Содержание к диссертации
Введение
1.Обзор литературы 8
1.1. Перелом у животных. Факторы, влияющие на их частоту у собак карликовых пород 8
1.2. Оперативное лечение переломов у животных 10
1.3. Осложнения после остеосинтеза . 15
1.4. Методы воздействия на регенерацию костной ткани 17
1.5. Оценка регенерации костной ткани при остеосинтезе 23
2. Собственные исследования 29
2.1 Материалы и методы 29
2.1.1 Методики экспериментальных исследований. 30
2.1.2. Методика клинических испытаний препарата на основе гидроксиапатита у собак карликовых пород . 39
2.1.3. Анестезиологическая защита 44
2.1.4. Краткая характеристика используемых в работе фармакологических препаратов и шовного материала. 47
2.2. Результаты собственныхисследований 52
2.2.1 Распространенность переломов длинных трубчатых костей конечностей у собак карликовых пород в городе Санкт-Петербург . 52
2.2.2 Результаты экспериментальных исследований на крысах 53
2.2.3. Результаты экспериментальных исследований на кроликах 61
2.2.4. Результаты клинического применения препарата на основе гидроксиапатита у карликовых пород собак 70
3. Обсуждение полученных результатов 79
4. Выводы 92
5. Практические рекомендации 94
6.список литературы 95
- Осложнения после остеосинтеза
- Методика клинических испытаний препарата на основе гидроксиапатита у собак карликовых пород
- Распространенность переломов длинных трубчатых костей конечностей у собак карликовых пород в городе Санкт-Петербург
- Результаты клинического применения препарата на основе гидроксиапатита у карликовых пород собак
Введение к работе
Актуальность темы. Морфологические и функциональные нарушения
опорно-двигательного аппарата у животных являются одними из наиболее
распространенных патологий костной ткани. Актуальной проблемой
ветеринарной хирургии и травматологии является реконструктивная терапия повреждений длинных трубчатых костей (Веремей Э.И., Лакисов В.М., 1992; Брохин В. А., 1999; Самошкин И.Б., 2004; Концевая С.Ю., Шакирова Ф.В., Ананич И.В., 2007; Башкатова Н.А., 2008; Карелин М.С., 2009; Абдрахманов Д.Р., 2012; Anderson G.I., 2001; Harasen G., 2003; Permattei D.L. Flo G., 2006).
В условиях повышения урбанизации общества растет количество животных, которых можно содержать в домашних (квартирных) условиях. Преимущественный процент отводится мелким «карликовым» породам собак. По данным за 2014-2015 гг. в ГБУ «Санкт-Петербургская горветстанция» переломы трубчатых костей составляют 10% от всех хирургически больных животных, переломы костей предплечья преимущественно встречаются у мелких пород животных.
Репаративная регенерация костной ткани – одна из актуальных проблем в ветеринарной медицине, и, несмотря на обстоятельные работы в этом направлении (Филиппов Ю.И., Плахотин М.В., 1976; Самошкин И.Б., 1996; Смирнова Н.В., 1997; Сиротин А.П., 1998; Козлов Н.А., 2000; Столяров С.Г., Виденин В.Н., 2000; Уша Б.В., 2003; Ватников Ю.А., 2004; Гололобов В.Г., 2004; Анников В.В., 2006; Деев Р.В., 2006; Самошкин И.И., 2007; Сахно Н.В., 2012), вопросы, касающиеся уменьшения сроков послеоперационной реабилитации, замещения дефекта костной ткани, остаются до настоящего времени не полностью решенными и требуют дальнейшего изучения.
Для лечения простых переломов трубчатых костей используются различные методы, но большей популярностью пользуются основные три:
-
остеосинтез динамической компрессирующей пластиной с винтами (Шугаев А.В., Ягников С.А., 2011).
