Содержание к диссертации
Введение
Раздел 1. Обзор литературы 21
1.1. Роль пробиотической микрофлоры в обеспечении колонизационной резистентности организма 21
1.2. Кишечная транслокация микроорганизмов и ее назначение 26
1.3. Патогенетические особенности течения хирургических инфекций 31
1.3.1. Роль микробного фактора при асептических и гнойно воспалительных процессах 33
1.3.2. Роль системы крови в патогенезе хирургической инфекции 39
1.4. Современные подходы борьбы с хирургическими инфекциями и их профилактика 59
1.5. Вывод из обзора литературы 69
Раздел 2. Выбор направлений исследований. Материал и методы выполнения работы 71
Раздел 3. Собственные исследования 92
3.1. Мониторинг распространения хирургических инфекций у кошек 92
3.2. Характеристика параметров гомеостаза у клинически здоровых кошек 96
3.2.1. Микробиоценозы экологических ниш организма здоровых кошек 97
3.2.2. Морфо-биохимические показатели крови у здоровых кошек 101
3.2.3. Иммунологические показатели крови у клинически здоровых кошек 105
3.3. Патогенетические звенья течения асептических процессов у кошек.. 107
3.3.1. Микробиоценозы кошек при операционной ране 108
3.3.2. Изменения морфо-биохимических показателей крови кошек при операционной травме 110
3.3.3. Иммунологические изменения в крови кошек при операционной ране 116
3.4. Патогенетические механизмы течения хирургических инфекций у кошек 119
3.4.1. Микробиоценозы кошек при гнойно-воспалительных процессах . 120
3.4.2. Определение взаимоотношений между микроорганизмами в микробиоценозах при гнойно-воспалительных процессах у кошек 129
3.4.3. Чувствительность возбудителей хирургических инфекций у кошек к антимикробным препаратам 131
3.4.4. Динамика морфо-биохимических показателей крови кошек при различных формах гнойно-воспалительных процессов 141
3.4.5. Иммунологические изменения в крови кошек при хирургических инфекциях 148
3.5. Характер кишечной транслокации микроорганизмов у кошек при операционной ране и при различных формах хирургической инфекции 153
3.6. Поиск перспективных штаммов пробиотической микрофлоры в экологических нишах клинически здоровых кошек 162
3.7. Характеристика маркерных биологических свойств культур кандидатов в пробиотические препараты для лечения и профилактики хирургических инфекций у кошек 164
3.7.1. Определение чувствительности изолированных штаммов индигенных бактерий к антимикробным препаратам 164
3.7.2. Определение адгезивных свойств бактерий родов Lactobacillus и Bifidobacterium, изолированных от здоровых кошек 174
3.7.3. Антагонистическая активность пробиотической микрофлоры по отношению к возбудителям хирургических инфекций у кошек 178
3.8. Создание пробиотико-сорбционных препаратов для коррекции микробиоценозов у кошек 190
3.8.1. Технологический процесс производства комплексных пробиотико-сорбционных препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт» 192
3.8.2. Характеристика конечных продуктов производства 197
3.8.3. Проведение доклинических испытаний пробиотико сорбционных препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт» 199
3.9. Клиническая характеристика и результаты лечения кошек со случайными гнойными ранами 205
3.9.1. Клиническая характеристика 205
3.9.2. Анализ видового состава и популяционного уровня микрофлоры 216
3.9.3. Динамика гематологических показателей 220
3.10. Клиническая характеристика и оценка эффективности лечения кошек, больных сепсисом 223
3.10.1. Клиническая характеристика 224
3.10.2. Анализ видового состава и популяционного уровня микрофлоры 229
3.10.3. Динамика гематологических показателей 236
3.11. Усовершенствование профилактики послеоперационных гнойно воспалительных осложнений у кошек 245
Раздел 4. Анализ и обсуждение результатов исследований 247
Выводы 287
Практические предложения 293
Список использованной литературы 295
Приложения 359
- Кишечная транслокация микроорганизмов и ее назначение
- Микробиоценозы кошек при гнойно-воспалительных процессах
- Проведение доклинических испытаний пробиотико сорбционных препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт»
- Динамика гематологических показателей
Введение к работе
Актуальность темы исследования. Среди наземных плотоядных животных господствующее положение занимают представители семейства кошачьих. Особенности жизни кошачьих способствуют их травматизации, что зачастую приводит к развитию различных форм хирургической инфекции. Семейство кошачьих включает 36 видов, в том числе и домашнюю кошку, которая имеет анатомо-физиологическое и генетическое сходство с другими представителями семейства, наибольший ареал распространения, численность и вполне доступна для исследований.
В последние годы наблюдается резкое увеличение количества кошек, которые стали не только полноценными жителями квартир, но и полноценными членами семьи. Увеличилась и ценность этих животных не столько в экономическом, сколько в этическом плане. Кошки улучшают настроение, уменьшают напряжение, помогают справиться с депрессией, дают ощущение нужности и создают в доме теплую и уютную обстановку. Они способствуют психологическому развитию детей с аутизмом, церебральным параличем и задержкой развития; улучшают качество жизни одиноким, пожилым людям и пациентам с заболеваниями сердечно-сосудистой системы. Кошки имеют также большое народно-хозяйственное значение, так как уничтожают грызунов в музеях, складских помещениях, зернохранилищах и животноводческих фермах. Многие породы кошек дорогостоящи, поэтому их целенаправленное селекционно-племенное разведение может существенно повысить поступления налогов в бюджет Российской Федерации.
Зоопарковые животные, в том числе и представители семейства кошачьих (львы, тигры, пантеры, гепарды, ягуары, рыси и т. д.), являются бесценными, большинство из которых занесены как в Красную книгу России, так и в Международную Красную книгу. Проблема борьбы с различными формами хирургической инфекции у представителей семейства кошачьих и их профилактика недостаточно освещены, что требует безотлагательных подходов к ее решению.
Нами найдены данные о том, что 95,6 % генома тигра совпадают с геномом домашней кошки, которая произошла от тигра приблизительно 1,8 миллионов лет назад (Бородин П. М., 2011). В связи с тем, что зоопарковые животные являются малочисленными и малодоступными для исследований, кошка домашняя нами была взята как биологическая модель представителей семейства кошачьих при изучении механизмов формирования микробиоценозов экологических ниш организма у здоровых животных; животных с операционной травмой, гнойными ра-3
нами, абсцессами и сепсисом; оценке диагностического и прогностического значения нарушений кишечной микрофлоры при данных патологиях; а также научного обоснования эффективности пробиотико-сорбционных препаратов «Дилак-сил» и «Сорбелакт» при борьбе с различными формами хирургической инфекции.
Роль условно патогенных бактерий в формировании микробиоценозов экологических ниш, в качестве секундарных инфекций при многих заразных и незаразных болезнях достаточно хорошо изучена у продуктивных животных и собак (Виденин В.Н. и др., 1998; Борисевич В.Б., 2002; Веремей Э.И. и др., 2003; Ярем-чук А.В., 2006). У представителей семейства кошачьих, в том числе и у кошки домашней, эти биологические процессы не изучены. Данная ситуация требует более глубокого изучения патогенетических особенностей течения различных форм хирургических инфекций, а также совершенствования методов их диагностики, профилактики и лечения.
