Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы:
1.1. Печеночная недостаточность 8
1.2. Интоксикационный синдром
1.3. Фармакологические методы снижения интоксикации и восстановления нормального функционирования гепатоцитов 13
1.4. Фармакологическое действие янтарной кислоты 14
1.5. Фармакологическое действие Реамберина 24
2. Собственные исследования:
2.1. Материалы и методы 41
2.2. Изучение безвредности Реамберина:
2.2.1. Определение острой токсичности на лабораторных животных 47
2.2.2. Определение подострой и хронической токсичности 56
2.3. Изучение иммунотоксического и аллергенного действия Реамберина:
2.3.1. Оценка аллергенных свойств 79
2.3.2. Определение иммунотоксических свойств
2.4. Экспериментальная фармакокинетика Реамберина 93
2.5. Цитопротекторное действие реамберина 99
2.6. Гепатопротекторное действие реамберина 104
2.8. Клинические испытания 115
3. Обсуждение результатов : 136
4. Выводы 148
5. Практические предложения 149
6. Список литературы 1
- Фармакологические методы снижения интоксикации и восстановления нормального функционирования гепатоцитов
- Фармакологическое действие Реамберина
- Определение острой токсичности на лабораторных животных
- Цитопротекторное действие реамберина
Введение к работе
Актуальность темы. В клинической практике ветеринарных врачей довольно часто наблюдаются состояния тяжелой эндогенной интоксикации и тканевой гипоксии, возникающие у животных при различных видах заболеваний.
При этом тканевая гипоксия, т.е. нарушение процессов тканевою дыхания, существенно осложняет течение основного заболевания, поскольку приводит к запуску целого комплекса негативных процессов в орі анизме больного.
Гипоксия является одним из ведущих компонентов в синдроме как экзо-, так и эндогенных интоксикаций, вызванных различными ксенобиотиками.
В част носі и, тканевая гипоксия играет замешую роль в формировании патологических процессов, связанных с активацией свободнорадикального окисления и истощением возможностей системы антиоксидантной и антиперекисной защиты.
В то же время, одним из основных повреждающих факторов, формирующих критические состояния, является нарушение про - и антиоксидантных систем, получившее название «окислительного стресса».
В последние годы доказана важная роль процессов свободно-радикального окисления липидов клеточных мембран в развитии іепаюцеллюлярного повреждения (Romero F.J., Bosch-Morell F.. Romero M.J.. Jareno E.J. 1988; Look M.P., Gerard A., Rao G.S., Sudhop T. 1999). Практика показывает, что печеночно-клеточная недостаточное гь. возникающая вследствие дисфункции гепатоцитов, - явление харакіерное для критических состояний любых этиологии. Предотвращение процессов цитолиза в больном организме (и в первую очередь - цитолиза їсиаюциюв) одно из лечебных мероприятий, которое позволит ветеринарному врачу сделать течение заболевания более благоприятным.
Снижение тяжести гипоксии и "ее последствий, обусловленных нарушением транспорта и утилизации кислорода, позволит в свою очередь препятствовать дальнейшему прогрессированию нарушений системы гомеостаза.
Интенсивная терапия критических состояний у собак с тяжелыми инфекционными заболеваниями, отравлениями, возникшими в ходе хирургических вмешательств или травм, - требует быстрого применения наиболее эффективных в конкретном случае препаратов. В го же время список препаратов, корректирующих нарушения биохимических процессов в организме животных, не слишком велик.
Например, антигипоксанты и антиоксиданты в виде инфузионных растворов, т.е. способных максимально быстро ппптппгптії по иг г пртацп и
I РОС. НАЦИОНАЛЬНА*!
і кани больного животного, вообще до недавнего времени отсутствовали в арсенале ветеринарного врача.
Исследователи давно пытались создать лекарственные препараты, использующие комплекс положительных биологических эффектов субстратного антигипоксаша - янтарной кислоты. Реамбсрин - первый инфузионный препарат янтарной кислоты, созданный Петербургской научно-технологической фармацевтической фирмой «Полисан», на протяжении нескольких лет позволяет медикам на практике успешно реализовывать все положительные эффекты сукцината.
