Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 8
2.1. Современное состояние ветеринарной химиотерапии 8
2.2. Биологическая активность и применение производных хиноксалина в медицине ...14
2.3. Перспективы использования производных хиноксалина в животноводстве 29
3. Материал и методы исследования 52
4. Собственные исследования 58
4.1. Физико-химические характеристики и контроль качества олаквиндокса тритурата 58
4.2. Биологические действия олаквиндокса 63
4.3. Токсические свойства олаквиндокса 68
4.4. Фармакологическое действие 73
4.4.1. Влияние на показатели обмена веществ животных 73
4.4.2. Влияние на основные показатели иммунитета 86
4.4.3. Влияние на усвоение энергетических веществ 89
4.4.4. Фармакокинетика олаквиндокса 100
4.5. Лечебно-профилактическое действие олаквиндокса 104
4.5.1. Эффективность при гастроэнтерите свиней 104
4.5.2. Эффективность при бронхопневмонии свиней ПО
4.5.3. Эффективность при гипотрофии свиней 118
4.5.4. Ростстимулирующее действие олаквиндокса 127
5. Заключение 151
6. Выводы 158
7. Предложения производству 160
8. Список литературы
- Биологическая активность и применение производных хиноксалина в медицине
- Перспективы использования производных хиноксалина в животноводстве
- Биологические действия олаквиндокса
- Влияние на основные показатели иммунитета
Введение к работе
Актуальность темы. Высокая заболеваемость и гибель сельскохозяйственных животных, особенно, молодняка, в значительной степени препятствует росту отечественного производства животноводческой продукции. Поэтому улучшение ветеринарного обслуживания животноводства, разработка более эффективных методов и средств профилактики и лечения широко распространенных заболеваний является актуальной задачей для ветеринарной практики (Е.В. Андреев, А.Б. Драгомир, 1978; В.А. Андросов, 1978; Г.П. Бородой, 1981; В.М. Данилевский, 1974; 1985; И.Н. Дегтярева и др., 1981).
Мировой опыт борьбы с заболеваниями животных показал, что основная роль при этом отводится лекарственной терапии и профилактике, позволяющей значительно снизить наносимый ими экономический ущерб (Е.Ф. Дымко, 1992; S. McKercher, 1978). Для этого используют различные фармакологические средства, наибольшее распространение из которых получили антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны (М.А.Амирбеков и др, 1985; И.И. Гладенко и др., 1977, Ю.В. Головизнин, 1980; А. Жамантаев и др, 1980; СП. Качанова, 1979; В.Ф. Ковалев и др, 1988). Однако их эффективность в последнее время значительно снизалась из-за изменения биологических свойств микроорганизмов, проявления множественной резистентности после многократного пассажирования и усиления их вирулентных и антигенных свойств. Устойчивые формы патогенных возбудителей болезней, в качестве новой биологической популяции циркулируют в природе и инфицируют животных и птицу, что существенно затрудняет их профилактику и терапию (СЕ. Агроник, 1976, В.П. Антипенко, А.П. Красильников, 1987; А.В. Анти-пов, 1978; Б.В. Виолин, 1988; Е.Н. Дымко, 1992, В.Е. Завьянцев, 1977; B.C. Зуева, 1970; М.Т. Коняев и др., 1979; М.Н. Лебедева, СД. Водопаева, 1972; В.М. Подкопаев и др., 1977; Э.А. Светоч, М.К. Шунисов, 1975; Е.Т. Тришкина, 1975; R.C Anderson et al 1975; R. Benveniste, J. Davis, 1973; W.H. Chang, G.R. Carter, 1975; W.E. Clapper et al., 1956).
В последние годы наряду с антибиотиками и сульфаниламидами, в таких целях все шире стали использовать антимикробные химиотерапевтиче-ские средства других классов соединений и, в частности, препараты хинокса-линового ряда. Наибольшую известность из них приобрел препа-рат,разработанный фирмой "Байер " под названием байонокс, действующим веществом которого является олаквиндокса тритурат ( D. Sechneider et al., 1975 «Bayer» (Bayo-N-ox, 1978).
В нашей стране в ВНИИФХИ научным; коллективом во главе с Е.Н. Падейской (1978) из производных хиноксалина разработаны и нашли достаточно широкое применение препараты диоксидин и хиноксидин.
