Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 12
1.1. Значение прививки в плодоводстве и питомниководстве. Биологические основы прививки. Проблемы несовместимости культур 12
1.1.1. Анатомия срастания компонентов прививок 16
1.1.2. Диагностика срастания компонентов прививок. Визуальные, биохимические и биофизические методы оценки совместимости и срастания компонентов 20
1.2. Раздражимость тканей растений. Возбуждение и торможение клеток растений в ответ на раздражение 24
1.2.1. Биофизические методы диагностики функционального состояния тканей растений 28
1.2.2. Электропроводность тканей прививок в процессе срастания 29
2. Объекты и методы исследований 31
2.1. Объекты исследования 31
2.2. Методы исследования качества срастания компонентов прививок 37
2.1.1. Метод электропроводности 37
2.1.2. Метод регистрации разности биопотенциалов 40
2.1.3. Метод «меченых атомов» 42
3. Экспериментальная часть 44
3.1. Разработка методики измерения электропроводности тканей прививок 44
3.1.1. Распределение значений электропроводности тканей на косом срезе однолетнего прироста и выбор оптимальной глубины введения электродов в ткани 45
3.1.2. Время восстановления разности БЭП прикамбиальных тканей черенка после раздражения их игольчатыми электродами 46
3.1.3. Сравнение значений электропроводности у различных плодовых культур на однолетних приростах: по длине, по окружности стебля и вблизи почки 48
3.1.4. Влияние температуры окружающей среды на показания электропроводности тканей однолетних приростов плодовых культур 56
3.1.5. Определение значений электропроводности тканей в зависимости от места введения электродов в зоне прививки 63
3.2. Рекомендации по использованию методики для измерения электропроводности у привитых растений 64
3.3. Апробация методики 64
3.3.1. Апробация методики на не привитых черенках 64
3.3.2. Апробация методики на привитых черенках 85
3.3.3. Регистрация разности биопотенциалов и электропроводности между привоем и подвоем привитых культур 98
3.3.4. Применение метода меченых атомов для определения срастания прививочных компонентов 106
3.4. Проведение опытов в производственных условиях 111
3.4.1. Исследование динамики электропроводности тканей прививочных компонентов при проведении летних прививок черенком в процессе зелёного черенкования 111
3.4.2. Исследование динамики электропроводности тканей прививочных компонентов при проведении весенних прививок 118
3.4.3. Исследование динамики электропроводности тканей прививочных компонентов при проведении зимних прививок 124
4. Экономическая эффективность 129
Заключение 133
Список использованной литературы 145
Приложения 162
- Диагностика срастания компонентов прививок. Визуальные, биохимические и биофизические методы оценки совместимости и срастания компонентов
- Сравнение значений электропроводности у различных плодовых культур на однолетних приростах: по длине, по окружности стебля и вблизи почки
- Апробация методики на привитых черенках
- Исследование динамики электропроводности тканей прививочных компонентов при проведении зимних прививок
Диагностика срастания компонентов прививок. Визуальные, биохимические и биофизические методы оценки совместимости и срастания компонентов
Основной задачей в питомниководстве является оптимизация процессов производства качественного посадочного материала и своевременная оценка жизнеспособности привойно - подвойных комбинаций. В производственных условиях используется визуальный способ оценки срастания привоя и подвоя, что не позволяет оценить качество срастания прививок во времени, а это важно, так как большинство разломов происходит в поздние сроки - 5-15-летнем возрасте [58, 104]. Разработка методов прогноза и диагностики срастания компонентов прививки - актуальная потребность практики.
Согласно «Программе и методике сортоизучения плодовых, ягодных и орехоплодных культур» - ВНИСПК, 1999 , в основу способа исследования совместимости компонентов, заложена следующая закономерность: у совместимого привойно - подвойного сочетания, которое следует рассматривать как единый организм, активность метаболических процессов находится на уровне, свойственному непривитому подвою. При отсутствии координации функций прививочных компонентов, имеющем место у несовместимой комбинации, метаболическая активность привитого растения отличается от таковой у соответствующего подвоя (независимо от формы проявления несовместимости). Причем, чем выше степень несоответствия прививочных компонентов, тем больше указанная разница [104].
В работе Коровина экспресс - оценку совместимости прививок осуществляли методом пересадки колец коры подвойных форм на привой или прививки сортов на отводки подвоев [59].