Поэтому нам представлялось весьма целесообразным изучить возможность применения этою отечественного аніигипоксическою и деюксицирующего препарата Реамберин в терапии эндогенных интоксикаций различной этиологии у собак.
Цели и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось комплексное изучение безвредности и терапевтической эффективности препарата Реамберина в терапии критических состояний орі анизма собак.
В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:
изучить в лабораторных условиях острую, подострую и хроническую токсичность препарата Реамберин;
изучить в лабораторных условиях цитопротективное и і епагоиротекторное действие препарата Реамберин;
определить эффективность препарата Реамберин в терапии эндогенных интоксикаций различных этиологии у собак.
Научная новизна. Впервые проведен комплексный анализ динамики биохимических маркеров эндогенной интоксикации, течения перекисных процессов цитолиза и функционального состояния гепатоцитов у собак с синдромом эндогенной интоксикации различной этиологии.
Выяснена и обоснована эффективность применения препарата Реамберин в практике ветеринарного врача мелких домашних животных при терапии эндогенных интоксикаций различного генеза. Пракіическая ценность работы. Получены научно-обоснованные результаты применения Реамберина, как средства антигипоксической и дегоксицирующей терапии собак.
Разработано временное наставление по применению Реамберина в ветеринарии.
Полученные данные используются в учебном процессе на кафедре фармакологии и токсикологии Санкт - Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.
На защиту выносятся. Научно-обоснованные рекомендации по применению Реамберина в ветеринарии.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуж,дедц.на.Х11, XIII, XIV международных, межвузовских конференциях «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт Петербург.
2000. 2001, 2002 г.г.), а также на конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов Санкт - Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.
Публикации научных исследований. По материалам диссерт ационной работы опубликовано 5 научных работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 168 страницах компьютерного текста, содержит 48 таблиц, 27 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений. Список литературы включает в себя 214 источников, в том числе 54 зарубежных авторов.
Фармакологические методы снижения интоксикации и восстановления нормального функционирования гепатоцитов
Янтарная кислота (бутадионовая кислота; этан-1,2-дикарбоновая кислота) и её соли и эфиры - сукцинаты представляют собой универсальный внутриклеточный метаболит, широко участвующий в обменных реакциях в организме.
Содержание янтарной кислоты в тканях организма человека и животных сопоставимо с таковым для других ди- и трикарбоновых кислот (лимонной, о кетоглутаровой, фумаровой, яблочной и др.) и составляет 0.2-0.8 ммоль/кг, а её концентрация в плазме крови значительно меньше и не превышает 0.04 ммоль/л [19, 50, 172]. Янтарная кислота, содержащаяся в органах и тканях организма, является продуктом пятой и субстратом шестой реакции цикла трикарбоновых кислот [181].
В настоящее время для получения ЯК редко прибегают к ее выделению из природных источников, предпочитая методы химического синтеза (гидрирование малеинового ангидрида или фумаровой кислоты). Ввиду отсутствия у молекул ЯК хиральной асимметрии, т.е. способности образовывать "зеркальные" изомеры, ее синтетические производные полностью идентичны по физико-химическим свойствам и биологической активности ЯК, выделенной из природных источников [59]. Ж и ее натриевая соль обладают низкой токсичностью для млекопитающих, в организме которых сукцинат является естественным метаболитом. Доза СН, вызывающая гибель 50% мышей при внутрибрюшинном введении (DL5o), составляет 52.84 ±3.16 мг-экв/кг (4.3г/кг), что на 8% больше DL5o натрия хлорида. Таким образом, острая токсичность натриевой соли ЯК не превышает острой токсичности хлорида натрия [58].
Специальными исследованиями было доказано, что ЯК для млекопитающих является малотоксичным веществом, как при острых, так и при хронических воздействиях на организм [165], [58], [4], [20], [171].
Введение в организм сукцината натрия (СН) в дозах, которые при условии равномерного распределения вещества по органам и тканям обеспечили бы концентрации на 2 и более порядков большие, чем среднетканевые в исходном состоянии, вызывает неспецифические эффекты, наблюдаемые также при введении гипертонических растворов хлорида натрия в эквивалентных дозах [23]. Свободная янтарная кислота не может быть введена в организм в столь больших количествах из-за ее кислотных свойств.
