Содержание к диссертации
Введение
2.Обзор литературы 17
2.1.Структура и функции иммунной системы 17
2.2.Виды, физиология микроорганизмов и питательные среды для их выращивания 27
2.3.Биологические свойства токсинов, совершенствование методов и средств получения анатоксинов 50
2.4. Характеристика стафилококков и средств специфической профилактики и лечения больных стафилококкозом животных 59
2.5Состояние и перспективы применения пробиотиков 68
2.6.Особенности биологических свойств кишечной палочки, сальмонелл, получения и применения анатоксин-вакцин 70
2.7. Виды и сущность действия адъювантов 74
2.8.Современные проблемы повышения эффективности антибиотиков 78
2.9.Состояние изученности влияния магнитных полей на биофизические свойства микроорганизмов 83
3. Собственные исследования 92
3.1. Материалы и методы исследований 3.2. Разработка и характеристика универсальной синтетической среды для выращивания патогенных микроорганизмов при получении биопрепаратов (аллергенов, анатоксинов и анатоксин-вакцин) 97
3.3. Разработка способа выделения стафилококков, кишечной палочки и сальмонелл 108
3.4. Биофизические свойства сальмонелл, кишечной палочки и стафилококков, подвергнутых электромагнитному воздействию 109
3.5.Результаты изыскания биологической модели к стафилококковому аллергену и способа его изготовления и контроля 114
3.6. Разработка нового способа получения и применения стафилококковой анатоксин-вакцины
3.7.Повышение биоцидной и лечебной эффективности стафилококковой анатоксин вакцины коллоидными ионами серебра 120130
3.8. Способ получения и применения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины 133
3.9. Разработка способа получения и применения ассоциированной анатоксин-вакцины для профилактики и лечения гнойно-септических болезней животных 138
3.10. Биотехнологическое обснование повышения протективной активности колисальмонеллезной анатоксин-вакцины 143
3.11. Научно-практическое обоснование изыскания способа и средств детоксикации, полимеризации и повышения биоцидной эффективности антибиотиков 155
3.12. Повышение эффективности и снижение токсичности антибиотиков с помощью формальдегида и этония 167
3.13. Результаты испытания лечебных свойств модифицированного стрептомицина на зараженных микобактериями туберкулеза морских свинках 177
3.14. Потенцирование бактерицидного и обеспечения вирусоцидного, фунгицидного и лечебного действия антибиотиков с помощью глутарового альдегида и этония 3.15. Эффективность лечения острых желудочно-кишечных болезней поросят колисальмонеллезной этиологии модифицированным линкоспектином с эубиотиками 3.16. Результаты получения и применения мази с глутаровым альдегидом, этонием, диметилсульфоксидом и антибиотиками 3.17. Результаты повышения биоцидного и лечебного действия энрофлоксацина в форме мази. 3.18. Результаты разработки и апробации мази без антибиотиков для лечения коров, больных маститом, рваных и ожоговых ран
3.19. Результаты повышения биоцидных и лечебных свойств антибиотиков, АСД-2Ф «Айсидивит», стафилококковой анатоксин-вакцины коллоидными ионами серебра.
3.19.1. Повышение биоцидного и лечебного действия амоксициллина коллоидными ионами серебра.
3.19.2. Повышение биоцидного и лечебного действия энрофлоксацина коллоидными ионами серебра.
3.19.3. Повышение эффективности левомецитина коллоидными ионами серебра.
3.19.4. Повышение биоцидных и лечебных свойств антисептика-стимулятора Дорогова АСД-2Ф «Айсидивит».
3.19.5. Биоцидные и лечебные свойства стафилококковой анатоксин- вакцины с коллоидными ионами серебра 182184185190196198198203205209212
4.Обсуждение результатов исследований. 217
5. Выводы 239
6. Практические предложения. 242
7. Список литературы 244
8. Приложения 2
Список сокращений
- Характеристика стафилококков и средств специфической профилактики и лечения больных стафилококкозом животных
- Разработка способа выделения стафилококков, кишечной палочки и сальмонелл
- Результаты испытания лечебных свойств модифицированного стрептомицина на зараженных микобактериями туберкулеза морских свинках
- Повышение биоцидных и лечебных свойств антисептика-стимулятора Дорогова АСД-2Ф «Айсидивит».
