Содержание к диссертации
Введение
1. Литературный обзор
1.1. Колиб актериоз и ассоциированные инфекции 7
1.2. Лечение колибактериоза птиц 13
1.3. Проблема лекарственной устойчивости и пути ее решения 15
1.4. Фторхинолоны 21
2. Собственные исследования
2.1. Материалы и методы исследования 34
2.2. Результаты исследования 46
2.2.1. Антибактериальная активность энрофлоксацина 46
2.2.2. Обоснование состава препарата 54
2.2.3. Фармацевтические исследования 55
2.2.4. Токсичность и кумулятивные свойства энрофлона 64
2.2.5. Изучение фармакокинетики энрофлона 70
2.2.6. Изучение сроков выведения остаточных количеств энрофлоксацина из организма птицы после применения энрофлона 72
2.2.7. Терапевтическая эффективность энрофлона 73
3. Обсуждение результатов 76
Выводы 89
Практические рекомендации 90
Список литературы
- Проблема лекарственной устойчивости и пути ее решения
- Фторхинолоны
- Антибактериальная активность энрофлоксацина
- Изучение сроков выведения остаточных количеств энрофлоксацина из организма птицы после применения энрофлона
Введение к работе
Актуальность проблемы. Колибактериоз широко распространен в России и в других зарубежных странах с развитым птицеводством. Заболевание вызывает значительный отход цыплят до 80-120-дневного возраста, является причиной снижения яйценоскости кур и уменьшения прироста массы бройлеров, оказывает отрицательное влияние на напряженность пост-вакцинального противовирусного иммунитета, что наносит большой экономический ущерб птицеводческим хозяйствам (А.Г.Ахмедова, 1968;В.В.Киприч, 1981).
Колибактериоз протекает как самостоятельно, так и в ассоциации с микоплазмозом. Многие исследователи (А.С.Серебряков, 1970; Г.А.Грошева, В.А.Шубин, 1968; А.Я.Фомина, 1966; A.Brion, 1961; J.Meszaros, L.Stipkovits, 1988) считают E.coli важным фактором в патогенезе респираторного микоплазмоза, осложняющим первичную микоплазмозную инфекцию. Для лечения такой ассоциативной инфекции требуются препараты активные не только в отношении гра-мотрицательных микроорганизмов, но и микоплазм.
Широкое внедрение в практику птицеводческих хозяйств антибактериальных препаратов и часто их нерациональное использование привело к распространению антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов, особенно в семействе энтеробактерий (В.Ф. Ковалев, Б.В.Виолин, 1985; Ю.К.Купчинскас и др., 1972; Г.Н. Нещадим, 1972; Е.Т.Тришкина, 1975; Э.А.Светоч.М.К.Жуну сов, 1975).
Формирование у микроорганизмов резистентности является основным фактором, ограничивающим эффективность антибиотиков и стимулирующим разработку новых препаратов, отличающихся от существующих механизмом антибактериального действия (М.Н.Лебедева, С.Д.Водопаева, 1972; С.М.Навашин и др., 1982; А.Г.Резвых, 1980).
Анализ современных литературных данных свидетельствует о том, что, начиная с 80-х годов, большой интерес для ветеринарии представляют фторированные производные хинолокарбоксильной кислоты (Е.Н.Падейская, В.П.Яковлев, 1995; A.L.Barry, P.C.Fuchs et а!., 1990; D.C.Hooper, J.S.Wolfson, 1991; W.LJenkins, L.G.Friedlander, 1988; P.Butaye, RDucatelle et al., 1997; P.C.T.Hannan, G. D.Windsor et al., 1997; B.Charleston, JJ.Gate etal., 1998).
Эти препараты по широте спектра действия и антибактериальной активности можно сравнить только с бета-лактамами третьего и четвертого поколений (A.Anadon, 1992).
Специфический механизм действия фторхинолонов, направленный на ингибирование ДНК-гиразы микроорганизмов, обеспечил для
ми, сульфаниламидами и нитрофуранами. Отсутствие ДНК-гиразы, мишени для фторхинолонов, в клетках млекопитающих и птиц, делает препарат практически не токсичным для макроорганизма.