-
внеочаговый остеосинтез с использованием двустороннего одноплоскостного. фиксатора и аппарата Илизарова (Ерофеев С.А. с соавт., 2004; Еманов А.А., Петровская Н.В. с соавт., 2009; Карелин М.С., 2009, Ягников С.А., 2010).
-
интрамедулярный остеосинтез спицей совместно с использованием гипсовой лонгеты (Курбанов Р.З., 1993; Шугаев А.В., Ягников С.А., 2011; Концевая С.Ю., 2007)
Сложность лечения переломов трубчатых костей заключатся в недостаточном кровообращении тканей, расположенных рядом с костными отломками, а также в малом объеме мягких тканей непосредственно над костями (Permattei D.L. Flo G, DeCamp C., 2006). Поэтому после использования как консервативных, так и оперативных методов лечения 10% случаев заканчивается осложнениями, такими как: нагноение раны, остеомиелит, несращение отломков, образование ложного сустава и др. (Виденин В.В. 1996; Гимранов В.В. 2000; Послов Г.А. 2001; Чернигов С.В. 2012; Permattei D.L. Flo G., DeCamp C 2006).
Вышесказанное свидетельствует об актуальности поиска новых
эффективных методов оперативного лечения. В связи с этим представляет интерес использования биодеградируемых материалов при лечении переломов, в частности, материалов на основе гидроксиапатита (ГА). В последние годы появился ряд работ, свидетельствующих о возможностях применения костнопластических материалов в гуманной хирургии (Зайцев В.В., Лекишвили М.В., Васильев М.Г., 2009; Зайцев В.В., Лекишвили М.В., Васильев М.Г., 2009; Дружинина Т.В., Каменчук Я.А., 2014) и у экспериментальных животных (Смирнова Н.В., 1997; Анников В.В., 2005). При этом получены результаты, доказывающие их эффективность в процентном соотношении относительно животных контрольной группы. Пока ещ очень мало работ, посвященных изучению использования биодеградируемых материалов на основе ГА при лечении собак карликовых пород с переломами трубчатых костей
Цель исследования: дать экспериментальное и клиническое обоснование применения биодеградируемого материала на основе гидроксиапатита при лечении переломов трубчатых костей конечностей у животных.
Задачи исследования:
-
выявить распространенность переломов длинных трубчатых костей у карликовых пород собак в клиниках города Санкт-Петербурга и частоту послеоперационных осложнений при остеосинтезе у карликовых пород собак;
-
определить влияние препарата на основе гидроксиапатита на организм экспериментальных животных и регенерацию костной ткани;
3) изучить в эксперименте возможность использования биодеградируемого
материала на основе гидроксиапатита при искусственно сформированных
дефектах бедренных костей у крыс и кроликов;
4) оценить возможность использования материала на основе гидроксиапатита
при закрытых случайных переломах костей предплечья у карликовых пород
собак;
Научная новизна. Экспериментально на лабораторных животных обосновано применение нового биодеградируемого материала на основе гироксиапатита при оперативном лечении переломов у животных. Выявлена возможность его клинического применения с целью повышения эффективности оперативного лечения закрытых переломов трубчатых костей у собак карликовых пород с использованием интрамедуллярного остеосинтеза.
Теоретическая и практическая значимость состоит в том, что на основании клинических, биохимических, рентгенологических, гистологических исследований установлена высокая терапевтическая эффективность применения гидроксиапатита при оперативном лечении переломов трубчатых костей.
Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что применение
стандартных методик оперативного лечения и препарата на основе
гидроксиапатита позволяет предупредить возникновение, развитие
послеоперационных осложнений и сократить сроки реабилитации животных на 10-14 суток.
Методология и методы исследования. Для решения поставленных задач
применялись следующие методы исследования: анализ и обобщение
литературных данных, термография, рентгенологические, биохимические,
гематологические, гистологические методы исследования, методы
математической статистики.
Основные положения, выносимые на защиту.
-
Результаты использования гидроксиапатита у крыс, кроликов и карликовых пород собак для замещения дефектов костной ткани при искусственно сформированных дефектах бедренной кости и диафизарных переломах предплечья.