При парентеральном применении меньших или физиологических доз ЯК, представляется возможным выделить следующие группы эффектов [59]: обусловленные прямым модифицирующим действием ЯК на клеточный метаболизм. связанные с влиянием ЯК на систему транспорта свободного кислорода в ткани. опосредованные влиянием ЯК на функции различных систем. Прямое действие сукцината на клеточный метаболизм В. Gozsy (1934) обнаружил, что добавление небольших количеств дикарбоновой кислоты (фумарата, малата или сукцината) к суспензии измельченной мышечной ткани приводит к приросту потребления тканью кислорода, многократно большему, чем это можно было бы объяснить только окислением добавленных субстратов доС02иН20/774у.
Процесс носит каталитический характер, поскольку одна молекула добавленной к ткани дикарбоновой кислоты обеспечивает окисление многих молекул экзогенных субстратов. Однако стимулирующее действие какой-либо из названных карбоновых кислот на потребление кислорода отменяется ингибитором СДГ (сукцинатдегидрогеназы, фермента ответственного за окисление сукцината) - малонатом. Иными словами, окисление сукцината является необходимым условием каталитического действия любой другой из карбоновых кислот на усвоение тканью кислорода.
Этот феномен был объяснен Г.Кребсом [180], который показал, что последовательность реакций окисления ряда ди- и трикарбоновых кислот замкнута в цикл, позже названный его именем. Для поддержания нормального тканевого дыхания теоретически достаточно лишь активированной уксусной кислоты (ацетил-КоА), другие субстраты не расходуются. Однако в действительности ди- и трикарбоновые кислоты постоянно отвлекаются из цикла Кребса в качестве субстратов анаболических реакций. Потеря интермедиатов цикла существенно возрастает, а пополнение их пула за счет запаса аминокислот нарушается при различных патологических состояниях [23, 30, 24, 148]. Поэтому пополнение пула интермедиатов цикла Кребса является необходимым.
При исследовании на целостном организме показателями состояния цикла Кребса являются титрометрическая кислотность мочи, экскреция с мочой аммиака, пировиноградной кислоты и суммы органических кислот [22, 129], а также пул органических кислот крови [72]. Это связано с компенсаторной интенсификацией анаэробного гликолиза и накоплением его кислых продуктов при нарушениях аэробного катаболизма в тканях.
Введение здоровым людям или лабораторным животным [58] СН приводит к снижению уровня органических кислот в крови и экскреции кислых продуктов обмена веществ из организма (частично в виде аммонийных солей), что указывает на нормализацию аэробной фазы тканевого обмена. Выполняя каталитическую функцию по отношению к циклу Кребса, [181, 174], ЯК снижает концентрацию в крови других интермедиатов цикла - лактата, пирувата и цитрата [58], накапливающихся в клетках на ранних стадиях гипоксии.
Энергизирующий эффект сукцината натрия ЯК уступает другим субстратам клеточного дыхания в термодинамической эффективности окисления. Сопряженный с фосфорилированием НАД-зависимый перенос к кислороду одной пары электронов от таких субстратов, как например пируват, изоцитрат, а-кетоглутарат, малатат, глутамат, сопровождается расходованием 3-х молекул АДФ и синтезом соответствующего количества АТФ. Близкое к этому соотношение (1:2.85) получается и при окислении жирных кислот. При окисление сукцината (которое не является НАД-зависимым) в пересчете на одну пару электронов образуется лишь менее 2 молекул АТФ. Поэтому при использовании в качестве субстрата окисления - сукцината, клетке, для удовлетворения ее энергетических потребностей, необходимо на треть большее количество кислорода, чем при НАД-зависимом окислении субстратов [59].
Однако в действительности, стимулирующий эффект ЯК на клеточное дыхание существенно превышает 33% (т.е. имеет место больший, чем на одну треть прирост расхода кислорода). Так, прирост скорости потребления кислорода срезами печени при внесении в содержащую глюкозу инкубационную среду СН составляет от 118% [161 J до 6000% [198].
