Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 11
1.1. Состояние отрасли кролиководства на современном этапе 11
1.2. Микробиоционозы кролиководческих хозяйств с разными формами собственности 18
1.3. Характеристика современных биоцидов (НУК+Н2О2) 21
1.4. Значение дезинфекции в кролиководстве 26
2. Результаты собственных исследований 29
2.1. Материалы и методы исследований 29
2.2. Микрофлора технологических объектов кролиководческих ферм 40
2.2.1. Чувствительность микрофлоры, выделенной с технологических объектов кролиководческих ферм к антибактериальным препаратам разли-чных групп 41
2.3. Физико-химические параметры дезинфицирующего препарата «Дезостерил» 47
2.4. Оценка токсичности и опасности дезинфицирующего препарата «Дезостерил» 53
2.5. Исследование бактерицидного свойства дезинфицирующего препарата «Дезостерил» в лабораторных условиях
2.5.1. Определение бактерицидного разведения 62
2.5.2. Определение фенольного коэффициента 64
2.5.3. Определение белкового индекса
2.6. Изучение спектра антимикробного действия дезинфицирующего препарата «Дезостерил» 70
2.7. Влияние органической нагрузки на дезинфицирующие свойства дезинфицирующего препарата «Дезостерил» 72
2.8. Ультраструктура клеток E. coli шт. K-12, St. аureus шт. 209-P и B. cereus шт. ip 5832 после воздействия дезинфицирующего препарата «Дезостерил» 84
2.9. Производственные испытания дезинфицирующего препарата «Дезостерил» 89
2.10. Экономическая эффективность применения рабочего раствора препарата «Дезостерил» в сравнении с традиционно применяемыми дезин фицирующими препаратами 95
3. Заключение 98
Выводы 108
Предложения производству 109
Список сокращений 110
Список использованной литературы 111
Список иллюстрированного материала
- Микробиоционозы кролиководческих хозяйств с разными формами собственности
- Характеристика современных биоцидов (НУК+Н2О2)
- Физико-химические параметры дезинфицирующего препарата «Дезостерил»
- Ультраструктура клеток E. coli шт. K-12, St. аureus шт. 209-P и B. cereus шт. ip 5832 после воздействия дезинфицирующего препарата «Дезостерил»
Введение к работе
Актуальность темы исследования. Для успешного ведения товарного
кролиководства важно учитывать имеющийся накопленный опыт
промышленного кролиководства и частных подворий кролиководов-любителей. При этом ключевой проблемой является выбор системы содержания кроликов (Е.А. Вагин, 1991; В.А. Александров, 2001). Мировой рынок специальных биоцидных веществ характеризуется очень большим числом фирм-производителей. Несмотря на широкий ассортимент дезинфицирующих средств, разработанных к настоящему времени и выпускаемых отечественной и зарубежной промышленностью, постоянно проводится работа, направленная на поиск новых средств и форм антимикробных препаратов. Связано это с возрастанием требований к биоцидам (эффективность, безопасность для человека и окружающей среды, дешевизна), возникновением резистентных штаммов микроорганизмов, созданием новых, сложно-конструктивных объектов, требующих специального подхода к их обеззараживанию.
В ряду дезинфицирующих препаратов, изучение антимикробных свойств нового препарата «Дезостерил» представляет теоретический и практический интерес.
Степень ее разработанности. Рынок дезинфицирующих средств для агропромышленного комплекса довольно обширен и многообразен. Препараты предназначены для использования в разных типах помещений, имеют отличительные друг от друга характеристики антимикробной эффективности.
По мнению А.П. Березнева (1990), проблема борьбы с микроорганизмами,
вызывающими заболевания у людей и животных, биообрастание
производственного оборудования, биодеструкцию материалов, весьма
актуальна. Несмотря на большой выбор дезинфицирующих препаратов, традиционно применяемые препараты для дезинфекции кролиководческих объектов либо недостаточно эффективны, либо токсичны, агрессивны и экологически небезопасны.
Дезинфицирующее средство на основе надуксусной кислоты имеет
высокую антимикробную эффективность, действует в низкой концентрации на
патогенные микроорганизмы (что дает дополнительную экономию),
малотоксично по сравнению с другими традиционно применяемыми дезинфицирующими препаратами.