Нормальная микрофлора макроорганизма играет важную роль в поддержании его физиологического состояния и обеспечении жизнедеятельности в целом. На современном этапе микрофлору рассматривают как совокупность множества микробиоценозов, занимающих экологические ниши макроорганизма на коже, слизистых оболочках и в полостях, которые соединены с внешней средой. При этом нарушение численности представителей симбиотической микрофлоры экологических ниш неизбежно приводит к дестабилизации гомеостаза макроорганизма в целом. К тому же дисбаланс в функционировании макроорганизма, который может возникнуть в результате стрессовых состояний, нерационального питания, развития инфекционных или гнойно-воспалительных процессов, нерациональной антибиотикотерапии и т.д., также обусловливает коренные изменения в составе микробиоценозов. При развитии дисбиотических нарушений микробиоценозов организма, селективное преимущество приобретают условно патогенные микробные агенты, среди которых могут появиться клоны с приобретенной устойчивостью к антимикробным средствам и генетическими детерминантами, которые обусловливают появление патогенности и роста вирулентности бактерий ( 2000; Бердичевский Б. А., 2001; Schuijt T. J et al., 2013; et al., 2016).
Степень разработанности темы. Изучением микробного пейзажа при хирургических инфекциях у разных видов животных занималась целая плеяда ветеринарных ученых. Однако бактериологическая характеристика ран включала изоляцию чистых культур возбудителей гнойно-воспалительных процессов и определение их чувствительности к антибактериальным препаратам. До конца невы-4
ясненными остаются пути бактериального загрязнения очага деструкции при хирургических инфекциях, а также не определена роль эндогенных микроорганизмов в механизмах формирования и прогрессирования гнойно-воспалительных процессов у животных, в том числе и у кошек. Поэтому, несмотря на создание новых поколений антибактериальных средств, на постоянное совершенствование методов асептики и антисептики, количество осложненных гнойной инфекцией ран у животных не только не уменьшается, а, наоборот, увеличивается (Плахотин М.В., 1961; Мастыко Г.С., 1961, 1985; Семенов Б.С., 1985; Издепский В.И., 1993; Панько И.С., 1998; Ермолаев В.А, 1999; Рубленко М.В., 2000; Ильницкий М.Г., 2002; Меженский А.А., 2003; Ханеев В.В., 2004; Лазоренко А.Б, 2005; Киричко Б.П., 2010; Рубленко С.В., 2010).
До сих пор создание пробиотических препаратов было направлено только на
коррекцию дисбактериозов и борьбу с острыми и хроническими кишечными ин
фекциями. Вопросами разработки и использования пробиотиков для коррекции
микробиоценозов при различных формах хирургической инфекции у кошек ис
следователи до сих пор не занимались. Поэтому раскрытие механизмов формиро
вания микробиоценозов, совершенствование методов диагностики, профилактики
и лечения кошек при хирургических инфекциях является актуальной проблемой, а
ее решение позволит увеличить эффективность борьбы с гнойно-
воспалительными заболеваниями мягких тканей.
Цель и задачи исследования. Цель работы – на биологической модели
кошки домашней изучить механизмы формирования микробиоценозов
экологических ниш организма у здоровых животных, животных с операционной травмой, гнойными ранами, абсцессами и сепсисом, оценить диагностическое и прогностическое значение нарушений кишечной микрофлоры при данных патологиях, а также научно обосновать эффективность пробиотико-сорбционных препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт» при борьбе с различными формами хирургической инфекции.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1. Провести мониторинг распространения хирургической инфекции у кошек
по данным клиник ветеринарной медицины г. Луганска.
-
Исследовать микробиоценозы экологических ниш организма, морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови у клинически здоровых кошек.
-
Определить микробиоценозы экологических ниш организма, морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови у кошек
при операционной ране.
4. Исследовать микробиоценозы экологических ниш организма,
морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови у кошек
при хирургических инфекциях различной степени тяжести.
5. Изучить характер кишечной транслокации микроорганизмов, ее роль при
операционной ране и при различных формах хирургической инфекции у кошек.
-
Разработать питательную среду для культивирования лактобактерий и накопления бактериологической массы.
-
Провести поиск в экологических нишах организма здоровых кошек культур-кандидатов в пробиотические препараты, изучить их маркерные биологические свойства (чувствительность к антибиотикам, адгезивные свойства, антагонистическая активность).
8. Разработать пробиотико-сорбционные препараты «Дилаксил» и
«Сорбелакт», а также доказать их эффективность при борьбе с хирургическими
инфекциями у кошек.
9. Разработать алгоритм профилактики возникновения послеоперационных
гнойно-воспалительных осложнений у кошек.
Научная новизна. Впервые на биологической модели кошки домашней у представителей семейства кошачьих изучены механизмы формирования микробиоценозов при операционной травме, гнойных ранах, абсцессах и сепсисе. Усовершенствованы методы диагностики, профилактики и лечения кошек при хирургических инфекциях.
Впервые проведен мониторинг распространения хирургических инфекций у кошек, их локализация, возрастная, породная, половая восприимчивость и сезонность в условиях г. Луганска.
Исследован микробный пейзаж экологических ниш организма (биоптат кожи, содержимое ротовой полости, содержимое прямой кишки, периферическая кровь) у здоровых кошек. Дополнены данные по морфологическим, биохимическим и иммунологическим показателям крови у здоровых кошек.
Впервые исследован микробный ценоз кишечника у кошек при операционной ране. Доказана связь между микробиоценозом кишечного тракта и составом микрофлоры операционной раны. Новыми являются данные о влиянии операционной раны на динамику морфологических, биохимических и иммунологических показателей крови у кошек.
Впервые у кошки исследованы микробиоценозы при различных формах хирургической инфекции. Найдены существенные различия в качественном и коли-6
чественном составе микробиоценозов кишечника при различных формах гнойно-воспалительных процессов. Установлено, что в механизмах формирования и про-грессирования хирургических инфекций нарушения экосистемы кишечника и возникающая при этом кишечная транслокация микроорганизмов в очаг гнойного воспаления играют ведущую роль. Состояние кишечной экосистемы и характер дисбиотических сдвигов свидетельствуют о тяжести течения гнойно-воспалительного процесса.
Впервые у кошек определены изменения морфологических, биохимических и иммунологических показателей крови при развитии хирургических инфекций различной степени тяжести.
Впервые изучены маркерные биологические свойства культур-кандидатов в пробиотические препараты, изолированных от здоровых кошек (чувствительность к антибиотикам, адгезивная активность и антагонистические свойства). Впервые разработан способ определения уровня количественной антагонистической активности молочнокислых микроорганизмов. Установлена корреляционная связь между антагонистическими и адгезивными свойствами у изолированных от здоровых кошек бифидо- и лактобактерий. Для накопления молочнокислой микрофлоры и повышения выхода бактериальной массы разработана твердая питательная среда «ПСЛ» для культивирования лактобактерий.