Фармакологическое действие Реамберина
Мыши. По данным вскрытия и макроскопического исследования изучаемых органов различий между группами животных при различных путях введения не установлено.
Мыши правильного телосложения, удовлетворительного питания. Шерсть была опрятного вида, очагов облысения не определялось. Видимые слизистые оболочки были блестящими, гладкими, бледного цвета.
В месте введения в стенке вены изменений не обнаруживали. Все слои отчетливо выражены, эндотелий имеет четкие ядра. Грудная и брюшная полости выпота не содержали. Положение внутренних органов нарушений не представляло. Подчелюстные лимфатические узлы и слюнные железы имели округлую и овальную форму, беловатый цвет, умеренно плотную консистенцию, розоватый цвет. Щитовидная железа была обычной величины и формы, красноватого цвета.
Тимус имел треугольную форму, беловатый цвет и чуть плотноватую консистенцию. Интима аорты была гладкой, блестящей. Сердца без изменений величины и формы. Мышца сердца была умеренно плотной, коричневатой окраски. Просвет трахеи и крупных бронхов был равномерно широким. Легкие легко спадались при вскрытии грудной клетки. Их поверхность была однородной бледно-розовой окраски. Ткань легких на ощупь представлялась воздушной.
Слизистая пищевода была блестящей, гладкой. Желудок имел обычные размеры, просвет его был заполнен пищевым содержимым. Слизистая оболочка была складчатая, однородного розоватого цвета. Раздражения, гиперемии не отмечалось. Слизистая оболочка тонкой кишки была бледно-розовой, блестящей, гладкой. Слизистая оболочка толстой была также гладкой, слегка сероватого цвета.
Форма и величина печени изменений не представляла. Ткань печени была умеренно полнокровной.
Поджелудочная железа была бледно-розового цвета, дольчатая. Размеры и форма селезенки изменений не представляли. Ткань селезенки была умеренно плотной кон 53 систенции, темно-вишневого цвета. Капсула почек легко снималась, поверхность была гладкой, однородно коричневато-сероватого цвета. На разрезе органа хорошо различимы корковое и мозговое вещество.
Надпочечники были округлой формы, беловатого цвета и умеренно плотной консистенции.
Слизистая оболочка мочевого пузыря была гладкой, блестящей, бледной окраски.
Тело и рога матки имели обычный вид и размеры. Яичники имели неровную поверхность, красноватый цвет и умеренную плотность. Яички самцов лежали в брюшной полости, поверхность их была гладкой, цвет—беловатый, форма—округлой.
Оболочки головного мозга были блестящими, тонкими, гладкими. На фронтальных разрезах расширения желудочков не наблюдалось.
Таким образом, по данным вскрытия и макроскопического исследования однократное внутриже-лудочное и внутривенное введение препарата «Реамберин» в дозах, не вызывающих гибели, белым мышам обоих полов не вызывает макроскопических изменений внутренних и эндокринных органов, головного мозга, а также слизистой желудка, кишечника и стенки вены.
Крысы. По данным вскрытия и макроскопического исследования изучаемых органов различий между группами животных при различных путях введения не установлено.
Шерсть была блестящей, опрятного вида. Очагов облысения не наблюдалось. Выделения из естественных отверстий отсутствовали. Передние и задние конечности изменений не представляли. Деформации конечностей не наблюдалось. Зубы были сохранены. Видимые слизистые оболочки были бледными, блестящими, гладкими.
Стенка вены в месте введения изменений не представляла. Все слои отчетливо выражены, эндотелий имеет четкие ядра.
Молочные железы самок без уплотнений на ощупь. Половые органы самцов правильно выражены. Отека, инфильтрации или некроза на месте введения не определя лось.
При осмотре грудной и брюшной полостей нарушений в положении внутренних органов не отмечалось. Листки плевры, перикарда и брюшины были тонкими, блестящими, гладкими.
Подчелюстные лимфатические узлы и слюнные железы имели округлую или овальную форму, гладкую поверхность, слегка желтоватый или розоватый цвет.
Щитовидная железа плотно прилежала к гортани. Консистенция ее была умеренно плотной. Величина и форма отклонений от нормы не представляли. Поверхность разреза была однородной розоватой окраски.