Препараты на основе надуксусной кислоты успешно применяются в молочной и других отраслях промышленности, в медицине, то есть там, где требуется повышенный микробиологический контроль (Л.И. Гаджиева, 1969).
В нашей стране препараты на основе надуксусной кислоты применяются только в медицине для холодной стерилизации, в том числе хирургических инструментов.
Поиском и возможностью применения новых средств для
обеззараживания животноводческих помещений занимались такие ученые как А.А. Поляков (1976); А.В. Куликовский (1979); А.А. Закомырдин (1981); Н.И. Попов (1985, 1999); А.М. Смирнов (1996, 2004); В.Н. Аржаков (2003); М.П. Бутко (2003); В.Г. Софронов (2014); J. Holah (1990); A. Russell (1991); P. Malchesky (2000).
Основное направление наших исследований – изыскание эффективного, широкого спектра антимикробного действия, доступного и дешевого препарата для дезинфекции объектов кролиководства.
Цели и задачи исследования. Разработать эффективное средство «Дезостерил» для дезинфекции объектов кролиководства.
В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:
провести мониторинг состава микрофлоры кролиководческих помещениях;
изучить физико-химические, токсикологические и бактерицидные свойства препарата;
изучить спектр антимикробного действия рабочих растворов препарата;
установить режим дезинфекции с использованием препарата в отношении различных микроорганизмов в лабораторно-производственных условиях;
определить экономическую эффективность применения препарата «Дезостерил»;
разработать рекомендации по применению препарата для совершенствования ветеринарно-санитарных мероприятий в кролиководстве.
Научная новизна. Впервые разработаны режимы и технологии дезинфекции технологических объектов и оборудования с использованием дезинфицирующего препарата «Дезостерил». Впервые изучены физико-химические и бактерицидные действия нового дезинфицирующего препарата «Дезостерил» на основе надуксусной кислоты и перекиси водорода. Определена токсичность препарата «Дезостерил». Проведена экономическая эффективность использования препарата «Дезостерил» для дезинфекции кролиководческих хозяйств.
Теоретическая и практическая значимость работы. В результате исследований оптимизирована система санации объектов кролиководства, имеющая большое значение для животноводства.
Научно обосновано применение препарата «Дезостерил» для
дезинфекции объектов кролиководства. Определена более высокая
экономическая эффективность применения препарата «Дезостерил» по
сравнению с используемыми аналогичными дезинфектантами. Разработаны
режимы применения препарата для дезинфекции объектов в кролиководческой
отрасли. Разработаны и утверждены методические рекомендации
«Использование препарата «Дезостерил» для проведения дезинфекции в кролиководческих хозяйствах различного типа» (Новосибирск, 2012).
Отдельные материалы диссертационной работы приняты к
использованию в учебный процесс и научно-исследовательской деятельности
на кафедре эпизоотологии, паразитологии и радиобиологии; микробиологии,
вирусологии и иммунологии при преподавании дисциплин: эпизоотологии и
инфекционные болезни животных, ветеринарная микробиология и
иммунология факультета ветеринарной медицины Федерального
государственного бюджетного образовательного учреждения высшего
профессионального образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», подтверждено документом «Обратная карта связи».
Методология и методы исследования. Проведен методологический
анализ и синтез информации трудов отечественных и зарубежных ученых по
проблеме совершенствования ветеринарно-санитарных мероприятий в
кролиководстве. Для достижения поставленной цели проведен мониторинг состава микрофлоры с технологических объектов кролиководческих ферм в Омской, Новосибирской областях Российской Федерации и в Павлодарской области Республики Казахстан, изучена и подтверждена эффективность дезинфицирующего препарата «Дезостерил» для обеззараживания объектов кролиководства на предприятиях с различной формой собственности. При этом для реализации поставленных задач применялись общепринятые и специальные методы исследования.
Положения, выносимые на защиту:
-
Обоснование эффективности использования препарата «Дезостерил» для дезинфекции объектов кролиководческих хозяйств и оптимальные режимы его применения.
-
Механизм обеззараживающего действия препарата «Дезостерил» в отношении микроорганизмов различных групп устойчивости к дезинфектантам и антисептикам.
