Введение к работе
Актуальность темы. В производстве пушнины песцеводству придается важное значение прежде всего из-за сравнительно низкой себестоимости и высокой окупаемости шкурковой продукции. Однако сдерживающим фактором в его развитии является патология, ассоциированная с синегнойной палочкой. Она, по данным О.Б. Литвинова (2000), контаминирует воду, корма, предметы ухода за животными и, проникая в организм песцов, обусловливает бактерионосительство, заболеваемость и гибель животных. Из-за поражения гениталий нарушается эмбриогенез, происходят выкидыши и рождается ослабленный молодняк. В результате в зверохозяйствах формируется стационарное неблагополучие и снижается воспроизводительная функция животных.
Вакцины, используемые в норководстве, обладают слабой протектив-ной активностью при псевдомонозе у песцов, поскольку серологический профиль возбудителя болезни не совпадает с природными маркерами патогенно-сти микроба и защитной активности их для пушных зверей. Между тем этио-патогенетическую роль синегнойной палочки определяют главные и вспомогательные факторы внеклеточной локализации, однако тестирование выделенных от песцов KyjrbTyp синегнойной палочки по экстрацеллюлярным факторам патогенным еще не изучено.
Цели и задачи исследований. Основной целью нашего исследования является апробация современных методов тестирования вирулентности синегнойной палочки, изолированной от песцов, по внеклеточным факторам пато-генности. Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие конкретные задачи.
1. Провести биотестирование вирулентности микробных изолятов на лабораторных животных.
2.Испытать ферментативный и иммунохимические методы определения экзотоксина А.
З.Исследовать возможность тестирования факторов распространения микроорганизмов с протеолитической активностью.
4.0пределить адгезивную активность внеклеточных структур синегнойной палочки.
5.Рассчитать корреляционную зависимость между факторами вирулентности возбудителя псевдомоноза песцов.
Научная новизна. Впервые проведено комплексное исследование возможности тестирования и уровня взаимодействия факторов патогенности строго идентифицированных клонированных культур синегнойной палочки, изолированных из патологического материала пораженных псевдомонозом песцов. На полевом материале апробированы современные способы тестирования главного фактора вирулентности по ферментативной и иммунохимиче-ской активности, адгезинов по прямой гемагглютинации и образованию экст-рацеллюлярной слизи, факторов распространения - по протеолитической способности щелочной протеазы и антигенной активности эластазы.
Установлена достоверная положительная корреляция между показателями биотестирования, адгезии, токсичности и протеолитической активности микроорганизмов.
Опытами по отмене адгезии микроба преинкубацией с антисыворотками показана обусловленность фиксации синегнойной палочки неполисаха-ридными структурами.
Сопряженность биосинтеза факторов патогенности с серологическим профилем синегнойной палочки экспериментально не подтверждена.
Практическая ценность. Для практической ветеринарии предложено биотестирование патогенности синегнойной палочки на белых мышах живой массой 18-20 г посредством внутрибрюшинного введения взвеси микроба в дозе 800*106 м.т./гол. Предложение вошло в «Методические рекомендации по выделению штаммов синегнойной палочки из организма песцов и лисиц и их
идентификация», ободренные секцией пушного звероводства Россельхозака-демии в 1994 г.
Для эпизоотологического анализа в зверохозяйствах (установление источника, распространения инфекции и рецепции возбудителя) предлагается определение экзотоксина А (в РПГА), адгезии (прямой гемагглютинацией эритроцитов кролика) и щелочной протеазы (по расщеплению казеина).
Тестирование токсичных экзопродуктов синегнойной палочки предлагается для отбора штаммов при изготовлении протективных препаратов, контроле их качества и защитной эффективности. Благодаря такому тестированию банк, вакциігньїх штаммов синегнойной палочки НИИПЗК им. В.А. Афанасьева пополнен нами 13 возбудителями псевдомоноза песцов, что подтверждено патентами ВНИИГПЭ.
Апробация материалов диссертации происходила при ежегодном обсуждении планов, методик и отчетов по научно-исследовательской работе на методігческой комиссии № 4 и Ученых советах института в 1989-1999 годах, на секции пушного звероводства российской академті сельскохозяйственных наук (1994), на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 65-летию НИИПЗК им. В. А. Афанасьева (1997), на семинаре ветеринарных специалистов зверохозяйств на ВВЦ (1998), при обсуждении заявок в Роспатенте в 1999 году.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 109 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, сведений о практическом использовании результатов исследований и рекомендаций по использованию научных выводов, списка литературы, включающего 150 источников, в том числе 97 иностранных авторов и два приложения. Работа содержит J9. таблиц и 1 рисунок.