Характеристика стафилококков и средств специфической профилактики и лечения больных стафилококкозом животных
Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно и является совокупностью его многолетних научных исследований. Автором лично сформулирована проблема, постановка цели, задач исследований и их реализация. Лично автором также подобраны штаммы, оптимизирована технология производства и показана эффективность применения анатоксин-вакцин и модифицированных антибиотиков. Материалы диссертации также проанализированы и обобщены лично автором. Вклад в работу других авторов отражён в публикациях по теме диссертации.
Достоверность результатов исследований подтверждается соответствием теоретических данных с полученными результатами экспериментов и опытно-производственных испытаний. Экспериментальные данные, выводы и рекомендации основаны на общепринятых теоретических закономерностях, не противоречат и с достаточной степенью точности согласуются с общеизвестными данными, апробированы и подтверждены эффективным применением в животноводческих хозяйствах. 1.12. Благодарности. Автор выражает благодарность научному консультанту – директору ВНИТИБП, доктору ветеринарных наук, профессору, академику РАН А.Я. Самуйленко. В выполнении некоторых разделов диссертации принимали участие и оказывали практическую и консультативную помощь доктор медицинских наук В.М. Коломиец и другие коллеги, за что приношу им сердечную благодарность.
Иммунная система функционирует как единое целое, определяя клеточное и гуморальное состояние организма. Органы иммунной системы подразделяются на: центральные: - 1)тимус (Т-система); 2)красный костный мозг, В-система и периферические: – 1)селезенка; 2)лимфатические узлы. Основной рабочий орган иммунной системы лейкоциты, а ее специфических реакций Т- и В- лимфоциты и цитотоксические клетки. В крови циркулирует пять типов лейкоцитов. С позиции иммунологии лейкоциты подразделяются на: а)фагоциты (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы и моноциты); б)иммуноциты – лимфоциты.
С позиции морфологии лейкоциты подразделяются на: 1)полиморфноядерные лейкоциты (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы); 2)мононуклеиды – одноядерные лимфоциты и моноциты, гранулоциты – макрофаги различного рода с продолжительностью жизни от нескольких месяцев до нескольких лет.
Нейтрофилы – это «камикадзе» - мало живут – 3-5 дней, содержат фермент лизоцим. Их 4500 клеток в 1мл. Они обеспечивают киллинг поглощенных микроорганизмов (Змушко Е.И., Белозеров Е.С., 1997; Караулов А.В., 2002; Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 2001; Otten M.A., 2006).
Биосинтез антител начинается в среднем через 3-5 дней после контакта антигена (анатоксина, анатоксин-вакцины) с В-лимфоцитами. В течение этого периода происходит распознавание антигена формирование и превращение части В-лимфоцитов в плазматические клетки, которые начинают синтезировать, образовывать антитела к антигену. Вначале синтезируются иммуноглобулины класса А и Е (Воронин Е.С., Петров А.М., Девришев Д.А., 2002; Otten M.A., 2006; Петров Р.В., 1997; Макаров В.В., 1999; Урбан В.П., 2001; Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2001; Janeway C.A., 2003).
Кровь не относят к лимфоидным тканям. В ней циркулирует 1,5-3,0% всех лимфоцитов, имеющихся в организме, а основная масса находится в лимфоидных тканях (тимус, костный мозг – центральные и периферические – селезенка, лимфоузлы, лимфоидные скопления желудочно-кишечного тракта (Петров Р.В., 1997; Масьянов Ю.Н., 2009; Сидорова Е.В., 2004).
Установлено, что при всех инфекциях и воспалениях снижается содержание Т-лимфоцитов в крови, т.к. они уходят в ткани (Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2001, 2003; Janeway C.A., 2003; Симонова А.В., 2005). Общее количество лимфоидных клеток, т.е. клеток иммунной системы составляет 1012 (в сумме около 1,5 кг), или 1,2-1.5% от общей массы (Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2007).
