Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Эпизоотическая ситуация по анаплазмозу в мире .11
1.2. Номенклатура возбудителей анаплазмоза 12
1.3. Морфология и культуральные свойства возбудителей анаплазмоза .13
1.4. Генетическое разнообразие штаммов анаплазм 14
1.5. Антигенная структура анаплазм 18
1.6. Эпизоотология анаплазмоза 19
1.7. Гранулоцитарный и тромбоцитарный анаплазмоз собак 24
1.8. Сочетанные с анаплазмозом трансмиссивные заболевания 30
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Материалы исследования .32
2.2. Методы исследования 34
Глава 3. Результаты эпизоотологических исследований
3.1. Результаты серологических исследований 46
3.2. Обнаружение генетического материала анаплазм (ПЦР) .47
Глава 4. Филогенетический анализ полученных изолятов анаплазм
4.1. Ген 16S рРНК 49
4.2. Gro-ESL-оперон 51
Глава 5. Результаты лабораторных исследований
5.1. Общая характеристика собак, положительных по анаплазмозу .54
5.2. Характеристика серопозитивных собак с клиническими признаками .57
5.3. Характеристика серопозитивных по анаплазмозу собак без клинических признаков 62
5.4. Характеристика клинически здоровых собак-носителей .67
5.5. Характеристика собак с острым гранулоцитарным анаплазмозом 72
5.6. Характеристика собак с тромбоцитарным анаплазмозом 75
5.7. Характеристика собак с бабезиозом в качестве микст-инфекции 79
5.8. Характеристика собак с боррелиозом в качестве микст-инфекции 85
5.9. Характеристика собак с дирофиляриозом в качестве микст-инфекции 90
Глава 6. Обсуждение полученных результатов
6.1. Серологические исследования 96
6.2. Исследования методом ПЦР .100
6.3. Генетическое разнообразие Anaplasma phagocytophilum и Anaplasma platys, выделенных от собак 102
6.4. Результаты лабораторных исследований .105
Выводы 117
Рекомендации по использованию научных выводов 118
Сведения о практическом использовании результатов 119
Перспективы дальнейшей разработки темы 119
Список использованной литературы 120
Приложение 143
- Эпизоотология анаплазмоза
- Характеристика серопозитивных собак с клиническими признаками
- Характеристика собак с дирофиляриозом в качестве микст-инфекции
- Результаты лабораторных исследований
Введение к работе
Актуальность темы. Анаплазмозы – классические природно-очаговые, передающиеся иксодовыми клещами облигатно-трансмиссивные инфекции, вызываемые облигатно-внутриклеточными грамотрицательными протеобактериями рода Anaplasma (Коренберг Э.И., 2013). Впервые гранулоцитарный анаплазмоз собак (вызываемый Anaplasma phagocytophilum) был описан в 1982 году (Madewell B.R., 1982); тромбоцитарный анаплазмоз (вызываемый Anaplasma platys) – в 1978 году (Harvey J.W., 1978). С этого момента эти два заболевания ежегодно регистрируются во многих странах мира.
Anaplasma phagocytophilum является возбудителем гранулоцитарного анаплазмоза не только у собак, но и у других видов животных, и у человека в том числе. Гранулоцитарный анаплазмоз человека (ГАЧ) регистрируется по всему миру, и в России в том числе. Переносчиками Anaplasma phagocytophilum в России являются клещи рода Ixodes (Коренберг Э.И., 2013), широко распространенные в нашей стране (Акбаев М.Ш., 2000). Зараженность клещей данным возбудителем варьируется в зависимости от региона и составляет от 0% до 46,7% в отдельных природных очагах (Katargina О., 2012; Рар В.А., 2011; Rar V.A., 2014; Колчанова Л.П., 2011; Ефимова А.Р., 2017; Ильинских Е.Н., 2015). Роль собак как возможных резервуаров инфекции пока не определена. Однако данные о распространенности гранулоцитарного анаплазмоза среди собак имеют большое значение, т.к. могут служить маркером возможного заболевания людей.
Наиболее вероятным переносчиком Anaplasma platys является клещ Rhipicephalus sunguineus (Sainz А., 2015), распространенный в южных регионах нашей страны (Акбаев М.Ш., 2000). Зараженность клещей данным возбудителем варьируется от 0,6% в Филиппинах (Ybaez А.Р., 2012) до 14,3% в Китае (Li Y., 2015). Информация о степени зараженности клещей Anaplasma platys в России на данный момент отсутствует.