-
Сравнительная оценка динамики клинических, биохимических, рентгенологических и гистологических показателей и сроков реабилитации животных в эксперименте и при клинических операциях у собак с переломами костей предплечья в контрольной и подопытной группах при использовании гидроксиапатита для замещения дефектов костной ткани.
Апробация работы. Основные материалы диссертации были вынесены на
обсуждение международной научной конференции профессорско-
преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ в 2014 и 2015 годах. Тезисы представлены на II Международном ветеринарном Конгрессе VETistanbul Group – 2015 (СПб, 07.04.2015).
Публикации: Материалы диссертации опубликованы в трех научных статьях, в том в числе 2 работы в рецензируемых изданиях ВАК при Министерстве образования и науки РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 121 страницах печатного текста и состоит из введения, литературного обзора, материалов и методов исследования, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы, приложений. Список литературы включает в себя 196 источников, 59 из которых являются иностранными. В работе имеется 15 таблиц и 41 рисунок.
Осложнения после остеосинтеза
Хирургическая или открытая репозиция переломов и внутрикостная фиксация широко используются в ветеринарной ортопедии. В конце 50-х годов ХХ в. была сформирована международная ассоциация остеосинтеза (АО), а в 1970 г. равноценная этой ассоциации ветеринарная ассоциация. Сформулированы четыре классических принципа лечения переломов (Денни Х.Р., Баттервоф С.Дж., 2007; Patil D.B., 2008). С течением времени происходила их эволюция, и сейчас они выглядят следующим образом: 1) репозиция фрагментов костей, их фиксация, восстанавливающее анатомическое взаимоотношение и позволяющее проводить функциональное восстановительное лечение (внутрисуставные переломы требуют точной анатомической репозиции, при переломах диафиза идеальная анатомическая репозиция не обязательна, но необходимо восстановление длины кости, а также устранение осевых и ротационных смещений); 2) стабильная фиксация отломков с взаимной их компрессией; 3) сохранение кровоснабжения кости и мягких тканей за счет атравматической хирургической техники и аккуратной техники репозиции перелома (предпочтение следует отдавать способам закрытой непрямой репозиции и использованию малоинвазивных хирургических доступов без отделения надкостницы и скелетирования кости); 4) раннее и безопасное восстановление подвижности в смежных суставах поврежденного сегментами активизация пациента в целом.
Стабильная фиксация означает фиксацию с минимальным смещением под воздействием осевой нагрузки силы мышц. Величина стабильности фрагментов костей после репозиции оказывает важное влияние на большинство биологических реакций во время процесса заживления. Точная адаптация и компрессия снижают до минимума нагрузку на имплант и предохраняют его от усталостного разрушения. (Файзуллина Н.З., 1996; Столяров С.Г., 1997, Корнилов Н.В., 2011; Шрейнер А.А., 2001; Сахно Н.В., 2007; Кондратьева Е.С., 2012).
