Введение к работе
Актуальность проблемы
Промышленное ведение животноводства с концентрацией поголовья одновозрастных животных на ограниченных площадях, комплектование комплексов сборным поголовьем из хозяйств-поставщиков с разной эпизоотической ситуаций способствует широкому распространению пневмо-энгеритов молодняка крупного рогатого скота, которые наносят большой экономический ущерб. В этиологической структуре пневмоэнтеритов телят особое место принадлежит вирусам инфекционного ринотрахеита и диареи, которые вызывают у молодняка поражение респираторных органов и иищева'ршельного тракта, а у взрослых — заболевания репродуктивных органов. Успешная борьба с этими заболеваниями возможна только при наличии надежных Средств специфической профилактики.
Связь работы с крупными научными программами, темами
Работа выполнялась в Белорусском НИИ экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского с 1994 по 1997 г. и являлась частью темы "На основе биотехнологических методов разработать и усовершенствовать средава диагностики и профилактики наиболее распространенных инфекционных болезней, позволяющие обеспечить стойкое благополучие хозяйств и сохранность животных до 95-98% (№ госрегистрации 142 от 6 декабря 1993 г.).
Цель и задачи исследований
Цель исследований - разработка бивалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота и изучение ее иммунологической и протйвоэпйэоотической эффективности. Для выполнения поставленной цели были запланированы следующие задачи:
-
Изучить распространение моно- и ассоциированных инфекции инфекционного рннотрахеита и вирусной диареи крупного рогатою скота в условиях Республики Беларусь.
-
Сконструировать бивалентную вакцину против инфекционного рннотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота и изучить ее иммуногешюсть.
-
Изучить иммунологическую и противозпнзоотическую эффективность бивалентной вакцины против ПРТ и ВД крупного рогатго скота.
-
Разработать нормативно-техническую документацию на бивалентную вакцину против ИРТ и ВД крупного рогатого скота.
Объект и предмет исследования Основным объектом исследований были геля га черпо-песгрой породы из животноводческих хозяйств Республики Беларусь. В опытах по изучению иммунологической и профилактической эффективности бивалентной вакцины использовано 1432 теленка 2-6 месячного возраста черно-пестрой породы, 50 кроликов породы белый великан, 200 белых мышей.
В работе использовали вакцинные штаммы вируса инфекционного рииограхеига «МВА-2/К1» и "КМПЭВ-6", вируса диареи «ВК-1№ 28>> "КМИЭВ-7". эпизоотические штаммы - вируса ПРТ — «4016», диареи - ЛУ 10.
Для опенки иммунного статуса и диаіноспікп иммунопатологии использованы штаммы: Е. coli. М. lysodeiclicns. Вас. subtilis, St. epiderroidis № 5ft.
Предметом исследований служили 1617 сывороток крови коров, 213 телят до 1 месячного воіраста, 1559 гелят. больных респираторными заболеваниями 1-6 месячною возраста, 1202 гелят, переболевших респираторными заболеваниями 1-6 месячного возраста. 876 молодняка крупного рогатою скота старше Ь месячного возраста. Выполнено более 11000 серо.тої ических. 5500 иммунологических и имму-похимнческнч исследований.
Гипотеза В условиях Республики Беларусь широко распространены заболевания, проявляющиеся у новорожденных телят поражением желудочно-ючиечиою тракта, у іеляї старше 1-!.5-месячною возраста - поражением органов дыхания, а у взрослых животных - поражением органов воспроизводства. Такой симптомокомнлекс позволил нам выдвинуть гипотезу, что э:и заболевание вызывается вирусами инфекционного рннотрахеита и вирусной диареи или их ассоциацией. После проведения диагностических исследовании и подтверждения пашей гипотезы о роли вышеуказанных во ібуди гелей в паголопш крупного рогатого скота нами была выдвинута вторая часть пшотен>( о раїработке и использовании бивалентной вакцины против инфекционного рннотрахеита и вирусной диареи для их специфической профилактики у крупного рогатого скота.
Методолої іія и методы проведенных исследований Для решения посчнвленных задач по разработке бивалентной вакцины против Ш'Т и ВД крупного рогатого скота и изучении ее иммунологической и прозивозннзоогнческон эффективности необходимо было нсиользоиа п> серологические, впрусолої цческие, иммунологические, физико-химические методы исследований.
Серологические методы преследовали цель обнаружения в сыворотках крови от животных с различным клиническим состоянием противовирусных антител. Для этого применили реакцию нейтрализации на культуре клеток (А.Ф.Карышева с соавт. 1983, В.Н.Ск-рин с соавт. 1986); реакцию непрямой гемагглютпнации (РИГА) в модификации П. А. Красочно с соавт (1988); иммуноферментныи анализ (Х.Шюгт, 1985, В.Н.Сюрин с соавт., 1986; П.А.Красочко с соавт., 1991).
Вирусологические методы применяли для репродукции и накопления вирусов. С -той целью использованы первично трипсинн-зированные культуры клеток почки эмбрионов коровы, а также перевиваемые клетки почки теленка ПТ (линия Таурус) или МДБК. Культуру выращивали на 0,5%-ном гидролизате лактальбумина или 5%-ном гемогидролизатс с добавлением 10% нормальной или фстальнон
сыворотки крупного рогатого скота и антибиотиков (Н.И.Смирнова с соавт, 1978; В.Н.Сюрнн с соавт., 1986)
Для изучения реактогенных и иммуногенных свойств бивалентной вакцины против ИРТ и ВД крупного рогатого скота опыт проведен на белых мышах и телятах.