На сегодняшний день собран достаточно большой объем информации о зараженности собак этими двумя видами анаплазм в разных странах мира, а также о клинических проявлениях данных заболеваний. В России проводилось лишь не-3
сколько исследований, посвященных распространению и проявлению анаплазмоза у собак (Volgina N.S., 2013; Филимонова О.Б., 2014; Колодий И.В., 2012; Раевская М.А., 2012; Бутенков А.И., 2013). Все они проводились на территории европейской части России; таким образом, ситуация на территории азиатской части до сих пор оставалась неизученной. Кроме того, стоит учесть, что большинство клинических случаев описано на территории Европы и США, в то время как встречающиеся в России штаммы Anaplasma phagocytophilum и Anaplasma platys могут характеризоваться иной симптоматикой.
Степень разработанности темы. В доступной литературе недостаточно отражены вопросы распространенности анаплазмоза и сочетанных с ним трансмиссивных заболеваний собак на территории России; информация по азиатской части России отсутствует. Также нет данных о генетических штаммах анаплазм, циркулирующих на территории нашей страны, и об особенностях клинического проявления при заражении собак данными штаммами. Таким образом, для ветеринарии важность изучения анаплазмоза собак в России определяется необходимостью выявления характерных для наших штаммов клинических признаков и гематологических маркеров, способных помочь ветеринарным врачам в диагностике данного заболевания.
Целью данной работы было изучить распространение анаплазмоза собак в различных регионах России и особенности его проявления в ассоциациях с трансмиссивными паразитозами, а также определить маркеры для его предварительной лабораторной диагностики.
В задачи исследования входило:
1) Определить серопревалентность по анаплазмозу среди собак в различных ре
гионах России.
-
Определить зараженность собак Anaplasma phagocytophilum и Anaplasma platys методом ПЦР в различных регионах России.
-
Сопоставить нуклеотидные последовательности полученных генетических изолятов анаплазм с уже имеющимися в международной базе данных (GenBank).
4) Сравнить клинические проявления анаплазмоза у собак в зависимости от ге
нетического изолята возбудителя.
-
Проанализировать биохимические и гематологические показатели положительных по анаплазмозу собак; выявить возможные диагностические маркеры данного заболевания.
-
Изучить частоту встречаемости сочетанных с анаплазмозом других трансмиссивных заболеваний.
-
Изучить особенности проявления микст-инфекций анаплазмоза и трансмиссивных заболеваний паразитарной природы.
Научная новизна. Впервые получены данные о распространении анаплазмоза собак на азиатской части России; данные по европейской части России дополнены результатами исследований методом ПЦР. Впервые определены генетические особенности изолятов анаплазм, выделенных от домашних собак на территории России. Выявлены отклонения в биохимических и гематологических показателях, характерные для гранулоцитарного и тромбоцитарного анаплазмоза собак. Установлены случаи бессимптомного носительства анаплазм, а также сочетания анаплазмоза с другими трансмиссивными заболеваниями.
Теоретическая и практическая значимость. Изучено распространение ана
плазмоза собак в восьми регионах как европейской, так и азиатской части России
Установлены случаи заражения собак как Anaplasma phagocytophilum, так и
Anaplasma platys. Обнаруженные изоляты Anaplasma phagocytophilum и
Anaplasma platys сопоставлены с уже имеющимися в международной базе данных. Отмечено, что при заражении одним и тем же штаммом Anaplasma phagocytophilum возможно как развитие клинически проявленного гранулоцитар-ного анаплазмоза, так и бессимптомное носительство. Выявлены лабораторные маркеры гранулоцитарного и тромбоцитарного анаплазмоза. Определена значимость метода ПЦР для выявления анаплазм у собак без сопутствующей клинической симптоматики. Определена значимость комплексного обследования собак на другие трансмиссивные заболевания, которые могут протекать совместно с анаплазмозом.
Личный вклад. Диссертантом лично выполнена экспериментальная часть работы, анализ полученных результатов, сформулированы выводы и практические предложения. Статистическая обработка данных выполнена совместно с Бондаре-
вым С.А. и Бондаревой О.В. Молекулярно-генетические исследования проведены на базе ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора совместно с заведующей научной группой по разработке новых методов диагностики природно-очаговых инфекций Карань Л.С. Автор выражает благодарность всем ветеринарным врачам, обеспечившим сбор и доставку материала из различных регионов России.