Многие авторы выделяют 3 основных способа лечения переломов трубчатых костей (Гимранов В.В., 2000; Ерофеев С.А. с соавт., 2004; Концевая С.Ю., Шакирова Ф.В., Ананич И.В., Файзулина Н.З., 2007; Сахно Н.В., Тимофеев С.В., Черванёв В.А., Троянская Л.П., Пальцев С.С., 2007; Еманов А.А., Петровская Н.В. с соавт., 2009; Карелин М.С., 2009, Ягников С.А., 2010, Шугаев А.В., Ягников С.А., 2011; Абдрахманов Д.Р., 2012), каждый из них имеет свои достоинства и недостатки:
Интрамедулярный остеосинтез. Основным недостатком способа является необходимость проведения двух операций: установки фиксатора и его извлечения после консолидации перелома (Послов Г.А., 2001). Одним из довольно частых осложнений после интрамедуллярного остеосинтеза является миграция фиксаторов (штифтов, стержней, спиц, гвоздей и т.д.) из просвета костномозгового канала, но исследования в этой области позволяют свести до минимума возможности миграции фиксатора (Даас А. А., 1990; Лебедев А. В., 1990; Концевая С.Ю., 2001; Сахно Н.В., 2006). В настоящее время определено место интрамедуллярного остеосинтеза. В ветеринарной практике целесообразность его применения показана на примере трубчатых костей собак в связи с особенностями техники исполнения, щадящей мягкие ткани (Самошкин И.Б., Тимофеев С.В., Слесаренко Н.А., 2002; Сахно Н.В. 2004;Мезин А.В. 2012);
Накостный остеосинтез. Применение шурупов, пластин и прочего для фиксации отломков увеличивает обнажение места перелома и размер операционного поля, продолжительность оперативного вмешательства и кровопотерю, особенно у больных с политравмами (Охотинский В.П., Сувалян А.Г. 1988; Абдрахманов Д.Р. 2012)
Чрескостная фиксация отломков. Ряд исследований доказывают, что увеличение диаметра и количества чрескостных элементов для повышения жесткости остеосинтеза повышает и рост травматичности, а также инфекционных осложнений. Проведение чрескостных элементов под взаимным углом 50-90 градусов вызывает угрозу повреждения сосудов и нервов, точек акупунктуры. Следует отметить, что расширение функциональных возможностей аппаратов внешней фиксации усложняет их конструкцию и повышает вероятность сбоев в работе (Сак Н.Н., Дедух Н.В., 1978; Шайко-Шайковский А.Г., 2000; Шевцов В.И., 2000; Шрейнер А.А., 2001; Краснов В.В., 2007).
К наиболее редкому и труднодоступному способу фиксации костных отломков относят установку аппарата Илизарова.
В 1951 году Г.А. Илизаровым был предложен аппарат для чрескостного остеосинтеза. В последующем он подвергся значительной модернизации и усовершенствованию, в которых приняли участие многие ученики и сотрудники Г.А. Илизарова. Этот аппарат позволил комплексно решить проблему оптимизации условий при лечении переломов и их последствий. Основу аппарата составляют наружные опоры, соединенные друг с другом стержнями, а с костями или их отломками - спицами. Принцип аппарата - это перекрестное проведение через костные отломки спиц, которые в натянутом состоянии крепятся на замкнутых неподвижных сегментах. Современный аппарат Илизарова собирается из малого количества унифицированных девайсов многоцелевого назначения, конструкции, которые в зависимости. от индивидуальных особенностей того или иного повреждения или заболевания. позволяют создавать неограниченное количество компоновок.
Проведение остеосинтеза с использованием аппарата Илизарова создает практически идеальные условия для проявления действия биологического закона репаративной регенерации костной ткани и быстрейшего сращения перелома кости. Данный метод позволяет обеспечить прочную фиксацию отломков, а так же возможность их функциональной нагрузки и с сохранением в определенной степени движений в смежных суставах и функции мышц животного. Остеосинтез может быть проведен при любых переломах большеберцовой кости и обеих костей голени, а так же костей предплечья, однако он наиболее показан при закрытых оскольчатых, особенно. многооскольчатых, переломах костей голени, при открытых переломах костей голени и при. множественных и сочетанных переломах.
Растяжение положения травмированного участка проводят по 1 – 1,7 мм в сутки в соответствии с возрастом животного, за 2 – 4 подхода, в зависимости от индивидуальных особенностей регенерации и функционального состояния нервно-мышечных тканей конечности меняется темп дистракции. Самым оптимальным является автоматический режим удлинения, когда тот же миллиметр удлинения разбивается на 60 приемов по 0,017 мм2. Удлинение конечности на нескольких уровнях позволяет увеличить суточный прирост количества ренерированной ткани до 1,5 – 2 мм. Оценивают регенерат на 10 сутки после начала дистракции по рентгенологическим снимкам.
