Введение к работе
1. -----
Актуальность темы. В последние годы Всемирная оргаї >заци>-вдравоохранения (ВОЭ) и Всемирная организация но продовольствии (ФАО) уделяют большое внимание разработке методов анализа и организации контроля за содержанием остатков лекарственных препаратов ветеринарного назначения в продуктах животноводства.
Однако, в нашей стране мало работ, посвященных изысканию новых и совершенствованию существующих методов анализа остаукоь препаратов ветеринарного назначения в продуктах животноводства, изучению их фармакокинентики, разработке регламентов безопасно! г> применения.
Такие же недоработки имеют место и по отношению к ветеринарным препаратам нитрофуранового ряда.
Нитрофурановые соединения - фуразолидои, фурацилин, фурадо-нин, фурагкн, фуразолин и другие - находят широкое применение в медицине и ветеринарии. Они обладают широким спектром антибакге-риального и антипротоеойного действия и используются для лечения колибактериозов, сальмонеллевоь, кокцидиозов, эндометритов, мас-'тита и других инфекционных заболеваний (Хоменко В.О. ,1661-1986; Артемьева С.А., 1963; Фортушный А.Т., Марчук А.Т., 1970; Аитипов В.А..198Н,.
Несмотря на широкое применение нитронурановых препаратов, и>. фармакокинетика изучена недостаточно. Имеются лишь отдельные работы, посвященные исследованию распределения в орі аниеме жиьоїньіл некоторых соединений нитрофурачоБого ряда (. Сонин Б.В., 1966; Нэ
винскіїй К.К. ,1985; Погорелый А.С. ,1987). Это объясняется тем, чт< отсутствовали специфичные и высокочувствительные количественны* методики определения остатков нитрофурановых лекарственных веществ в органах и тканях животных, молоке, яйцах.
Цель исследований. Разработать новый высокочувствительны: метод анализа остатков нитрофурановых препаратов в органах и тка нях животных,молоке, яйцах и научить динамику их распределения организме животных, выделение с молоком и яйцами.
В задачу исследований входило:
-
Разработать высокочувствительную количественную методику определения остатков нитрофурановых соединений (фураэолидона. фу рацилина, фурагина, фурадонина) в мясе, молоке и яйцах.
-
Изучить накопление и распределение нитрофурановых соеді нений в организме животных.
-
Исследовать выделение нитрофураков с молоком.
-
Исследовать выделение нитрсфуранов с яйцами.
Б. Разработать рекомендации по профилактике отравлений селі скохозяйотвенных животных лекарственными препаратами нитрофурані вой группы, предупреждения аагряввения их остатками продуктов а встновсдства.
Научная новизна работы состоит в следующем: - вперше в стране разработана высокочувствительная методика о ределения остатков фураэолидона, фурацилнна. фурагина и Фурадої' «а в органах и тканях животных, молок';, я шах,
р.п^рьь-о pa-ipaCOTfJ оригинальный ме^од ю-вл-гч^ния Ш'трофур*
- Б -
нов из биологических субстратов и их очистки с помощью твер-дс-фавной экстракции на сорбенте "Диасорб 08" и концентрирующих п&тронах "Диапак С8" с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЗйХ) , позволяющей обнаруживать остатки пре паратов на уровне 2,Б-7 мкг/кг;
изучена фармакокинетика нитрофуранов в организме кроликов, сви ней и кур;
впервые были проведены исследования по выявлению сохранности остатков нитрофуранов в процессе варки, , и хранения мяса в моро аильной камере;
уточнены данные о продолжительности выделения остатков нитрофуранов о яйцами при их введении в корм курам;
уточнены данные о продолжительности выделения остатков нитрофу ранов с молоком при лечении мастита и эндометритов у коров.
Практическая ценность работы:
разработана " Методика определения остатков нитрофуранов в продуктах животноводства: мясе, молоке, яйцах", утвержденная От делением ветеринарной медицины РАСХН;
разработаны "Рекомендации по профилактике отравлений сёльскохо вяйственных животных лекарственними препаратами нитрофурановой группы, предупреждении загрязнения их остатками продуктов животноводства", утвержденные Отделением ветеринарной медицины РАСХН.
Апробация работы.
Материалы диссертации доложены на межлабораторном заседании научных сотрудников ВНИИВСГЭ 29 января 1996 г.
Публикация.
По теме диссертации опубликовано две статьи, в которых содержатся материалы исследований.
Объем габоты.
Диссертация изложена на /ОЗстраницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, двух приложений. Содержит Ц таблиц и 10 рисунков. Список литературы включает 86 источника, в том числе 23 иностранных.
г. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследования.