Разработан метод профилактики возникновения послеоперационных гнойно-воспалительных осложнений у кошек с помощью перорального использования пробиотико-сорбционного препарата «Сорбелакт».
Научная новизна подтверждена патентами на изобретение (№ 94608. Способ
определения количественной антагонистической активности пробиотиков) и по
лезную модель (№28153. Штамм бактерии Lactobacillus plantarum «Victoria» 22
для изготовления пробиотического препарата; №35832. Твердая питательная сре
да «ПСЛ» для культивирования лактобактерий; №38395. Препарат комплексный
пробиотико-сорбционный для коррекции дисбиотических нарушений у мелких
животных «Сорбелакт»; №38948. Препарат комплексный пробиотико-
сорбционный для лечения гнойных ран у кошек «Дилаксил»; №40681. Способ катетеризации вен у мелких животных; №54994. Изолят бактерии Lactobacillus rhamnosus 26 для изготовления пробиотического препарата; №56051. Изолят бактерии Lactobacillus acidophilus 24 для изготовления пробиотического препарата; №90577. Способ интракорпоральной пробиотико-сорбционной детоксикации кошек, больных абдоминальным сепсисом).
Теоретическая и практическая значимость работы. Предложены новые критерии оценки тяжести хирургических инфекций у кошек. Установленные нарушения в микробиоценозах кишечного тракта при хирургических инфекциях дают основание рекомендовать применение пробиотиков в комплексном лечении животных с гнойными ранами, абсцессами и сепсисом, а также профилактики возникновения послеоперационных гнойно-воспалительных осложнений.
Предложен и экспериментально обоснован количественный метод оценки антагонистической активности молочнокислых микроорганизмов.
Экспериментально и теоретически обосновано применение препаратов «Ди-лаксил» и «Сорбелакт» для коррекции микробиоценозов при хирургических инфекциях различной степени тяжести у кошек.
По результатам проведенных исследований разработаны и предложены для практического использования:
нормативно-техническая документация на препарат комплексный пробио-тико-сорбционный для лечения гнойных ран у кошек «Дилаксил» (технические условия ТУ У 24.4-00493669–003:2008-18.12.2008, которые утверждены Государственным комитетом ветеринарной медицины Украины; патент Украины, №38948; лабораторный регламент, инструкция по изготовлению и контролю препарата по показателям качества и листок-вкладыш по применению препарата, утвержденные ректором Луганского НАУ).
нормативно-техническая документация на препарат комплексный пробио-тико-сорбционный для коррекции дисбиотических нарушений у мелких животных «Сорбелакт» (технические условия ТУ У 24.4 – 00493669-004:2008-18.12.2008, которые утверждены Государственным комитетом ветеринарной медицины Украины; патент Украины, №38395; лабораторный регламент, инструкция по изготовлению и контролю препарата по показателям качества и листок-вкладыш по применению препарата, утвержденные ректором Луганского НАУ).
- нормативно-техническая документация на среду питательную твердую
«ПСЛ» для культивирования лактобактерий (технические условия ТУ У 24.4–
00493669-007:2013-18.12.2013, которые утверждены Государственным комитетом
ветеринарной медицины Украины; патент Украины, №35832; лабораторный рег
ламент, инструкция по изготовлению и контролю питательной среды по показате
лям качества и листок-вкладыш по применению среды, утвержденные ректором
Луганского НАУ).
- методические рекомендации по диагностике дисбактериозов у кошек, ут
вержденные Научно-методическим советом Государственного комитета ветери-
8
нарной медицины Украины;
методические рекомендации по отбору проб биологического материала от собак и кошек для диагностических исследований, утвержденных Научно-методическим советом Государственной ветеринарной и фитосанитарной службы Украины;
учебное пособие: хирургические болезни кошек;
учебное пособие: паразитоценозы животных;
способ катетеризации вен у мелких животных (патент Украины, №40681);
способ определения количественной антагонистической активности про-биотиков (патент Украины, №94608);
штамм бактерии Lactobacillus plantarum «Victoria» 22 для изготовления пробиотического препарата (патент Украины, №28153), задепонирован в музее культур микроорганизмов кафедры микробиологии и вирусологии ЛНАУ;
изолят бактерии Lactobacillus rhamnosus 26 для изготовления пробиотиче-ского препарата (патент Украины, №54994), задепонирован в музее культур микроорганизмов кафедры микробиологии и вирусологии ЛНАУ;
изолят бактерии Lactobacillus acidophilus 24 для изготовления пробиотиче-ского препарата (патент Украины, №56051), задепонирован в музее культур микроорганизмов кафедры микробиологии и вирусологии ЛНАУ;
способ интракорпоральной пробиотико-сорбционной детоксикации кошек, больных абдоминальным сепсисом (патент Украины, №90577).
Результаты исследований используются в учебном процессе при подготовке специалистов на факультете ветеринарной медицины Луганского НАУ.
Методология и методы исследования. Методы исследования –
клинические (анамнез, осмотр, термометрия, перкуссия, пальпация,
аускультация), цитологические (мазки-отпечатки), микробиологические
(бактериологические, серологические, микологические), морфологические
(количество эритроцитов, лейкоцитов, лейкограмма крови, СОЭ, ЛИИ, НЭК), биохимические (гемоглобин, общий белок и его фракции, мочевина, креатинин, АсАТ, АлАТ, -амилаза, билирубин, СОД, КТ, ЦП, ГЛП, ГЛР, ОАОА, ДК, МДА, МСМ), иммунологические (Т-лимфоциты, Т-хелперы, Т-супрессоры, ИРИ, В-лимфоциты, ЦИК, Фп, Фч, IL-1, IL-6, IL-8, TNF) и статистический анализ.
Основные положения, выносимые на защиту:
распространение хирургических инфекций у кошек по данным клиник ветеринарной медицины г. Луганска;
доступные параметры гомеостаза у клинически здоровых кошек;
патогенетические звенья течения асептических процессов у кошек на модели операционной раны при проведении плановой овариогистерэктомии;
результаты изучения патогенетических механизмов течения гнойных ран, абсцессов и сепсиса у кошек;
совершенстование методов диагностики различных форм хирургических инфекций у кошек;
эффективность применения пробиотико-сорбционных препаратов «Дилак-сил» и «Сорбелакт» для коррекции микробиоценозов у кошек при борьбе с различными формами хирургической инфекции.
Степень достоверности. При проведении расчетов использовали критерии Шапиро-Уилкса, Стьюдента, Крускала-Уоллиса, %, корреляционный и регрессионный анализы. Разницу между опытными группами считали достоверной при р < 0,05; р < 0,01; р < 0,001. Все расчеты проводили на компьютере с помощью статистической программы STATISTICA 7.0 (StatSoft, USA).
