Иммунобиологическая характеристика хламидий, уосвершенствование методов и средств лабораторной диагностики хламидиозов Шафикова, Рисаля Ахатовна

Введение к работе

Актуальность проблемы. Продовольственная программа страны -. одно; из ведущих направлений научно-технического прогресса, на основе которого происходят коренные преобразования в народном хозяйстве. Она призвана обеспечить устойчивое снаоженио населения всеми видами продовольствия за счет повышения сохранности, продуктивности сельскохозяйственных животных и элективного ветеринарного обслуживания отрасли. При этом важное значение имеет разработка нових методов и средств диагностики, лэ.ения я профилактики инфекционных заболевай: 2 сельскохозяйственных ответных.

Известно, что хламидии играют большую роль в патологии животных, вызывая остро, хронически и латентно протекающие болезни. Клинически хламздиозы проявляются в зиде абортов j овец, коров, коз, свиней и лошадей ; рождения нежизнеспособного или слабого молодняка; пневмонии и артритов у телят, ягнят, поросят и жеребят; энтеритов, эн~эфаломиелитов и конъюнктивитов У телят. Наиболее значительный экономический "тіерб испытывает кавотково; ство из-за больших потерь ожидаемого приплода в результате массовых абортов и гибели молодняка в первые дни после рождения. В последние годы установлено, что аборты хламидийной этиологии распространены в звероводческих хозяйствах, особенно среди серебристо-черных лисиц и песцов (Равалов Р.Х. и др., 1288), что наносит немалый урон эконггаке страны.

Хламидии представляют такяо потенциальную угрозу здоровью человека, поскольку не исключено заболевание лвдеЁ в резул-^аге контакта с животными и птицами, пораженными хламидияма.

Лабораторная диагностика хламвдяозов основана на: обнг"туже-нии хламидии в тканях пораненных рганог путем обычной микроскопии и в реакция пммунофлуоресценцил (РИФ) выделении возбудителя на куриных эмбрионах (КЭ) я его пдентаевлдации вирусологическими и серологическими методами; выявлении нарастания тигров комплементсвязьпзаюцих ar-ител в сішоротке крови болькнх пли переболевших ..ІИЕОТШХ.

В течение длительного времени ветеринарная службо страны для серологической диагностики хламадпозов использовала медицинский орнитозшій диагностикуіл, который по отношению к возбудителям хламадпозов rareor гах является гэгерологпчшм я из-за

4 низкой чувствительности и специфичности не позволяет выявить полностью хронически и латентно Сольных животных (хламидионосигелвй),

В последнее время для лабораторией диагностики бактериальных и вирусных болезней предложена реакция энзиммеченых антител (РЭМА), основанная на применении меченых ферментом антител и антигенов (И.Ф.Вишняков, Л.Я.Цыбанова, 1983; Г.Х.Ильясова и др., 1983; Н.Я.Зуева и др., 1984,19^.5; М.А.Домейка, 1985; Е.И.Титова и др., 1987; E.C.Beuvery et al. , 1983; B.Hivetz et al. , 1985; V.P.Caporale et al. , 1986; V.U.Vaaiol^.U.Debexme , 1987 И др, К ее преимуществам относят высокую чувствительность, простоту постановки и учета, воспроизводимость, возможность обследования большого количества проб в короткий срок. В специальной литература имеются сообщения о применении РЭМА для выявления хламидийных антител и антигенов в исследуемом материале и о создании набороо диагносїикумоЕ, которые, к сожалению, изготовлены из представителей Chl.tracboaatis и используются только в медицинской практике ( K.C.Uohanty et al. . 1986 ; F.Pothier.A.Kaziaierczak:, 1986 ; S.S.Hipp et el., 1987 ; D.C.W.Mabey et al., 1987 И др.). Следует отметить, что несмотря на свою высокую чувствительность и специфичность и другие преимущества, в настоящее время этот негод еще не нагаел широкого применения в ветеринарных лабораториях, продолжаются испытания различных модификаций РЭМА в сравнении с другими тестами (М.А.Домейка, И.И.Терских, 1987; И.И.Багдонас и др., 1988; U.Pepin et al, I985;P.U.Finney,A.C.Buchell , 1986; R.Piccini et al. . 1987; N.Schmeer et al. , 1987;A.Souriau, A.Kodolakie , 1986 ; j.A.Perez-1'.artinez et al., 1986 и др.).