Разработан и успешно апробирован простой визуальный метод прогноза совместимости прививочных компонентов по их регенерационному потенциалу, определяемому путем удаления части коры с помощью трубчатого сверла (10мм) и наблюдением за образованием каллуса на раневой поверхности изучаемых растений [4]. Регенерационный потенциал определяют по формуле, учитывающей прямую зависимость регенерационного потенциала от скорости заполнения каллусом раневой поверхности. Однако этот метод продолжителен и основан на субъективной визуальной оценке тканей в процессе регенерации.
Предложен способ ранней диагностики совместимости прививок путём сравнения отношения тотальной РНК к тотальной ДНК в верхушках побегов у испытуемой комбинации и непривитого подвоя. Чем ближе эти показатели, тем выше степень соответствия компонентов прививки [32]. Автором также использован биологический метод оценки срастания по показателю отношения величины рабочей адсорбирующей поверхности корневой системы в процентах к её общей массе. Этот показатель у совместимых привойно -подвойных комбинаций выше или равен таковому у непривитого подвоя, а у несовместимых – существенно ниже. Этот метод не позволяет осуществлять прижизненную оценку совместимости.
Разработан способ [64, 65] определения качества срастания прививок по рентгенографическому изображению. Рентгеновские лучи, проходя через ткани прививки, поглощаются в той или иной степени, а на рентгеновской пленке фиксируются тени большей или меньшей оптической плотности. На рентгенограмме процесс соединения проводящей системы наблюдается в виде уменьшения плотности изображения в тех участках каллусной ткани, где идёт интенсивная дифференциация сосудов [65].
В работе [153] использовался метод меченых атомов для исследования совместимости. В качестве количественного показателя совместимости прививок может служить отношение концентрации меченого фосфора (вносимого в почву) в листьях привоя испытуемого растения к концентрации меченого фосфора в листьях привоя контрольного растения, хорошая совместимость которого с данным подвоем заранее известна. При совместимых прививках на заданном подвое указанное отношение близко к 100%, при несовместимых оно значительно меньше [153]. Этот метод диагностики сложен и не безопасен.
Методом импеданса (измерение комплексного активного и реактивного электрического сопротивления) оценивали состояние привоев и подвоев на ранних этапах формирования лесосеменных плантаций 3-5-ти летних саженцев сосны обыкновенной [47, 48]. Сопоставляли текущие приросты осевых побегов и значения импеданса прикамбиального комплекса тканей привоя и подвоя с помощью электронного влагомера древесины и металлических электродов. Качество прививок в большей степени отражалось на импедансе привоя, при этом неблагоприятные условия выращивания саженцев влияли в значительной мере на импеданс подвоя. Выявлены различия в показателях импеданса подвоя и привоя при некачественном срастании прививок и нарушении водного режима; констатировали взаимосвязь ежегодных приростов с электрическим сопротивлением тканей привоя и подвоя. Однако, значения импеданса у 3-5-ти летних прививок в условиях питомника не являются актуальными, важнее ранняя диагностика срастания компонентов, в том числе для избегания излишних финансовых затрат. Предложен метод диагностики приживаемости прививок, осуществляемый путём регистрации электрического сопротивления у прививок в первый и на 5-10 день после прививки [103]. Выбраковывали прививки, у которых при повторном измерении произошло увеличение сопротивления. При использовании этого метода, обнаружение не прижившихся прививок, осуществляется на 5-10 день, когда появляются первые клетки каллуса, происходит рассасывание изолирующей прослойки и закладка вторичного камбия, что не вполне объективно, т.к. по анатомическим исследованиям срастания прививок проводящая система полностью восстанавливается в более поздние сроки [43, 62].
С учётом выше отмеченных недостатков способов диагностики и методических подходов, нами был использован метод измерения динамики электропроводности тканей прививочных компонентов с целью разработки экспресс-метода прижизненной оценки качества срастания прививок плодовых культур [24 – 29, 94, 144-147].
Сравнение значений электропроводности у различных плодовых культур на однолетних приростах: по длине, по окружности стебля и вблизи почки
Для эксперимента были отобраны однолетние приросты следующих плодовых культур: яблоня, груша, слива, айва.
