Введение к работе
Актуальность темы. Искусственные фосфолшшд-ные везикулы, открытые более 30 лет назад А. Бэнгхемом и получившие название липосом, из объекта чисто лабораторных исследований, где они применялись как модель биологических мембран, превратились в объект широких биологических и медицинских исследований, представляющий на сегодня непосредственный практический интерес. Это подтверждается изданием за рубежом научного журнала по проблемам липосом, образованием ряда промышленных компаний, ориентированных на выпуск липосомальных лекарственных и диагностических препаратов, и, наконец, успешными клиническими испытаниями и появлением на фармацевтическом рынке первых липосомальных препаратов клинического назначения.
Уникальные свойства липосом, как носителей лекарственных веществ, позволяют включать в их внутреннее водное пространство водорастворимые, а в липидный бислой водонерастворимые препараты, целенаправленно доставлять в нужные области организма, снижать токсичность и продлевать действие, предохраняя лекарства от воздействия "агрессивной" физиологической среды организма. В последние годы учёным и технологам в значительной мере удалось решить проблемы, связанные с получением липосом, их стандартизацией по размерам, стерилизацией, хранением в виде суспензий или лио-филизированной форме, а также стабильностью в организме (Норейка P.M. ссоавт., 1987,ЧучалинА.П, 1990).
Значимость таких исследований подтверждается значительным количеством патентных работ в этой области и принятой решением координационного совещания АМН в июне 1988 г. программой по биотехнологии на 1989-1995 гг., в которой была предусмотрена организация как фундаментальных, так и прикладных исследовании, предусматривающих изучение физико-химических свойств липосом, особенностей строения и функционирования липосомальной мембраны, изучение взаимодействия липосом с клетками, стабильности и распределения их в организме. Тем не менее, вопросы подбора оптимального состава липосом, способов получения, включения в них иммуномо-дуляторов и вакцин для применения в птицеводстве остаются открытыми.
Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований явилось изучение биологических свойств липосом из суммарных липидов и фосфатидилхолина яичного желтка для повышения эффективности некоторых ветеринарных препаратов в птицеводстве.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
- подобрать оптимальный состав и метод формирования лило
сом и сравнить иммуномодулирующие свойства тималина и тималиш
в липосомальной форме в опытах in vitro;
определить диапазон иммуностимулирующих доз липосо мальных суспензий при различных способах введения цыплятам;
сравнить иммуномодулирующее действие тималина и тима лина в липосомальной форме при введении в эмбрион и на моделі экспериментальной иммуносупрессии у цыплят;
исследовать влияние фосфатидилхолиновых липосомальньп суспензий на культуру клеток куриных и перепелиных эмбриональны: фибробластов, культивирование ВГИ и его выживаемость в режима: плюсовых температур;
г изготовить опытную серию вакцины против болезни Марек из штамма "ВНИВИЙ" с добавлением в среду культивирования фос фатидилхолиновых липосомальных суспензий и испытать её иммуно генные свойства в экспериментальных и производственных условиях;
- изготовить экспериментальные серии вакцины против болез
ни ССЯ-76 с использованием в качестве адъюванта липосомальної
формы тималина или ганглиина и изучить их протективные свойства;
птиц в экспериментальных условиях.
Основные положения выносимые на защиту. Определен! оптимальные состав и способ получения липосом, получены липосо мальные формы ветеринарных препаратов (иммуномодулятор тима лин, вакцины против болезни Марека и ССЯ-76) и показана их эффек тивность для ветеринарной практики в птицеводстве.
Научная новизна. Впервые на основании исследо ваний, проведённых в лабораторных и производственных условия» установлены преимущества использования липосомальной формі иммуномодуляторов и вакцин:
-определена оптимальная доза липосомальной суспензии дл введения цыплятам;
установлена эффективность применения липосомальной формы тималина при циклофосфановой иммуносупрессии и введении в эмбрион для увеличения вывода цыплят;
доказана возможность улучшения свойств ВГИ и ВБМ при их культивировании с добавлением липосом и повышения иммуногенности липосомальной формы вакцины из штамма "ВНИВИП" против болезни Марека.
Практические результаты и предложения по использованию материалов. Результаты проведённых исследований в условиях птицехозяйств позволили получить положительный результат от применения липосомальной формы иммуномодулятора тималина в эмбрион и липосомальной формы вакцины против болезни Марека из штамма "ВНИВИП". Подобранный состав липосом и метод получения могут быть рекомендованы для изготовления на их основе ветеринарных препаратов, применяемых в птицеводстве.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены на 5-й Межгосударственной межвузовской и 10-й Международной научно-практических конференциях "Новые фармакологические средства в ветеринарии" (Санкт-Петербург, 1993, 1998 гг.), на XI Международном конгрессе Мировой ветеринарной птицеводческой ассоциации (Будапешт, 19-23 августа, 1998 г.), на методическом и учёном советах Всероссийского НИВИ птицеводства (1991-1996 г.г.).
Публикация. Основные положения диссертации опубликованы в 5 научных статьях.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 108 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, рекомендации производству, список использованной литературы и приложение. Работа иллюстрирована 5 рисунками и 14 таблицами. Список литературы включает 200 источников, в том числе 85 иностранных авторов.