Введение к работе
1.1 .Актуальность темы. Успешное развитие животноводства невозмож-ю без ветеринарных мероприятий, обеспечивающих профилактику и ликвидацию .нфекционных болезней животных, в том числе туберкулеза.
Система контроля благополучия хозяйств по туберкулёзу КРС предусматри-іает поголовное обследование животных два раза в год. В неблагополучных хозяй-ггвах обследование проводят каждые 30 - 45 дней. Эффективность профилактики >аспространения и борьбы с туберкулёзом в значительной мере определяется со-іершенством средств и методов диагностики болезни ( М.М.Иванов, 1959, 1972, \.И.Кузин, 1987, В.П.Урбан, 1996). В качестве основного метода диагностики тубер-улёза применяют аллергический метод - туберкулиновую пробу. В нашей стране іля диагностики туберкулеза у млекопитающих используют туберкулин очищенный ППД) для млекопитающих, технология изготовления и качественный состав которо-о отличаются от туберкулинов зарубежного производства.
Туберкулин вводят животным в дозе 10000 ME в 0,2 мл растворителя. При том большое значение для эффективности диагностики имеет величина и точность іогировки вводимого препарата. При увеличении дозы туберкулина возрастает ко-іичество неспецифических реакций, что вызывает необходимость убоя раагирую-цих животных с диагностической целью и проведения дополнительных исследова-іий в благополучных хозяйствах. При уменьшении дозы часть зараженных живогных і неблагополучных хозяйствах не реагирует на туберкулин и остается в стаде, что величиваэт сроки оздоровления (А.Н.Шаров, 1996).
Использование при многократных исследованиях серий туберкулина с раз-іичной активностью не позволяет определить динамику проявления реакций, кото-ізя является дополнительным диагностическим признаком.
В соответствии с действующим ГОСТ 16739 - 88 "Туберкулин очищенный ППД) для млекопитающих" активность каждой серии препарата по содержанию юждународных единиц проверяется на сенсибилизированных морских свинках а равнении со стандартным образцом препарата.
Матод определения биологической активности туберкулина рекомендован ямитотом зкспертоз ВОЗ по стандартизации препаратов (1968). Однако, в силу то-э, что аллергены, изготавливаемые в разных странах, являются оригинальными репаратами, при определении их активности применяют различные варианты этих
методов, обеспечивающие наибольшую достоверность получаемых результатов. Основные различия касаются прежде всего вида сенсибилизирующего антигена, дозировок испытуемого и стандартного туберкулинов, количества свинок в опьгто и методов математической обработки результатов туберкулиновых проб (Т.Б.Яблокова, 1969,1984).
Метод определения активности туберкулина на сенсибилизированных морских свинках имеет ряд существенных недостатков, связанных с ошибками при вво дении туберкулина и при учете результатов кожной реакции, а также с разным имді видуальным ответом у морских соинок. Поэтому разрабатываются новые способы определения активности туберкулина, в частности - реакции иммунокомпетентных клеток сенсибилизированного организма.
1.2. Цель и задачи исследования. Основной целью настоящего исследования является изучение влияния комплекса факторов на точность определения а тивности туберкулина в опытах на сенсибилизированных морских свинках и выявл ние возможности использования с этой же целью реакции торможения миграции макрофагов (РТММ).
Для достижения цели исследования были поставлены следующие задачи:
-
Изучить уровень аллергии у морских свинок, сенсибилизированных разными видами туберкулёзных антигенов. Подобрать метод сенсибилизации животных, обеспечивающий постоянный высокий уровень аллергии.
-
Определить форму зависимости интенсивности ответных аллергически) реакций у сенсибилизированных морских свинок от дозы туберкулина.
-
Изучить влияние количества используемых разведений и интервалов м< жду ними испытуемой серии и стандартного образца на точность определения ах тивности туберкулина.
-
Выбрать метод математической обработки результатов туберкулиновьс проб и определить минимальное количество свинок, обеспечивающее получение достоверных результатов исследования.
5 Изучить влияние дозы туберкулина на эффективность диагностики тубе кулеэа у крупного рогатого скота.
- 6. Разработать условия постановки и учета результатов РТММ с использс взнмем клеток перитомеального экссудата мышей
7 Изучить возможность применения РТММ для определения активности т беркупина
1.3. Научная новизна. Впервые выявлены закономерности влияния комплекса факторов на точность определения по содержанию ME активности туберкулина, изготовленного по технологии, принятой в нашей стране. Установлена форма антигена, обеспечивающая устойчивую сенсибилизацию животных. Установлены диапазон доз препарата и метод математической обработки данных испытания, при которых проявляется и учитывается линейная зависимость lg дозы - эффект.
Оптимальным является использование двух доз - 100и ЮМЕ, при дозах туберкулина менее 5 и более 100 ME нарушается линейная зависимость Іддозьі-зффект.
Установлено, что регламентированная ГОСТ СЭВ на туберкулин (1967) методика контроля не учитывает закономерности проявления аллергических реакций и не обеспечивает необходимую точность определения активности препарата.
Установлено снижение эффективности аллергического исследования на туберкулёз при уменьшении дозы препарата. При её уменьшении даже о 1,3 раза количество реатрующих животных из числа зараженных достоверно снижается.
Разработаны условия постановки и учет результатов РТММ для определения активности туберкулина.
Установлено, что для получения статистически учитываемых зон миграции макрофагов необходимо использовать мышей линии СВА, массой не менее 20 г, но ранее чем через три недели после подкожной сенсибилизации вакциной БЦЖ на физиологическом растворе, и через трое суток после внутриперитонеапьной стимуляции выхода макрофагов легким минеральным маслом.
Установлено, что в РТММ линейная зависимость логарифм дозы - эффект оптимально проявляется при использовании туберкулина в интервале доз от 12 до 250 мкг/мл.
1.4. Практическая значимость. На основании результатов исследований разработан оптимальный метод определения активности туберкулина, изготавливаемого по технологии, принятой в нашей стране, на морских свинках.
Результаты исследований нашли отражение в изменениях и дополнениях к "Инструкции по изготовлению и контролю туберкулина очищенного (ППД) для млекопитающих" и в проекте Изменений Na 1 ГОСТ 16739 - 88 "Туберкулин очищенный (ППД) для млекопитающих". Созданы предпосылки для применения РТММ при контроле туберкулина.
1.6. Апообаиоя работы. Материалы диссертационной работы доложены и
получили положительную оценку:
на Юбилейной конференции лаборатории туберкулеза ВНИИЭВ им. Я.Р.Ко -валенко{1992);
на межлабораторном совещании научных сотрудников ВГНКИ ветпрепара-тов(1996);
1.R, ПуЯпикаиии. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ.
1.7. Объем работы. Диссертация изложена на 185 страницах машинописного
тексті, и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуж
дение полученных результатов, выводы, практические предложения, список литера
туры и приложение. Работа иллюстрирована 19 рисунками и 12 таблицами. Список
литературы включает 268 источника, из них 128 на иностранных языках.