За рубежом в ветеринарной практике наиболее широко из фторхинолонов используют энрофлоксацин - производное хинолокарбок-сильной кислоты, который в свою молекулу включает радикал фтора в позиции 6, радикал пиперазинила в позиции 7 и радикал циклопро-пила в позиции 1 (R.B. Ford, 1988; J.Schroder, 1989).
Энрофлоксацин обладает широким спектром антибактериального действия, подавляет рост и развитие грамположительных и грамот-рицательных микроорганизмов, в том числе E.coli, а так же Mycoplasma (T.Arai, 1984; W.Cedek, 1985; F.T.W.Jordan, 1985; D.Taylor, 1985;A.Steinberger, 1986).
На основании вышеизложенного, мы сочли целесообразным разработать отечественный препарат на основе энрофлоксацина для лечения колибактериоза птиц и колибактериоза, осложненного мико-плазмозом.
В соответствии с требованиями Совета по ветеринарным препаратам Минсельхозпрода России, внедрению нового препарата в ветеринарную практику должно предшествовать всестороннее изучение его противомикробной активности, фармакотоксикологических свойств и терапевтической эффективности.
Цели и задачи исследования. Изучить и внедрить в ветеринарную практику антибактериальный препарат на основе энрофлоксацина для лечения колибактериоза цыплят.
Для этого было необходимо:
обосновать состав и разработать лекарственную форму антибактериального препарата на основе энрофлоксацина;
разработать методы контроля качества антибактериального препарата и технические условия на препарат;
изучить стабильность препарата в процессе хранения;
изучить острую токсичность препарата в опытах на лабораторных животных и птице;
изучить субхроническую токсичность препарата в опытах на цыплятах;
изучить фармакокинетику энрофлоксацина в организме птиц;
определить сроки выведения остаточных количеств энрофлоксацина из организма цыплят;
разработать схему применения энрофлона.
Научная новизна. Теоретически и экспериментально обоснован состав антибактериального препарата, на основе энрофлоксацина, получившего название энрофлон.
Изучена острая и субхроническая токсичность энрофлона на лабораторных животных и цыплятах, изучена фармакокинетика, определены сроки выведения остаточных количеств энрофлоксацина из организма птиц, обоснована схема применения препарата, изучена его терапевтическая эффективность при колибактериозе цыплят.
Практическая ценность работы.
Разработан и изучен антибактериальный препарат для лечения колибактериозе цыплят - энрофлон.
Разработаны методы контроля качества энрофлона.
Установлен срок годности препарата.
Определены сроки возможного убоя птиц на мясо после лечения энрофлоном.
Разработана схема применения энрофлона при колибактериозе цыплят.
Разработана нормативная документация на препарат энрофлон (технические условия, наставление по применению энрофлона в ветеринарии), согласованная и утвержденная Департаментом ветеринарии России.
Энрофлон внедрен в ветеринарную практику.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
теоретическое и экспериментальное обоснование состава препарата энрофлон;
разработка качественных и количественных методов контроля энрофлона;
результаты изучения острой и субхронической токсичности энрофлона в опытах на лабораторных животных и цыплятах;
исследование фармакокинетики энрофлона и определение сроков выведения остаточных количеств энрофлоксацина из организма птицы;
изучение терапевтической эффективности энрофлона при колибактериозе цыплят;
практические предложения по применению энрофлона в ветеринарии.
Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на научно-практических конференциях (10-я и 11-я межвузовские конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» в Санкт-Петербурге, международная конференция ВНИ-ИВВиМ «Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными и экзотическими болезнями животных» в Покрове) и на заседаниях Совета по ветеринарным препаратам и проблемно-методических комиссий ВГНКИ (г. Москва, 1997-1999 г.г.).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 111 листах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы и практические предложения. Работа иллюстрирована 29 таблицами и 1 графиком. Список литературы содержит 225 источников, в том числе 114 иностранных. Приложение на 30 листах.
