Введение к работе
Актуальность гены. Среди диких и клеточных соболей повсеместно встречается заболевание, -именуемое самопогрызашем. [Шурки, полученные от таких убитых больных соболей, имеет ряд существенных дефектов, приводящих их к обесцениванию. Инфекционная природа заболевания подтверждается эпиэоотологическими, вирусологическими и патоыорфологическими исследованиями (В.Ф. Мартынов, 1971; И. А. Прохорова и др. ,1971; М. Е. Жданова и др. 1975; 1М, Петрова, 1977; 0. А. Приступа, 1980). Исследования последних лет показали, что самопогрызание имеет сходство с персистентными формами нейроинфекций СИ. Н. Захаров, 1987; 0. А. Приступа, 1983; Л. В. Гежес, 1989).
Успехи, достигнутые теоретической вирусологией, привели к выяснению многих молекулярных механизмов лизнедеятельности вирусов животных. Применение однослойных тканевых культур позволило выявить не только особенности цитопатогенного действия вирусов, но и изучить некоторые стороны обмена веществ инфицированных клеток. Получены данные о цитопатологических и цитохимических изменениях, вызываемых многими вирусными инфекциями (В. Я. Каршшева, 1976; А.Ф. Быковский и др. 1979; Д. В. Голубев, 1979; R Д. Соловьев, Я.Е. Хесин, 1973; В.Н Сюрия и др. 1991; Смирнов ЇІЕ и др. 1992). Однако, патологические изменения, происходящие в клеточных культурах, зараженных агентом от больных свыояогрыэанием зверей, не исследованы. Поэтому научение этой проблемы представляет большой научный и практический интерес. Детальное описание цитологических изменений под действием исследуемого патогена может внести важный вклад в разработку методов диагностика. Кроме того, раскрытие взаимоотноаакяй возбудителя с клеткой шяэт служить теоретической основой для разработки способов профилактики и лечения заболевания.
Настоящее исследование представляет собой фрагмент комплексной темы по изучении сашлогрызания у пушных зверей, над которой работают сотрудники кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Омского ветеринарного института (М госуд. регистращзи 01.91.00. За. 708).
Ш-Ок ШШ?. исследования ^ выявить наиболее характерные лриинакн, оприделлвдю цитоморфологическую и цитохимическую специфичность интактных и инфицированных агентом сачюпогрызания культур клеток почек золотистого хомяка.
Основные задачи исследования:
-
Провести вирусологическое изучение агента сашпогрызания, пассированного через различные Биологические объекты, и выяснить оптимальные условия его культивирования.
-
Изучить особенности цитошрфологической и цитохт.шческой дифференциации интактных культур клеток почек хомяка в различные переводы культивирования.
-
Установить воздействие агента сашпогрыэашя на морфологическую характеристику культур клеток почек хошка и некоторые показатели клеточного метаболизма.
-
Получить цитофизичеекш данные, свидетельствующие о функциональном состоянии интактных и инфицированных цитопатогеном сашпогрызания клеточных культур.
-
Провести электронномккроскопическое изучение коры большого мозга золотистых хомяков при экспериментальном самопогрызании и зараженной культуры клеток ВВД-21.
Научная новизна:
отработаны оптимальные условия культивирования агента сашпогрызания в почечных культурах золотистых хомяков для получения его с наивысшей инфекционной активностью;
методаш; световой иикроскопии уточнены некоторые аспекты цитопатогенного действия агента сашпогрызания на культуры клеток почек золотистых хомяков;
установлены особенности распределения и изменения в содержании РНК, ДНК, гликогена, белков, липидов и некоторых окислительно-восстановительных ферментов в интактных и инфицированных агентом сашпогрызания культурах клеток ГОС и ВНК-21;
получены данные о митогической активности и кариометрии, свидетельствующие о различии в функциональном- состоянии интактных и инфицированных цитопатогеном сашпогрызания культур клеток;
дана ультраструктурна1! характеристика коры большого мозга золотистых хомяков при экспериментальном самопогрызании и зараженной культуры клеток ВНК-2І.
- з -Практическая значимость. Полученные данные позволяют рекомендовать:
отработанные нами оптимальные условия культивирования исследуемого агента сашпогрызания в клеточных культурах аоло-гистых хомяков;
культуры клеток ГОС и ВИК-21, как модель для культивирования агента саиопогрыэаиия, изучения его цигопатогенного действия и диагностики заболевания;
цитоморфологичеекие и цитохимические критерии в качестве дополнительного метода диагностики заболевания в культурах клеток.
Результаты работы используются:
при лабораторией диагностике заболевания в Омской областной ветеринарной лаборатории;
в научно-исследовательской работе и учебном процессе па кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ОГБЙ;
в учебном процессе на кафедрах патологической.анатомии и вскрытия с. -х. животных, эпизоотологии е. -х. животных.
Результаты работы вошли в рекомендации по диагностике сашпогрызания пушных зверей, утверяденные и рекомэндованние к использованию Омским, Тюменским и Оренбургским агропромами.
Предложены ряд устройств и приспособлений (шесть удостоверений на рационализаторские предложения), облегчающих проведение лабораторных исследований при самопогрызании.
Основные положения^ выносимые на ващигу: 1. Определены основные ^геоморфологические признаки размножения агента самопогрыза-ния в клеточных культурах.
-
В основе патологии инфицированных цитопатогеном сашпогрызания клеточных культур лежат изменения в распределении и содержании нуклеинового, Оелкового, углеводного, жирового обменов и некоторых оімслнтелгліо-восстановите льных ферментов.
-
Возможность воспроизведения ааболевания в эксперименте на лабораторной модели, динамика патологического процесса в зараженных агентом самопогрыэания культурах клеток, данные цитохимии, световой, люминесцентной и электронной микроскопии показывают, что самопогрыаание имеет сходство с персистентныыи формами нейро-инфекций.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены на пятой региональной конференции молодых ученых и специалистов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1983); на заседаниях ученого совета ВНИИБТ& (Омск, 1983-1986); на Всесоюзной научной конференции по проблемам эпизоотологии (Казань, 1983); на четвертой Всесоюзной конференции по биологии и патологии клеточных пушных зверей (Киров, 1985); материалы экспонировались на областной выставке молодых ученых и специалистов (Омск, 1985); на научной конференции преподавателей и аспирантов ОГВИ (Омск, 1989, 1990, 1993); на третьем Всесоюзном совещании по культивированию клеток животных и человека (Пущино, 1990); на четвертом Международном совещании по культивированию клеток животных и человека (Пущино, 1994); на Всероссийской научно-производственной конференции "Гигиена, ветсанитария и экология животноводства" (Чебоксары, 1994).
Публикация результатов исследований. По материалам исследований опубликовано девять работ.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 11 таблицами, 62 рисунками, в том числе SO макро и микрофотографий. Список литературы представлен 176 наименованиями, из них 97 отечественных и 78 работ зарубежных авторов. В приложении представлены документы, подтверждающие результаты работы, ее научную и практическую ценность.