Методика клинических испытаний препарата на основе гидроксиапатита у собак карликовых пород
Анестезиологическая защита у собак. Перед операцией проводили премедикацию: димедрол 0,2 мл/кг 1% раствора, затем – 0,1мл атропина на 10 кг массы животного. После этого через 10– 15 мин собаки становились вялыми, сонливыми, исчезали негативные реакции, отмечалась сухость слизистых оболочек. Дыхание уравнивалось и становилось глубоким. В это время обрабатывали операционное поле. Животным, которые проявляли агрессию, с целью премедикации использовали внутримышечное введение ксилазина гидрохлорида в дозе 0,1мл/кг за 20-30 мин до начала наркоза. После его введения отмечалось опорожнение. желудка и кишечника, что имеет немаловажное значение для проведения дальнейшего наркоза.
После фиксации собаки на столе использовали специальные маски (Рис. 15), приспособленные для животных, которые обеспечивали подачу ингаляционного вещества (изофлюран) в дыхательные пути без применения интубации. Как только животное достигало стадии наркоза III1–Ш2, вводили интубационную трубку, которую в дальнейшем подсоединяли к аппарату, и начинали ингаляцию 4-5 об.%, далее понижали до 3-2,5 об.%. При использовании изофлюранового наркоза, восстановление животного после анестезии происходило быстрее.
Эндотрахеальную трубку удаляли только после восстановления адекватного самостоятельного дыхания и появления кашлевой рефлекса при раздражении дыхательных путей. У некоторых животных после пробуждения отмечали дрожь в результате переохлаждения и остаточного эффекта медикаментозной блокады центра терморегуляции. После операции животных укрывали, согревали грелками и помещали в специальные камеры, в которые осуществлялась подача дополнительного кислорода. В послеоперационном периоде обращали внимание на цвет языка, посинение которого свидетельствует о вентиляции легких и газообмена (Гимранов В.В., 2015).
Техника проведения операции у собак. После обработки операционного поля предплечья 0,5% спиртовым раствором хлоргексидина и проведения местной инфильтрационной анестезии 0,5% раствором новокаина из наружно-бокового доступа послойно рассекали мягкие ткани. Костные отломки скрепляли фиксатором, введенным в костномозговой канал. С этой целью остеосинтез проводили через два разреза. Один разрез длиной 4 – 5см делали над местом перелома (Рис. 16). Второй разрез длиной 1 – 2см – над дистальным эпифизом лучевой кости. После выделения костных фрагментов рассверливания полости проксимального и дистального отломков вводили штифт внутрь костномозгового канала. Сформированный костный дефект заполняли биодеградируемым материалом на основе гидроксиапатита. Операцию заканчивали зашиванием раны двухэтажным косметическим швом, который послойно закрывал все ткани, гипсовая лонгета накладывалась таким образом, что бы не закрыть шов. За животными вели клинические наблюдения, обращая внимание на такие признаки воспаления, как величина воспалительного отека, припухлость тканей в области шва, болезненность, гиперемия как в подопытных, так и в контрольных группах животных, а так же проводили термометрию.
Оценку результатов исследования в контрольной и подопытной группах животных проводили на основании общего состояния и данных рентгенографических исследований в области перелома, клинического и биохимического анализа крови в сроки до операции и через 1, 3, 6, 10 недель после операции. Определение биохимических показателей крови проводили на анализаторе фирмы “RX Daytona+” (Randox, Япония). В качестве реактивов использовались комплекты Audit Diagnostics “Liquid Chemistries”.
Клинический анализ проводили на световом микроскопе фирмы “Nicon” после окрашивания мазков крови по стандартной методике азуром II-эозином, а так же на анализаторе Sinnowa B200 «SINNOWA Medical Science & Technology».