Проблема лекарственной устойчивости и пути ее решения
Колибактериоз (колисептицимия, колибациллез, колиинфекция, колиэн-терит, колиперитонит) - инфекционное заболевание птиц, протекающее остро и хронически. Возбудителем колибактериоза является Escherichia coli сероваров 01, 02, 08, 045, 078, 0127, 0138 (патогенная кишечная палочка), принадлежащая к роду Escherichia, семейству Enterobacteriaceae (7, 43, 98, 108).
Колибактериозом болеют сельскохозяйственные птицы (куры, утки, гуси, индейки, фазаны), дикие птицы (воробьи, голуби, вороны), комнатные декоративные птицы (канарейки, попугаи). Наиболее восприимчив к этому заболеванию молодняк 25-120-дневного возраста, у которого оно протекает в септической и токсикосептической форме, называемой колисептицимией. Для взрослых птиц характерно хроническое течение заболевания (6, 26, 37).
Колибактериоз широко распространен в различных странах. Это заболевание вызывает значительный отход цыплят до 80-120-дневного возраста и нередко взрослых птиц и является причиной снижения яйценоскости в стадах кур и уменьшения приростов массы бройлеров; оказывает отрицательное влияние на напряженность поствакцинального противовирусного иммунитета, что в результате наносит большой экономический ущерб птицеводческим хозяйствам (10,45).
По данным Департамента ветеринарии с 1994 года, несмотря на уменьшение поголовья птиц в крупных хозяйствах России, наблюдается рост количества неблагополучных пунктов по колибактериозу. Так, если в 1995 году неблагополучных птицефабрик было 44, то в 1997 году - 60, а в 1998 году - уже 95. Наибольшее количество вновь выявленных неблагополучных пунктов в 1997 году установлено в Краснодарском крае - 22, в Ростовской области - 9 и в Липецкой области - 5. В 1998 году неблагополучные по колибактериозу птицефабрики выявлены практически в тех же областях (в Краснодарском крае - 15, в Ростовской области - 24, в Липецкой области - 18 и в Пензенской области -10).
Колибактериоз - экзогенная инфекция, которая заносится в хозяйство различными путями: переболевшей птицей, поступающей на комплектование стад; инфицированными Е. coli инкубационными яйцами и кормами; дикой птицей и мышевидными грызунами, обитающими на территории и в помещениях птицехозяйств; транспортными средствами, тарой и обслуживающим персоналом (15).
Инфекционный характер колибактериоза подтверждается массовым заболеванием поголовья и преимущественным контактным заражением (аэрогенно и алиментарно), когда больная птица выделяет в окружающую среду возбудителя и инфицирует воздух, корм, воду, подстилку (59).
Для колибактериоза, как для любого инфекционного заболевания, характерны: инкубационный период, который продолжается от 1 до 10 дней; повышение температуры на 1,5-2 С; выделение из патологического материала возбудителя - патогенной кишечной палочки; искусственное воспроизведение заболевания выделенной от павшей птицы культурой возбудителя и однотипный характер клинических и патологоанатомических признаков, как на спонтанном фоне, так и в условиях эксперимента (8, 26, 37, 81, 103).
При заражении эмбрионов Е. coli выводимость цыплят резко снижается, вывод затягивается на 10-12 часов, а молодняк оказывается слабым, недоразвитым. Для 1-5-дневных цыплят при колибактериозе характерными являются вялость, слабая подвижность и жажда. При остром течении инфекции наступает гибель цыплят в течение нескольких часов. По данным Б.Ф.Бёссарабова (1972), у цыплят заболевших в первые дни жизни, отмечают омфалит. Часть цыплят в 2-3-недельном возрасте переболевает колибактериозом в хронической форме, у них отмечаются хромота на одну или обе конечности и опухание суставов, трахеит, синусит, отек головы. У цыплят 45-80-дневного возраста, а иногда в возрасте 120-140 дней заболевание протекает в острой септической форме. Оно характеризуется повышением температуры, общим угнетением, вялостью, от 9 сутствием аппетита и жаждой. При тяжелом течении заболевания наблюдается затрудненное дыхание, появляется понос. Колибактериоз у взрослых птиц имеет хроническое течение, при этом резко снижается яйценоскость (42, 87, 96).