Апробация результатов исследования. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на заседаниях и отчетных сессиях ученого совета и научно-технического общества факультета ветеринарной медицины ЛНАУ (г. Луганск, 2006-2013 гг.); международных научных и научно-практических конференциях: «Молодые ученые в решении проблем аграрной науки и практики» (г. Львов, 2007-2009 гг.); «Региональные проблемы экологии ветеринарной медицины» (г. Житомир, 2007 г.); «Современные проблемы ветеринарной медицины в вопросах эпизоотологии, биотехнологии и иммунологии» (г. Полтава, 2008 г.); «Современные достижения и перспективы ветеринарной медицины» (г. Харьков, 2008, 2010 гг.); по содержанию, кормлению и лечению диких животных (г. Киев, 2008 г.); «Актуальные вопросы биологии и медицины» (г. Луганск, 2008 г.); «Научное и кадровое обеспечение ветеринарного благополучия животноводства» (г. Одесса, 2008 г.); по проблемам мелких животных (г. Чернигов, 2008 г.; г. Черновцы, 2010 г.); «Проблемы неинфекционной патологии животных» (г. Белая Церковь, 2008, 2010 гг.); «Пути научного обеспечения национального проекта по животноводству» (Россия, пос. Персиановский, 2008 г.); «Аграрный форум - 2008» (г. Сумы, 2008 г.); «Современные проблемы биотехнологии, стандартизации и обеспечение контроля качества ветеринарных препаратов, кормов и кормовых добавок» (г. Киев, 2008 г.); «Инновационность развития современного аграрного производства» (г. Львов, 2008, 2009 гг.); «Теоретические и практические аспекты ветеринарной медицины» (г. Харьков, 2008 г.); «Современные проблемы общей патологии в ве-
теринарной медицине» (г. Сумы, 2009 г.); «Внедрение новых технологий в профилактику и лечение хирургической патологии у животных» (Россия, г. Санкт Петербург, 2009 г.); «Диагностика, лечение и профилактика болезней животных: проблемы, достижения, перспективы» (г. Харьков, 2010 г.); «Dynamika naukowych badan – 2010» (Polska, Przemysl, 2010 r.); «Проблемы образования, науки и внедрения в ветеринарной медицине Украины и пути их решения на современном этапе» (г. Киев, 2010 г.); «Актуальные проблемы современной биологии, животноводства и ветеринарной медицины» (г. Львов, 2010 г.); «Современные экологические аспекты ветеринарной медицины» (г. Житомир, 2012 г.); Международном конгрессе по ветеринарной медицине, посвященном 85-летию со дня основания ННЦ «ИЭКВМ» (г. Харьков, 2008 г.); 3 научно-практической конференции Международной ассоциации паразитоценологов (Беларусь, г. Витебск, 2008 г.); І Всеукраинской научной конференции студентов, магистрантов, аспирантов и докторантов «Актуальные проблемы и научные свершения молодежи в начале третьего тысячелетия» (г. Луганск, 2008 г.); международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения А.Ф. Бурденюка «Современные проблемы и перспективы развития ветеринарной хирургии» (г. Белая Церковь, 2010 г.); конференции научно-педагогических работников, научных сотрудников и аспирантов НУБиП Украины (г. Киев, 2010 г.); научно-практической конференции, посвященной 20-летию факультета ветеринарной медицины ПГАА «Актуальные проблемы ветеринарной медицины в Украине» (г. Полтава, 2012 г.); научно-практической конференции «Биомедицина и биомоделирование» (МО, пос. Светлые горы, 2016 г.).
Публикации. Основные положения диссертационной работы изложены в 73 научных работах, из которых 17 в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 33 в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК Украины, 7 в региональных изданиях и материалах конференций, 2 научно-практических рекомендациях, 1 патенте на изобретение, 8 патентах на полезную модель, 3 технических условиях и 2 учебных пособиях.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 440 страницах, состоит из введения, 4-х разделов собственных исследований, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений. Работа содержит 44 рисунка, 90 таблиц и 45 приложений. Список использованной литературы включает 610 источников, в том числе – 256 зарубежных авторов.
Кишечная транслокация микроорганизмов и ее назначение
Ранее считалось, что возбудители хирургической инфекции попадают в рану из окружающей среды [12-14, 86]. Между тем в природе широко распространено явление «кишечной транслокации» бактерий из желудочно-кишечного тракта, которое является причиной возникновения значительного количества гнойно-воспалительных процессов. В последние годы отмечен стремительный рост количества публикаций, преимущественно ученых гуманной медицины [47, 87, 88], о том, что микрофлора кишечного тракта может стать источником аутоинфекции (эндогенная инфекция) и способна, в результате выхода микроорганизмов за пределы естественного биотопа, вызывать или осложнять гнойно-воспалительные процессы различной локализации.
Общеизвестно, что в возникновении хирургической инфекции первоочередное место занимает микрофлора. Однако, микрофлора присоединяется к процессу не в начале заболевания, а после возникновения значительных морфологических изменений. С другой стороны, попадание в рану микроорганизмов автоматически не означает развитие раневой инфекции. Так, уже через два часа после проведения асептической операции из стенок раны изолировали микрофлору. Учитывая, что эти бактерии не вызывали гнойно-воспалительных осложнений, их биологические свойства не изучались [89].
Особое беспокойство у медицинского сообщества вызывают гнойно воспалительные заболевания, при которых этиологическими агентами выступают условно патогенные микроорганизмы, многие из которых являются представителями нормальной микрофлоры [90-94]. Первые сведения о неспецифической бактериемии – «кишечной транслокации микроорганизмов», появились в конце XIX века [95]. В 1973 году Д. Г. Затула и С. Г. Резник [96] экспериментально обосновали, что при введении per os Bacillus subtilis, она проникает в кровь и органы животных. В 1979 году R. D. Berg, A. W. Garlington [97] обнаружили кишечную транслокацию аутофлоры в мезентериальные лимфатические узлы и органы на гнотобиотичний модели крыс. В 1985 году R. D. Berg [98] был опубликован литературный обзор, посвященный кишечной бактериальной транслокации. В. И. Никитенко [89] обнаружил транслокацию аутобактерий из желудочно-кишечного тракта в очаг раневой поверхности. В дальнейшем кишечная транслокация микроорганизмов была обнаружена при стрессе, травматических повреждениях, ожогах, гепатитах, остром панкреатите, эндометритах, различных иммунодепрессивных состояниях [99-106].
Микробиологические исследования М. И. Долгушина [107] подтверждают, что ранним источником бактериемии при травме является кишечная микрофлора. Так, после повреждения кожи любой площади уже через несколько минут внутренняя среда организма мышей переставала быть стерильной. Н. И. Савицкая [108] указывает, что микрофлора кишечного тракта вызывает аутоинфецирование и способна вызывать или поддерживать воспалительные процессы различной локализации. E. Liverani, N. Silveri, G. Gasbarrini et al. [109] говорят о том, что, чем тяжелее травма, тем выше проницаемость кишечной стенки.
Е. В. Буданова [37], утверждает, что развитие гнойно-воспалительного процесса определяется состоянием кишечной микрофлоры. Исследования, проведенные И. А. Поликарповым [110], показали, что одни и те же виды условно патогенных бактерий, изолированные от здоровых людей и пациентов с признаками кишечного дисбактериоза, могут существенно отличаться по биологическим свойствам, что отражается на их роли в течении патологического процесса.