Степень достоверности и апробация результатов. Основные положения диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на следующих конференциях:
-
Международная научно-практическая конференция, посвященная 90-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ «Инфекционная патология животных» (Омск, 2011 г.);
-
Научно-практическая конференция аспирантов «Достижения молодых ученых-аграрному производству» (Омск, 2012 г.);
-
Международная научно-практическая конференция «Фундаментальная наука и технологии – перспективные разработки (США, 2015);
-
На инновационном проекте «Конструирование новых моюще-дезинфицирующих препаратов (Омдез-1, Омдез-2, Дезостерил) работа отмечена благодарственным письмом за участие в городской выставке «Инновации года-2012» (Омск, 2012 г.).
Микробиоционозы кролиководческих хозяйств с разными формами собственности
На сегодня кролиководство России большей частью представлено предприятиями, работающими на шедах с открытым способом содержания, у этого способа кролиководства очень много недостатков. Но главным, пожалуй, является нецикличное производство продукции и низкая механизация производственных процессов, как следствие высокая себестоимость продукции и сложность со стабильным сбытом в сетевых магазинах [41, 61, 142]. Удел таких предприятий работа с посредниками по навязанным ценам, уже сейчас многие из них находятся на грани нерентабельности, некоторые закрываются. Несмотря на это, динамика производства мяса кролика в России положительная, свой вклад вносят мелкие хозяйства, у которых рентабельность выше, большая часть из них работает как личное подсобное хозяйство, во многих областях выделяются субсидии в рамках целевых программ «Развитие АПК на 2008-2012гг». Благодаря этому в течение последних трех лет на российском рынке производство мяса кролика непрерывно растет. Занимая не более 3% в 2006 году, российское кролиководство укрепило свои позиции и отвоевало к концу 2009 года 5% рынка, а к 2011 году доля отечественной продукции составила уже около 10%.
Рост продукции кролиководства, является также следствием постепенно увеличивающегося спроса на мясо кролика, оно является диетическим продуктом, рекомендованным для питания детям, аллергикам и людям престарелого возраста. Мясо кролика выгодно отличается по своему химическому составу от говядины, свинины и баранины более высоким содержанием белка и меньшим жира. Кроме того, постепенно расширяется ассортимент продукции из крольчатины: консервы, субпродукты и т.д. [3, 44]. Следует отдельно отметить, что в Советском Союзе в 1985 г. объемы кролиководства превышали текущие годы в 1000 раз. Столь значимое расхождение, лишний раз подчеркивает огромный потенциал для развития кролиководства в нашей стране [50].
До 2008 г. наблюдалось сокращение объемов российского рынка крольчатины, но с 2009 г., рынок мяса кроликов вырос почти вдвое и составил 5тыс. тонн мяса. Однако по итогам 2010 г., рынок мяса кролика снова упал на 43%. В 2011 г. наблюдалась тенденция к увеличению, но в конце августа Россия наложила временное ограничение на ввоз продукции китайских мясоперерабатывающих предприятий, обладавших правом поставок на российский рынок мяса кроликов. Причиной послужили результаты мониторинга на наличие в мясе антибиотиков или бактериальной загрязненности. Об этом сообщало РИА «Новости» со ссылкой на сообщение Россельхознадзора.
Что касается импорта, то его доля на российском рынке в 2010 году составила более 70%. Если смотреть динамику, то в период с 2006 по 2010 гг., доля импорта на российском рынке мяса кроликов менялась в диапазоне от 97,2% до 72,2%. Доля отечественной продукции, несмотря на колебания рынка, за тот же период неуклонно росла: с 2,8% до 27,8% (в 10 раз) от совокупного объема рынка. Импортозамещающий потенциал роста отечественного производства мяса кроликов создает основу снижения рисков расширения производства и открывает российским предпринимателям перспективу дальнейшего развития бизнеса. Импортное мясо кролика в Россию поставляется в основном из Китая, который является мировым лидером по его производству (около 600 тыс. тонн крольчатины в год) и продает его по более низким ценам. В 2010 году объем поставок из этой страны составил около 2тыс. тонн, при том, что доля Китая в импорте крольчатины оценивается в 90%. На втором месте Венгрия – 9%
Стоит также отметить низкое качество импортной крольчатины, поставляемой в замороженном виде, зачастую выдаваемой недобросовестными поставщиками за охлажденную продукцию российского кролиководства. Это несколько снижает доверие к мясу кролика у конечного потребителя, но с развитием отечественного кролиководства проблема будет решена [41, 156].