При вскрытии цыплят, павших от колибактериоза, как указывает А.Е. Картушина (1971), наблюдаются следующие макроскопические изменения: посинение кожных придатков головы (гребня, сережек); застойное полнокровие кожи и внутренних органов; наличие наложений фибринозного экссудата на серозных оболочках сердца, печени, воздухоносных мешков и реже кишечника. Редко отмечается увеличение селезенки. В паренхиматозных органах регистрируются дистрофические процессы, в частности, имеет место жировая дегенерация печени. В результате чего печень приобретает охряно-желтую или бурую окраску (42).
Возбудитель колибактериоза - Escherichia coli - представитель широко распространенной группы энтеробактерий.
Эшерихии - мелкие или средних размеров грамотрицательные палочки. Встречаются отдельно или в парах. Подвижные, движутся при помощи перит-рихальных жгутиков; или неподвижные. Неспорообразующие факультативные анаэробы. С капсулами или без капсул. Хорошо растут на обычных плотных и жидких питательных средах с мясным экстрактом. Для роста благоприятна температура 37-38 С, но наблюдается размножение Е. coli в температурном диапазоне 12-48 С (7, 45). На плотных средах эшерихии образуют выпуклые колонии средней величины, влажные, блестящие, прозрачные и непрозрачные в проходящем свете, круглые с ровным краем (гладкие формы) или более плоские, сухие, со слегка волнистым краем (Шероховатые формы). В жидких средах эшерихии растут диффузно либо дают осадок или пленку на поверхности, кольцо на стенке пробирки (108).
Фторхинолоны
Стерильные чашки Петри с ровным дном помещали на горизонтальную поверхность. В охлажденную до 65-70 С расплавленную питательную среду добавляли одномиллиардную взвесь спор Bacillus subtilis АТСС 6633, из расчета 10 мл взвеси на 100 мл среды и 1% стерильного 40%-ного раствора глюкозы. После перемешивания среду разливали в чашки Петри по 15 мл. В застывшей среде бором (d = 8 мм) вырезали 6 лунок, используя трафарет, на котором было расположено 6 кружков под углом 60 на расстоянии 35 мм от центра круга.
Навеску стандартного образца энрофлоксацина (15-20 мг), взятую с точностью до 0,0002 г, растворяли в 0,2N растворе соляной кислоты, с таким расчетом, чтобы в 1 мл раствора содержалось 1000 мкг активного вещества. Разведение проводили с учетом активности стандартного образца. Из основного стандартного раствора энрофлоксацина готовили рабочие растворы с концентрацией фторхинолона 0,25; 0,375; 0,5; 0,75 и 1,0 мкг/мл. Разведения делали на фосфатном буфере №4, приготовленном по ГФ XI, вып.2, с.223 (рН 7,8-8,0). Раствор, содержащий 0,5 мкг/мл энрофлоксацина являлся контрольным. Полученные растворы использовали для построения стандартной кривой. С этой целью в три лунки каждой чашки Петри вносили пипеткой по 0,1 мл одного из рабочих растворов, а в другие три - по 0,1 мл контрольного раствора.
Чашки Петри после преддифузии при комнатной температуре в течение 1-1,5 часов помещали в термостат при температуре 37 С на 16-18 часов. После инкубации в чашках линейкой измеряли зоны задержки роста тест-культуры и на полулогарифмической сетке строили стандартную кривую, откладывая на оси абсцисс концентрацию энрофлоксацина, а на оси ординат диаметр зоны задержки роста. Количественное содержание энрофлоксацина в 1 мл сыворотки крови или в 1 г исследуемых органов рассчитывали по предварительно постро 44 енным стандартным кривым для каждого органа или ткани с учетом разведения исследуемого материала в соответствии с методикой, описанной в ГФ XI, вып.2, с.214. Сыворотку крови для исследования использовали без разведения.