Интересным, с нашей точки зрения, является сообщение Л. Д. Депутатовой [111], которая отмечает, что желудочно-кишечный тракт является входными воротами для хирургической инфекции. Так, при анализе качественного и количественного состава кишечной микрофлоры при гнойно-воспалительном процессе установлены значительные сдвиги его биоценоза: отсутствие B. вifidum, снижение количества апатогенной кишечной палочки и бурный рост эшерихий с низкими ферментативными свойствами. В. М. Клименко, А. С. Тугушева, С. Д. Шаповал и др. [38] указывают, что при неблагоприятном течении раневого процесса всегда в кишечнике регестрируют дисбактериоз. Так, в посеве из прямой кишки превалируют микроорганизмы, которые в норме не выделяются (протей, клебсиелла, псевдомонада, кишечная палочка с измененными биохимическими и ферментативными свойствами). Кроме того, в посеве из раневого экссудата этих больных были выделены идентичные бактерии. Г. И. Сидоренко, В. Д. Фундюр, В. Ф. Кулачек [112] отмечали быструю транслокацию патогенных и условно патогенных микроорганизмов в лимфатические узлы брыжейки, кровь воротной и периферических вен, печень и селезенку при экспериментальном перитоните у собак.
Транслокация является результатом взаимодействия физических, иммунологических и микробиологических функций кишечника [113]. Ее возникновению способствуют различные факторы: нарушение «экологического равновесия» организма, приводящая к усилению размножения минорной группы микроорганизмов в кишечнике [39, 112, 114-117], функциональная недостаточность печени, которая приводит к попаданию микроорганизмов в общий кровоток [118], нарушение иммунной реактивности больного [113, 114], повышение проницаемости слизистого барьера [39, 101, 119, 120], а также в результате деструкции эпителия [121] кишечника.
Так, J. Fortn Abete, P. Martn-Dvila [101] указывают, что эндогенная микрофлора становится способной к кишечной транслокации при нарушении гликопротеидного слоя пищеварительного эпителиального барьера, которое может возникать при различных факторах (послеоперационный период, травмы, ишемия, иммуносупрессивные состояния). Повышенная проницаемость кишечной стенки ведет к транслокации микроорганизмов и продуктов их жизнедеятельности (эндотоксины, пептидогликан) в кишечнике. Это запускает местную и системную иммунно-воспалительную реакцию, которая может стать причиной возникновения полиорганной недостаточности [122]. В. В. Теплый [39] утверждает, что нарушения барьерной функции слизистой оболочки приводит к росту эндотоксемии и транслокации микрофлоры из кишечника. Возникновению последней способствуют активизация микрофлоры, повышение проницаемости слизистой оболочки, нарушение иммунной реактивности. Однако существует точка зрения, что транслокация микроорганизмов, прежде всего, зависит от наличия способных к ней микроорганизмов, а не от повреждения кишечной стенки [123].
Вышеупомянутые механизмы могут действовать одновременно, что приведет к летальному сепсису. При физически неповрежденном эпителии кишечника микроорганизмы внутриклеточным путем достигают лимфатической системы и по ней перемещаются в мезентериальные лимфатические узлы. При наличии физических повреждений эпителия транслокация микроорганизмов происходит между клетками непосредственно в кровоток [114].
Следует отметить, что не все микроорганизмы способны к транслокации. Так, чаще всего из аутофлоры кишечного тракта транслоцируется кишечная палочка, протей, энтеробактерии, значительно реже грамположительные аэробы [124, 125]. В то же время уровень кишечной транслокации облигатных анаэробов очень низкий и может возникать только при крайне тяжелых гнойно-воспалительных состояниях в макроорганизме [126-128].
Очень важным аспектом этого вопроса является, на наш взгляд, зависимость уровня транслокации бактерий от уровня их количественной популяции в кишечном тракте. Так, нами найдены сообщения [129, 130] о том, что транслокация бактерий из желудочно-кишечного тракта в мезентериальные лимфатические узлы у животных возможна только тогда, когда их популяция равна, как минимум, 108-109 м.к. / г фекалий. В. В. Смирнов [131] установил, что минимальная доза микробных клеток, которую необходимо ввести животному для развития бактериемии, должна составлять, как минимум, 5 106 м.к./кг. массы.
Интересным аспектом изучения этого феномена является исследование путей транслокации. Имеются сообщения [89, 131-133], что первичная локализация осуществляется в мезентериальные лимфатические узлы, а выход бактерий из лимфатического комплекса регулируется макроорганизмом. При возникновении воспалительной реакции, травмы, раны или иного патологического процесса меняется характер транслокации, она переходит во вторую фазу – из лимфатической системы бактерии снова попадают в кровь и лимфу и достигают очага повреждения, где начинают свою жизнедеятельность в некротизированных тканях.
Микробиоценозы кошек при гнойно-воспалительных процессах
Нами, прежде всего, были проведены микробиологические исследования патологического материала, отобранного от кошек при гнойных ранах, абсцессах и сепсисе, результаты которых приведены на рисунке 3.8.
Всего нами от 103 кошек с различными формами хирургической инфекции, из отобранного для микробиологических исследований гнойного экссудата были изолированы 353 культуры условно патогенных микроорганизмов 15 видов, относящихся к 9 родам. При этом, чаще всего мы изолировали S. aureus 76 (21,5 %), E. coli 55 (15,6 %), P. aeruginosa 45 (12,7 %), а также S. pyogenes 30 (8,6 %) от общего количества изолированных культур.
Для большей наглядности материала, а также для определения соотношения грамположительной и грамотрицательной микрофлоры при различных нозологических формах хирургической инфекции мы приводим анализ видового состава возбудителей гнойно-воспалительных процессов у кошек отдельно.
Результаты микробиологических исследований 64 случайных гнойных ран у кошек представлены в таблице 3.27.
Данные таблицы 3.27 показывают, что микробный пейзаж случайных гнойных ран у кошек весьма разнообразен. Так, из 64 проб гнойного экссудата нами было выделено 217 культур условно патогенных микроорганизмов 14 видов. Чаще всего мы изолировали S. aureus 52 (24,0 %), E. coli 32 (14,7 %), P. aeruginosa 26 (11,9 %); реже – S. uberis и S. pyogenes 20 (9,2 %) и 19 (8,8 %) случаев соответственно. Из данных этой таблицы также следует, что в гнойных ранах грамположительная микрофлора (56,9 %) значительно превалирует над грамотрицательной микрофлорой (40,3 %), что составляет 16,6 %.
Результаты проведенных микробиологических исследований гнойного экссудата, отобранного из 22 абсцессов у кошек, приведены в таблице 3.28.