Нейтрофилы и моноциты выполняют роль фагоцитов, эозинофилы и базофилы организуют очаг воспаления, а Т- и В-лимфоциты- специфические иммунные реакции фагоцитарно-клеточного и гуморального - антительного иммунитета (Федоров Ю.Н., 1996, 2005, 2006; Кильметова И.Р., 2006; Кирдей Е.Г., 2002; Конопля Е.Н., 1997; Семенова И.Б., 2005; Goldstein A., 1995; Smith E.M., 1997).
В последующем формируются клетки иммунной памяти – это Т- и В-лимфоциты, после взаимодействия с антигеном (вакциной).
В целом продукция антител регулируется симпатико-адреналовой системой (лат. ад – над и рен – почка). Генерализованное возбуждение медиальных зон гипоталамуса и гормона роста, образуемый гипофизом ведет к резкому усилению продукции антител.
Основным защитным звеном организма при внедрении в него микроорганизмов является фагоцитоз (Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2007). Поглотившая микроб фагоцитарная клетка после ферментативного расщепления бактерий или комплекса микроорганизм + антитело – это белки на аминокислоты, жиры на жирные кислоты, реализует затем свой бактерицидный эффект в первую очередь кислородным взрывом, в процессе которого образуются активные формы кислорода (АФК), разрушающие остатки мембран и генетические фрагменты микроорганизма (Федоров Ю.Н., 1996, 2006; Калинина О.А.,1993).
В то же время избыток АФК способен обеспечить повреждение не только микроба, но и самого фагоцита, поэтому фагоцитирующие клетки (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты и т.д.) обладают собственной ферментативной системой антиоксидантной защиты (АОЗ).
Первым продуктом кислородного взрыва является высокотоксичный супероксидонин, который под влиянием супероксиддисмутазы (СОД) трансформируется в менее агрессивную перекись водорода (Н2О2).
Однако в присутствии ионов железа и хлора из Н2О2 под действием перексидаз образуются наиболее токсичные АФК – гидроксил-радикал и гипохлорный анион (Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2007; Конопля В.И., 2003; Goldstein A., 1995; Smith E.M., 1997).
Поэтому активность каталазы разлагающей Н2О2 воду и молекулярный кислород, является основным фактором в системе внутриклеточной АОЗ.
Соотношение между способностью развивать кислородный взрыв при встрече с микробом и характером ответа со стороны АОЗ на гиперпродукцию АФК определяет как бактерицидный эффект, так и возможную степень повреждения самого фагоцита в процессе фагоцитоза микробной клетки и в целом депрессию Т– клеточного иммунитета и альвеолярных макрофагов (Heffer J., 1989).
Таким образом, ключевую роль в формировании иммунитета играют альвеолярные макрофаги (АМ) и различные популяции Т- клеток – супрессоров, киллеров и т.д.
В целом исход взаимодействия макрофагов и микробных клеток зависит от баланса антимикробной активности фагоцитирующих клеток и резистентности, устойчивости микроорганизмов к бактерицидному действию макрофагов.
Разработка способа выделения стафилококков, кишечной палочки и сальмонелл
Стафилококковая коагулаза имеет различную специфичность с плазмой человека, крупного рогатого скота, свиней, кроликов из-за антигенного разнообразия коагулаз (до 8 видов) и контролирующих их биосинтез генов. Кроме того золотистые стафилококки способны образовывать целый спектр гемолизинов, в том числе - гемолизин, а также протеин-А, обладающий свойствами специфически связываться с иммуноглобулинами. Кроме того у стафилококков выявлена способность инактивировать комплемент, лизоцим.
Несмотря на признание международным микробиологическим обществом вышеперечисленных свойств у стафилококков, поиск новых их биологических характеристик продолжается, т.к. эволюция знаний привела к представлению о многообразии видов, а изученные тесты следует рассматривать как ценные таксономические маркеры эпизоотических свежевыделенных штаммов стафилококков.
