо от концентрации 6-БАП и этапов мультипликации.
С увеличением количества пассажей также увеличивался коэффициент размножения микрорастений. На обоих этапах мультипликации на 60 день субкультивирования при применении 6-БАП в концентрации 0,25 мг/л диапазон активных концентраций составил 110-6%…. 110-12 % (первый пассаж – 6,4- 6,8 ед., второй пассаж – 6,8-7,6 ед. против 2,5-3 ед. в контроле) (таблицы 8-11, рисунок 25).
При применении 6-БАП в концентрации 0,5 мг/л в большинстве вариантов опыта также проявлялось ингибирующее влияние на рост микрорастений, за исключением вариантов 110-3, 110-6 и 110-18 , где на 60 день субкультивирования на первом пассаже коэффициент размножения составил 7,2-8,8 ед., на втором пассаже – 8,0-9,2 против 2,5-3ед. в контроле (таблица 9).
Оценка экономической эффективности применения препарата Суперстим-1 для длительного депонирования микрорастений малины ремонтантной в условиях культуральной комнаты
Оценка экономической эффективности производится для того, чтобы определить себестоимость саженцев, полученных различными способами.
Нами уже установлено, что препарата Суперстим-1 эффективно вводить в состав питательной среды перед длительным депонированием. Предложенная технология не требует специального оборудования, условий, дополнительных пересадок на свежую питательную среду и позволяет сохранить жизнеспособность микрорастений малины ремонтантной сорта Бриллиантовая без признаков некрозов и хлорозов в течение 12 месяцев.
При рекультивации на первом пассаже коэффициент размножения составил 7,6 против 1,5 ед. в контроле без депонирования, на втором пассаже – 7,6 против 2,5 ед.
На 30 день этапа ризогенеза на укореняемость микрорастений составила 100% против 71,4% в контроле.
На 20 день адаптации приживаемость микрорастений составила 100% против 85,7% в контроле и уже по высоте приростов (4,7 против 2,5 см) соответствовали требованиям ОСТ 10 069-95 (приложения Т). На 35 день адаптации высота приростов составила 12,8 против 10,8 см.
Чтобы оценить эффективность каждого варианта опыта, рассчитаны технологические карты для одного рабочего периода (прил, У), исходя из того, что при каждом способе производства исходное количество растений для этапа мультипликации составляло 100 шт., а на производстве уже имеется необходимое оборудование и инструменты. Для того чтобы вычислить выход саженцев после этапа адаптации, необходимо учесть потери на этапе укоренения и адаптации (таблица 33). При высоком уровне подготовки сотрудников потери при клональном микроразмножении минимальны и не превышают 5 %. Затраты на расходные материалы, в том числе и на питательные среды различаются по вариантам опыта (таблица 33, 34).
Уровень рентабельности - процентное отношение прибыли к сумме полной себестоимости товарной продукции. Каждый процент рентабельности соответствует получению одной копейки в расчете на рубль затрат. Приемлемый уровен рентабельности должен составлять 130-140%, на предприятиях занимающимися клональным микроразмножением растений уровень рентабельности чаще всего ниже, не смотря на частичную автоматизацию производства (автоклавы и средоварки с автоматическим управлением, перистальтические насосы для разлива питательной среды, моечные машины для посуды), и сравнительно высоким коэффициентом мультипликации микрорастений, достигающим 4-6 ед./пассаж, а также высокими ценами реализации полученного растительного материала.
При экономической оценке целесообразности применения препарата Суперстим-1 на этапе длительного депонирования микрорастений малины ремонтантной были учтены такие факторы, как затраты на электроэнергию, повышение коэффициента размножения, увеличение процента укоренившихся и адаптированных ex vitro растений. Уровень рентабельности повысился с 21,8 % без применения длительного хранения микрорастений до 130,5 % для вариантов с применением длительного хранения в условиях культуральной комнаты с применением препарата Суперстим-1 (таблица 35, приложения У1-У2).