Эти препараты обладают иным, чем у известных средств механизмом действия на микробную клетку. Лекарственная устойчивость к ним развивается медленнее и не достигает высоких пределов. Применение хиноксалинов в медицинской практике достаточно широко, но оно ограничено в основном антисептическим назначением.
Приведенные данные делают разработку и; внедрение новых лекарственных средств из группы 2,4-ди->>Г-оксихинолина в животноводстве актуальной научной проблемой для ветеринарной фармакологии.
Цель и задачи исследований. Основной целью настоящей работы является фармако-токсикологическое исследование химиотерапевтического препарата хиноксалинового ряда — олаквиндокса тритурата с целью разработки его применения в ветеринарии.
Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:
Выяснить биологическое действие препарата.
Определить основные фармако-токсикологические свойства олаквиндокса, изучить его распределение в организме и влияние на морфо- функциональное состояние отдельных органов и тканей животных, а также качество продуктов убоя животных при его назначении.
Изучить влияние олаквиндокса тритурата на метаболизм и пищеварение, а также усвоение энергетических веществ.
4. Разработать показания к применению олаквиндокса и, в частности, установить лечебно-профилактическую эффективность при отдельных болезнях свиней, определить ростостимулирующее действие препарата, его влияние на рост и развитие животных, некоторые показатели обмена веществ, а также и в установленном порядке внедрить в практику ветеринарии.
Научная новизна, В результате проведенных исследований с помощью фармакологических, токсикологических, физиологических, микробиологических и биохимических методов экспериментально изучено и обосновано применение олаквиндокса тритурата, являющегося производным хиноксали-на. В частности, определено его влияние на рост животных, основные стороны его метаболизма, процессы пищеварения, химиотерапевтическую активность по отношению к различным микроорганизмам, грибам и гельминтам; всасывание, распределение и выведение из организма, воздействие на мор-фофункциональное состояние различных органов и тканей животных.
В соответствии с требованием Ветфармбиокомиссии Департамента ветеринарии МСХ РФ отработаны показания к применению..
Практическая значимость. Практическому животноводству предложен новый препарат, обладающий высокой лечебно-профилактической эффективностью при желудочно-кишечных и респираторных заболеваниях, а также гипотрофии свиней.
Практическая значимость подтверждается положительными результатами широких производственных испытаний и Временным наставлением по применению олаквиндокса тритурата, одобренным Ветфармбиокомиссией и в установленном порядке утвержденным Департаментом ветеринарии МСХ РФ.
Внедрение результатов исследования. В условиях животноводческих хозяйств разных регионов страны, в т.ч. в Воронежской и Ростовской облас-тях,обеспечено его применение в качестве высокоэффективного лекарственного средства.
Апробация работы. Материалы диссертации были доложены:
1. На заседании президиума Ветфармбиокомиссии.
На Всероссийской научно-производственной конференции "Состояние и перспективы развития научных исследований по профилактике и лечению болезней, сельскохозяйственных животных и птиц", посвященной 50-летию Краснодарской НИВС (г. Краснодар, июнь, 1996).
На международной научно-производственной конференции, посвященная юбилею Прикаспийского ЗНТВТ (Махачкала, 2003).
Основные положения, выносимые на защиту:
результаты фармако - токсикологического исследования производного хиноксалина - олаквиндокса тритурата;
результаты изучения биологического действия препарата;
результаты применения олаквиндокса при различных болезнях животных, а также в качестве ростстимулирующего средства.
Публикации результатов исследований. Основное содержание работы изложено в 6 научных публикациях.
Биологическая активность и применение производных хиноксалина в медицине
Производные ди-Ы-окиси хиноксалина - это вещества с высоким молекулярным весом (220-306), зеленовато-желтого цвета, плохо растворимые в воде. Растворимость хиноксалинов возрастает при нагревании, они выдерживают высокую температуру, не теряя при этом основных физико-химических свойств. Водные хиноксалиновые растворы не устойчивы, после кипячения через 5 минут выпадают в кристаллы, растворимые в хлороформе.