Тимус имел треугольную форму, беловатый цвет и умеренно плотную консистенцию.
Диаметр аорты был равномерным на всем протяжении. Интима аорты была гладкой, блестящей, беловатой окраски. Величина и форма сердца изменений не представляли.
Мышца сердца была умеренно плотной, равномерно коричневатой окраски. Клапаны сердца были тонкими, гладкими, блестящими. В полостях сердца содержалось небольшое количество жидкой крови.
Легкие спадались при вскрытии грудной клетки. Величина и форма их изменений не представляли. Поверхность легких имела однородную бледно-розовую окраску. Ткань легких была пушистой на ощупь. Просвет трахеи и крупных бронхов был широким. Слизистая оболочка—блестящей, бледно-розовой, гладкой.
Слизистая пищевода была блестящей, гладкой, бледного цвета. Величина и форма желудка изменений не представляли. Его просвет был заполнен пищевым содержимым. Гиперемии, эрозий, кровоизлияний, свидетельствующих о раздражающем действии введенного препарата, не наблюдалось.
Просвет 12-перстной кишки изменений не представлял, слизистая кишки была блестящей, гладкой, бледно-розовой. Слизистая оболочка тонкой кишки была также бледно-розовой, блестящей, гладкой. Слизистая оболочка толстой кишки имела слегка сероватый оттенок, была гладкой, блестящей.
Форма и величина печени изменений не представляли. Поверхность печени была гладкой, однородной темно-красной окраски. Ткань печени на разрезе была темно-красной. Капсула печени была тонкой, прозрачной. Консистенция печени имела обычную плотность.
Определение острой токсичности на лабораторных животных
Существенное различие оценок вполне естественно, поскольку заложенные в их основу предположения о характере фармакокинетических процессов различны. В первом случае мы предполагаем, что кинетика препарата имеет двухфазный характер: быстрое начальное распределение по тканям и медленная последующая утилизация и удаление излишков по отношению к фону (постоянные времени - порядка 3 минут и 3 - 4 часов соответственно). Во втором случае предполагается, что введенный препарат, пока его концентрация значительно выше естественного уровня, уходит в ткани и выводится как обычный ксенобиотик; в дальнейшем, когда его концентрация опускается до определенного уровня, контроль за его концентрацией берут на себя механизмы регуляции организма и собственно «кинетическая» фаза на этом заканчивается.
Таким образом, второй случай -только первая часть предыдущего. Величина AUCj введена для сопоставления и показывает, какой вклад вносит начальный участок фармакокинетической кривой в общую площадь под кривой (вклад только первого слагаемого в формуле приведенной выше.
Заключение. Результаты исследования фармакокинетики Реамберина позволяют заключить, что зависимость концентрации препарата в плазме крови от времени имеет вид, характерный для внутривенного введения. Однако уровень препарата не снижается до своего фонового значения, что может свидетельствовать о задержке части реамберина в организме. Учитывая, что препарат может применятся 1 -3 раза в сутки, важное значение имеет отсутствие токсического эффекта, что было подтверждено в опытах по определению острой, подострой и хронической токсичности препарата.
Характерным свойством раковой клетки является нарушение внутриклеточных энергетических процессов, проявляющееся в утрате митохондриями доминирующей роли в регуляции соотношения дыхания и гликолиза [124]. Ослабление митохондриальных функций характерно и для старения, связанного также и с повышением тенденции к возникновению 100 опухолей. Возможность избирательным воздействием на энергетический баланс клетки получить экстренное восстановление основного нарушения окислительных процессов, а именно, превращение эффекта Кребтри в Пастеровский эффект, показана на асцитных опухолевых клетках [43, 122]. Существенное усиление энергетических реакций митохондрий, а также зависящих от них микросомальных процессов восстановления и общее цитопротекторное действие может быть обеспечено in vitro увеличением участия в окислении янтарной кислоты. Ее введение приводит к существенной нормализации нарушенных физиологических функций и в опытах in vivo, связано с влиянием на регуляторные центры гипоталамуса [42,125,56,122].