В ближайшие 2-3 года развитие кролиководства будет обеспечиваться главным образом за счет увеличения доли промышленных ферм, работающих с мясными гибридами, при этом доля крупных и средних кролиководческих хозяйств, работающих с шедами, будет постепенно снижаться. Мелкие кролиководческие хозяйства вне зависимости от технологии кролиководства смогут существовать еще очень продолжительное время. Следующим этапом, будет развитие качественных генетических центров, созданных на базе уже работающих промышленных ферм или построенных зарубежными компаниями для обеспечения возрастающего спроса на российском рынке. В таком варианте развитии событий, можно смело говорить о снижении доли импорта, этому также способствуют предпринимаемые правительством меры по запрещению к ввозу некачественной продукци.
В нашей стране кролиководству всегда уделяли особое внимание. В 70-х годах отрасль переводили на промышленную основу. Из-за рубежа завозилось много высокоценных пород кроликов, в разных регионах создавались крупные племенные хозяйства. Однако в 90-е годы кролиководство на территории России остановилось в своем развитии, снизилась рентабельность производства крольчатины после резкого повышения цен на комбикорма, энергоносители, ветеринарные и биопрепараты [49].
Проблема и в том, что кролиководство на данный момент существует в формате мелких фермерских хозяйств, личных подсобных хозяйств, в виде семейного бизнеса, что не может существенно повлиять на увеличение рынка мяса кролика. Также за эти годы произошло исчезновение таких пород кроликов, как черно-бурая, серый великан, белая пуховая и других. В стране, к сожалению, слишком мало хозяйств, занимающихся чистопородным разведением кроликов, ведущих племенной учет в соответствии с действующими нормами [110].
В.Ф. Кладовщиков отмечает, что по сей день значимость кролиководческой продукции для народного хозяйства не потеряло актуальности [56]. Перспективы у данного бизнеса в России огромные, так как осталась любовь россиян к разведению кроликов еще с давних времен, а сейчас появились еще и реальные перспективы по развитию производства мяса данного вида животных. Крольчатина - это мясо, рекомендуемое как диетический продукт и очень вкусный деликатес [44]. Более того, повышенный интерес к кроликам имеет убедительный экономический аспект, обусловленный их биологическими особенностями. Коэффициент воспроизводства биомассы животного в течение года (отношение живой массы приплода от основной самки в течение года к весу самки) в разы больше, чем у других животных (крупного рогатого скота, свиней, овец). С.Н. Александров отмечает, что кролик в силу биологических особенностей способен увеличить свою массу в потомстве в примерно 80 раз в течение года. Все это еще раз подчеркивает перспективность развития данной отрасли животноводства. Жир кроликов сравнительно легкоплавкий (температура плавления 22-25о) [3]. В качестве нейтральных жиров Н.А. Балакирев отмечает, что преобладают незаменимые полиненасыщенные жирные кислоты (линолевая, линоленовая, арахидоновая), что придает жиру высокую биологическую эффективность, так как перчисленные полиненасыщенные жирные кислоты в организме человека не синтезируются [61].
Характеристика современных биоцидов (НУК+Н2О2)
Из семейства Enterobacteriaceae, выделено микроорганизмов в 144 пробах (60%) от общего количества проб (240), из клеточных шедов изолировано 106 (73,6%) бактерий.
Бактерии рода Proteus, которые были выделены из 43 проб (29,8%). При этомих максимальное количество 32 (74,4%) изолировано в пробах, взятых с пола и стен клеточных шедов. При этом Klebsiella mobilis выделена из 26 (18,1%) проб, максимальное количество изолировано из клеточных шедов 23 (88,5%), Сitrobacter freundii изолирована из 24 (16,7%) проб, максимальное количество 18 (75%) проб было выделено из клеточных шедов.