Распространенность переломов длинных трубчатых костей конечностей у собак карликовых пород в городе Санкт-Петербург
Изучение возможностей применения гидроксиапатита в клинических условиях проводили при остеосинтезе у 14 собак карликовых пород, подобранных по принципу аналогов, в возрасте от 1,5 до 2-х лет, с угловыми закрытыми переломами дистальной 1/3 диафиза костей предплечья и давностью не более 3-х суток.
В первые двое суток в пораженной ткани наблюдали местное повышение температуры по сравнению с окружающей здоровой кожей. Болевую реакцию наблюдали вплоть до 3-х суток после операции. Характер течения воспалительного процесса в области перелома у животных подопытной группы не отличался от такового у животных контрольной группы и продолжался до 5 суток. Процесс регенерации мягких тканей у животных подопытной и контрольной группы завершился на 7-10 сутки после операции.
У всех собак опорная функция конечностей в течение первых суток после операции отсутствовала; на 2-3 сутки после операции она начинала восстанавливаться, сопровождаясь сильно выраженной хромотой опорного типа. К 13-15 суткам все собаки уверенно опирались на поврежденную конечность. При этом отмечалась средняя и слабая хромота опорного типа. К 20-25 суткам у собак подопытной и к 25-30 суткам у животных контрольной групп функции поврежденных конечностей полностью восстанавливалась.
По данным рентгенологических исследований через 15 суток после операции у собак контрольной группы четко прослеживалось увеличение дефекта кости вследствие деминерализации костной ткани (рис. 27). К 35 суткам у собак контрольной группы на концах костных отломков выявлялась слабо выраженная тень периостального регенерата. У собак, которым с целью стимуляции остеорепарации применяли костнопластический материал, к 35 суткам после операции в зоне остеотомии отмечалось формирование преимущественно эндостального регенерата (рис. 28). На 45 сутки после операции у этих собак обнаруживали наличие костной мозоли неоднородной плотности. В последующем, по истечении 55 суток после операции отмечалось заполнение дефекта кости однородным регенератом с хорошо развитым периостальным, эндостальным и интермедиарным мозолеобразованием. В то время как у собак контрольной группы рентгенологически заметная костная мозоль была выражена в меньшей степени, щель в зоне остеотомии хорошо визуализировалась даже на 55 сутки после проведения операции, также отмечались периостальные воспалительные реакции (рис. 29). Полноценная костная мозоль формировалась к 70 суткам после операции.
Рентгенологические изменения на 15 сутки после операции у собак а) подопытная группа, б) контрольная группа. 1 – участок костного дефекта, 2 – диафиз лучевой кости, 3 – мет. спица в костномозговом канале Рисунок 28. Рентгенологическое исследование на 35 сутки после операции у собак а) подопытная группа, б) контрольная группа. 1 – участок костного дефекта, 2 – диафиз лучевой кости, 3 – мет. спица в костномозговом канале. Рентгенологические изменения на 55 сутки после операции у собак а) подопытная группа, б) контрольная группа. 1 – участок костного дефекта с костной мозолью, 2 – диафиз лучевой кости. Анализ динамики гематологических показателей карликовых пород выявил изменения, представленные в таблице 13.
Достоверному изменению в клиническом анализе крови, а именно: увеличением уровня тромбоцитов к 1 неделе наблюдений (280,26 ± 18,40 Г/л подопытная группа и 202,29 ± 23,09 Г/л контрольная группа при р0,05). По всей видимости - это является результатом нарушения целостности кожных покровов, а так же костного мозга трубчатых костей.
Результаты биохимического исследования сыворотки крови показали неодинаковую динамику ряда показателей у собак контрольной и подопытной групп, что отображено в таблице 14. Уже на первой неделе исследований после операции отмечается достоверное (р0,01) увеличение показателей уровня АСТ у животных контрольной группы, по сравнению с животными подопытной группы (27,46±4,01 МЕ/л и 42,76±3,81 МЕ/л соответственно). Также это отмечается на 3 неделю (31,9±4,05 МЕ/л и 48,57±4,62 МЕ/л) наблюдений.