Впервые антимикробная активность производных хиноксалина описана в 1943 г. Н. Мс. Jlwain в опытах со стрептококком и дифтерийной палочкой. За период с 1943 по 1956 гг. было опубликовано всего девять работ по изучению биологических свойств этого класса веществ. Однако, уже эти исследования показали, что именно ди - N - окиси производные хиноксалина могут представить интерес как антибактериальные препараты. В отношении многих бактерий, некоторых простейших (дизентерийная амеба) и хламидиоза (возбудители пситтакоза и пахового лимфогранулематоза) (Н. Мс. Jiwain, 1943; S. Wiediinq, 1945; A.R. Fzisk, 1946; S.N. Jland, 1948; А.И. Титова, 1952; W.R. Jones et al, 1953; E.W. Hurst et al, 1953; J. Francis et al, 1956).
В опытах с ди - N-окисью 2,3-диметилхиноксалина установлено, что это соединение высокоактивно при экспериментальной инфекции мышей, вызванной S. dublin несмотря на слабое действие вещества в отношении этого же микроорганизма в опытах in vitro (минимальная подавляющая концентрация - 1000 мкг/мл) (J. Francis с соавт., 1956).
Кроме антимикробного действия производные хиноксалина проявляют и другую биологическую активность, в частности, антигельминтную (патент США № 656216; 658028; 4661593), противопротозойную (патент США № 4803209; Е , Schobisch , 1969; "Crandi Industrie zootechniche, 1973; Патент США № 4659713), противогрибную (Е. Schobisch, 1969).
Они могут проявлять противоаллергическое и противоастматическое действие (патент США № 4742059).
Но чаще всего производные хиноксалина из-за высокого ростостимули-рующего действия рекомендуются в качестве эффективных ростостимули-рующих средств (заявка ФРГ № О 3121977; заявка ФРГ № Щ 3I2I978; заявка ФРГ № О 3120543).
В 1968 году фирма Пфайзер рекомендовала для медицинского применения при бактериальных инфекциях два препарата, производных ди - N -окиси хиноксалина: мекадокс (1,4-ди-М-окись 2-оксиметил 3-метилхиноксалина) карбадокс (1,4-ди-М-окись карбаметоксигидразона хи-ноксалин 2-альдегида). Однако, каких либо подробных публикаций и итогов их клинического изучения не было. В 1972 г. опубликовано четыре патента США, в которых описано получение целого ряда новых производных хиноксалина и их N-окисей; приводятся очень подробные данные по биологическому изучению этих соединений
L.H. Conover (1972) показал, что ди-М-окиси производных хиноксалин-карбоксамида оказались высокоэффективными в отношении сальмонелл. Соединения были хорошо изучены при сальмонеллезах домашних животных, а особенно в опытах на свиньях, зараженных S. cholerae suis. Подчеркивается важность поисков препаратов для лечения этой инфекции, часто протекающей скрыто у животных, но являющейся причиной тяжелых заболеваний у человека. Изученные производные ди-М-окиси хиноксалина были более активны, чем тетрациклин.
К. Ley и F. Seng в 1972 установили активность ряда новых производных ди-Ы-окиси хиноксалина в опытах с бактериями и некоторыми простейшими. Эти соединения, как правило, слабоактивны in vitro , но оказывают высокий химиотерапевтический эффект в опытах на мышах. В работах даются рекомендации (включая лекарственную форму) по применению активных соединений для лечения инфекций у человека и животных.
Начиная с 1957 г по 1973 г. во ВНИХФИ в широком масштабе проходили исследования по синтезу более 150 производных хиноксалина и их N-окисей с целью поиска новых химиотерапевтических препаратов (Л.Г. Цы-рульникова, 1965; А.Е. Едина, 1969; И.С. Мусатова, 1973).
Полученные данные показали высокую химиотерапевтическую активность ди-Ы-окисей диметильных, оксиметильных и ацетоксиметильных производных хиноксалина в отношении грамположительных и грамотрица-тельных микроорганизмов (А.Е. Елина, 1969; Л.Г. Цырульникова, 1965; Е.Н. Падейская с соавт. 1966), крупных вирусов - пситтакоза и лимфогранулематоза, дизентерийной амёбы, установлена некоторая активность в отношении возбудителя дифтерии (А.И. Титова, 1952; E.W. Hurst, 1953; W.R. Jones 1953). В опытах на мышах, зараженных S. doublin это соединение проявило высоких химиотерапевтический эффект.
