Введение к работе
Актуальность проблемы. Среди существующих лечебных фермент-содержащих средств особое место занимают препараты гиалуронидазы. Уникальная способность гиалуронидазы катализировать реакции гидролитического расщепления гиалуроновой кислоты и родственных ей соединений делает ее незаменимой в лечении различных заболеваний человека.
В нашей стране препараты с гиалуронидазной активностью «Лидаза», «Ронидаза» выпускаются около 30 лет. К сожалению, качество выпускаемых в России препаратов несравнимо с зарубежными аналогами. За этот период накопилось значительное количество материалов, показывающих возникновение нежелательных побочных реакций, причиной которых, по-видимому, является то, что препараты гиалуронидазы готовят на основе гетерологично-го для человека сырья животного происхождения - тестикул крупного рогатого скота (КРС). По литературным данным до 20 % терапевтической дозы лидазы приходится на долю высокоаллергенного белка, что значительно увеличивает антигенную нагрузку на организм.
Действующая в нашей стране ФС 42-2606-93, регламентирующая качество выпускаемых препаратов гиалуронидазы, ограничивает не верхний предел содержания общего белка, что необходимо для снижения антигенной нагрузки, а, напротив, лимитирует нижний предел: «...не менее 10 мг/мл». Исходя из требований к величине общей (64-128 УЕ/мл) и удельной активностей (не менее 4 УЕ/мг белка), следует заключить, что содержание белка в препарате допускается до 32 мг/ мл.
Вопросы разработки новых требований к препарату и совершенствование технологии импортзамещающих ферментных препаратов на основе гиалуронидазы, являются актуальными для отечественной фармации и здравоохранения.
Эти исследования важны для расширения сферы применения препаратов гиалуронидазного действия в различных областях медицины. Существующая практически только одна лекарственная форма препарата — инъекционная - ограничивает возможности его использования, в том числе при применении гиалуронидазы в акушерстве и гинекологии. В этом плане создание новой лекарственной формы гиалуронидазы - суппозиториев - является альтернативным, перспективным и позволяет избежать ряда негативных явлений парентерального введения.
В ММА им. И.М. Сеченова в 70-х годах прошлого столетия были разработаны суппозитории с гиалуронидазои, предназначенные для изготовления в аптечных условиях. Однако исследования по выбору суппозиторнон основы и объем проведенных экспериментов недостаточны для автоматического перенесения полученных данных в промышленное производство.
Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось создание промышленных технологий и стандартизация очищенного препарата тестикулярной гиалуронидазы, предназначенной для инъекционного введения и ректального в виде суппозиториев.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
-
Изучить качественный состав коммерческих препаратов лидазы, выпускаемых предприятиями России. Провести исследования по очистке тестикулярной гиалуронидазы от примесей и получению препарата с высокой удельной активностью.
-
Создать промышленную технологию очищенного инъекционного препарата гиалуронидазы.
-
Провести доклинические исследования очищенного препарата гиалуронидазы.
-
Теоретически и экспериментально обосновать состав, разработать технологию суппозиториев с гиалуронидазой.
-
Исследовать стабильность суппозиториев с гиалуронидазой в процессе хранения. Провести доклиническую и клиническую оценку суппозиториев с гиалуронидазой.
-
Разработать нормативную документацию на очищенный инъекционный препарат тестикулярной гиалуронидазы и суппозитории с гиалуронидазой.
Научная новизна. Создана научно обоснованная технология, позволяющая получать очищенный инъекционный препарат гиалуронидазы с высокой специфической удельной активностью и стабильными физико-химическими свойствами (приоритетная справка № 2002129245 от 01.11.02 г. на изобретение «Получение препарата гиалуронидазы»).
Разработаны оптимальный состав и технология суппозиториев с гиалуронидазой, обладающих высокой биодоступностью.
Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований:
1. Разработана и внедрена промышленная технология очищенного препарата тестикулярной гиалуронидазы, позволяющая уменьшить длительность технологического процесса в 2 раза и снизить материалоемкость и энергоемкость производства. Разработаны и утверждены фармакопейная статья предприятия ФСП 42-0028-3745-02 «Лидаза лиофилизат для приготовления, раствора для инъекций 64 УЕ Гиалуронидаза» и промышленный регламент производства препарата лидазы ПР 42-6802055-3-03. На основе разработанной технологии приготовлено пять экспериментально-производственных серий препарата лидазы, соответствующих требованиям ФСП 42-0028-3745-02. .
2. Разработаны промышленная технология суппозиториев с гиалу-ронидазой и способ определения гиалуронидазной активности в суппозиториях. Разработана и утверждена ФСП 42-0028-0907-01 «Гиалуронидаза суппозитории 64 УЕ». Подготовлен проект регламента производства препарата «Гиалуронидаза суппозитории 64 УЕ».
3. Очищенный препарат Пермского НПО «Биомед» выбран, из выпускаемых отечественных препаратов лидазы, в качестве компонента для изготовления лекарственного препарата гиалуронидазы пролонгированного действия - лонгидазы. Опытные серии лонгидазы проходят клинические испытания.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы обсуждались на XIV Республиканской молодежной научной конференции (Сыктывкар, 2000); на Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов», посвященной 95-летию Уфимского НИИВС им И.И. Мечникова ГУП « Иммунолрепарат» (Уфа, 2000); на межвузовской научно-практической конференции, посвященной 85-летию высшего образования на Урале (Пермь, 2001); на VIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2001).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ и получена 1 приоритетная справка на изобретение.
Связь задач исследования с проблемным планом научно-исследовательских работ. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно- исследовательских работ НПО «Биомед» (номера государственной регистрации 01.960.0.11488,01.2001.08830)
На защиту выносятся:
результаты поиска методов очистки гиалуронидазы, выделенной из семенников крупного рогатого скота;
промышленная технология инъекционного препарата тестикулярной гиалуронидазы с высокой удельной активностью, обеспечивающая стабильность физико-химических свойств;
обоснование состава и технологии суппозиториев с гиалуронидазой, предназначенных для лечения гинекологических заболеваний;
стандартизация суппозиториев с гиалуронидазой.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 163 страницах, иллюстрирована 62 таблицами, 21 рисунком. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, раздела собственных исследований (3 главы), выводов, списка литературы, содержащего 191 источник (106 отечественных и 85 зарубежных), 8 приложений на 14 страницах.