А) Сравнение значений электропроводности у различных плодовых культур по длине однолетних приростов
Для опыта было взято по пять приростов каждой культуры с периферийной части кроны, на которых измеряли длину побега и через каждые 9 см – диаметр, а через каждые 3 см – электропроводность по длине прироста. Результаты замеров представлены на графиках (рис.10, 11) и сведены в таблицу 5.
Ниже представлены характерные графики значений электропроводности по длине побегов с указанием диаметра однолетнего прироста для сливы Волжская красавица (рис. 10) и яблони Антоновка обыкновенная (рис. 11).
Как видно из графиков (рис. 10 и 11) при увеличении диаметра однолетнего прироста по его длине наблюдается увеличение электропроводности. Диапазон изменения диаметров всех изучаемых объектов был от 3 до 7,5 мм, а диапазон изменения значений электропроводности у сливы составлял 152 - 255 мкСм, у яблони – 220 - 310 мкСм. При этом длина прироста у сливы 42 см, а у яблони 60 см. Замеры остальных образцов обработаны и сведены в таблицу 5, в которой отмечены диапазоны изменения значений электропроводности, длины приростов и их диаметры.
Как видно из таблицы 5, наибольшие значения электропроводности при максимальном диаметре 9 мм были у груши 346±29 мкСм и яблони 308±15мкСм, слива имеет немного меньшие значения электропроводности 265±17мкСм, а у айвы значения ещё ниже: 150±19мкСм. Такое распределение значений при равных диаметрах у различных плодовых культур свидетельствует об особенностях электролитного состава и структуры тканей каждой культуры.
Ранее было отмечено, что значения электропроводности тканей приростов меняются линейно в зависимости от их диаметра. Определим, на сколько меняется электропроводность в случае необходимости сместить электроды на 1 см по длине черенка. Так для яблони, при длине побега 60 см, изменение электропроводности равно примерно 1,5 мкСм, т.е. около 0,7%. Для груши это изменение составит: (346-230) мкСм / 45 см = 2,6 мкСм. То есть, эта величина составляет 1,1% от первоначального значения. Для сливы – 1,7%, айвы – 1%. Следовательно, можно принять, что для всех исследуемых культур погрешность в изменении значений электропроводности не более 1,7%. Б) Сравнение значений электропроводности у различных плодовых культур по окружности однолетних приростов
Известно, что черенки для зимней прививки заготавливают в начале зимы, до наступления сильных морозов, так как подмерзшие черенки плохо приживаются [14, 15, 16, 111]. Для прививки используют однолетние приросты с периферийных и освещенных частей кроны с хорошо вызревшей древесиной, длиной 30-50 см и толщиной 6-10 мм.
Электропроводность тканей однолетних приростов семечковых (яблоня Папировка) и косточковых культур (слива Тульская черная) с диаметром 7 ± 0,3 мм измеряли по окружности побега в зависимости от частей света (табл. 6).
Наибольшие значения электропроводности у изучаемых однолетних приростов наблюдали с южной стороны, а наименьшие - с северной, как у яблони, так и у сливы. Различия между этими значениями - около 40%, в то время как между значениями электропроводности тканей с восточной и западной стороны существенной разницы не обнаружили (около 10%).
Определим величину погрешности в измерении электропроводности при перемещении измерительного электрода на 1 мм по длине окружности однолетнего прироста. Рассчитаем, как меняются значения электропроводности при смещении электродов влево или вправо от южной стороны. При диаметре образца 7 мм длина окружности составит 22 мм, тогда реперные точки (юг, восток, север, запад) будут размещаться на 5,5 мм друг от друга. Значения реперных точек приведены в таблице 6.
Расчёт процентного отклонения значений электропроводности тканей показал, что для максимальных значений отклонения между южной и восточной сторонами однолетних стеблей яблони: (275-250) мкСм / 5,5 мм = 4,5 мкСм/мм, что соответствует 1,7% от первоначального значения. Это отклонение является максимальным. Остальные отклонения имеют меньшие значения.
Как видим, что при перемещении электродов по длине однолетнего стебля на 1 см вверх или вниз от первоначальной точки замера, либо при перемещении его по окружности влево или вправо на 1 мм, погрешность значений не превысит 1,7%. При регистрации динамики электропроводности принимаем, что зона введения электродов в ткань растения должна быть по длине побега 10 мм и по окружности стебля 1 - 2мм в любую сторону. На данной площади можно сделать около 60 замеров.