Данные, приведенные в таблице 3.28, свидетельствуют, что микроорганизмы, изолированные из гнойного экссудата при абсцессах, существенно не отличаются от патогенов, которые были выделены при случайных гнойных ранах. Так, при проведении микробиологических исследований 22 проб гнойного экссудата нами были изолированы 67 штаммов условно патогенных микроорганизмов 14 видов, относящихся к 9 родам. Следует также отметить, что чаще всего из абсцессов у кошек мы изолировали S. aureus 12 (17,9 %), E. coli 11 (16,4 %), P. aeruginosa 9 (13,4 %), а также S. intermedius и S. pyogenes по 5 культур (7,5 %) от общего количества изолированных штаммов микроорганизмов. При анализе соотношения грамположительной (47,9 %) и грамотрицательной (50,8 %) микрофлоры установлено, что у кошек при абсцессах группа энтеробактерий и псевдомонад незначительно (на 2,9 %) превалирует над кокковыми микроорганизмами.
У кошек при сепсисе мы отбирали гнойный экссудат из первичного очага гнойно-воспалительного процесса и периферическую кровь, а после гибели животных – патологический материал, отобранный из внутренних органов.
Результаты микробиологических исследований при сепсисе приведены в таблице 3.29.
Данные, приведенные в таблице 3.29., свидетельствуют, что из очага гнойно-воспалительного процесса 17 кошек нами были изолированы 69 культур условно патогенных микроорганизмов 15 видов. Так, чаще всего мы выделяли S. aureus и E. coli по 12 (17,4 %), P. aeruginosa 10 (14,5 %), а также S. pyogenes и P. vulgaris по 6 культур (8,7 %) от общего количества изолированных штаммов микроорганизмов.
Интересными, на наш взгляд, являются данные, о изоляции микроорганизмов из внутренних органов при сепсисе у кошек. Так, первое место занимала E. coli 40 (35,7 %), далее S. aureus 26 (23,3 %) и P. aeruginosa 20 (17,8 %) культур от общего количества изолированных штаммов микроорганизмов.
Следует также отметить, что в гнойном экссудате, отобранном из очага гнойно-воспалительного процесса, нами выделено на 16,1 % больше грамотрицательной микрофлоры, чем грамположительной.
Результаты серологической типизации изолированных культур E. coli от кошек при гнойно-воспалительных процессах представлены в таблице 3.30.
Из данных этой таблицы видно, что наиболее широкий серологический спектр изолированных культур E. coli нами отмечен при случайных гнойных ранах у кошек, а именно он представлен 10 серологическими группами. Следует отметить, что чаще всего при этом мы изолировали E. coli серогрупп О8 – 12 (37,5 %), О18 – 5 (15,6 %), О111 – 4 (12,5 %), а также О26 – 3 (9,4 %) от общего количества выделенных культур кишечных палочек. При абсцессах нами были изолированы лишь четыре серогруппы E. coli: О8 – 5 (45,4 %), О111 – 3 (27,3 %), О26 – 2 (18,2 %) и О9 – 1 (9,1 % ) случай от общего количества бактерий. У животных при сепсисе мы изолировали идентичные серогруппы кишечных палочек, а именно О8, О26 и О111.
Кроме этого необходимо отметить, что при различных формах хирургической инфекции нами были изоловани культуры E. coli, которые владели гемолитической активностью. Так, при гнойных ранах было изолировано 6 (18,7 %), при абсцессах – 3 (27,3 %), а при сепсисе – 55 (91,7 %) гемолизин продуцирующих культур кишечных палочек от общего количества выделенных изолятов E. coli.
Патогенные свойства изучены нами у 489 культур условно патогенных микроорганизмов, изолированных при различных формах хирургической инфекции у кошек. Полученные результаты приведены в таблице 3.31.
Из приведенных данных видно, что по патогенным свойствам культуры микроорганизмов, выделенные при различных формах хирургической инфекции, существенно отличаются. Так, наибольшее количество микроорганизмов – 171 (83,4 %) культуру, которые обусловливали гибель белых мышей, нами выделено при сепсисе. Напротив, изоляты из гнойного экссудата более доброкачественных форм хирургической инфекции – гнойных ран и абсцессов, были патогенными только для 36,4 % и 40,3 % мышей соответственно.
Необходимо отметить, что при гнойных ранах чаще патогенные свойства регистрировали у культур S. aureus – 21 (26,6 %), E. coli – 16 (20,2 %) и S. intermedius – 9 (11,4 %) от общего количества изолированных патогенных микроорганизмов. При абсцессах чаще патогенными свойствами обладали изоляты S. aureus – 7 (25,9 %), E. coli – 5 (18,6 %), S. intermedius, S. pyogenes, S. uberis и P. aeruginosa по 3 (11,1 %) культуры от общего количества изолированных патогенных микроорганизмов. При сепсисе наибольшее количество патогенных микроорганизмов, изолированных из первичного очага мы отмечали у культур S. aureus – 12 (25,0 %), E. coli – 10 (20,7 %), P. aeruginosa – 8 (16,7 %) и P. vulgaris – 5 (10,4 %) от общего количества патогенной микрофлоры; выделенных из проб периферической крови – у изолятов E. coli – 126 (40,0 %), S. aureus – 6 (30,0 %) и P. aeruginosa – 3 (15,0 %) от общего количества изолированных патогенных бактерий; выделенных после гибели кошек из внутренних органов – у культур E. coli – 37 (35,9 %), S. aureus – 26 (25,3 %), а также P. aeruginosa – 19 (18,4 %) штаммов от общего количества патогенных микроорганизмов. Нами также отмечен важный признак, который заключается в том, что от белых мышей которые выжили, не удалось выделить исходных культур микроорганизмов, тогда как от погибших животных возбудитель изолировали всегда.
Данные о структуре микробных ассоциаций, изолированных из очагов деструкции от кошек при хирургических инфекциях, приведены в таблице 3.32.
Проведение доклинических испытаний пробиотико сорбционных препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт»
При установлении основных технологических характеристик исследованые серии препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт» оказались стандартными и соответствовали техническим условиям. В частности, препараты представляли собой рассыпчатую сухую массу кремового цвета без механических примесей. На всех пакетах с пробиотико-сорбционными препаратами «Дилаксил» и «Сорбелакт» была этикетка и они были не повреждены.
При исследовании пробиотико-сорбционных препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт» не обнаружено наличия механических примесей, плесени, хлопьев, нарушений герметичности пакетов. По биохимическим показателям все серии препаратов были стандартными. Исследуемые препараты «Дилаксил» и «Сорбелакт» сворачивали молоко в течение 72 часов при температуре 38 С с образованием характерного сплошного сгустка без пузырьков газа. При определении безвредности препаратов обнаружено, что все 10 белых мышей остались живы.
Таким образом, результаты исследований показали, что препараты «Дилаксил» и «Сорбелакт» в течение 15 месяцев по внешнему виду, биохимическими свойствами, безвредностью, отсутствием посторонних примесей представляют собой стабильные композиции и не меняют своих биологических, терапевтических и превентивных свойств.
Для определения микробной контаминации делали посевы препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт» на различные питательные среды. Наличие роста лактобактерий в средах МРС, ПСЛ и отсутствие роста микроорганизмов в МПБ, МПБ с добавлением глюкозы, МПА, кровяном агаре средах Китта-Тароци, Эндо, Сусло-агаре свидетельствует об отсутствии бактериальной и грибковой контаминации.