Отечественныь препаратом хиноксалинового ряда является диоксидин, синтезированный коллективом во главе с Е.Н. Падейской (Е.Н. Падейская, 1976). В химическом отношении это 1,4-ди-№-окись-2,3-ди(оксиметил) хиноксалина (М.Д. Машковский, 1993).
Препарат высоко активен по отношению ко многим грамотрицательным и грамположительным микроорганизмам (В .П. Антипенко, А.П. Красильни-ков, 1982; А.В. Антипов, 1978, 1979; СИ. Ашбель, 1978; СИ. Ашбель и др., 1974; СИ. Ашбель, 1973, 1973; Б.М. Бекбергенов и др., 1982; Т.А. Зинченко, и др., 1982; Ю.С Куликов и др., 1977; А.В. Лившиц и др., 1976; И.И. Олей-ники др.. 1984: Е.Н. Падейская и др., 1966; Е.Н. Падейская и др., 1974, М.А. Хусейн, 1986; И.Ю. Аманова, Л.Е. Холодова, 1986), и является химиотера-певтическим средством широкого спектра действия. Минимальные бактерио-статические концентрации диоксидина колеблются в довольно значительных пределах в зависимости от вида бактерий и свойств штамма. Изучение активности диоксидина в опытах in vitro установило его бактерицидное свойство (Е.Н. Падейская, 1972,1974).
Перспективы использования производных хиноксалина в животноводстве
За рубежом из производных хиноксалина, имеющих широкое применение в животноводстве и ветеринарии известны такие препараты, как олак-виндокс, мекадокс, карбадокс, циадокс и другие. Все эти препараты используются в самых разных показаниях, в-том числе и для стимуляции продуктивности животных (Ж. «Свиноводство», 1990 ; Е. Рое et al., 1983 ; F. Rot, M. Kirchgessner 1977, Буклет KPKA «Slovenia», 1995; Проспект фирмы «Сано-фи», 1994; и фирмы «Эланко», 1995).
Олаквиндокс разработан фармацевтической фирмой «Байер» и выпускается под коммерческим названием «Байонокс».
Байонокс (олаквиндокс) - синтетический препарат из группы хинокса-линов - ди-№оксидов с эмпирической формулой C12H13N3O4 и молекулярным весом 263,3. Он представляет собой желтый порошок, который при комнатной температуре слегка растворим в воде и практически нерастворим в органических растворителях.
Байонокс обладает выраженным антимикробным действием против грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов, в т.ч. кишечной палочки, сальмонелл, протея и клебсиелл (А.С. Селиванова, 1987, W. Visek, 1970).
Механизм стимулирующего действия олаквиндокса аналогичен механизму других стимуляторов. Первичная эффективность заключается в специфической положительной селекции кишечной микрофлоры, причем как качественной, так и количественной. Вторично наступает улучшение утилизации всех компонентов корма и их всасывание, что находит свое отражение в общем повышении нарастания массы и в снижении потребления корма на единицу нарастания массы (D. Schneider et al., 1976). После введения олаквиндокса у животных повышается удержание азота и улучшается утилизация белков, энергии и органических компонентов корма (Берхауэр, 1979, Гарен-ца, Яблоньский, 1979). Результаты трех экспериментов, описанных в ВАУО-N-OX технич. бюллетене (1978), показали, что у свиней с живой массой 27 кг введение 50 мг олаквиндокса на кг" корма в день обуславливает удержание азота в количестве 20,1 г, в то время как без применения стимулятора лишь 18,7 г.
Распределение олаквиндокса в организме изучалось путем определения остатков олаквиндокса и его возможных метаболитов в органах и мышечной ткани животных. Чешский олаквиндокс в этом отношении анализировался. Шкаркой и Шестаковой (1980). Олаквиндокс очень быстро разлагался в испражнениях и в навозе. Через сутки в испражнениях содержится менее 10% выделенного количества, а почва содержит менее 1/100 введенного вещества.
В экспериментах с радиоактивно меченным олаквиндоксом, в ходе которых было выявлено, что более 90% вещества в течение суток экстрагируется мочой, 5% испражнениями.