В) Сравнение значений электропроводности тканей на однолетних приростах плодовых культур при расположении электродов вблизи почки.
Цель эксперимента: определить степень влияния месторасположения электродов на показания значений электропроводности тканей в зависимости от структурных элементов однолетних приростов яблони и сливы.
Объектами исследования были однолетние приросты яблони (Папировка) и сливы (Тульская черная). Опыты проведены на 10-ти приростах яблони с диаметрами от 4,1 – 7,1 мм и на 10-ти приростах сливы с диаметрами от 3,5 до 5,8 мм. Электроды вводили в ткани прироста, как показано на рис. 12. Измерения проводили весной, до распускания почек.
Данные по распределению значений электропроводности у однолетних приростов яблони Папировка (табл.7) и сливы Тульская черная (табл.8) представлены в таблицах.
Наибольшие значения электропроводности наблюдали под почкой у яблони 222 ± 29 мкСм и сливы 195 ± 29 мкСм. Вероятно, это было связанно с аттрагирующим эффектом в зоне почек на распределение ионных потоков [51, 60, 143]. Наименьшие значения электропроводности были над почкой 187 ± 26 мкСм и 172 ± 32 мкСм, соответственно. Наиболее близкими значения электропроводности были при измерении слева и справа от почки, как у яблони, так и у сливы. Данная тенденция в распределении значений электропроводности не зависела от диаметра приростов и от культуры.
Исходя из полученных данных, был произведён расчет процентного отклонения значений электропроводности в зависимости от места измерения (табл. 9).
Данные, приведенные в таблице 9, показали, что максимальные процентные отклонения в значениях электропроводности наблюдали между измерениями над и под почкой – до 33,1% у яблони и 31% у сливы. Наименьшие отклонения в значениях были при измерении электропроводности слева и справа от почек – 4,7 % у яблони и 2,2 % - у сливы. Процентное отклонение значений с обратной стороны почки занимает промежуточное значение между «над / под» и «слева / справа» от почки.
Для того, чтобы избежать влияния структурных элементов однолетних приростов (почек) на снятие показаний электропроводности тканей в процессе срастания прививок, необходимо исключить введение электродов «над» и «под» почкой. Для получения достоверных данных следует вводить электроды либо «слева», либо «справа» от почки.
Апробация методики на привитых черенках
Цель опыта: провести проверку методики измерения электропроводности тканей привитых черенков косточковых культур. Задачи опыта:
1. Выявить динамику электропроводности в процессе срастания прививок на разных стадиях физиологического состояния исследуемых образцов
2. Оценить факторы влияния на показания электропроводности тканей косточковых культур
3. Провести сравнение полученных данных с использованием метода регистрации разности биопотенциалов и метода меченых атомов
Опыты на привитых черенках проводились с использованием метода электропроводности при условиях на гране жизнеспособности черенков, с целью фиксации функциональных состояний привитых растений.
В качестве привоев использовали сорта абрикоса Эдельвейс и Гвиани, а в качестве подвоев сливу Скороспелка новая и Евразия – 21, а также алычу – 12-120, 13-113, ОП-23-23. Для вишни черенками привоев были сорта Анухтинская и Склянка розовая, подвоями – ЛЦ-52 и ВЦ-13. Побеги исследуемых объектов были заготовлены заранее (начало декабря) и находились в хранилище при температуре 0 - +4 С. Перед проведением прививки (конец февраля – начало марта), побеги замачивали в воде в течение трёх дней, а затем проводилась операция прививки. В опытах использовали черенки разного диаметра от 3 мм до 8,5 мм. Длина привитого растения не более 20-ти см. Для каждой привойно - подвойной комбинации было сделано по 10 прививок, все комбинации были пронумерованы. Готовые прививки опускали на глубину 1,5-2 см в ёмкость с водопроводной водой. Воду предварительно отстаивали в течение 2-х суток и с периодичностью в 2-3 дня её обновляли.
Перед помещением привитых черенков в ёмкость с водой проводили измерение электропроводности тканей привойно - подвойной комбинации в трёх местах: подвой, место прививки, привой. Данные по электропроводности и состоянию прививок записывали в журнал наблюдений. Последующие замеры проводили ежедневно в течение 3-х недель. Опыты показали, что все произведённые прививки с сортами абрикоса Эдельвейс и Гвиани в течение первых 7-ми дней сохраняли жизнеспособность, у некоторых наблюдали распускание почек и цветение. В последующие дни разные растения в зависимости от их диаметров и первоначального состояния вели себя по-разному: засыхали, подгнивали, оставались жизнеспособными.