Для оценки активности любого сорбционного препарата с иммобилизованным на него лекарственным веществом (ЛВ) необходимо учитывать скорость десорбции. Результаты определения десорбции лактобактерий из полученных пробиотико-сорбционных препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт» нашли свое отражение на рисунке 3.37. Данные, приведенные на рисунке, свидетельствуют, что активная десорбция лактобактерий из препарата происходит через три часа наблюдения. Так, через час из препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт» десорбируется только 8,84 log (14,1 %) и 8,75 log (11,4 %) иммобилизованных КОЕ/см3, а после трех часов наблюдения этот показатель достигал 9,19 log (31,0 %) и 9,29 log (39,4 %) соответственно, от общего количества иммобилизованных на них культур лактобактерий.
Необходимо отметить, что при дальнейшем исследовании мы регистрировали замедление десорбции иммобилизованных на аэросиле ЛВ. Так, из препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт» спустя 8 часов наблюдения десорбируется 9,20 log (32,0 %) и 9,34 log (44,0 %), а спустя 12 часов - 9,24 log (35,4 %) и 9,41 log (52,0 %) КОЕ/см3 соответственно от общего количества иммобилизованных лактобактерий.
Таким образом, замедленная скорость десорбции в первые три часа контакта с физраствором свидетельствует, что полученные пробиотико-сорбционные препараты «Дилаксил» и «Сорбелакт» обладают пролонгированным действием. Это действие, на наш взгляд, позволит сократить кратность обработок при местном применении, а также повысить эффективность транспорта иммобилизованных ЛВ, за счет уменьшения потери лактобактерий во время их пути в организме при назначении per os.
В дальнейшем нами были проведены исследования по определению острой токсичности полученных пробиотико-сорбционных препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт». Критерием острой токсичности любого препарата принято считать гибель подопытных животных в течение 14 дней после однократного введения испытуемого препарата в организм. В нашем случае аппетит у лабораторных животных был сохранен, не было отмечено изменений поведенческих реакций, клинических признаков отравления. У животных волосяной покров был блестящий, гладкий, не был взъерошенный. Все они остались живы.
Кроме этого, нами были определены пирогенные свойства полученных пробиотико-сорбционных препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт».
Проведенными исследованиями установлено, что препараты являются апирогенными, потому что после введения их растворов ни у одного из лабораторных животных ни при одном измерении температура тела не повышалась более чем на 0,6 С.
При исследовании аллергенных и раздражающих свойств установлено, что пробиотико-сорбционные препараты «Дилаксил» и «Сорбелакт» не оказывали раздражающего действия при кожных аппликациях и конъюнктивальных пробах на кроликах и не обуславливали возникновение аллергических реакций.
На следующем этапе исследований нами были проведены доклинические испытания препарата «Сорбелакт» на клинически здоровых кошках. Изменения веса тела подопытных животных под влиянием препарата приведены в таблице 3.61. Результаты исследований, приведенные в таблице, свидетельствуют о том, что скармливание препарата «Сорбелакт» в течение 30 дней приводит к достоверному увеличению в 1,28 раза (р 0,05) массы тела у опытных кошек. Необходимо также отметить, что у опытных животных значительно улучшились качество волосяного покрова, их физическая активность и эмоциональные реакции.
Из данных таблицы 3.62. следует, что препарат «Сорбелакт» существенно не влияет на морфологические показатели опытных животных. Так, у кошек под действием препарата наблюдали далекую от достоверности тенденцию к повышению уровня гемоглобина, СГЭ, количества эритроцитов, а также снижение палочкоядерных нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов. Необходимо отметить, что указанная выше тенденция изменений показателей крови свидетельствует о доброкачественном влиянии препарата «Сорбелакт» на организм животных.
С целью более углубленного изучения влияния испытуемого нами пробиотико-сорбционного препарата на организм опытных животных были проведены исследования с применением дополнительных лабораторных тестов, в том числе были определены биохимические показатели крови. Влияние препарата «Сорбелакт» на биохимические показатели крови клинически здоровых кошек представлены в таблице 3.63. Как свидетельствуют данные таблицы 3.63, под влиянием длительного скармливания кошкам препарата «Сорбелакт», уровень в их крови биохимических показателей не меняется в течении опыта. Это свидетельствует о том, что испытуемый препарат является безопасным при применении и негативно не влияет на биохимические процессы в организме животных.
Таким образом, по результатам проведенных исследований установлено, что комплексные пробиотико-сорбционные препараты «Дилаксил» и «Сорбелакт» являются стабильными и пригодными для использования в ветеринарной практике.
Пробиотико-сорбционные препараты «Сорбелакт» и «Дилаксил» прошли доклинические испытания и разрешены к проведению клинических исследований в государственных и частных клиниках ветеринарной медицины Луганской области (согласно приказу Начальника управления ветеринарной медицины в Луганской области № 16-5/1599 от 24.12.2008 года).
Динамика гематологических показателей
Морфологические показатели крови на фоне лечения кошек, больных сепсисом, представлены в таблице 3.82.
Из приведенных данных видно, что у кошек при сепсисе наблюдали возникновение олигохромемии, эритроцитопении, лейкоцитоза и увеличение показателя СОЭ. При проведении функционального анализа гемограммы установлено, что у кошек, больных сепсисом, возникает достоверное увеличение маркерных показателей эндогенной интоксикации – НЭК и ЛИИ.
При общепринятой терапии кошек по схеме В1 на 7 сутки наблюдения констатировали дальнейшие негативные изменения морфологических показателей в периферической крови. Необходимо отметить, что наиболее позитивные изменения морфологического состава крови были зарегистрированы в группе кошек, которых лечили по схеме В3. Так, уже на 7 день лечения у кошек этой группы наблюдали достоверное (р 0,001) увеличение содержания гемоглобина в 2,1 раза - с 61,37±3,19 до 129,00±2,92 г/л, эритроцитов в 2,6 раза - с 2,07±0,22 до 5,30±0,34 Т/л, а также достоверное уменьшение содержания лейкоцитов в 3,3 раза - с 46,16±4,21 до 14,05±1,14 г/л (р 0,001), показателей СОЭ в 6,1 раза - с 52,87±3,66 до 8,62±1,47 мм/ч (р 0,001), НЭК в 13,2 раза - с 8,70±0,60 до 0,66±0,10 у. ед. (р 0,001) и ЛИИ в 2,5 раза - с 6,35±1,90 до 2,50±1,08 у. ед. (р 0,01).
Эффективность использования пробиотико-сорбционных препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт» в комплексном лечении кошек, больных сепсисом, которых лечили по схеме В3, наглядно подтверждается при сравнении уровня морфологических показателей периферической крови с аналогичными показателями животных групп В 1 и В2. Так, на 7 сутки наблюдения в группе животных, которых лечили по схеме В3, в периферической крови отмечали высоко достоверное (р 0,001) увеличение содержания гемоглобина и эритроцитов - в 2,9 и 3,5 раза соответственно; достоверное уменьшение содержания лейкоцитов - в 4,6 раза (р 0,001), показателей СОЭ - в 7,6 раза (р 0,001), НЭК - в 23,4 раза (р 0,001) и ЛИИ - в 2,5 раза (р 0,05) при сравнении с показателями у кошек, которых лечили по схеме В1. Стоит отметить, что на 14 сутки наблюдения в группе кошек, которых лечили по схеме В3, регистрировали достоверное (р 0,001) увеличение содержания гемоглобина и эритроцитов в 1,5 и 1,6 раза соответственно, достоверное (р 0,001) уменьшение содержания лейкоцитов , показателей СОЭ и НЭК в 2,9, 4,8 и 7,4 раза соответственно.