Escherichia coli была выделена из 17 (11,8%) проб при этом наибольшее количество 15 (88,2%) так же было изолировано в пробах, взятых из клеточных шедов. Enterococcus были изолированы из 34 (23,6%) проб, при максимальном количестве выделения в 18 (59,9%) пробах взятых из клеточных шедов. Анализируя таблицу 1, необходимо следать заключение, что из общего количества проб-смывов, из которых выделенны бактерии семейство Bacillaceae и Enterobacteriaceae составило 240 проб (96 проб + 144 пробы). А из клеточных шедов, выделенны микроорганизмы семейств Bacillaceae в 59 пробах (61,5%) от общего количества (96 проб). Микроорганизмы семейств Enterobacteriaceae выделенны в 73,6% случаях (106 проб-смывов) из клеточных шедов от общего количества (144 проб-смывов). Микробиоценозы кролиководческих ферм представлены различными семействами и родами бактерий, наибольшее их количество изолировано из клеточных шедов. Таблица 1 - Микрофлора, выделенная с технологических объектов кролиководческих ферм
Изоляты K. mobilis проявляли повышенную чувствительность к цефалоспоринам III поколения: цефтибутен, цефтриаксон (задержка роста - 10 мм), к цефепиму IV поколения (задержка роста - 10 мм), карбапенемам (задержка роста -15 мм), аминогликозидам III поколения - амикацин (задержка роста - 10 мм).
Повышенной чувствительностью к нитрофуранам (фурадонин) обладала C. freundii зона задержки роста - 12 мм, низкую устойчивость отмечали к фторхинолонам: левофлоксацину и норфлоксацину (зона задержки роста - 7 мм), к цефалоспорину IV поколения цефепим (зона задержки роста - 5 мм).
Бактерии рода Proteus обладали устойчивостью к антибиотикам следующих групп: пенициллинам, цефалоспоринам, аминогликозидам, карбапенемам и антибактериальным препаратам групп фторхинолонов и сульфаниламидов. Повышенная чувствительность отмечалась к фурадонину (задержка роста - 15 мм).
Escherichia coli проявляла устойчивость к цефалоспоринам II и III поколений, пенициллинам; высокую чувствительность отмечали к аминогликозидам (зона задержки роста - 10 мм), фторхинолонам (зона задержки роста - 7 мм), имипенему (зона задержки роста - 12 мм).
Бактерии рода Baccillus обладали чувствительностью к фурадонину (задержка роста - 5 мм), к ампициллинам (задержка роста - 3 мм) и цефалоспорину IV поколения - цефотаксиму (задержка роста - 3 мм).
Максимальной чувствительностью к изолятам Enterococcus обладал антибиотик из группы карбапенемов, имипенем (зона задержки роста - 5 мм). ТОО «БО-НА» предоставила ФГБОУ ВПО ОмГАУ имени П.А. Столыпина новое дезинфицирующее средство с целью изучения возможного его применения для дезинфекции производственных объектов кролиководческой отрасли. Препарат «Дезостерил» относится к группе органических надкислот и перекисных соединений. В качестве активно действующих веществ содержит (10%-ный водный раствор надуксусной кислоты СН3С(О)-О—ОН и 5%-ный водный раствор перекиси водорода, в качестве вспомогательных компонентов перекись диацетила, натрия дифосфат, воду питьевую. Рецептура дезинфицирующего препарата «Дезостерил» представлена в таблице 3. Таблица 3 - Рецептура дезинфицирующего препарата «Дезостерил» № п/п Вещества, входящие в рецептуру Концентрация, % 1. Надуксусная кислота 10 2. Перекись водорода 5 3. Натрия дифосфат 0,2-0,3 4. Перекись диацетила 1,2 5. Вода дистиллированная остальное Органолептическое исследование испытуемого образца. «Дезостерил» - бесцветная прозрачная жидкость, с запахом уксусной кислоты, допускается незначительное наличие осадка, расфасован в темную полиэтиленовую тару объемом 2 литра, на которой имеется этикетка с указанием: наименования и местонахождения предприятия изготовителя, юридический адрес, товарный знак, номер партии, серия, объем в дм, состав, срок годности, назначение и способ применения, условия хранения, меры предосторожности.