Для оценки состояния иммунитета определяли: содержание Т-н
В-лимфоцитов по Д.К. Новикову и В.И. Новиковой (1979);
бактерицидную активность сыворотки крови по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1968); концентрацию лизоцима в сыворотках крови и титр бета-лнзинов по В.Г. Дорофейчуку (1972); бактериальный тигр интерферона с помощью нефелометрического метода по Н.Е. Мурашовой с соавт. (1971); общий белок сыворотки крови с помощью рефрактометра РПА-2 (Н.М.Беляков, 1978).
Иммуноглобулины классов М и G выделяли in сыворотки крови крупного рогатого скота по Й. Броку (1985) с дальнейшей очисткой полученных фракций методом гель-фильтрации .
Биометрическую обработку цифрового материала, полученного в экспериментальных исследований, проводили по Р.Б Стрелкову (1966) с учетом рекомендаций П.Ф. Рокицкого (1967).
Экономическую эффективность применения разработанной вакцины рассчитывали согласно «Методике определения экономический эффективности ветеринарных мероприятий» (Москва, 1982 г.), а также в соответствии с «Методикой определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских н опытно-конструкторских работ новой техники, изобретений и рационализаторских предложений», утвержденной МСХ СССР в 19S3 г.
Научная новизна.
На основании изучения распространение в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь возбуди гелей вирусных пневмоэнтеритов установлена устойчивая ассоциация возбудителей инфекционного рино-трихента н вирусной диареи н дано обоснование для конструирования бивалентной вакцины.
Отработаны способы культивирования монокомпонентов вакцины пакцнны против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота в различных клеточных системах, изучена возможность одновременного и отдельного их культивирования.
Сконструирована бивалентная живая кульгуральная вирусвакцина против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота и тучен иммунный ответ у молодняка крупного рогатого скота при иммунизации моно компонентами и бивалентной вакциной.
Изучена иммунологическая и противоэпизоотнческая эффективность бивалентной живой кульгуральной вирусвакцнны против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота в условиях производства.
По результатам разработки бивалентной живой кульгуральной пи-русвакппны против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крушимо рогатого скота подготовлена заявка в Государственный патентный комитет Республики Беларусь (заявка № 970693 от 11 декабря 1997
г.).
Практическая ценность. Подготовлена нормативно-техническая документация ( временная инструкция но изготовлению и контролю, технические условия, временное наставление по применению) на бивалентную живую культуральную вирусвакцину против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота, отработана технология ее производства в условиях лаборатории острых вирусных инфекций БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского.
Экономическая значимость полученных результатов Внедрение в практику бивалентной живой кульгуральной вирусвак-цгпш против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота показало профилактическую эффективность 87-94% и позволило достигнуть окупаемости ветеринарных мероприятий 5,74-8,08 рубля на рубль затрат.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту
-распространение инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи и их ассоциаций в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь, позволяющее рационально планировать протпвоэпизоотических мероприятий на уровне отдельной области и республики в целом.
-методы культивирования монокомпопентов, конструирования бивалентной живой культуральной вирусвакцины против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота и ее иммунологической активности, что позволяет получать у иммунизированных телят напряженный иммунитет против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи.
-профилактическая и иммунологическая 'эффективность бивалентной живой культуральной вирусвакцины против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупною рогатого скота в условиях производства, что позволяет повышать сохранность телят и предотвращать их непроизводительное выбытие.
Личный вклад соискателя
Исследования по изучению распространения ИРТ и ВД крупного рогатого скота и их ассоциаций в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь, отработке методов культивирования монокомпонентов бивадетной вакцины на культуре клеток, конструированию бивалентной живой культуральной вирусвакцины против МРТ и ВД крупного рогатого скога, изучению ее иммунологической и профилактической эффективности проводились лично под руководством академика ААН РБ Ковалева Н.А. и док юра ветеринарных наук Красочко П.А. Долевое участие в совместных работах составляет от 40 до 75V
Апробация работы.
Основные положення диссертационной работы доложены и одобрены: на кісеціппяч Ученої о Совета Белорусского Н11ИЭВ им. С.И.Вышелесскою (199-4-1997 і .г.). научно-практической конференции "Збереженість молодняка ч7і тарнії - запорука розвитку гварнництва України" (Харьков, 1994), Международной научно-практической конференции "Научно-технический прогресс в сельскохозяйственном произ-
водстве" (Минск, 1997); Международной научно-практической конференции "Зооатропонозные болезни, меры профилактики и борьбы" (Гродно. 1997), 1-й итоговой научно-практической конференции "Современные проблемы инфекционной патологии человека - эпидемиология, клиника, микробиология, вирусология и иммунология" (Минск, 1998).
Публикации По материалам исследований опубликовано 7 научных работ, ііз них 2 в сборниках трудов институтов. 4 гечиса докладов, I статья п журнале.
Структура и объем диссертации