Перспективным направлением в диагностике хламидиозов является использование моноклоналышх антител (J.KA), которые обладают узкой специфичностью го сравнению с обычными антисыворогками и позволяют выявлять антигенные различия не только между видами хламидий, но и меэду отдельными штаммами возбудителей хламидиозов (j.Alexander et al. , 1985; D.A.Hawking et al. , 1985; D.C.W.itabey , 1966; D.Heuning.K.Nielsen , 1987; C.C.Kuo, E.Y.Chi , 1987 ; J.D.Patel et el. , 1988 И др.).

В связи с этим для более полного и своевременного проведения мер борьбы и профилактики в неблагополучных хозяйствах необходимо совершенствовать существующие и разработать новые метода и средства диагностики хламидиозов.

Цель и задачи исследований. Цель исследований - изучить иммунобиологические свойства хламидий, усовершенствовать существующие, разработать новые методы и средства лабораторной диагностики хламидиозов животных.

Задачи исследований.

4. Изучить иммунобиологические свойства штатов хлямадий-зозбудителсй хлашідиозоз сельскохозяйственных животных и пупках зверей.

5. Выяснить ультраструктурную характеристику взаимодействия хламидий с клеткой-хозяином на лабораторіях моделях.

6. Изыскать способ изготовления антигенов и иммунной сыворотки для серологической диагностики хламидийных инфекций яи-вотных, используя возбудителя аборта овец.

7. Наладить производство флуоресцирующих иммуноглобулинов для диагностики хламидиозов животных.

8. Разработать РЭМА в качестве диагностического теста при хламидиозном аборте оі- ;ц.

9. Сравнительно испытать созданные наборы хяамнди&их днаг-ностикуыов.

10. Получить моноклонаяыше антитела к возбудители хлампдкоз-ного аборта овец, изучить их свойства.

Реаэние поставленных задач позволило сформулировать следующие основные научные положения, выдвигаете на защиту:

выделение я идентификация штаммов возбудителей хламидиозов рогатого скота, пушных зверей ;

результаты сравннтатьного изучения иммунобиологических свойств штатов хламидий ;

научно-теоретическое обоснование взаимодействия хламидий с клеткой-хозяином ин вптро и пн виво ;

способ получения яомялеиектсвязынаищего антигена из возбудителя хламядиозного аборта овец, разработка научно-практических и технологических оснс" изготовления на его основе високоактивних и сецийпчесдих днагностикуков (наборов) ._чля серологической диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных ;

создание набора гёлуоресцируюцЕХ иммуноглобулинов и контрольных сивороток для диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных ;

разработка РЭМА в качестве метода диагностики хламидиозно-го аборта овец, наборов для выявления антител и антигенов, нормативно-технической документации по их изготовлению, контролю и применению;

получс зие моноклоналъных антител к возбудителю хламидиоэ-ного аборта овец и их характеристика.

Научная новизна. Выделены возбудители при остром и латентном хламидиозе рогатого окота, пушных зверей; сравнительно изучены биологические свойства ряда штаммов хламиднй (иммупомодулирующее свойство и влияние на функциональную активности макрофагов изучены впервые), на основании этого часть штаммов в дальнейшем использована в качестве производственных, часть - признана в качестве изобретения (положительное решение Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий на выдачу авторского свидетельства ог 9 и 15 февраля 1990 г.).

Изыскан способ изготовления высокоактивного а специфического хламвдийного антигена (авторское свидетельство & 543259 от 21 сентября 1976 г.). Разработаны научная основа технологии производства, эрмативно-техническая документация по изготовлению, контролю и применению наборов антигенов и сывороток для серологической диагностики, а также флуоресцирующих иммуноглобулинов и контрольных сывороток для диагностики хламидиозов сельскохозяйственных кивотных, налакено плановое серийное производство вышеназванных наборов диагностикумов на биопредприятии.

Разработана РЭМ в качестве диагностического теста при хла-мидиозном аборте овец, созданы два набора диагностикумов для выявления антител и антигенов; составленная нормативно-техническая документация по изготовлению, контролю, применению опытных серп:! наборов утверздена ГУВ Госкомассии Совмина СССР по продовольствию и закупкам 19 декабря 1990 г.

Установлена пригодность планшетов, иммобилизованных антигеном из возбудителя аборта овец, для диагностики хламидиозов крупного ротатою скота, свиней, серебристо-черных лисиц в РЭМА при использовании соответствующих антивидового пероксидазного кокъюгата и контрольных сывороток.