Через 6 недель после операционного вмешательства отмечали достоверное (р0,05) увеличение уровня АСТ у животных подопытной группы по сравнению с контрольной (30,63±4,1 МЕ/л и 19,79±2 МЕ/л соответственно).
Уровень АЛТ имеет достоверные (р0,05) изменения лишь к 10 неделе наблюдений и отмечается незначительным повышенем у контрольной группы (54,5±4,75 МЕ/л) по сравнению с подопытной (43,1±4,3 МЕ/л).
Подобные процессы происходили с уровнем креатинина на 1, 3, и 6 недели как в подопытной (75,01±8,12 МЕ/л; 69,51±7,71 МЕ/л и 72,7±9,8 МЕ/л соответственно), так и в контрольной группе животных (119±9,4 МЕ/л; 101±11,32 МЕ/л и 44,6±5,83 МЕ/л).
Результаты клинического применения препарата на основе гидроксиапатита у карликовых пород собак
Повышение содержания щелочной фосфатазы в сыворотке крови, видимо, совпадало с фазами остеорегенерации во все сроки наблюдения и было выше у подопытной группы животных по сравнению с контрольной (табл. 10) (рис. 38).
Клинические наблюдения свидетельствуют, что восстановительный послеоперационный период у кроликов протекал удовлетворительно, без проявлений локальных и системных осложнений, что подтверждается исследованием биохимических показателей в сыворотке крови животных. Показатель содержания общего белка (65,4±0,74 г/л) , АЛТ(51,1±3,2 нмоль/л), АСТ (26,6±1,23 нмоль/л), а также креатинина (76,25±2,1 мкмоль/л) соответствовал нормативным значениям, которая приводит Линева А. 2001, во все сроки наблюдений и не отличались от таковых относительно контрольной группы животных (общий белок 66,±0,72 г/л, АЛТ 35,95±3,1 нмоль/л, АСТ 30,85±0,17 нмоль/л, креатинина 76±1,7 мкмоль/л).
Наличие достоверных отклонений в количестве эритроцитов(5,9 ± 0,8 Т/л и 5,1 ± 0,8 Т/л) и лейкоцитов (8,3 ± 1,3 Г/л и 7,3 ± 1,4 Г/л) через 1 неделю после проведения экспериментальных исследований, возможно, является следствием кровопотери. Отсутствие миелоцитов, юных клеток и палочкоядерных указывает на отсутствие инфекционных заболеваний (Постников, В. С. 1984, Бочкарёв В.В. 2015).
Данные биохимических исследований подтверждаются рентгеновскими снимками. Об образовании костной мозоли можно судить по интенсивности заполнения искусственно сформированного отверстия костной тканью, которое более выражено у животных подопытной группы. Эти данные подтверждаются гистологическими исследованиями.
При гистологических исследованиях было выявлено, что через 4 недели после имплантации внутри исследуемого материала формируется костная ткань, в то же время в повреждениях у животных контрольной группы слабые признаки остеогенеза начали наблюдаться через 8 недель после операции.
Следовательно, животные, у которых костный дефект был заполнен материалом на основе ГА имели регенерацию костной ткани на 10-14 раньше, чем животные без костнозамещающего материала.
В исследованиях на собаках карликовых пород анализ биохимических показателей крови показал, что непосредственно после перелома, а также в течение первых 21 суток достоверно повышалось содержание общего кальция и неорганического фосфора в сыворотке крови подопытной группы относительно животных контрольной группы (2,43±0,08 ммоль/л и 1,47±0,07 ммоль/л, при исходном уровне равном 2,43±0,04 ммоль/л и 1,12±0,15 ммоль/л) (табл. 15) (рис. 39, 40). Это обусловлено высоким уровнем регенерации костной ткани в данный период и подтверждается рентгенологическими исследованиями. В дальнейшем отмечалось постепенное снижение указанных показателей, связанное, с отложением ионов кальция и фосфора на органическом матриксе в месте перелома.