Определение растворимости препарата. С этой целью определяли количественную характеристику растворимости отношением массы испытуемого средства к объему растворителя: в граммах на 100 мл и в граммах на 1000 мл воды; при температуре 20С и 70С. Во всех отношениях испытуемые рабочие растворы препарата хорошо смешивались с водой (t =20С и 70 С) без выпадения осадка, хлопьев, образования суспензии или эмульсии.
Определение рН растворов. Результаты определения рН испытуемых растворов представлены в таблице 4. Анализ, которой свидетельствует о том, что рабочие растворы препарата «Дезостерил», а также концентрат имеют кислое значение среды рН=2,2-3,4.
Определение поверхностного натяжения испытуемых растворов «Дезостерил». В результате проведенных исследований по изучению поверхностного натяжения рабочих растворов препарата «Дезостерил» в соответствии с ранееописанной методикой были получены следующие данные, которые приведены в таблице 5.
Результаты определения поверхностного натяжения рабочих растворов различных концентраций, препарата «Дезостерил» свидетельствуют о том, что данные показатели приближаются к поверхностному натяжению воды. Снижение поверхностного натяженияот концентрированной формы препарата к рабочим растворам, приводит к повышению площади контакта молекул рабочего раствора препарата с обрабатываемой поверхностью.
Физико-химические параметры дезинфицирующего препарата «Дезостерил»
Для изучения механизма действия дезинфицирующего препарата «Дезостерил» на морфологию микробных клеток, нами, совместно исполняющим обязанности начальника отдела микроскопических исследований Тарановым О.С. Федерального бюджетного учреждения науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека были проведены электронно-микроскопические исследования субмикроструктуры клеток E. сoli шт. К-12, St. aureus шт. 209-Р, В. сereus шт. ip 5832, после воздействия на них рабочих растворов препарата «Дезостерил» в 0,5%; 1% и 3% концентрации при 30 мин и 60 мин. экспозиции.
При электронно-микроскопическом исследовании интактной культуры E. сoli в полях зрения определяются палочковидные профили, нормально структурированных микробных клеток. Отчетливо просматриваются основные морфологические компоненты микробной клетки: клеточная стенка и нуклеоид, представленный более светлой областью цитоплазмы (рисунок 7). увел. 100 тыс. Рисунок 7 - Интактные клетки E. сoli шт. К – 12 Белой стрелкой показана клеточная стенка, черной стрелкой-нуклеотид. Изучение ультраструктуры кишечной палочки после воздействия препаратом «Дезостерил» 0,5%-ной концентрации и 15 мин. экспозиции показало, что все клетки находились в состоянии тотального лизиса: наблюдали: сегрегация цитоплазмы и выход клеточного содержимого наружу (рисунок 8). увел. 100 тыс.
Интактные клетки St. aureus шт. 209-Р После 15 мин. воздействияна золотистый стафилококк препаратом «Дезостерил» в 1%-ной концентрации, отмечали: нарушение целостности клеточной стенки, вакуолизация клеток (рисунок10).
Морфологический анализ действия ряда дезинфицирующих веществ, входящих в состав препарата «Дезостерил» на микроорганизмы различных видов позволяет сделать вывод о высокой степени их эффективности. Основное проявление повреждающего действия исследуемого вещества на бактериальные клетки – это воздействие на цитоплазматическую мембрану, приводящее к ее разрушению с последующим летальным структурным изменениям. 2.9. Производственные испытания препарата «Дезостерил»
Производственные испытания нового дезинфицирующего препарата проводили согласно методическим указаниям «О порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики» (1987) и «Правилами проведения дезинфекции и дезинвазии объектов ветеринарного надзора» (2002). Дезинфекцию производственных помещений кролиководческих хозяйств проводили c 2011 по 2012 гг. в хозяйствах ООО «Омск-Миакро» г. Омск, ООО «Акро» Омской и Усть-Тарского района Новосибирской областей, а также в хозяйстве Павлодарской области Республика Казахстан. За этот период обработано 1750 м2 площадей. Перед началом дезинфекции с поверхностей производственных участков (пол, стены, клетки) предварительно были взяты пробы-смывы для выделения санитарно-показательных видов микроорганизмов. Рисунок 13 - Результаты бактериологических исследований проб-смывов Рисунок 14 - Гидропульт «Marolex» В результате бактериологических исследований проб-смывов было установлено наличие различной микрофлоры, представленной микст-культурами бактерий и грибов (рисунок 13). Дезинфекцию производственных объектов проводили влажным методом при помощи гидропульта «Marolex» (рисунок 14).