Взаимодействие белка-А с иммуноглобулинами приводит к нарушениям функций систем комплемента и фагоцитов в организме больного. Белок-А обладает сильными антигенными и аллергенными свойствами и индуцирует размножение Т- и В-лимфоцитов. Золотистые стафилококки различаются по чувствительности к фагам, антибиотикам, температуре, дезвеществам.
Стафилококки длительное время сохраняются во внешней среде, коже, слизистых оболочках носа вследствие недостатка секреторных IgА, нарушения адгезивных свойств, вызывают септикопиемию – это форма сепсиса, при которой возбудитель образует гнойные очаги в различных органах и тканях, т.е. сепсис, осложненный гнойными метастазами.
Важную роль в постинфекционном иммунитете играют антитоксины, антимикробные антитела, а также Т-лимфоциты, фагоциты и антитела против ферментов. У стафилококков разнообразна антигенная структура, а перекрестного иммунитета нет (А.И. Лесницкий, 1995).
Видоспецифическим антигеном являются тейхоевые кислоты – для S. аureus – риботейхоевые; для эпидермального – глицеротейхоевые и у сапрофитных выявляют оба вида тейхоевых кислот (А.Е. Вершигора и др., 1986; N.S. Abel, J.H. Chaise, 1997). Изучено, что главными компонентами клеточной стенки стафилококков являются тейхоевая кислота – сложное вещество полисахаридной природы и пептидогликан (мукопептид), обеспечивающий регидность клеточной стенки (С Бабош и др., 2005; T.J. Foster, D. McDevitt, 1994; L.J. Frank et al., 1995).
Тейхоевые кислоты – группа сложных соединений, состоящих из многоатомных спиртов, фосфата, сахаров, аминокислот (Г.В. Выгодчиков, 1963; S. Gatermann, H.G. Meyer, 1995; J. Gustafson, A. Strassle, H. Hachler et al., 1994). Тейхоевые кислоты являются аглютиногенами и проявляют свою активность в реакции преципитации (M.V. Jesudason, W.S. Anandaraj, P. Jegadeesan, 1997; N. Kobayashi, 1998). Тейхоевые кислоты не только защищают стафилококки, но еще и выполняют ведущую роль в патогенезе стафилококковых инфекций (E. Mascini, M. Jansze, 1999).
Тейхоевые кислоты запускают комплементарный каскад по альтернативному пути, облегчают адгезию (прикрепление) микроорганизма к эпителиальным поверхностям тканей, органов (T. Mitsuda et al., 1994; J. Nishi et al., 1995). Факторами патогенности стафилококков являются микрокапсула, компоненты клеточной стенки, токсические субстанции – экзо- и эндотоксины, гемолизины и ряд ферментов в т.ч. коагулаза (С. Бабош и др., 1995; M. Khular, S. Chatterjee, 1995; M. Jett et.al., 1994).
Пептидогликан (мукопептид, муреин) является структурным элементом клеточной стенки стафилококков. На его долю приходится 64% веса клеточной стенки. Он довольно прочно соединен с тейхоевой кислотой и к нему ковалентной связью прикреплен белок А (S. Kasmir et.al., 1990; C. Lawrence et al., 1996).
С пептидогликаном клеточной стенки грамположительных бактерий ковалентно связаны тейхоевые кислоты (от греч. teichos – стенка), молекулы которых представляют собой цепи из 8-50 остатков глицерола и рибитола, соединенных фосфатными мостиками (N.K. Karamonus et al., 1995; K. Kato et al., 1995; Olmsted et al., 1992).
Фермент каталаза защищает бактерии от действия кислородозависимых микробиоцидных механизмов фагоцитоза, а существующая в трех антигенных формах коагулаза вызывает свертывание сыворотки, образует тромбоподобное вещество (U. Fluckiger et al., 1998; S. Daugherty et al., 1993; Collin D. et al., 1995).