Срастание компонентов прививок в конце опыта по привойно -подвойным комбинациям черенков было следующее:
- Эдельвейс /Евразия-21, Гвиани / Евразия-21 - 0 %;
- Эдельвейс / ОП-23-23, Гвиани/12-120, Гвиани/Скороспелка новая -10%
- Эдельвейс/12-120, Эдельвейс/13-113 - 20%
- Гвиани/13-113 - 30%
- Эдельвейс/Скороспелка новая, Гвиани/ОП-23-23- 40%
- Апухтинская /ВЦ-13 - 10%;
- Апухтинская / ЛЦ-52, Склянка розовая / ЛЦ-52,Склянка розовая / ВЦ-13 -0%
Динамика изменения состояния жизнеспособности привойно -подвойных комбинаций с сортом Эдельвейс отразилась и на электропроводности, что позволило отобразить это графически (рис. 33 - 35).
Как видно на графике (рис. 33), у наиболее жизнеспособной привитой комбинации Эдельвейс / Скороспелка новая наблюдали набухание почек на второй день, которое выразилось локальным повышением значений электропроводности на 10-15 мкСм. С 1-го по 9 ый день у компонентов прививки повышение электропроводности составило 30-70 мкСм. На 12-ый день отмечено повышение электропроводности тканей привоя на 15-25 мкСм, очевидно связанное с началом образования побега. Однако с 15-го по 22-ой день показания электропроводности всех трёх компонентов прививки изменялись по – разному, что указывает на потерю жизнеспособности и начало загнивания растения.
Спокойное течение срастания (рис. 35) выявлено у другой привойно - подвойной комбинации Эдельвейс / 13-113 (d=4мм) показано на рис. Линии изменения электропроводности в течение 22 дней находятся на близком расстоянии друг от друга, часто превращаясь в одну линию. На 7-й день наблюдалось набухание бутона, что отображалось на графике локальным снижением электропроводности приблизительно на 20-30 мкСм. График имеет слабую положительную динамику значений электропроводности и на 22-й день прививка ещё сохраняла свою жизнеспособность.
Аналогичные графики, отображающие характерные состояния привитых растений, приведены ниже для привойно - подвойных комбинаций с сортом абрикоса Гвиани (рис. 36 -38).
Как видно, графики привойно - подвойных комбинаций с сортами Эдельвейса (рис. 33 – 35) и Гвиани (рис. 36 – 38), схожи между собой и аналогичны графикам, отражающим состояние жизнеспособности их отдельных черенков. Таким образом, отражение всех физиологических состояний растений на всех графиках отображается одинаково. Поэтому данные объяснения были приняты в качестве анализа жизнеспособности прививаемых компонентов при обработке материалов в дальнейших опытах.
Для определения зависимости показаний электропроводности между подвоем и привоем был проведён корреляционно-регрессионный анализ для комбинаций с сортом абрикоса Гвиани по всем удавшимся прививкам. Не смотря на то, что запас питательных веществ в тканях растений был ограничен, однако 7 прививок из 50 сохранили свою жизнеспособность на момент завершения опыта. Коэффициент корреляции между значениями электропроводности привоя и подвоя равен 0,6, что говорит о прямой и заметной связи величин (рис 39).
Исследование динамики электропроводности тканей прививочных компонентов при проведении зимних прививок
Исследование проводили на зимних прививках согласно методике [5, 111, 112] в середине февраля. В эти сроки возможность повышения приживаемости возрастает, поскольку процессы сращивания компонентов прививки контролируются . Привой и подвой находились в вынужденном покое и хранились при температуре 0 -+4С в подвале. Прививки проводили способом улучшенной копулировки. В данном опыте исследовали заведомо совместимую комбинацию яблоня Папировка / 62-396, несовместимую по типу непрочного срастания яблоня Китайка долго / 62-396 [129] и заведомо несовместимую груша Чижовская / 62-396 [58]. Измерения электропроводности проводили согласно методике описанной в главе 2. При проведении зимней прививки наиболее значимым при оценке качества срастания является динамика значений электропроводности привоя, т.к. на начальных этапах срастания у черенков привоя сказывается недостаток питательных веществ и воды из-за расходования их на процессы регенерации. Состояние подвоя было более стабильным из-за наличия корневой системы и целостности растительного организма.