Гидропульт «Marolex» состоит из шланга и рукоятки штанги с шаровым клапаном для побелки; длинный наружный насос; модульная штанга 60 см. с регулируемой форсункой MR1,5 мм.; удлинитель 50 см.; рукоятка штанги с дозирующим клапаном для опрыскивания; заливная воронка с сеточным фильтром; смеситель раствора; дополнительные плоскоструйные форсунки для побелки и покраски, прокладки, фильтр и силиконовая смазка. Общий объём: 11,6 л. Рабочий объём: 11,0 л. Давление: 0,4 МПа. Вес нетто: 2,4 кг. Рисунок 15 - Приготовление рабочего раствора препарата
Тест-объекты (кафель) контаминированы микробной культурой Bacillus subtilis штамм ВКПМ В 7092 Опытные рабочие растворы препарата «Дезостерил» (1-5% растворы по препарату) готовили на водопроводной воде с температурой 18-20С, тщательно перемешивали и заливали в емкость опрыскивателя непосредственно перед дезинфекцией (рисунки 15, 16). Для отработки режимов дезинфекции, в клетках для содержания кроликов были размещены вгоризонтальной и вертикальной проекциях тест-объекты (дерево, кафель, стекло) контаминированные 2x109 взвесью микробной культуры Bacillus subtilis штамм ВКПМ В 7092 (рисуноки 17,18). Режимы дезинфекции включали обработку производственных поверхностей рабочими растворами «Дезостерил» в 1%; 2%; 3%; 4%; 5%-ной концентрации, однократно, при расходе 0,3 л на 1 м2, экспозиции 30, 60, 120 мин., как с предварительной влажной механической чисткой водопроводной водой, так и без нее.
Обеззараживание производственных объектов наступало после воздействия 1%-ной концентрации препарата и 30 мин. экспозиции, спороцидный эффект проявлялся при использовании 3%-ной концентрации и 60 мин. экспозиции.
В присутствии органических загрязнений высокие (4 и 5%-ные) концентрации не снижали бактерицидного эффекта препарата.
Контроль качества производственных опытов проводили согласно методике «Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора» (2002 г.).
Ультраструктура клеток E. coli шт. K-12, St. аureus шт. 209-P и B. cereus шт. ip 5832 после воздействия дезинфицирующего препарата «Дезостерил»
Для определения фенольного коэффициента, получения достоверных данных опыт повторяли 3 раза с вычислением среднего бактерицидного разведения фенола и испытуемого средства при 10 и 30 мин. воздействия. Полученная цифра отражала фенольный коэффициент исследуемого средства, т.е. во сколько раз это бактерицидная активность препарата ниже или выше фенола. Для исследования брали химически чистую кристаллическую карболовую кислоту (фенол) без содержания воды (ГОСТ 6417-72). Бактерицидное действие препарата «Дезостерил» на кишечную палочку выше фенола в 11,37 раз, на золотистый стафилококк, синегнойную палочку и М. шт. В – 5, соответственно в 9,74; 12; 4,97 раз.
В результате использования дезинфицирующих средств в практических условиях, они соприкасаются не только с микроорганизмами, но и с окружающей средой. Следовательно, часть АДВ в препарате теряют свою активность, поэтому снижается бактерицидный эффект.
Белковый индекс – показатель снижения активности дезинфицирующего средства в присутствии белка. В качестве белка использовали инактивированную сыворотку крови крупного рогатого скота.
Результаты определения белкового индекса показали, что в присутствии органической субстанции препарат «Дезостерил» снижает бактерицидную активность в отношении тест – микроорганизмов (1,8 - 2,9 раз). Бактерицидная активность 3% раствора «Дезостерил» подогретого до +20С - +30С увеличивается в 1,04 раза в отношении тест-культур.
В соответствии с общими инструктивными материалами токсикологическая характеристика дезинфицирующего средства «Дезостерил» включает сведения по параметрам токсикометрии при различных путях его поступления в организм экспериментальных животных с оценкой общих токсикологиских эффектов. Токсикологические исследования проводили с использованием метода наименьших квадратов для пробит-анализа кривых летальности (В.Б.