Данные о генетическом механизме контроля патогенности стафилококков позволяет судить о роли «глобальных» генетических регуляторов в переключении биосинтеза микробной клетки с факторов вирулентности на факторы персистенции. Патогенность микроорганизмов – это их способность не только инициировать инфекционный процесс, но и поддерживать его в течение длительного времени. Для описания данного явления применяется термин «персистенция», отображающий способность патогенна к длительному переживанию в организме хозяина (W. Ferens et al., 1998).
Глобальная регуляторная система возбудителя S. аureus связана с наличием комплекса генов (accessory gene regulator), контролирующих развитие стафилококковой инфекции, ферментов и токсинов, таких как -, -, - гемолизины, плазмокоагулаза, лейкоцидин (В.В. Смирнова и др., 2003; P.S. Barie, 1998).
Основная биологическая роль белка-А – защита стафилококка от фагоцитоза путем блокирования FC иммуноглобулинов (В.В. Смирнова, 1994; A.S. Bayer et al., 1995).
Стафилококки обладают большим количеством комплексов факторов патогенности в т.ч., фактор адгезии – прикрепления стафилококков к клеткам тканей и содержат разнообразные ферменты, играющие роль «агрессии и защиты» плазмокоагулаза (главный фактор патогенности), гиалуронидаза, фосфотаза и т.д., а также комплекс секретируемых экзотоксинов (С. Бабош и др., 2005; В.Ф. Романенко, 2005; J.M. Balwit et al., 1994).
В своем составе стафилококки содержат мембраноповреждающие токсины, которые ранее подразделялись на гемолизины (лизины), некротоксины, лейкоцидины и летальные токсины, т.е. каждый из этих токсинов разрушал эритроциты, лейкоциты, макрофаги, тромбоциты, клетки тканей (А.В. Чижевский, 1974; Г.Н. Чистович, 1973; Ялфимова Е.Ю., Пронин А.В., 2009; M. Cote, 1999; A.S. Bayer et al., 1995).
В последующем установлено, что разрушение клеток и гибель животных происходит в результате действия одного и того же экзотоксина, хотя у них существует отличие по антигенным свойствам (Дерябин Д.Г., 2002; D. Collin et al., 1994).
Энтеротоксины стафилококков (А, В, С, Д, Е) характеризуются антигенной специфичностью и термолабильностью (M. Cote, 1999; А.В. Чижевский, 1974; J.E. Coia et al., 1992).
Стафилококки – главные виновники кожных и респираторных заболеваний (дерматиты, астма), сепсиса (септицемия – гнилокровие), гнойного очага, из которого поступает возбудитель, выделяя токсины и аллергены (Мусина Л.Т., 1999; Нестерова И.В., 2002; Б.Е. Кноринг, 1996; А.И. Коротяев и др., 1998; Г.Н. Чистович, 1979; Д.Г. Дерябин, 2000).
Постстафилококковый иммунитет обусловлен гуморальными и клеточными факторами, при которых важную роль играют антитоксины, антитела против ферментов и микробов, а также Т-лимфоциты и фагоциты (Т.А. Бектимиров и др., 2001; В.И. Павловский, 1973; O. Chesneau et al., 1993; G.L. French et al., 1990).
Результаты испытания лечебных свойств модифицированного стрептомицина на зараженных микобактериями туберкулеза морских свинках
Штаммы. В исследованиях использованы: 80 штаммов эшерихий, в том числе 21 производственный, 42 музейных и 17 изолятов; 40 штаммов стафилококков, 20 штаммов сальмонелл, 3 штамма стрептококков, селекционированных по способности продуцировать факторы патогенности (токсины), 30 штаммов и изолятов синегнойной палочки, 20 штаммов и изолятов протея. Музейные культуры бактерий получены из Курской областной ветеринарной лаборатории и с кафедры микробиологии и вирусологии Курского государственного медицинского университета.
Питательные среды, наборы и реактивы. Для проведения бактериологического исследования по стандартным методикам использовали мясопептонный агар (МПА), мясопептонный кровяной агар (МПКА) и агар Эндо. В отдельных опытах в качестве селективной среды использовали агар Плоскирева и висмут-сульфат агар, а также RVS-бульон, тетратионатный бульон Мюллера-Кауфмана, ХLD, ХLТ агар, Rambach Аgаг. Для выращивания сальмонелл в больших количествах применяли жидкую среду - мясопептонный бульон с 0,5% глюкозы. Биохимические свойства культур изучали с использованием пластин биохимических энтеробактерий (ПБДЭ), СИБ, АРI ID 32 Е, автоматического баканализатора VIТЕК 2 Сотрас1 производства «BioMerieuх», Франция..