Впервые в отечественной ветеринарной науке получены МКА к возбудителю хламвдиозного аборта овец, изучены их свойства, определена возможность применения в РИФ и РЭМА.

Практическая ценность работы. Результати исследований вошли в разработки: I) Временное наставление та постановке и учету реакции связывания комплемента (РОК) и реакции длительного связывания комплемента (РДСК) при диагностике энзоотичэского аборта овец и коз (утверздено ГУВ МСХ СССР I августа 1976 г.); 2) Инструкция по профилактике и ликвидация хламидиозного (энзоотического) аборта овец я коз (утвервдена ГУВ МСХ СССР 12.02.1981 г.); 3) Методические указания по лабораторной диагностике хламидиозного аборта овец и коз (утверадекы Г/В МСХ СССР 28.10.1983 г.); 4) 'Летодиче-скке указания по лабораторным исследованиям на хламидийнко инфекции сельскохозяйственных животных (утверзднны ГУВ МСХ СССР 5.04. 1986 г.); 5) Временная инструкция по изготовлению и контролю набора антигенов и сывороток для лабораторной диагностики хламидиозного аборта овец и коз (утвервдена ГУБ МСХ СССР 27.12Л82 г.) ; 6) Технические условия на набор антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиозного аборта овец и коз (угверздены ГУВ МСХ СССР 27.12.1982 г., зарегистрированы Государственным Комитетом стандартов 22.0--.1983 г., JS 2342226); '.) Технические условия на набор флуоресцирующих иммуноглобулинов и контрольных сывороток для диагностики хламидиозного аборта овец и коз (утверя-дены Г/В МСХ СССР 27.12.1982 г., зарегистрированы Государственным Комитетом ставдаргов 22.02.1983 г., В 2342231); 8) Временное наставление по применению набора антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиозного аборта овец я коз (утвег ядено ГУБ МСХ СССР 21.01.1983 г. ) ; 9) Временное наставление по применению набора флуоресцирующих иммуноглобулинов и контрольных сывороток для диагностики хламидиозного аборта озец и коз (утвервдено ГУБ МСХ СССР 21.01.1983 г.) ; 10) Временная инструкция по изготовлению и контролю чабора антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиозного іборта овец и коз и набора флуоресцирующих иммуноглобулинов и контрольных сывороток для диагностики хламидиозного аборта овец и коз (угаерздена ГУБ Госагропрома СССР 30.1Г.^Т987 г.); II) Дополнения я "Временной инструкции го изготовлению и контроль набооа ан.лгенов и сывороток для серологической диагностики хламидиозного аборта овец и коз и набора флуоресцирующих иммуноглобулинов и контрольных сывороток для диагностики хламидиозного аборта овеїі и коз"' (утверждены ГУВ Госагропр-да СССР 10.07.1988 г.); 12) Технические условия на набор антигенов и сывороток для серологической

диагностики хламвдиозов сельскохозяйственных отвотных (утверждены ІУВ Госагропрома СССР 22.07.1988 г., зарегистрированы Государственным Комитетом стандартов 18.08.1988 г.,К 058/164510); 13) Технические условия на набор флуоресцирующих иммуноглобулинов и контрол .ных сывороток для диагностики хламадиозов сельскохозяйственных животных (утвервдены ГУВ Госагропрома СССР 22.07. 1988 г., зарегистрированы Государственным Комитетом стандартов 13.08.1988 r.,J* 058/1^5511); 14) Временное наставление но применению набора антигенов и сывороток для серологияесксй диагностики хлымидиозов сельскохозяйственных животных (утвервдено ГУБ Госагропрома СССР 19.07.1988 г.); 15) Временное наставление по применению набора флуоресцирующих иммуноглобулинов и контрольных сывороток'для диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных (утверадено ГУВ Госагропрома СССР 19.07.1986 г.) ;

16. Инструкция по профилактике и ликвидации хламидиоза кивотных (угвэрвдена Г/В Госагропрома СССР 8.08.1989 г., И 4323) ;

17. Временная инструкция го изготовлению и контролю препаратов для диагностики хламидиозного аборта овец в РЗМА (набора) (утверзкденг директором БНИВИ 20.II.1989 г.); 18-21) Технические условия на опытную партию препаратов для диагностики хламидиозного аборта овец в РЭМА путем выявления антител (набор)» Технические условия на опытную партию препаратов для диагностики хламидиозного аборта овец в РЭМА, путем выявления антигена (набор), Временное наставление по применению препаратов для диагностики хламидиозного аборта овец в РЗМА. путем выявления антител (набора), Временное наставление по применению препаратов для диагностики хламидиозного аборта овец в РЭМА путем выявления антигена (набора) (согласованы с ВГНКИ 16.03.1990 г. и утЕерадены ГУВ Государственной комиссии Совмина СССР по продовольствию и закупкам 19.12.1990 г.).