Биохимические показатели крови в процессе лечения кошек, больных сепсисом, приведены в таблице 3.83.
Данные, представленные в таблице, свидетельствуют о том, что при общепринятом лечении кошек, больных сепсисом (схема В і), на 7 сутки наблюдения в крови отмечали дальнейшие негативные изменения биохимических показателей. Так, мы наблюдали в пробах периферической крови животных этой группы тенденцию к повышению уровней АсАТ, АлАТ, мочевины, а также общего билирубина за счет непрямой фракции. Следует отметить, что в динамике лечения кошек, больных сепсисом, наиболее позитивные изменения биохимических показателей крови нами отмечены у животных группы В3. Так, уже на 7 сутки наблюдения у кошек при лечении сепсиса по схеме В з в пробах крови отмечали высоко достоверное (р 0,001) снижение показателей АсАТ в 2,4 раза - с 1,67±0,09 до 0,68±0,06 ммоль/(ч л), АлАТ в 1,8 раза - с 1,33±0,05 до 0,74±0,06 ммоль/(ч л), мочевины в 2,2 раза - с 17,20±0,57 до 7,88±0,41 ммоль/л, общего билирубина в 3,0 раза - с 24,26±2,81 до 7,98±1,24 мкмоль/л, что возникало за счет обоих его фракций, а также достоверное (р 0,01) уменьшение показателя креатинина в 1,6 раза - с 0,22±0,02 до 0,143±0,01 ммоль/л.
Необходимо отметить, что эффективность использования пробиотико-сорбционных препаратов в комплексном лечении кошек, больных сепсисом, подтверждается при сравнении уровня биохимических показателей периферической крови с аналогичными показателями животных групп В і и В2. Так, уже на 7 сутки наблюдения в группе животных, которых лечили по схеме Вз, в пробах крови отмечали высоко достоверное (р 0,001) снижение уровня активности АсАТ - в 2,7 раза, АлАТ - в 1,9 раза, мочевины - в 2,5 раза, креатинина - в 1,6 раза, прямого и непрямого билирубина - в 7,9 и 2,9 раза соответственно, что повлияло на показатель общего билирубина, который уменьшился - в 3,9 раза при сравнении с показателями у кошек, которых лечили по схеме Вь Стоит отметить, что на 14 сутки наблюдения в группе животных, которых лечили по схеме Вз, отмечали дальнейшую положительную динамику изменений биохимических показателей крови при сравнении с показателями у кошек, которых лечили по схеме Вь
Динамика показателей клеточного звена иммунитета кошек при сепсисе в процессе лечения представлена в таблице 3.84. Из приведенных данных видно, что на 7 сутки при общепринятом лечении кошек, больных сепсисом (схема В і), в сыворотках крови наблюдали дальнейшие негативные изменения показателей клеточного звена иммунитета. Так, у животных, которых лечили по схеме В і, на 7 сутки наблюдения мы отмечали достоверное (р 0,01) уменьшение Т-общих клеток и субпопуляции Т-хелперов в 1,1 и 2,8 раза соответственно.
Необходимо отметить, что за счет снижения Т-хелперов у животных этой группы возникло достоверное (р 0,05) уменьшение показателя ИРИ в 3,1 раза - с 0,41±0,03 до 0,13±0,05 у. ед. Кроме этого, в период клинической манифестации гнойно-воспалительного процесса на 7 сутки у кошек, которых лечили по схеме Вь снижалась функциональная активность нейтрофилов, что проявлялось в достоверном (р 0,05) уменьшении общего количества фагоцитирующих клеток в 1,3 раза - с 20,71±2,02 до 16,25±2,39 %.
СТОИТ отметить, что наиболее позитивные изменения показателей клеточного звена иммунитета нами отмечены у животных, которых лечили по схеме Вз. Так, уже на 7 сутки терапии в сыворотке крови кошек этой группы наблюдали высокодостоверное увеличение (р 0,001) фагоцитарного показателя в 2,0 раза, Т-общих клеток - в 1,7 раза, Т-хелперов - в 3,0 раза, и, как следствие, рост показателя ИРИ - в 2,8 раза, а также достоверное (р 0,001) уменьшение 0-клеток в 1,2 раза.
Эффективность использования пробиотико-сорбционных препаратов «Дилаксил» и «Сорбелакт» в комплексном лечении кошек, больных сепсисом, подтверждается при сравнении уровня в сыворотке крови показателей клеточного звена иммунитета с аналогичными показателями животных групп В 1 и В2. Так, уже на 7 сутки наблюдения в группе животных, которых лечили по схеме В3, в сыворотках крови отмечали высоко достоверное (р 0,001) увеличение содержания Т-общих лимфоцитов в 2,1 раза, Т-хелперов - в 10,3 раза, показателя Фп - в 2,6 раза; роста (р 0,01) показателя ИРИ в 12,4 раза, а также достоверное (р 0,001) снижение количества 0-клеток в 1,3 раза при сравнении с аналогичными показателями кошек, которых лечили по схеме В1. Необходимо отметить, что на 14 сутки наблюдения в группе животных, которых лечили с использованием пробиотико-сорбционных препаратов, отмечали дальнейшую положительную динамику изменений в клеточном звене иммунитета при сравнении с показателями кошек, которых лечили по общепринятой схеме.
Динамика показателей гуморального звена иммунитета кошек при сепсисе в процессе лечения приведена в таблице 3.85. Данные, представленные в таблице, показывают, что при лечении животных, больных сепсисом по схеме В 1, на 7 сутки наблюдения в сыворотках крови мы отмечали дальнейшие неблагоприятные изменения показателей гуморального звена иммунитета. Это проявлялось в достоверном (р 0,05) снижении В-общих клеток в 1,2 раза; достоверном (р 0,05) росте общих ЦИК в 1,1 раза, которое возникало за счет достоверного (р 0,01) роста наиболее патогенных средне- и мелкомолекулярных фракций в 1,1 и 1,1 раза соответственно. Необходимо отметить, что наиболее положительные изменения показателей гуморального звена иммунитета кошек при сепсисе нами отмечены в процессе их лечения по схеме В3. Так, уже на 242 сутки наблюдения в сыворотке крови кошек этой группы отмечали высоко достоверное (р 0,001) увеличение В-общих клеток в 1,6 раза и крупномолекулярных ЦИК в 1,9 раза.
ЭТО происходило на фоне достоверного (р 0,001) уменьшения общих ЦИК - в 1,8 раза, которое возникало за счет достоверного снижения среднемолекулярных (р 0,05) и мелкомолекулярных (р 0,001) фракций в 1,4 и 3,0 раза соответственно.