Методы. Для изучения антигенной структуры, определения серогрупповой и вариантной принадлежности выделенных культур сальмонелл использовали стандартные наборы биофабричного производства агглютинирующих комплексных или поливалентных О-сывороток и монорецепторных О и Н- сывороток. Для определения серогрупповой принадлежности эшерихий применяли 0-коли агглютинирующие сыворотки Армавирской биофабрики, для выявления и количественного определения энтеротоксинов – анти-ТЛ- и анти-ТС-сыворотки производства Государственного научного Центра (ГНЦ) прикладной микробиологии, адгезивных антигенов - набор антисывороток к адгезивным антигенам эшерихий К88, К99, 987Р, F41, А20 (коли-адгезин тест) производства НПФ "Диавак". Качественную характеристику токсигенности культур эшерихий проводили по эдематозному тесту Вартаняна Ю.П. (1978). Количественное определение адгезивных антигенов проводили методом двойной радиальной диффузии в агарозе по Ухтерлони (РДП). Количественное определение токсинообразования проводили у штаммов эшерихий в РДП с анти-ТЛ- и анти-ТС-сыворотками и в тесте изолированной петли кишечника поросенка по индексу дилятации, подробно описанному в работе Пирожкова М.К., 2007. Также продукцию термостабильного токсина (ТС-токсина) выявляли на мышах-сосунах при пероральном введении, на мышах массой 14-16 г. при интраплантарном введении и на кроликах при внутрибрюшинном введении по индексу увеличения веса кишечника, отёку лап мышей и некрозу кроликов соответственно (Тугаринов О.А.,1999). Оптимальная концентрация адъюванта определялась по ИД50 при иммунизации лабораторных животных вакцинами с различным содержанием геля гидроокиси алюминия. Острую и хроническую токсичность вариантов ассоциированных вакцин изучали на двух видах животных (мыши и крысы) путём морфологического исследования внутренних органов и кожи на месте инъекции.
Изучение бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков проводили в отношении свежевыделенных стафилококков, сальмонелл, кишечной палочки, протея, синегнойной палочки от павших телят, поросят, птицы; канамицино- и стрептомициноустойчивых микобактерий туберкулёза человеческого и бычьего видов, выделенных от больных туберкулезом животных и человека на кафедре туберкулеза Курского государственного медицинского университета и межрайонных ветеринарных лабораторий.
Определение чувствительности штаммов бактерий к антибиотикам проводили методом диффузии в агар (среда АГВ) при помощи стандартных дисков с антибиотиками. Диски с антибиотиками фабричного изготовления накладывали на поверхность агара с помощью пинцета на одинаковом расстоянии друг от друга и на расстоянии 2 см от края чашки. Чашки выдерживали при комнатной температуре 10-20 минут, чтобы дать впитаться жидкости. Учёт результатов проводили в отражённом свете. Штаммы микроорганизмов, у которых зона задержки роста вокруг диска была 15-25 мм и более, считали чувствительными к действию антимикробного препарата, менее 15 мм – резистентными.
Культивирование стафилококков, сальмонелл, эшерихий, протея, синегнойной палочки, стрептококков осуществляли стационарным методом - в стеклянных бутылях объёмом 0,5, 5,0 и 20 л, модернизированных реакторах объёмом 100л и биореакторе «Торнадо» объёмом 200 л. Концентрацию микроорганизмов оценивали по стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича, морфологию – микроскопией мазков, окрашенных по Граму. Изготовление и контроль посевных материалов микроорганизмов осуществлялись в соответствии с требованиями ГОСТ Р 52249-2009.
