Введение к работе
Актуальность темы. Проблемы инфекционной и в особенности вирусной патологии молодняка и органов воспроизводства у коров имеют большое народнохозяйственное значение. Респираторные и желудочно-кишечные болезни телят особую значимость получили в связи с созданием крупных животноводческих комплексов.
Сложная этиология так назывгемнх"пкевмоэнтеритов"существен-но затрудняет диагностику этих болезней, а, следовательно, их лечение и специфическую профилактику.
Одними из вирусных агентов, вызывающих заболевания телят, являются парвовирусы крупного рогатого скота. Эти вирусы участвуют чакхе в патологии органов воспроизводства, обусловливая эмбриональную смертность и нарушение оплодотворяемости животных (Bachmenn Р.А., 1971; Boglae А.В. et al., 1981; Thorson J.,1984).
.- Однако, парвовирусная инфекция КРС остается до сего времени малоизученной. Как показала работы сотрудников лаборатории вирусологии ВИЭВ, помимо известных в мире 2-х серотипов парвовиру-сов, .в нашей стране широкое распространение имеет парвовирус, антигенно отличающийся от них. Этот штамм парвовируса был выделен от теленка в период вспышки в хозяйстве острого респираторного заболевания. Проведенные экспериментальные исследования выявили выраженную вирулентность вируса для телят и его широкое распространение-среди крупного рогатого скота (Крюков Н.Н. и соазт., 1988). Дальнейшее изучение инфекции оказалось затруднительным вследствие отсутствия наделмого метода лабораторной экспресс-диагностики.
. Цель работы. Целью настоящей работы являлась разработка , имцуноферментной диагностики парвовирусной инфекции крупного рогатого скота, вызванной 3-им типом парвовируса (штамм В-2).
Задачи исследования.
-
Выбор оптимальной клеточной системы для культивирования парвовируса КРС 3 серотипа (штамм В-2).
-
Разработка схемы очистки и концентрирования парвовирус-ного антигена, обеспечивающей максимальную чувствительность реакции ИФА. і
-
Разработка схемы получении специфических иммуноглобулинов к парвовирусу КРС 3-го типа (штамм В-2).
-
Приготовление иммунопероксидазного коньпгата на основе этих иммуноглобулинов. ''.
-
Определение.оптимальных условий проведения ИФА для выявления парвовирусного антигена в выделениях животных (кал, носо- . вая слизь).
-
Изучение оптимальных условий проведения ИФА для индикации антител к парвовирусу КРС 3-го типа в сыворотке крови.
-
Проведение сравнительного изучения различных вариантов ИФА и традиционных методов лабораторной диагностики на основе материала из неблагополучных по респираторным и келудочна-кйшёч-: ным заболеваниям телят хозяйств.
Научная новизна работы. Изучены условия проведения вариантов иммуноферментного анализа для выявления парвовируса КРС 3-го типа и антител к нему с учетом физико-химических особенностей ;:."-возбудителя. - ;' V .;.-".'',; .: -\ л'/-'.';'-.
Разработана методика, позволяющая добиться максимального выхода клеточно-аесоциированного вируса и вирусных антигенов.
Установлено, что для выявления антигена парвовируса КРС 3-го
типа оптимальным вариантом ИФА является "сэндвич"-метод, который
позволяет определять вирусный белок в количестве 0,03 мкг/мл,.
что соответствует примерно 4-4,5 lg "ЩЛ^/мл инфекционного ви-,
руса. , ...'...
Установлено» что для выявления антител к парвовирусу UPC 3-го типа оптимальным вариантом Шк является блокирующий вариант "сэндвич"-метода, который обеспечивает достаточную чувствительность и воспроизводимость результатов независимо от степени очистки антигена и адсорбирующих свойств твердой фазы.
Впервые показано, что иммуноферментный анализ является специфический .экспресс-методом, который может быть использован для массовых прямых и ретроспективных исследований на парвови-руснуга инфекцию крупного рогатого скота, вызываемую 3-им типом парвовируса. *
Практическая ценность работы. Разработаны технологически приемлемые схемы получения антигена для ИФА, перспективные для использования в широкомасштабном производстве, а также схема получения специфических иммуноглобулинов для приготовления на их основе иммунопероксидазно'го конъюгата.
Предложены оптимальные условия выявления антигена парвови-руса КРС 3-го типа и антител к нему методом иммуноферментного анализа.
Разработанная методика апробирована в условиях неблагополучных хозяйств. Показана ее достаточная чувствительность и специфичность. ..
Апробация работы. Материалы доложены и получили положительную оценку на меялабораторном совещании сотрудников и Ученом Совете Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии (1992, 1993 гг.). ., Публикация результатов исследований. По теме диссертации два работы приняты в печать и составлены "Методические рекомендации по применении иммуноферментного анализа для диагностики парвовирусной инфекции крупного рогатого .скота, вызываемой 3-м типом парво вируса", рассштренные и одооренные методической jcomuc-.
сией ВИЭВ ( протокол № 10 от 26 августа 1993 г.). .'.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 146 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и список литературы. Материалы диссертации иллюстрированы 9 таблицами и 14 рисунками. Список литературы включает 200 источников, из них 97 отечественных и 103 зарубежных авторов,