Кроме того, проводились некоторые гематологические и биохимические исследования у свиней и телят (Полашек и др., 1982). У свиней тестировались дозы 75, 150, 375 и 750 мг/кг"1 корма. Результаты исследования по прошествии 84 дней выявили, что концентрации 75 и 150 мг/кг 1 корма являются безвредными для состояния здоровья свиней и с точки зрения клинических проявлений. У телят, у которых на протяжение 60 дней препарат вводили в дозах 60 и 90 мг/кг"1 корма, анализировались гематологические данные и было констатировано, что по Истечении указанного срока не наблюдалось изменений по сравнению с контрольной группой, в которой олаквиндокса не вводили. Было лишь установлено повышение содержания витаминов А и С у телят при введении дозы 90 мг/кг"1 корма по сравнению с контрольной группой.
Байонокс обладает невысокой острой токсичностью для животных Его ЛД50 для белых мышей при внутреннем применении равняется 3300 мг/кг и подкожном 220 мг/кг. При применении внутрь он быстро всасывается и вы деляется из организма. Выделение его происходит, в основном, через почки и только в небольших количествах с фекалиями (Н. Hermann, 1978).
Наряду с антибактериальными действием, байонокс обладает анаболическим действием, что в общем итоге обуславливает его ростостимулирую-щий эффект (H.I. Hauchild et.al., 1977). Впервые, как стимулятор роста его применили в ФРГ К. Bronsch, D. Schneider (1976) при откорме поросят. Результаты опытов показали, что байонокс увеличивает прирост массы тела в зависимости от дозы на 9-15% и улучшает усвоение корма на 5-7%. Аналогичные результаты были получены H.I. Hauchild (1977). В другом опыте масса поросят при отъеме составила 8,01 кг против 7,68 в контроле, а смертность соответственно -14,6 и 26,8. (Б. Рое et.al., 1983; М. Kirchgessner, 1977).
В Чехии была разработана собственная оригинальная технология про-мышленного производства олаквиндокса, выпускаемого фирмой "Спофа" под торговым названием олаквиндокса-тритурат. Олаквиндокса-тритурат -препарат, активное вещество которого перерабатывают в 10% премикс, состоящий из смеси углекислого кальция и двуокиси кремния с декларированным количеством активного вещества и добавкой жидкого парафина.
Активным веществом является (N-2-гидроксиэтил/амидЗ-метил-хиноксалин-1,4-диоксид-2-карбоновой кислоты. Это - мелкий кристаллический порошок желтого цвета, растворимый в воде и содержащий минимум 95% олаквиндокса и максимум 5% метилового эфира олаквиндокса (Anon, Bayo-n-ox, 1976).
Испытания препарата проведены в Чехии (L. Polasek et.al., 1981), Франции (D. Bourdon, 1979) и других странах мира. Обширные опыты и тестирование оптимальной дозировки олаквиндокса провели J. Тешога, Z. Polasek в 1980. В экспериментах тестировались дозы 25,50, 75,100 мг олаквиндокса на 1 кг корма. Результаты опыта показали высокий стимулирующий эффект олаквиндокса на рост, причем наиболее целесообразными представляются дозы 75 мг на 1 кг корма для поросят и 50 мг на 1 кг корма при предварительном откорме свиней.
Биологические действия олаквиндокса
Антимикробную активность олаквиндокса тритурата (1% раствора на дистиллированной воде) изучали методом серийных разведении на жидких и плотных питательных средах в мясо-пептонном бульоне и мясо-пептонном агаре в отношении 15 микроорганизмов, в том числе: кишечной палочки, сальмонелл, стафилококка, микрококка, пастерелл, аэрококка, бордетелл, клостридий стрептококка и синегнойной палочки. Эти штаммы микроорга-низмов по своим морфологическим, культуральными и биохимическим свой- ствам были типичны. В каждую группу входили музейные и свежевыделен-ные (полевые) штаммы от животных, больных диареями и пневмониями.
В эксперименте олаквиндокс предварительно растворяли в стерильной дистиллированной воде в соотношении 1:100, с последующим разведением основного раствора до нужной концентрации.
Антимикробное действие препарата определяли по росту тест-культур после суточной и 2-х суточной инкубации при температуре 37С. О степени активности препарата судили по его концентрации в 1 мл питательной среды, вызывающей полное угнетение роста тест-культур.
Результаты экспериментов по определению чувствительности различных микроорганизмов к препарату представлены в таблице 3.