Экстракцию фторхинолона из биосубстратов проводили фосфатным буфером с рН 7,8-8,0. С этой целью образец органа или ткани массой 3,0 г измельчали ножницами и тщательно растирали в фарфоровой ступке с небольшим количеством песка. К растертому образцу добавляли 3 мл фосфатного буфера, тщательно перемешивали и оставляли при комнатной температуре на 1 час для извлечения энрофлоксацина. Полученную смесь центрифугировали в течение 20 мин при 6000 об/мин, отбирали супернатант, который использовали для определения. Каждый образец исследовали в 3-х повторностях.
Изучение сроков выведения остаточных количеств энрофлоксацина из организма птицы после применения энрофлона Определение сроков выведения остаточных количеств энрофлоксацина из организма бройлеров после применения энрофлона проводили на 15 цыплятах массой 830-840 г, которым ежедневно в течение 7 дней вводили через зонд препарат в дозе 5 мг/кг массы тела один раз в сутки. Через 1, 3 и 5 сутки после последнего введения препарата убивали по 5 цыплят и проводили исследования мышечной ткани, сердца, легких, почек, печени, мышечного желудка, кожи, крови на наличие фторхинолона. Определение энрофлоксацина в биосубстратах проводили микробиологическим методом с тест-микробом Вас. subtillis АТСС 6633 по вышеописанной методике. Терапевтическая эффективность энрофлона при бактериальных инфекциях птицы
Изучение терапевтической эффективности энрофлона в производственных условиях проводили при колибактериозе цыплят в хозяйствах Курганской, Московской и Свердловской областей России, а во Владимирской области при колибактериозе, осложненном микоплазмозом. Диагноз заболевания ставили на основании эпизоотических данных, клинических признаков болезни, патоло-гоанатомических изменений и результатов бактериологического исследования патологического материала.
Лечебную эффективность энрофлона изучали в сравнении с наиболее эффективными препаратами аналогичного назначения хлорамфениколом или кламоксилом, а также с препаратом аналогом по содержанию действующего вещества, байтрилом.
Птицу по принципу аналогов делили на две группы, не отличающиеся по возрасту, массе тела, тяжести заболевания и находившиеся в одинаковых условиях кормления и содержания. Первая группа птицы (опытная) получала эн-рофлон с водой в дозе 5 мг/кг массы тела. В период лечения цыплята опытной группы имели доступ только к воде содержащей энрофлон. Вторая группа (контрольная) получала препарат сравнения в соответствии с наставлением по его применению (хлорамфеникол в смеси с кормом, водорастворимый порошок кламоксил фирмы «Пфайзер» или байтрил 10% оральный раствор фирмы «Байер» с водой). При определении терапевтической эффективности учитывали сохранность цыплят, длительность курса лечения и кратность применения препаратов. Статистическую обработку полученных результатов проводили методами вариационной статистики, используя руководство Ю.С.Малеты и В.В.Тарасова (58).
Антибактериальная активность энрофлоксацина
Изучение острой токсичности энрофлона При введений энрофлона в дозах 1750 мг/кг массы тела белым мышам и 2250 мг/кг массы тела белым крысам (таблица 16) не отмечено существенных изменений в состоянии животных. Мыши и крысы активно двигались и хорошо поедали корм, фекалии были плотной консистенции, акты дефекации происходили с равными интервалами.
Увеличение дозы препарата для мышей до 2000-2500 мг/кг и для крыс до 2500-3250 мг/кг вызывало через 1-1,5 часа после введения препарата развитие умеренного угнетения, ослабление реакции на свежий корм, снижение двигательной активности, усиление жажды. Через 2-3 часа угнетенное состояние усиливалось, начиналась отдышка, наблюдалось посинение хвоста и ушей, слабость задних конечностей. Часть животных погибала через 10-14 часов. У выживших животных клиническое состояние приходило в норму через сутки, только отмечали учащение дефекации и разжижение фекалий.