Ранее в экспериментах с перевививаемыми опухолями крыс и мышей под действием янтарной кислоты наблюдали два вида эффектов - выраженное торможение роста опухолей у части животных и резистентность опухолей или даже стимуляцию их роста у другой части [122]. Эти данные побуждали к дальнейшему анализу влияния ЯК на опухолевый рост, с целью чего было проведено настоящее исследование действия продолжительного введения инфузионного раствора ЯК - Реамберина на возникновение спонтанных опухолей у мышей высокораковой линии.
Материалы и методы: в опытах были использованы самки мышей линии СЗН/Sn, полученные из питомника "Рапполово" РАМН. Животных содержали по 7-8 в пластмассовых клетках при постоянной температуре (22 ± 2 С), естественном режиме освещения на стандартной лабораторной диете и воде без ограничения.
Начиная с 3,5-месячного возраста мыши получали 5 раз в неделю в течение всей жизни зондом через рот 0,2 мл водопроводной воды (контроль) или 0.2 мл Реамберина. Животных еженедельно пальпировали для выявления опухолей молочной железы. Павших или убитых в состоянии крайней слабости мышей подвергали аутопсии. Органы, подозрительные на наличие опухолевого роста, фиксировали в 10% нейтральном формалине и после рутинной гистологической обработки заливали в парафин. Гистологические срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином и при необходимости по Ван Гизону и изучали микроскопически. Выявленные новообразования классифицировали согласно рекомендациям МАИР [42].
Результаты исследования: В результате введения Реамберина наблюдалось существенное уменьшение частоты спонтанных опухолей и увеличение максимальной продолжительности жизни (табл. 41). Однако, то обстоятельство, что под влиянием Реамберина не изменялась средняя продолжительность жизни мышей обусловлено неодинаковостью эффекта Реамберина на животных разного возраста и различным временем возникновения у них опухолей молочной железы. Рассмотрение причин гибели животных до и после этого срока позволяет выявить ряд существенных различий в действии Реамберина на две условно выделенные субпопуляции животных. В таблице 40 можно видеть, что в субпопуляции короткоживущих мышей (проживших менее 470 дней) наблюдается некоторое сокращение средней продолжительности жизни, что обусловлено, по-видимому, увеличением частоты пневмоний. При этом частота возникновения опухолей под влиянием Реамберина несколько уменьшается. В субпопуляции долгоживущих мышей (проживших более 470 дней) оба эффекта Реаберина более выражены. Так, на 68 дней увеличилась средняя продолжительность жизни животных и более чем в 5 раз снизилась частота новобразований. Следует учесть, что в долгоживущей субпопуляции контрольных животных в 100% случаев причиной гибели были опухоли, тогда как в подопытной группе они развивались значительно реже и с меньшей множественностью. Таким образом, имеются существенные различия в действии Реамберина на продолжительность жизни и частоту возникновения спонтанных опухолей мышей выявленных субпопуляций.
Цитопротекторное действие реамберина
Повреждение гепатоцитов в результате токсического действия четыреххлористого углерода подтверждалось увеличением количества малонового диальдегида МДА на 75% (с 2.8 + 0.14 до 4.9 + 0.21 нМ/г), что свидетельствовало об усилении интенсивности процессов перекисного окисления липидов; снижением количества гликогена в тканях печени, как результат нарушения углеводного обмена; почти двукратным повышением содержания билирубина в сыворотке крови, отражавшим нарушение пегментообразовательной функции печени. Использованные с лечебной целью Реамберин (100 и 250 мг/кг), препараты сравнения Пирацетам и Карсил в равной степени снижали уровень МДА в ткани печени и препятствовали истощению запасов гликогена в гепатоцитах и оказывали защитное действие на пигментообраэовательную функцию печени, снижая уровень билирубина до исходной величины.
Результаты опыта подтвердили наличие у Реамберина гепатопротекторных свойств, сопоставимых по эффективности с известным гепатопротектором Карсилом.
