Введение к работе
\ктуальность проблемы. Вакцинопрофнлактика вирусных бо-лей сельскохозяйственных животных, в том числе болезни ски, является обязательным составным звеном противоэпи-гических мероприятий. Хотя вакцинация не приводит к иско-ению вируса болезни Ауескн, ее вынуждены проводить в тех тонах, где болезнь широко распространена (Van Oirrchot G. Т., kenr A. L. G., 1984), поскольку это сокращает экономические тки в результате гибели заболевших животных (De Leeuw P. W., і Oirrchot G. Т., 1985), уменьшает способность вирулентного уса перснстировать в организме вакцинированных животных и
следствие и число вирусоносителей (Van Oirrchot G. Т., 1990). Для борьбы с болезнью у нас в стране успешно применяется пифическая профилактика инактивированными (М. С. Чоба-, 1965; В. Т. Айрапетян, 1978; А. М. Цьшбал, 1987; Ю. В. Лап-, 1990) и живыми вакцинами (П. М. Базылев, Э. М. Прохоро-
1972; Г. X. Камалов, 1973, 1975). Недостатком живых вакцин яется то, что они малоэффективны или неэффективны при об-отке поросят с колостральным иммунитетом. Вирус живых цин, репродуцируясь в организме, выделяется в окружающую ду и может, после пассирования на животных, приобретать улентность и вызывать поствакцинальные реакции по типу сме-лшдрома. Вакцинный вирус, используемый для вакцинации ней может быть вирулентным для овец и крупного рогатого та. Пассирование вакцинного вируса на плотоядных животных ле поедания ими боенских отходов приводит к реверсии виру-тных свойств вируса. Вирус аттенуированных вакцин не все-
является апатогенным для поросят. Живые вакцины не реко-[дуются к применению в последний период супоросиостп, так : они вызывают аборты у свиноматок. Применяемая в отечест-ной практике вирусвакцина ВГНКИ обладает свойствами ат-уированных вакцин. Кроме того, показана слабая ее эффектив-ть для профилактики болезни Ауескн у свиней (Л. П. Гришок этр., 1990; А. А. Коломыцев с сотр., 1991). Исходя из того факта, что инактнвированные вакцины безопас-
их предпочитают живым, Вместе с тем, эффективность инак-ированных вакцин зависит от качества цируссодержащего ма-иала, степени очистки и концентрирования антигена, использо-ия различных адъювантов (А. И. Дудников с сотр., 1974—1990; И. Собко с сотр., 1967—1975; А. А. Гусев: с сотр., 1977—1980; К. Муравьев с сотр., 1975—1978). Существенное значение име-технологичность и доступность производства вакцин в биофаб-[ных условиях. Однако используемые в настоящее время спосо-
изготовления инактивированных вакцин на монослойных куль-ах первичных (В. Г. Айрапетян с сотр., 1978)- или перевивае-х клеток (А. М. Цьшбал с сотр., 1987) весьма трудоемки и ма-технологичны. ВИЭВ предложена вакцина ПЛАХ (В. А. Сер-
геев с сотр., 1990) технология изготовления' которой предусматр вает культивирование одного из компонентов вакцины — виру< болезни Ауески в суспензионной культуре перевиваемой лиш клеток ППК/666. Следует отметить, что крупномасштабное пр нзводство этой вакцины не отработано, объемы получаемого сыр] не превышали 5—10 литров.
Для инактивации вируса болезни Ауески во всех перечисле ных выше вакцинах используют формальдегид, который1 не обе печивает получение полностью авирулентных препаратов. Налич: остаточной- инфекционности и продолжительные сроки инактиващ вируса (3—15 суток) ограничивают его применение.
В связи с вышеизложенным разработка л-ехнологическі приемов получения вирусосодержащего-материала в биореактора методов очистки и концентрирования, инактивации вируса с уч том оптимизации вакцины по антигену и адъюванту представляї* большой научно-практический интерес.
' Исходя из этого; была поставлена цель; разработать подхох к. созданию промышленной технологии изготовления инактивир ванной, вакцины против болезни Ауески, обладающей выражешк иммуногенностью, на основе суспензионного культивирования кх ток и вируса.
Для реализации этой цели были поставлены следуют задачи:
— подобрать оптимальную по чувствительности клеточную сі
тему для крупномасштабного культивирования вируса.
лезни Ауески;
:—отработать надежные- методы инактивации вируса, болезн Ауески;'
изыскать наиболее технологичные режимы и методы кс центрирования вирусного сырья;
изготовить лабораторные образцы вакцины с оптимизир ванным: составом по антигену и эффективных адъювантоЕ
— изучить иммуногенные свойства экспериментальных обр;
... цов .вакцины.
Научная новизна. Отработан полупромышленный метод q пензионног.о культивирования вируса, болезни Ауески штаг «УНИИЭВ-18в» в. линиях перевиваемых клеток ВНК-21/2-: nnK-666/17,-iRS-88. Для: инактивации: вируса, болезни. Ауески і пользован димер; этилешшлна (АЭЭИ); и. бромэтнлимин гиді бромид (БЭИ), что позволило сократить время инактивации і руса болезниАуески в пределах до 24 часов и получать полності авирулевтные и иммуногенные препараты.
Определены: оптимальные условия концентрирования виру болезни Ауески в 60 раз по объему при-помощи адсорбентов и і лиэтнленгликоля.
Впервые при изготовлении инактивированных вакцин прот болезни: Ауески в качестве.адъюванта использован аэросил. П проведении испытаний экспериментальных образцов сорбиров;
ной и сорбированно-эмульсионной образцов вакцины на Животных получены положительные результаты.
За счет использования концентрированного вирусного антигена и применения в составе вакцины масляного адъюванта ВНИЯИ прививная доза, обеспечивающая формирование стойкой защиты привитых животных от заражения вирулентным штаммом вируса, снижена до 1 см3.
Практическая значимость. Разработана и предложена технология полупромышленного изготовления инактивированной концентрированной вакщшы против болезни Ауески из культурального вируса, репродуцированных в суспензионных линиях перевиваемых клеток ВНК-21/2-17, ППК-666/17 и RS-88. Получены и испытаны образцы инактивированной концентрированной сорбированно-эмульсионной и сорбированной вакцины против болезни Ауескн. На основе полученных результатов экспериментальных исследований по разработке изготовления вакцины и изучения ее иммуно-генных свойств разработаны: «Технические условия на инактиви-рованную эмульсионную вакцину ВНИЯИ-УНИИЭВ против болезни Ауески из культурального вируса», «Инструкция по изготовлению и контролю инактивированной эмульсионной вакцины ВНИЯИ-УНИИЭВ против болезни Ауескн из культурального вируса», «Временное наставление по применению инактивированной эмульсионной вакцины ВНИЯИ-УНИИЭВ из культурального ви-эуса», одобренных Учеными советами УНИИЭВ (протокол № 17 эт 19 августа 1991 г.) и ВНИЯИ (протокол № 14 от 10 октября 1991 г.) и утвержденных ГУВ ІЧСХ Украины.
Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены на научных конференциях УНИИЭВ (Харьков, 1990), ХЗВИ (Харьков, 1991), заседаниях Ученого совета УНИИЭВ (1990— .992).
Публикация. Материалы диссертации изложены в 4 научных >аботах, опубликованных в 1990—1991 годах.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора лите-іатурьі, собственных исследований, обсуждения результатов, вы-юдов и практических предложений, иллюстрирована 22 таблица-ш и 1 графиком. Список использованной литературы включает 80 наименований, из них 117 отечественных и 163 зарубежных.