Степень достоверности. Достоверность результатов подтверждается большим объемом серологических, генетических, биохимических и гематологических исследований, а также статистической обработкой данных.
Апробация результатов. Материалы исследований представлены на конференции «Лабораторная диагностика в ветеринарной медицине» (Москва, 2014); XXIII Московском Международном Ветеринарном конгрессе в рамках секции «Лабораторная диагностика» (Москва, 2015); Ежегодной научно-практической конференции МГАВМиБ им. К.И.Скрябина «Актуальные проблемы ветеринарной медицины, зоотехнии и биотехнологии», проводимой в рамках Всероссийского Фестиваля науки (Москва, 2015); Международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 95-летию кафедры паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы МГАВМиБ им. К.И.Скрябина (Москва, 2015); Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Инновационные технологии и технические средства для АПК» (Воронеж, 2015); Конференции «Лабораторная диагностика в ветеринарной медицине» (Санкт-Петербург, 2016); XXV Московском Международном Ветеринарном конгрессе в рамках секции «Трансмиссивные заболевания» (Москва, 2017).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 статей (из них 2 – в журналах, рекомендованных ВАК РФ), а также учебно-методическое пособие.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа включает в себя следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, рекомендации по использованию научных выводов, сведения о практическом использовании результатов, перспективы дальнейшей разработки темы. Работа содержит 145 страниц машинописного текста (в т.ч. 2 страницы приложений), иллюстрирована 35 рисунками и включает 39 таблиц. Список используемой литературы включает 189 источников, из них
Эпизоотология анаплазмоза
Наиболее важным фактором передачи анаплазм являются иксодовые клещи; для Anaplasma phagocytophilum это клещи рода Ixodes. В Северной Америке это клещи I. scapularis и I. pacificus; в Европе основным переносчиком анаплазмоза считается I. ricinus (15; 148). В восточной Европе, а также на всей азиатской территории России вплоть до Японии эту нишу занимает близкий вид – I. persulcatus (148). В некоторых регионах России циркуляцию A. phagocytophilum среди мелких млекопитающих поддерживает клещ I. trianguliceps (14;143). Методом ПЦР Anaplasma phagocytophilum была обнаружена и в других видах клещей р.Ixodes: I. hexagonus (128) и I. ventalloni (151). Кроме того, этот микроорганизм также был выявлен и в клещах рода Dermacentor: D. silvarum (106) и D. albipictus, причем в последнем случае доказана трансовариальная передача (31).
У людей описана перинатальная передача (79), а также заражение при гемотрансфузии (28). Помимо этого, в статье Zhang et al. рассматривается возможность заражения гранулоцитарным анаплазмозом при непосредственном контакте с кровью и выделениями больного на основании подобного случая в одной из больниц Китая (186).
Для собак основным путем передачи Anaplasma phagocytophilum является укус клеща; также возможна передача при гемотрансфузии (148). Перинатальная передача для собак не характерна; в статье Plier at al. (138) описан клинический случай гранулоцитарного анаплазмоза у кормящей суки, в то время как у её щенков Anaplasma phagocytophilum обнаружена не была.
Для Anaplasma platys наиболее вероятным переносчиком считается клещ Rhipicephalus sanguineus, однако воспроизвести этот путь передачи в условиях эксперимента не удалось (157). Однако ареалы распространения тромбоцитарного анаплазмоза совпадают с ареалом распространения этого вида клещей; кроме того, молекулярно-генетическими методами в этих клещах обнаруживают данный вид анаплазм (149). Всё это позволяет говорить о роли Rhipicephalus sanguineus в распространении данного заболевания.
Помимо укуса клеща, передача Anaplasma platys возможна и при переливании собакам зараженной крови (62). Кроме того, в недавнем исследовании Latrofa et al. показана возможность трансплацентарной передачи Anaplasma platys от беременной суки ее потомству (103).