Исследования проводили в лаборатории токсикологии ВНИИВСГЭ, на Чеховской птицефабрике Московской области и в опытном хозяйстве ВНИИВСГЭ "Милет" в период с 1993 по 1995 г.г.
Для выполнения поставленных задач использовали метод высокоэффективной жидкостной хроматоргафии (ВЕШХ). Разработку методики определения остатков нитрофуранов-в мясе, молоке, яйцах проводили кз жидкостном хроматографе производства Чехословакии, оборудованного насосом высокого давления НРР 5001 , ультрафиолетовым детектором LCO-2563. Для разделения смесей использовали обращенно-фаг-иую колонку Separon SGX С1& длиной 150 мы и внутренним диаметром 3 на. Эбъем доэиртцей петли хроматографа был установлен на 20 |/кл. Скорость лентопротячки на самописце - 0.3 см/с, напряжение
на самописце - 2 mV.
Подбор оптимальных условий разделения и количественного определения нитрофуранов проводили на смеси стандартных растворов фурацилина, фурадонина, фуразолидона и фурагина в концентрация/ от 5 до 0,06 мкг/мл, приготовленных на ацетонитриле ТУ 6-09-03534-87. При подборе подвижной фазы была испытана смесь ацето-нитрил:вода в соотношениях (с,6:4), (0,75:4), (1:4) при скорости 1,2 мл/мин. Для детектирования нитрофуранов устанавливали светофильтры с длинами волн 365 и 405 им.
При подборе способа подготовки проб мяса, молока, яиц для анализа ВЭЖХ были испытаны три варианта экстракции смеск нитрофуранов, внесенных в биосубстраты в концентрациях 0,06-5 мкг/мл : -экстракция нитрофуранов из пробы путем перемешивания о алетоиит рилом на шуттель-аппарате в течение одного часа;
экстракция измельченного субстрата ацетонитрилом на гомогенизаторе 13 Течение 10 МКН ПрИ 4 ТЫС/Об.;
твердо-фазная экстракция с помощью сорбента "Диасорб 08/1)."
Для очистки экстрактов использовали органические растворители Н-гексан ч, ТУ 6-39-2375-78 и хлороформ Х.ч., ГОСТ ШЭ1Ь-';4. Концентрирование экстрактов проводили на патронах "Дкапзк СЗ".
Изучение динамики остатков Фуразолидона б органах и тканях кроликов проводили на четырех группах животных. Кролики трех опытных групп получали фур&золидон с корком в терапевтической дозе Ю мг/кг живой массы в день в течение 5-22 днем. Кропиков убивали в равные срокл после окончания сведения препарата. Четвертой группе кроликов фуразолядон еводили через зонд п доз<= 5О0 і.іг/кг ж.м.з день в течение четырех дней с послечусцин убоем через сутки.
Для изучения динамики остатков фураэоладояа в организме кур, три группы кур получали фураволидон с кормом в терапевтической дове 10 иг/кг ж.м. в день в течение Б дней с последующим убоем черев 4, 10 и 1? дней. Четвертая группа получала препарат в дове 500 мг/кг ж.м. в день в течение четырех дней с последующим убоем через сутки.
Динамику остатков фуразолидона в организме свиней изучали после введения животным препарата с кормом в течение б дней в доге 10 мг/кг ж.м. в день. После окончания введения фуразолидона поросята были убиты через 1, 4 и 16 дней.
Для исследования выделения остатков фуразолидона с яйцами, курам-несушкам вводили в корм фуразолидон в доге 5 иг/кг ж.м. в день в течение 10 дней. Яйца отбирали и анализировали методом ВЭКХ через 1,3,6 и 9 суток с момента начала введения препарата в корм. После прекращения введения препарата * остатки его определяли в яйцах через 1, б, 10, и 15 суток.
Изучение выделения нитрофуранов с молоком коров при лечении мастита проводили на примере, фурацилина, который через внутриоос-ковый канал вводили в виде водного раствора 0.02Х - ной концентраций ежедневно в течение трех дней. Пробы молока для анализа отбирали один раз в день в утреннее доение.
Исследование выделения нитрофуранов с молоком при лечении эндометритов у коров проводили в опытах с. фуразолидоном. С этой целью препаратом lZ-ной концентрации в течение двух дней с интервалом 24 часа обрабатывали матку коровы. Пробы молока на остатки фуразолидона исследовали после каждого доения - утром и вечером. Анализ проб на остатки 'нитрофуранов в органах и тканях животных , молоке, яйцах, проводили методом ВЭЖХ- по разработанной уни-
фицированной методике. Полученный цифровой материал обработан методом статистического анализа на IBM FC ЛТ/286 по программе Sup percale 4.