Апробация работы. Основные результаты исследований, предлагаемые способы изготовления диагностических препаратов, степень их активности и специфичности прошли комиссионную проверку (1974,1975,1976,1986,1988,1989, КВИ, НИВИ, ВШВИ, г. Казань; 1975, ІДО МСХ СССР; 1976,1980, Ставропольская краевая ветлабо-ратория МСХ РСФСР; 1980.1931,1986,1988, Приволжская и Херсонская биофабрпки Главбиопрома МСХ или Агропррма СССР). Материалы доложены на ветеринарной секции Научно-технического Совета МСХ СССР (16 декабря 1981 г.), ежегодны:: научных сессиях : конфе-

ренциях КВИ, НИВИ, БНІІЕИ по итогам ИГР (1973-1989 гг.),респуб
ликанских научно-технических конференциях по вопросам ветерина
рии и зоотехнии (г. ІСазань, 1980,1982), научно-производственных
конференциях по теоретическим и практическим вс росам етерина-
рпи и зоотехнии (г. Казань, 1989, 1990 г.), заседаниях методи
ческого совета ВГНКИ ветпрэпаратов (г. Москва, 1970,1990 гг.),
Всесоюзных научных конференциях по: ветеринарной нрусологли
(г.Владимир, 1976 г., Казань, I960 г.), научным основам техноло
гии промышленного производства ветеринарных биологических препа
ратов (г.І.'осква, 1978,1983,1987 гг.), болезням овэц (г. Чита,
1980 г.), разработке апробации и государственному контролю ве
теринарных препаратов (.Москва, 1981 г.), проблемам эпнзоотоло-
гяи (Казань, 1983 г.), эпизоотологии, эпидемиологии, средствам
диагностики, терапии и специфической профилактики пн болезней, обдих для человека и гшвогных (Львов, 1988 г.), профи
лактике, диагностике и мерам борьбы с ин$екцнонним:!, инвазионны
ми и незаразными заболеваниями сельскохозяйственных янвотпых,
птиц, пчел и рыб при нн'иненвном ведении хозяйс ва (Баку, І9Я9 г)
зональной научно-технической конференции по актуальным пробле
мам интенсификации яявопюводсгва... (Троицк, 1989 г.), I Всесо
юзном иммунологическом съезде^Сочи, 1989 г.). Наборы хламидиіі-
ных дкагностикумов в 1982 г. экспонировались в павильоне

"Ветеринария" ВДНХ СССР и отмечены бронзовой медэльп ВДНХ СССР.

Публикация го теиз работ. По материалам диссертации апудл"-кованы 42 статьи, 3 временные инструкции, 6 тохпячеекпх условий, 6 наставлений го применению, 2 методические рекомендации, 2 инструкции по профилактике и ликвидации хламндпозог. "здача в соавторстве книги: "Хламидиозы рогатого скота и мері борьбы с ними" (5,5 п.л., Казань, 1980 г.), "Хлашднозы се.тьскохозльст-венных яивотннх" (11,76 п.л., Москва: Колос, ^т984 г.). Получены I авторское свидетельство J5 5-13259, 3 полонителъшх решения пи выдачу авторского свидетельства от 9 и 15 с-евраля, 22 марта 1990 г., два удостоверения на рационализаторские предложения.

Объем и ci.jyKTypa диссертации. Диссертация изяс лш на 45". страницах машинописного текста и состоит из введения, обзор- литературы, материалов я методов исследований, собегззнннх исследований (7 глав), обсуждения, выводов, предложений для практики и указателя литератур:: (в^гзго 613 источников, в том числе 385 иностранных авторов). Работа иллюстрирована ЄЗ таблицами и 44

рисунками, при этом текстуальная часть диссертации состоит из 402 страниц. Прилагаются разработанные нормативно-технические документы, авторское свидетельство, положительные решения на выдачу авторского свидетельства и ачты комиссионных испытаний.