Клещи рода Ixodes развиваются по треххозяинному типу. Нимфы и личинки этих клещей питаются на мелких млекопитающих и птицах; реже – на пресмыкающихся. Имаго паразитируют преимущественно на крупных и средних млекопитающих – как диких, так и домашних. Часто присасываются к человеку. (1). Данный род клещей активен при температуре выше 6С (148). Активность личинок обычно проявляется в период с мая по сентябрь; имеется два пика активности – в июне и в августе-сентябре. Доминирующими хозяевами личиночной фазы клещей рода Ixodes являются мышевидные грызуны. Обычно продолжительность питания личинок составляет 3-4 дня (2). Активность нимф начинается с апреля и продолжается весь теплый сезон, достигая своего минимума в августе. Сроки паразитирования нимф на теплокровных животных (грызунах и насекомоядных) варьируются в зависимости от температуры окружающей среды: от 3-6 дней в летний период до 14-15 дней в мае и сентябре (2). Активность взрослых клещей начинается с начала апреля и продолжается до начала ноября, причем характер сезонной динамики активности имеет две вершины: в конце мая – начале июня и в конце сентября – начале октября. В более южных широтах активность клещей может длиться более продолжительный период, в то время как в северных регионах период активности имаго сокращается с конца апреля до сентября. Сроки паразитирования на теплокровных животных составляют от 5 до 15 дней. Продолжительность цикла развития Ixodes ricinus обычно занимает 3-4 года (2).
В Европе основными природными резервуарами для A. phagocytophilum служат рыжая лесная полевка, желтогорлая мышь, обыкновенная бурозубка, а также косуля и благородный олень (50). В исследовании Rar et al. зараженность полевок на территории Западной Сибири составила 38,9% (143). Поскольку A. phagocytophilum у клещей р. Ixodes передается трансстадийно, но не трансовариально (145), очевидна роль природных резервуаров для поддержания очагов инфекции. Схема циркуляции A.phagocytophilum в природе показана на рисунке 1.
Помимо наземных млекопитающих, важную роль в распространении инфицированных клещей могут играть птицы. Например, в Швеции инфицированные A. phagocytophilum нимфы клещей I. ricinus были обнаружены у перелетных птиц, перезимовавших на континентальной части Европы и в Африке (36).
Наиболее вероятным переносчиком Anaplasma platys считается клещ Rhipicepalus sanguineus. Данный вид клеща широко распространен в южных Европы (148). На территории России Rhipicepalus sanguineus обитает на Северном Кавказе, в Крыму, Закавказье, Калмыкии (1). Ареал обитания охватывает лесостепи, степи, полупустыни и пустыни, а также горные степи. Rhipicepalus sanguineus – треххозяинный клещ; основным хозяином данного вида является собака, на ней паразитируют все фазы клеща. Имаго могут паразитировать и на других домашних животных, а личинки и нимфы – на грызунах. Имаго обнаруживаются в период с марта по сентябрь, а юные фазы – с апреля по август. В течение года развивается одно поколение. Зимовать способны все фазы метаморфоза (1). Активны при температуре 10-12С (148). Будучи завезенными в более холодные регионы вместе с хозяином, клещи данного вида способны выживать и активно размножаться в закрытых помещениях (собачьих конурах, домах, сараях). Популяция Rhipicepalus sanguineus в собачьих приютах может достигать огромных размеров из-за постоянного присутствия рядом хозяев-прокормителей. У собак, не получающих профилактических обработок от эктопаразитов, количество паразитирующих клещей в таких приютах может исчисляться сотнями, причем одновременно могут присутствовать все стадии развития (148).
Природный резервуар Anaplasma platys пока не изучен.
Зараженность клещей анаплазмами и другими возбудителями инфекционных заболеваний на сегодняшний день исследуется методом ПЦР. В таблице 1 представлена зараженность клещей Anaplasma phagocytophilum в различных регионах России. К сожалению, на данный момент отсутствуют опубликованные отечественные данные об обнаружении в клещах Anaplasma platys.
Количество опубликованных данных, касающихся зараженности собак анаплазмозом на территории России, весьма невелико. Данные об имеющихся исследованиях представлены в таблице 2.
Характеристика серопозитивных собак с клиническими признаками
В данную группу вошли собаки (n=3), имеющие антитела к возбудителям анаплазмоза, но отрицательные при исследовании методами ПЦР и световой микроскопии. Основными симптомами у собак была вялость и отказ от корма. Температура при осмотре была повышена у одного животного (39,7С); у двух других находилась в пределах нормы (38,5С и 38,7С). Какие-либо сопутствующие трансмиссивные заболевания у животных данной группы не выявлены.
Результаты биохимических исследований по каждому показателю представлены в таблице 11.