Тем не менее, мы провели еще дополнительную серию лабораторных опытов по исследованию гепатопротекторных свойств Реамберина. Следующий эксперимент включал изучение защитных свойств Реамберина при отравлении хлористым аммонием. Его проводили на 46 линейных крысах Вистар, разделенных на 4 группы животных. В качестве препарата сравнения использовали инфузионный раствор с антигипоксическим Мафусол (НИИ Гематологии и трансфузиологии, С.-Петербург) на основе другого интермедиата цикла Кребса - фумаровой кислоты.
В первой группе животных в течение 7 дней вводили внутрибрюшинно хлорид аммония однократно в суточной дозе 125 мг/кг (1/3 ЛД50) в двух мл 0.9 % изотонического раствора хлорида натрия. Во второй группе хлорид аммония вводили аналогично в 2 мл Реамберина. В третьей группе хлорид аммония вводили аналогично в 2 мл Мафусола. В четвертой (контрольной) группе крысам вводили только 0,9 % изотонический раствор хлорида натрия.
Эффективность Реамберина на модели интоксикации хлористым аммонием оценивалась по нескольким группам показателей: морфометрическим, биохимическим, функциональным. Клиническая картина в группе крыс, получавших хлористый аммоний без лечения, характеризовалось гиподинамией, заторможенностью, взъерошенностью шерсти и неопрятностью животных. Они хуже набирали вес, чем остальные крысы. Применение Мафусола несколько уменьшало, а Реамберина — практически полностью купировало проявления интоксикации хлористым аммонием.
Как и следовало ожидать, интоксикация хлоридом аммония нарушала все основные функции печени: белково-синтетическую, детоксицирующую, липосинтезирующую, что сопровождалось биохимическими признаками цитолиза. В крови повышалась активность трансаминаз, фосфатаз, снижалось содержание в сыворотке крови общего белка, повышались уровни билирубина. В печени уменьшались запасы гликогена, уровни детоксицирующих цитохромов и макроэргов.
В результате многочисленных анализов и тестов было показано, что Реамберин в большей степени, чем Мафусол способствует сохранению биохимических показателей функционирования печени и ее пигментообразующей функции, на модели хронической интоксикации хлористым аммонием, что свидетельствует о выраженной гепатопротекторной активности. О мембраностабилизирующем действии Реамберина, антиоксидантной активности свидетельствует более низкое содержание основного продукта перекисного окисления липидов - малонового диальдегида - в клетках печени по сравнению с Мафусолом и, тем более, с изотоническим раствором. Кроме того, у животных получавших Реамберин или Мафусол, были значительно менее выражены гистологические изменения гепатоцитов.
Полученные результаты свидетельствуют о высокой эффективности Реамберина, превосходящего по действию официнальный антигипоксический детоксицирующий инфузионный раствор Мафусол при интоксикации и поражениях печени, вызванных острой интоксикацией хлористым аммонием.
После подтверждения высокой эффективности и безопасности Реамберина в ходе лабораторных исследований, мы перешли к клиническим испытаниям препарата. Следует отметить, что Реамберин уже применялся в некоторых ветеринарных клиниках в качестве детоксицирующего и антигипоксического раствора, при этом врачи предпочитают данный препарат другим инфузионным лекарственным формам, применяемым при сходных патологиях. Личный опыт этих врачей, согласовывался с данными исследований подтверждавших преимущества препарата Реамберин.
Поэтому нашей задачей было провести максимально подробный мониторинг состояния животных в период лечения Реамберином, чтобы убедиться в эффективности препарата в условиях клиники и получить документальные подтверждения нормализации процессов в организме больных животных.
Первая часть опытов была проведена на базе ветеринарной клиники доктора Валеевой и Института Токсикологии МЗ РФ. Был проведен мониторинг состояния шести собак, поступивших в клинику в состоянии тяжелой эндогенной интоксикации, с признаками функциональной недостаточности печени, различной этиологии.
Клинически у всех животных отмечалось угнетенное состояние, понос и (или) рвоту, аннорексию, обезвоживание, снижение тургора кожи, тусклость шерстного покрова. У каждого животного при поступлении в клинику и после трех дней терапии Реамберином была взята кровь для исследования по 17 биохимическим показателям, характеризующим состояние и функциональную активность печени, степень интенсивности перекисных процессов, а также уровень эндогенной интоксикации.