Из приведенных данных видно, что все исследованные штаммы микроорганизмов проявляли к олаквиндоксу высокую чувствительность. Однако, относительно более высокая активность проявлялась в отношении грамотрицательных бактерий. Из этих микроорганизмов наиболее чувствительной к препарату оказалась пастерелла. При этом минимальная бактерио-статическая концентрация препарата к ней составила - 0,39-3,12 мкг/мл, а минимальная бактерицидная — 0,78-6,25 мкг/мл.
Примерно аналогичную чувствительность к препарату проявил аэрокок-кус вириданс, которая составила в обоих случаях 3,12 мкг/мл. Несколько меньшее антимикробное действие препарат проявил в отношении синегной-ной палочки, которое тем не менее оказалось достаточно высоким и составило: бактериостатическое в концентрации 3,12 мкг/мл и бактерицидное -25,0 мкг/мл. Salmonella typhimurium u Micrococcus lysodeicticus по своей чувствительности к препарату оказались примерно равными. Минимальная бактериостатическая концентрация в отношении обоих микроорганизмов составила 12,5-25,0 мкг/мл. Другие серотипы сальмонелл были более устойчивы. При этом бактериостатическая и бактерицидная активности Salmonella dublin равнялись 12-25 мкг/мл, a Salmonella cholerae suis 50,0-100 мкг/мл.
Антимикробное действие препарата на Bordetella также оказалось достаточно выраженным и составило 25-100 мкг/мл. Различные серотипы кишечной палочки были примерно аналогично чувствительными к олаквиндоксу. При этом их чувствительность проявлялась в концентрациях от 25,5 до 50 мкг/мл. Наиболее устойчивыми из изученных штаммов микроорганизмов были грамположительные микроорганизмы, в частности, рода Staphylococcus u Streptococcus. Эта чувствительность варьировала в пределах от 50 до 100 мкг/мл.
Активность препарата по отношению к вульгарному протею была сравнительно низкой. Его бактериостатическое действие составило 100-200 мкг/мл, а бактерицидное - 200 мкг на 1 мл среды/Клебсиелла была более чувствительной к нему, действие которого проявлялось в концентрации 25-50 мкг/мл.
Таким образом, олаквиндокс проявляет выраженную антимикробную активность in vitro в отношении большинства грамотрицательных и ряда грамположительных микроорганизмов, возбудителей желудочно-кишечных и респираторных болезней животных.
Химиотерапевтическую активность препарата изучали на модели экспериментальной эшерихиозной инфекции, которую вызывали внутрибрюшин-ным введением белым мышам смертельной дозы суточной культуры эшери-хий в дозе 2 млрд. микробных тел. Штамм обладал всеми признаками патогенной активности: проявлял резистентность к тетрациклину.
В первой серии определяли терапевтическую дозу препарата при внутреннем и внутрибрюшинном введении его в форме водных растворов в объеме 0,2 мл через 1 час после инфицирования животных. ЕД50 препарата (доза, предохраняющая от гибели 50% животных) рассчитывали методом Кербера в модификации И.П. Ашмарина и А.А. Воробьева (1962) по формуле: LgE&0= Д - (L - 0,5), где Д - максимальная доза олаквиндокса в эксперименте Lg - логарифм отношений каждой последующей дозы от предыдущей L - сумма всех отношений числа животных, выживших от введения данной дозы к общему числу животных.
Влияние на основные показатели иммунитета
В дальнейшем изучено влияние олаквиндокса на иммунобиологическую реактивность организма птиц в сравнении с диоксидином. Первую серию опытов провели на 1050 цыплятах 15 суточного возраста. Цыплята первой группы получали диоксидин в дозе 5,0 мг/кг в течение 5 суток, цыплята второй группы получали олаквиндокс в дозе 50 мг/кг массы в течение 10 суток, цыплята 3 группы служили контролем. Исследование крови и сыворотки проводили до (фон) и через 3, 7, 10, 21 день после окончания дачи диоксиди-на. Тестировали состояние организма цыплят всех групп по количеству эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, активности лизоцима; уровню комплемента, титрам интерферона, нормальных гемагглютининов, гемолизинов, активности АсАТ, АлАТ, альдолазы, БАС крови, фагоцитарному показателю, общему белку.
Чтобы выровнять сроки исследований, олаквиндокс давался на 5 суток раньше начала опытов с диоксидином. Результаты исследований представлены в таблицах (15,16).