Общий белок у всех собак находился в пределах референсного интервала.
У двух животных наблюдалась незначительная гипоальбуминемия (27,9 г/л; 29,3 г/л).
Содержание глобулинов у одной собаки умеренно превышало референсный интервал (43,2 г/л), у двух других находилось в пределах нормального диапазона.
Концентрация глюкозы у всех собак была в переделах референсных интервалов.
У двух собак наблюдалось повышение уровня АСТ: у одной – незначительно (42 Ед/л), у другой – умеренно (65 Ед/л).
У двух собак отмечено повышение уровня АЛТ: у одной – умеренно (87 Ед/л), у другой – значительно (253 Ед/л).
Концентрация мочевины и креатинина у всех животных находилась в пределах нормы.
Повышение активности щелочной фосфатазы наблюдалось у двух собак: у одной она была повышена незначительно (92 ед/л), у другой – значительно (568 Ед/л).
При сопоставлении данных между исследуемой и контрольной группой достоверная разница была выявлена для концентрации альбумина (р= 0,01) и АЛТ (р=0,04). Альбумин был достоверно ниже в исследуемой группе, в то время как активность АЛТ – достоверно выше (таблица 12, рисунки 13 и 14).
Общее число лейкоцитов было умеренно повышено (24,5 тыс/мкл) у одной собаки.
У двух собак наблюдалась умеренно выраженная анемия (число эритроцитов составило 3,18 млн/мкл и 3,87 млн/мкл).
Концентрация гемоглобина была снижена (88 г/л) у одного животного.
Среднее содержание гемоглобина в эритроцитах (MCHC) превысило референсный интервал (397 г/л; 407 г/л) у двух собак. Средняя концентрация гемоглобина (MCH) была незначительно повышена у одной собаки (27,7 пг) и умеренно повышена у другой (30 пг).
Средний эритроцитарный объем (MCV) был умеренно повышен (75,5 фл) у одного животного.
Гематокрит был снижен у двух собак: у одной – умеренно (29,2%), у другой – значительно (21,6%).
Количество тромбоцитов было незначительно повышено (473 тыс/мкл) у одного животного.
При сопоставлении данных между исследуемой и контрольной группой достоверная разница (р=0,03) была выявлена для концентрации гемоглобина. Данный показатель был достоверно ниже в исследуемой группе (таблица 14, рисунок 15).
Характеристика собак с дирофиляриозом в качестве микст-инфекции
В данную группу были включены собаки (n=3), у которых помимо антител к возбудителям анаплазмоза при микроскопии нативной капли крови были обнаружены микрофилярии. В одном случае был выявлен антиген Dirofilaria immitis (SNAP 4DX); владельцы данного животного указывали на наличие у него кашля и хромоты. В двух других случаях при исследовании на данный антиген собаки показали отрицательный результат; эти две собаки были клинически здоровы.
Результаты биохимических исследований по каждому показателю представлены в таблице 36.
Содержание общего белка у всех животных было в пределах нормального диапазона.
У одной собаки отмечалась незначительная гипоглобулинемия (29,2 г/л).
Повышение уровня глобулинов наблюдалось у двух животных: у одного – незначительное (36,1 г/л), у другого – умеренное (45,8 г/л). Концентрация глюкозы была незначительно снижена (3,19 мкмоль/л) у одной собаки.
Активность АСТ у всех животных не отличались от референсных значений.
Активность АЛТ была незначительно повышена (65 Ед/л) у одной собаки.
Незначительное повышение концентрации мочевины (9,25 ммоль/л) было отмечено у одного животного.
Концентрация креатинина была умеренно снижена (30 мкмоль/л) у одной собаки.
У двух животных наблюдалось повышение активности щелочной фосфатазы: у одного – умеренное (141 Ед/л), у другого – значительное (358 Ед/л).
При сопоставлении данных между исследуемой и контрольной группой достоверной разницы (р0,05) не было выявлено ни для одного показателя (таблица 37).
Результаты гематологических исследований по каждому показателю представлены в таблице 38.
Количество лейкоцитов и эритроцитов, а также концентрация гемоглобина у всех животных находились в пределах референсного диапазона.
Среднее содержание гемоглобина в эритроцитах (MCHC) было незначительно снижено (291 г/л; 295 г/л) у двух собак.