Ростовой потенциал и физиологическую активность бактерий оценивали графическим методом по продолжительности фаз приспособления (tлаг) и логарифмического роста (tлог), максимальной удельной скорости роста (max) бактерий и времени одной генерации (gмин) в процессе периодического культивирования и уровню накопления микроорганизмов (Исаева З.А. , 1980).
Лечебную эффективность стафилококковой анатоксин-вакцины проверяли при лечении коров, больных маститами, ожоговых, рваных ран и дерматитов у собак, а также в качестве иммуномодулятора. Безвредность приготовленных вакцин проверяли на 100 белых мышах, 80 морских свинках, 300 поросятах и 102 телятах. Контролем эффективности иммунного ответа на активную иммунизацию служил рост титра специфических антител в сыворотке крови, определяемый реакцией пассивной гемагглютинации (РПГА) с использованием специфических эритроцитарных диагностикумов: стафилококкового, протейного и синегнойного (Кунягина О.В., 1996). Эффективность используемых концентраций и доз препаратов определяли по следующим показателям: суммарная продолжительность лечения, биоцидное действие лекарственных средств на микроорганизмы – 80-100% - высокоактивная доза, 40-80% - активная доза, менее 40% - слабоактивная доза.; разница сроков лечения коров, больных маститами, рваных и ожоговых ран и морских свинок, зараженных микобактериями туберкулеза бычьего вида экспериментальным стрептомицином и поросят, зараженных кишечной палочкой контрольными и экспериментальными лекарственными средствами.
Результаты исследований подвергали статистической обработке с вычислением средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (m) и достоверность разницы (р) между средними величинами по методу Стьюдента-Фишера. Отличие сравниваемых показателей считали достоверными, если уровень вероятности не превышал р 0,05 (Ашмарин И.П., Воробьев А.А., 1962; Лакин Г.Ф.,1990; Венедягин Г.В., 1973).
Повышение биоцидных и лечебных свойств антисептика-стимулятора Дорогова АСД-2Ф «Айсидивит».
Из данных, представленных в таблице 19, следует, что модифицированные формольной детоксикацией и полимеризацией гентамицин, стрептомицин, пенициллин, энроксил, байтрил проявляли повышенную бактерицидную активность на 15-20% по сравнению с коммерческими препаратами, а подвергнутые модификации с помощью 0,1% раствора формалина с 0,1% раствором этония антибиотики обладали более повышенной бактерицидной активностью в отношении 10 тысяч стафилококков, сальмонелл и кишечной палочки в мясопептонном глицериновом бульоне (МПГБ).
С учётом перекрёстной резистентности энтерококков, стафилококков, стрептококков, сальмонелл ко всем препаратам макролидов (эритромицин, азитромицин и др.), линкозамидным антибиотикам (линкомицин, линкоспектин и т.д.) и бета-лактамным антибиотикам целесообразно определять чувствительность к одному представителю этого класса антибиотиков.
Особый интерес вызывает устойчивость стрептококков, энтерококков, сальмонелл, стафилококков к тетрациклинам.
В то же время стрептококки, стафилококки, сальмонеллы являются высокочувствительными к хлорамфениколу, но из-за высокой токсичности его применение ограничено. В этой связи целесообразно было провести формольную детоксикацию, полимеризацию с этонием хлорамфеникола и изучить его остаточную токсичность, бактерицидную эффективность.
Повышение эффективности при снижении токсичности пенициллина, стрептомицина, канамицина, гентамицина и т.д. достигнутое с помощью 0,2% раствора формалина с 0,1% раствором этония позволило провести дополнительные исследования по детоксикации, полимеризации тетрациклина и хлорамфеникола в отношении повышения их бактерицидной эффективности при снижении токсичности. Полученные результаты по бактерицидной эффективности представлены в таблице 20.
Из данных, представленных в таблице 20, следует, что модифицированные формольной детоксикацией и полимеризацией с этонием антибиотики проявляли практически вдвое большие критерии задержки роста микроорганизмов на мясопептонном агаре (МПА) в чашках Петри по сравнению с производственными антибиотиками, т.е. до детоксикации и полимеризации 0,1% раствором формалина с 0,1% раствором этония.