Данные таблицы 15 свидетельствуют о том, что гематологические и биохимические показатели опытных 1 и 2 групп достоверно не отличаются от контрольных, хотя просматривается некоторое увеличение гемоглобина в опытных группах. Показатели иммунобиологической реактивности цыплят при применении олаквиндокса (продолжение таблЛ 6).
Из таблицы 16 видно, что олаквиндокс и диоксидин активизируют защитные системы организма, что проявляется в увеличении титров интерферона, активности лизоцима, БАС и др. показателей неспецифической резистентности организма, по сравнению с контролем. Причем оба препарата действуют почти одинаково. группа телят получала диоксидин в дозе 10 мг/кг в течение 5 суток с кормом, 2 группа получала олаквиндокс в дозе 50 мг/кг массы в течение 10 суток, третья группа служила контролем (табл. 15).
Из таблицы 16 видно, что применение олаквиндокса не вызывает достоверных отличий по биохимическим и гематологическим показателям по сравнению с контрольной группой и группой телят, получавших диоксидин, за исключением общего белка. Этот показатель в обеих подопытных группах был с 10 дня достоверно выше, что говорит о ростостимулирующем свойстве этих препаратов.
Данные таблицы 16 свидетельствуют о том, что показатели иммунобиологической резистентности организма телят достоверно выше в группах телят, которым применяли олаквиндокс с максимальными значениями на 7-14 сутки.
При этом препарат повышал лизоцимную и бактерицидную активность сыворотки крови и уровень комплемента.
Целью настоящего исследования являлось изучение влияния олаквиндокса на прирост массы тела крыс, потребление пищи, процесс всасывания глюкозы в тонком кишечнике; определение зависимости эффективности препарата от возраста и пола животных.
В острых опытах использовали крыс, содержащихся в обычных условиях, крыс забивали, вскрывали брюшную полость и на охлажденное стекло извлекали тонкую кишку. Вырезали семь кусочков длиной 5 см, начиная от конца двенадцатиперстной кишки. При этом всю тощую кишку условно делили на проксимальный, средний и дистальный отделы для сравнения интенсивности всасывания глюкозы. Вырезанные кусочки кишки помещали в чашку Петри с физиологическим раствором. Затем эти кусочки выворачивали слизистой наружу. Для этого края кишки вворачивали внутрь тонкой палоч кой, а саму кишку нанизывали на неё. После этого вывернутый кусочек осторожно снимали с палочки. На оба конца кусочка накладывали лигатуры. Эта методика так называемого аккумулирующего препарата слизистой (АПС) была предложена Уголевым A.M. и др. (1970). АПС дает возможность количественно охарактеризовать начальные этапы всасывания. Далее АПС в виде пустых вывернутых мешочков инкубировали в растворе Д-глюкозы (0,2%), постоянно оксигенируя при Т— 37С. Объем раствора составлял 500 мл, готовили его на растворе Рингера с рН= 7,4; в инкубационную среду добавляли различные дозы олаквиндокса - от 5 мг до 100 мг на 1 литр раствора. Время инкубации АПС - 30 мин. и 60 мин. бралось на основе данных Е.Е. Нуркса (1971).
Кусочек №4 взвешивали, а затем подвергали биохимическому анализу для определения исходного уровня глюкозы, содержащейся в ткани тощей кишки.
По окончании инкубации кусочки № 1,2,5,6 ополаскивали в холодном растворе Рингера и удаляли избыток жидкости легким прикосновением концов препарата к бумажному фильтру. Лигатуры срезали и препараты взвешивали. После этого кусочки помещали в 3,7 мл из изотонического раствора. Добавляли 0,2 мл 10% раствора вольфрамата натрия и осаждали в течение 10 мин. несахарные редуцированные вещества. Содержимое пробирок перемешивали и фильтровали. К 1,0 мл фильтрата добавляли 1,0 мл медно-щелочного реактива (смесь растворов А и Б) для окисления редуцирующих веществ. Пробирки помещали на 10 мин в кипящую водяную баню. По истечение указанного времени в каждую пробирку добавляли по 3,0 мл мышьяково- молибденового реактива, предварительно разведенного водой в отношении 1:2, который окисляет глюкозу, давая сине-зеленое окрашивание.