Прозоровский, 1962), Результаты исследований свидетельствуют, что «Дезостерил» по степени токсичности относится к 3 классу опасности. Спектр антимикробного действия препарата изучали с использованием тест-культур: E. сoli шт. К-12; St. aureus 209-Р; P. mirabilis АТСС 14153; M. bovis 14; B. cereus шт. ip 5832, Penicillium. Анализ полученных результатов, свидетельствует, что 0,5%-ная его концентрация обладала бактерицидным действием в отношении: E. сoli в 5 мин., St. аureus в 15 мин.; P. mirabilis при 10 мин. воздействии. Микобактерицидный эффект отмечался при использовании 1%-ной концентрации и экспозиции 120 минут. Спороцидное действие наблюдалось в 3%-ной концентрации и 60 мин. экспозиции. Фунгицидное действие проявлялось при использовании 0,5%-ной концентрации и 120 мин. экспозиции. Дезинфицирующее действие препарата «Дезостерил» с применением органической нагрузки (стерильный навоз крупного рогатого скота) изучали на тест-культурах указанных в предыдущем исследовании. Для этого использовали тест-объекты: дерево, металл, бетон, кафель, резина. Расход сухого стерильного навоза на 100 см составил 0,2 г., препарата – 300 мл/м.
Аналогичные исследования проводили и без органической защиты. При этом использовали концентрации препарата: 0,5%; 1%; 2% и 3%-ные концентрации и экспозиции 3; 5; 15; 30; 60 мин. В опытах с органической защитой бактерицидное действие в отношении E. сoli и St. aureus проявлялось в 1%-ной концентрации при 30 мин. экспозиции на всех тест-объектах. Бактерицидное действие в отношении M.bovis отмечали на всех тест-объектах при воздействии 2%-ной концентрации и 120 мин. экспозиции. Спороцидный эффект наблюдали при использовании 3%-ной концентрации и экспозиции 120 минут. Фунгицидный эффект проявлялся в 1%-ной концентрации и 120 мин. экспозиции на всех тест-объектах.
Без органической защиты бактерицидное действие препарата «Дезостерил» в отношении кишечной палочки проявлялось в 0,5%-ной 105 концентрации на всех тест-объектах при 5 мин. экспозиции на металлических, кафельных и резиновых тест-объектах, на деревянных и бетонных при экспозиции 30 мин и 15 мин. соответственно. В отношении золотистого стафилококка губительный эффект 0,5%-ной концентрации, проявлялся на деревянных тест-объектах при воздействие 30 минут, на всех остальных тест-объектах при экспозиции 15 минут. Микобактерицидное действие отмечалось привоздействие 2%-ной концентрации, и экспозиции 60 минут на всех тест-объектах. Спороцидный эффект отмечался на всех тест объектах при использовании 3%-ной концентрации и 60 мин. экспозиции. Фунгицидное действие наблюдалось при использовании 1%-ной концентрации, и экспозиции 60 минут, на всех тест-объектах. Изучение механизма действия дезинфицирующего препарата на ультраструктуру микробных клеток проведены электронно микроскопические исследования субмикроструктуры клеток E. сoli шт. К-12 и B. subtillis ВКПМ 7092 после воздействия на них рабочих растворов препарата «Дезостерил» (0,1%-ный раствор, экспозиция –5; 10;15 мин.), опыты проводили без органической защиты. При электронно-микроскопическом исследовании нативных препаратов тест-культур в полях зрения определяли округлые и палочковидные профили, нормально структурированных микробных клеток. Отчетливо просматривались основные морфологические компоненты микробной клетки: клеточная стенка, плазмолемма, мелкозернистый матрикс рибосомальной системы и нуклеоид, представленный более светлой областью цитоплазмы. После 10 мин. воздействия дезинфектанта на E. coli наблюдали сегрегацию цитоплазмы бактериальной клетки. Центральная ее зона выглядела оптически пустой, определялись только фрагменты оболочек и хлопьевидный материал, что свидетельствует опреобладании процесса полного лизиса бактериальных клеток.