Как было установлено ранее (см. 3.3.2.) при качественном срастании компонентов прививки характерно следующее расположение кривых на графике: верхнее - электропроводность подвоя, внизу - электропроводность привоя и по середине электропроводность места прививки. При этом кривые располагаются близко друг от друга и коэффициент корреляции значений электропроводности привоя и подвоя стремится к 1. Важным показателем качественного срастания прививки является также характер динамики электропроводности - монотонный рост в пределах 80 мкСм в первые 14-16 дней.
Результаты данного опыта по зимней прививке по трём привойно -подвойным комбинациям сведены в таблицу 20 и представлены на рис. 62 - 123 в виде графиков и в Приложениях 5 - 7. По данным эксперимента рассчитаны коэффициенты корреляции подвоя и привоя на 1-й, 10-й и 28-25-й день опыта (табл. 20).
Как видно на рис 62 у совместимой комбинации сорта яблони Папировка, привитой на клоновый подвой 62-396 наблюдался постепенный рост электропроводности у всех компонентов прививки, стандартное отклонение не превышало ± 30 мкСм (табл. 20). Кривые динамики электропроводности расположены в правильном порядке: подвой, прививка, привой и довольно близко друг от друга. Коэффициент корреляции равен 0,81. Данный график соответствует всем признакам качественного срастания компонентов прививки Папировка / 62-396.
На рис. 63 представлен график несовместимой по типу непрочного срастания привойно – подвойной комбинации Китайка Долго/62-396. Значения электропроводности привоя практически не меняются. До 13 дня расположение кривых электропроводности подвоя, прививки и привоя было в правильном порядке. С 7-го дня отмечается тенденция общего понижения значений электропроводности подвоя и прививки. После 13-го дня значения прививки и подвоя сблизились, при этом значения электропроводности прививки стало несколько выше, чем значения подвоя, что свидетельствовало о нарушении процессов срастания и возможной последующей гибели растений. Разница между средними значениями электропроводности на 1-й и на 25-й день не превышает 5 мкСм. При этом стандартное отклонение подвоя не превышает ±31 мкСм. Коэффициент корреляции подвоя и привоя на 25-й день опыта равен 0,1 (табл.20).
Для заведомо несовместимой привойно - подвойной комбинации груша Чижовская/62-396 (рис. 64) характерно постепенное повышение электропроводности, при этом стандартное отклонение не выше ±38 мкСм, а коэффициент корреляции 0,35 (табл.20). Несмотря на близкое расположение кривых электропроводности подвоя, прививки и привоя, кривая электропроводности прививки уже на 4-й день занимает верхнее положение, а с 17-го дня наблюдается постепенное понижение значений электропроводности всех компонентов прививки. Данный порядок расположения кривых электропроводности и снижение значений не отвечает требованиям нормального срастания и свидетельствует о возможной скорой гибели растения. Соответственно прививки на рис 63 и 64 подлежат выбраковке.
В результате проведенного исследования:
- показано, что качественное срастание компонентов прививки (совместимая привойно - подвойная комбинация) характеризуется определённым порядком расположения кривых электропроводности: верхнее положение - электропроводность подвоя, среднее - место прививки, нижнее привой. Коэффициент корреляция значений электропроводности подвоя и привоя стремится к 1, при этом отмечается монотонный рост динамики электропроводности при изменении значений электропроводности между 14-м и 1-м днём в пределах 80 мкСм. при некачественном срастании (несовместимая привойно - подвойная комбинация) верхнее положение занимает кривая электропроводности места прививки, что свидетельствует о нарушении процессов срастания (подгнивании) и возможной последующей гибели растения.
- у несовместимых комбинаций значения электропроводности привоя практически не менялись (на 5-10 мкСм) от первоначальных, при этом отмечается некоторый разброс в расположении кривых подвоя, прививки и привоя. Коэффициент корреляции в пределах 0,1… 0,5.
На основании полученных данных был разработан «способ диагностики качества срастания компонентов прививки» и получен Патент № RU2588545C1.