От доз энрофлоксацина для мышей 2500-3000 мг/кг, а для крыс 3500-3750 мг/кг массы тела симптомы угнетения развивались в течение 30-60 минут и быстро нарастали. Уже через 1-2 часа после применения энрофлона большинство мышей и крыс лежали на боку с парезом задних конечностей. Животные не реагировали на прикосновение. Большинство мышей погибало в течение суток.
В результате проведенных исследований установлено, что среднесмер-тельная доза энрофлоксацина для белых мышей составила 2400 мг/кг массы тела; ЛДіб и ЛД84 составляют соответственно 2075 и 2800 мг/кг массы тела. Таким образом для белых мышей ЛД5о находится в пределах 2400 (2177,8-4-2644,8) мг/кг массы тела, а доверительные границы составляют 1,16 (1,06-4-1,26) при Р = 0,05.
При пероральном применении энрофлоксацина белым крысам средне-смертельная доза составила 2995 мг/кг массы тела, а ЛД!6 и ЛД84 были соответственно 2700 и 3250 мг/кг массы тела. 50%-ная гибель белых крыс вызывалась дозами в пределах 2822,2-4-3189 мг/кг массы тела, а доверительные границы составили 1,10 (1,0526-5-1,1495) при Р = 0,05.
При введении энрофлона цыплятам в дозах 1100-1600 мг/кг массы тела не отмечали существенных изменений в состоянии птицы (таблица 17). Цыплята активно двигались и хорошо поедали корм. Увеличение дозы препарата до 2100 мг/кг вызывало через 3-5 часов после введения энрофлона развитие умеренного угнетения, ослабление реакции на свежий корм, снижение двигательной активности, птица сидела нахохлившись.
В таком состоянии цыплята находились в течение 8-12 ч, а две птицы в течение двух суток погибли. От доз энрофлона 2600-3600 мг/кг угнетенное состояние развивалось в течение 1 часа, птица садилась на ноги, начиналась отдышка. Часть цыплят погибала в течение 48 часов. У выжившей птицы клиническое состояние приходило полностью в норму на 3 сутки после введения энрофлона. От дозы энрофлоксацина 4100 мг/кг вся птица погибла в течение 10 часов.
Среднесмертельная доза энрофлона для цыплят составила 2500 мг/кг массы тела, а ЛД16 и ЛД84 - соответственно 1320 и 3900 мг/кг массы тела. У цыплят диапазон 50%-й гибели находился в пределах доз 1810- 3450 мг/кг массы тела, а доверительные границы составили 1,168 (1,22 -2,32) при Р = 0,05.
Изучение острой токсичности препарата показало, что энрофлон по параметрам острой токсичности, согласно ГОСТ 12.1.007-76, относится к третьему классу опасности (вещества умеренно опасные).
Изучение кумулятивных свойств энрофлона Исследование кумулятивных свойств энрофлоксацина проводили на мышах, крысах и цыплятах. Энрофлон вводили животным в течение 28 дней. Результаты представлены в таблицах 18-20. Как видно из приведенных данных, в связи с отсутствием гибели 50% подопытных мышей, коэффициент кумуляции рассчитать невозможно. Следовательно, препарат при алиментарном введение его белым мышам не обладает кумулятивным свойством. Определение кумулятивных свойств энрофлоксацина в опытах на крысах показало, что суммарная доза, при которой начинался падеж, составила 17490,8 мг/кг массы тела, то есть от дозы между 0,5 и 0,75 от ЛД5о- При дальнейшем введении препарата гибель белых крыс продолжалась и к концу опыта, то есть к 28-м суткам, когда доза составляла 1,12 от ЛД50, в живых осталось 9 из 16 голов. Таким образом, и для белых крыс не возможно рассчитать коэффициент кумуляции, что свидетельствует об отсутствии кумулятивного эффекта энрофлона для этого вида животных
Изучение сроков выведения остаточных количеств энрофлоксацина из организма птицы после применения энрофлона
При определении стабильности энрофлона в процессе хранения оценку качества препарата проводили по основным показателям: внешний вид, цветность, прозрачность, рН и содержание действующего вещества. Количество энрофлоксацина в препарате определяли тремя методами: микробиологическим методом диффузии в агар, спектрофотометрическим методом и методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Установлено, что в течение 5 лет изменений качества энрофлона не происходит, продукты распада энрофлоксацина практически не образуются.