Повторное повышение уровня общего кальция (2,51±0,007 ммоль/л) и неорганического фосфора (1,19±0,007 ммоль/л) на 42 сутки после остеосинтеза может быть связано с перестройкой костной мозоли что подтверждается данными таких исследованиелей как Любимова Н. В.(1997); Дерхо М.А.(2000); Десятниченко К.С.(2000); Козлов Н.А.(2001); Лукьяновский В.А.(2001). У собак контрольной группы максимальное увеличение содержания в сыворотке крови общего кальция (1,77±0,22 ммоль/л) и неорганического фосфора (1,17+0,08 ммоль/л) отмечалось к 3-й неделе после операции с последующим снижением на 42 сутки (р0,05) (табл. 15) (рис. 39, 40). Полученные данные свидетельствуют о биосовместимости биодеградируемого материала на основе ГА.
Динамика уровня неорганического фосфора в сыворотке крови собак при заполнении дефекта бедренной кости препаратом на основе ГА (ммоль/л). Сахно Н.В. (2007); Лаврова К.М. (2010) сообщают, что повышение уровня щелочной фосфотазы влияет на интенсивность формирования костной мозоли. В наших исследованиях первый пик активности щелочной фосфотазы (114,86±15 МЕ/л) у собак, которым стимулировали остеогенез препаратом на основе ГА, отмечался на 21-е сутки, что, соответствует фазам остеорегенерации. Второй подъем произошел к 42 суткам (78,86±7,49 МЕ/л) он совпадал со стадией консолидации отломков кости и вероятнее всего отвечал за активную перестройку костной мозоли (Бочкарёв В.В., Дружинина Т.В. 2015). У собак контрольной группы повышение активности щелочной фосфатазы отмечалось в меньшей степени: 62±6,28 МЕ/л и 51,57±8,13 МЕ/л, соответственно, при исходном уровне -58,93±7,73 МЕ/л (табл. 14) (рис. 41). Следовательно, исследуемый материал обладает способностью стимуляции остеогенеза.
При клинических наблюдениях установили, что в послеоперационном периоде у экспериментальных животных в течение первых двух суток отмечалось: гиперемия, местное повышение температуры, тканевой отек, болезненность и нарушение функции прооперированной зоны. Затем, в течение первой недели, указанные явления уменьшались, а через 4 недели наступало полное восстановление исследуемой зоны. Полученные данные свидетельствует о нормальном течении воспалительного процесса что так же подтверждается многими авторами Адо А.Д. (1980); Адо А.Д. Новицкий В.В. (1994); Пауков В. С. (1995); Стрыгина С. О., Дементьев С. Н., Слиденко А. М., Чернышова Г. И. (1997).
В ветеринарной практике для диагностики заболеваний широко используется определение активности таких ферментов, как ACT и АЛТ в сыворотке крови.
АЛТ синтезируется в печени, а АСТ — в миокарде, при инфаркте миокарда или гепатите обнаруживается повышенная концентрация в крови какого-либо фермента. Так, при инфаркте миокарда, активность АСТ в крови возрастает в 8-10 раз, тогда как АЛТ только — в 1,5-2 раза. При гепатитах активность АЛТ в сыворотке крови возрастает в 2-20 раз, а АСТ — в 2-4 раза. Определение активности в крови АСТ и АЛТ имеет диагностическое значение, так как они обладают органоспецифичностью. В наших исследованиях коэффициент Де Ритиса, рассчитанный из полученных данных биохимического исследования сыворотки крови крыс, кроликов и собак, не превышал среднее значение 0,9, что свидетельствует о нахождении этого показателя в пределах нормативных значений (Браунштейн, А.Е. 1987; Мейер Д. 2007), следовательно, можно судить о том, что применяемый препарат на основе ГА не вызывает токсических поражений печени и сердечной мышцы.