Несмотря на высокий показатель задержки роста на поверхности агара в диаметре до 20-25 мм стафилококков, стрептококков, сальмонелл и кишечной палочки в отношении бумажных дисков, содержащих всего 8мкг производственного хлорамфеникола и вдвое превышающие диаметры задержки роста микроорганизмов от бумажных дисков, пропитанных модифицированным формольной детоксикацией с этонием хлорамфениколом, необходимо было выяснить произошло ли снижение высокотоксичного антибиотика.
Изучение токсичности производственного и модифицированного формольной детоксикацией и полимеризацией с этонием хлорамфеникола проводили на 12 белых мышах, 10 морских свинках, 14 поросятах 2-3-х месячного возраста путем ежедневного однократного подкожного введения в течение 4суток (для белых мышей), 8 суток (для морских свинок) и 9 суток поросятам. Антибиотики вводили в объеме 0,4-0,5мл для белых мышей, 1,0мл для морских свинок и 9-10мл для поросят.
Полученные результаты представлены в таблице 21.
Из данных, представленных в таблице 21, следует, что белые мыши, морские свинки и поросята без осложнений и падежа переносят высокие дозы на подкожное введение модифицированного формольной детоксикацией и полимеризацией хлорамфеникола.
В то же время на подкожное введение 0,5мл производственного хлорамфеникола белым мышам в течение 4 суток произошла гибель 10 животных из 12, падеж морских свинок составил 3 из 10, поросят 2 из 9.
Полученные данные подтверждают не только повышение бактерицидных свойств модифицированного хлорамфеникола путем детоксикации и полимеризации 0,2% раствором формалина с 0,1% раствором этония, но и практически утрату токсичности для белых мышей, морских свинок и поросят.
Результаты испытания лечебных свойств модифицированного стрептомицина на зараженных микобактериями туберкулеза морских свинках
В исследованиях использованы свежевыделенные микобактерии туберкулеза бычьего и человеческого видов, обладающие первичной, природной, исходной устойчивостью к стрептомицину.
Заражение морских свинок проводили в дозе 1 мг путем подкожного введения во внутреннюю поверхность тазовой конечности. Общепринятой дозой заражения морских свинок является 0,01-0,001мг микобактерий туберкулеза отжатой между двумя листами фильтровальной бумаги и содержащих соответственно 40000 микробных клеток, способных вызывать гибель животных через 1,5-2,0 месяца.
Исследования проводили в Курской областной ветлаборатории, туберкулезном изоляторе кафедры туберкулеза Курского медицинского университета, Жуковской ветеринарной лаборатории Калужской области и в Должанской ветлаборатории Орловской области.
Лечение животных проводили производственным и модифицированным стрептомицином формольной детоксикацией и полимеризацией с 0,1% раствором этония по истечении 30 суток после введения 100000ЕД стрептомицина в течение 9-30 суток.
В качестве контроля использовали морские свинки, зараженные в дозе 1 мг микобактерий туберкулеза и оставленные без лечения.
Первоначально исследования провели в Курской областной ветеринарной лаборатории с использованием морских свинок путем заражения микобактериями туберкулеза человеческого вида в дозе 1мг (40 миллионов микробных тел). Заражение проводили во внутреннюю поверхность тазовой конечности. Для достоверности заболевания провели контрольный убой двух морских свинок после 30 суток с момента заражения. На вскрытии у животных обнаружены обширные гнойнокавернозные поражения легких, печени, селезенки.
В дальнейшем через 45 и 55 суток три контрольные морские свинки погибли. На вскрытие обнаружены гнойнокавернозные поражения легких, печени и селезенки. Оставшиеся зараженные 24 морские свинки были разделены на две группы. Первая группа из 12 морских свинок была использована для лечения обычным коммерческим стрептомицином путем подкожного введения в дозе 100 тысяч ЕД на одно животное в течение 9 суток. Морские свинки второй группы в количестве 12 голов были подвергнуты лечению модифицированным формольной детоксикацией с этонием стрептомицином.