В результате изучения острой токсичности энрофлона (таблица 29) на лабораторных животных и птице, нами установлено, что препарат по параметрам острой токсичности согласно ГОСТ 12.1.007-76 относится к третьему классу опасности - вещества умеренно опасные (ЛД50 при введении в желудок — 151-5000 мг/кг). Табл.29 Результаты изучения острой токсичности энрофлона
Энрофлоксацин не накапливается в организме при многократном применении, так как при изучении кумулятивных свойств энрофлона суммарно введенная в течение 28 дней белым мышам и белым крысам доза энрофлоксацина (31488 мг/кг и 36522 мг/кг соответственно) не вызывала 50% гибели животных. В тоже время суммарно введенная цыплятам доза энрофлоксацина 4700 мг/кг хотя и привела к гибели птицы, но отношение ЛД50 при многократном введении к ЛД5о при однократном введении было больше 1 и составило 1,62, что также свидетельствует об отсутствии у энрофлона выраженных кумулятивных свойств для цыплят (Lim K.et al., 1961).
Для выявления возможного гепатоксического действия энрофлона была поставлена гексеналовая проба (Гацура В.Н., 1974), основанная на определении длительности сна. Продолжительность гексеналового сна обусловлена, в первую очередь, функцией печени и зависит от времени, необходимого для концентрации гексенала в крови ниже уровня, вызывающего наркоз.
При оценке детоксицирующей функции печени было установлено, что энрофлон в дозе 1/10 ЛД5о (240 мг/кг) не вызывает функциональных изменений и продолжительность сна белых мышей достоверно не отличается (Р 0,05) от контрольной группы. При увеличении дозы до 1/5 ЛД50 (480 мг/кг) через 3 часа после введения препарата было отмечено увеличение длительности гексеналового наркоза (82,6+18,8 мин), а через 6 ч уменьшение (18,6+6,2 мин), что достоверно отличается (Р 0,05) от контрольной группы (27,7+4,1 мин). Видимо максимальная доза энрофлоксацина первоначально вызывает непродолжительное ингибирование, а затем индуцирование активности микросомальных ферментов в гепатоцитах, что приводит сначала к резкому увеличению, а затем к снижению времени сна. Таким образом, в высоких дозах энрофлон, как и большинство антибактериальных лекарственных средств, обладает гепатотоксиче-ским действием.
Изучение токсичности энрофлоксацина в опытах на цыплятах показало, что двадцатидневное введение энрофлона в двукратной и в восьмикратной терапевтической дозе не оказывает токсического действия и не вызывает функциональных изменений в организме птицы. Все клинико-биохимические показатели крови у опытных групп находятся в пределах физиологической нормы и не отличаются (Р 0,05) от показателей контрольной группы.
Результаты изучения субхронической токсичности энрофлона свидетельствуют, что даже двадцатидневное введение препарата в дозах в 2-8 раз превышающих терапевтическую, не оказывает токсического действия на организм птиц, и поэтому даже случайная передозировка препарата в условиях хозяйства не приведет к гибели цыплят.
Полученные нами результаты распределения энрофлоксацина в органах и тканях цыплят подтверждают известные по литературе сведения о том, что препарат легко и быстро всасывается из желудочно-кишечного тракта. (Conzelman G.M. et al, 1987).
Было установлено, что уже через 30 минут после однократного, перо-рального введения энрофлона в дозе 5 мг/кг массы тела концентрации энрофлоксацина во всех органах и тканях цыплят достигают терапевтических значений (график 1). Максимальные концентрации фторхинолона обнаруживаются, начиная с 1 часа, и поддерживаются на высоком уровне в течение 6-8 часов после введения препарата.