Средняя концентрация гемоглобина (MCH) у всех животных не отличалась от нормальных значений. Средний эритроцитарный объем (MCV) у всех собак превышал норму: у двух собак – незначительно (73,1 фл; 73,3 фл), у одной – умеренно (78,5 фл).
У всех животных наблюдалось незначительное повышение гематокрита (54,3%; 54,2%; 56,2%).
Количество тромбоцитов у всех собак было в пределах референсного интервала.
При сопоставлении данных между исследуемой и контрольной группой достоверная разница была выявлена для MCHC (р=0,01), MCV (р=0,01) и гематокрита (р=0,004). MCHC был достоверно ниже в исследуемой группе, в то время как средний эритроцитарный объем (MCV) и гематокрит – достоверно выше (таблица 39, рисунки 33, 34, 35).
Результаты лабораторных исследований
В ходе нашей работы анамнестические данные, а также результаты лабораторных исследований были собраны для собак из Москвы, Московской области (приют «Бим») и Воронежской области (Воронежский заповедник).
В общей сложности в этих трех регионах были обследованы 190 собак; положительными по анаплазмозу оказались 30 (15,7%). При этом наибольшее число положительных животных (n=18) было выявлено на территории Москвы, что, вероятнее всего, связано с предварительной выборкой исследуемых собак. Породной предрасположенности в нашем исследовании выявлено не было. Из всех положительных собак 12 были метисами; из числа породистых собак встречались представители в основном крупных и средних пород, реже – декоративных. В этом результаты нашего исследования совпадают с работой Galke (60), где явной породной предрасположенности также не было отмечено: среди серопозитивных по анаплазмозу собак преобладали метисы, а из породистых животных – животные различных крупных и средних пород. Стоит отметить, что у собак крупных пород чаще обнаруживают антитела к возбудителям анаплазмоза, чем у мелких пород (94); возможно, это связано с тем, что у собак выше 50 см в холке больше шансов подвергнуться нападению клещей, потому что последние обычно сидят на траве как раз этой высоте (51). Кроме того, по сравнению с собаками декоративных пород, собаки крупных пород чаще имеют вольерное или свободно-выгульное содержание, что также делает их более подверженными нападению клещей. Есть предположение, что породной предрасположенностью к анаплазмозу обладают бернские зенненхунды; в работе Kirtz (94) в группе, состоящей из собак этой породы, серопревалентность по анаплазмозу составила 77,8%. В исследовании Волгиной (172) среди породистых собак, положительных по анаплазмозу, также преобладали собаки крупных пород – лабрадор, среднеазиатская овчарка, немецкая овчарка, пойнтер.
Средний возраст положительных по анаплазмозу животных составил 5,91. 50% собак относились к группе молодых животных (до 7 лет включительно); на долю щенков (до 1 года включительно) пришлось 20%, на долю собак старшего возраста – 30%. В этом наши результаты несколько расходятся с данными других исследований. Так, в работе Galke (60) антитела выявлялись чаще у собак старшего возраста, чем у молодых животных. Считается, что у пожилых животных чаще выявляются антитела к возбудителям анаплазмоза, поскольку с течением времени повышается возможность контакта с возбудителем (50). Тем не менее, в исследовании Волгиной (172) средний возраст собак, серопозитивных по анаплазмозу, составил всего 3,8 года.
Гендерной предрасположенности собак к заражению анаплазмами в нашем исследовании выявлено не было (50% положительных собак были кобели, 50% -суки). По данным литературы, анаплазмоз чаще регистрируется у самцов, чем у самок. Так, в работе Galke (60) среди положительных по анаплазмозу животных число кобелей превышало число сук; статистически достоверной разницы, однако, между гендерными группами выявлено не было. В исследовании Волгиной (172) из 33 серопозитивных по анаплазмозу собак 25 были кобелями, а 8 – суками. Возможно, это различие связано с более активным исследовательским поведением самцов (особенно при свободно-выгульном содержании) по сравнению с самками. Кроме того, считается, что такая поведенческая особенность кобелей, как мечение предметов и растений (в том числе и высокой травы), также делает их более подверженными нападению клещей, по сравнению с суками (94).
В группы I и II были включены собаки, у которых были выявлены антитела к возбудителям анаплазмоза методом твердофазного ИФА; при этом все собаки были отрицательны при исследовании методом ПЦР, а также у них не было выявлено каких-либо других трансмиссивных заболеваний. В группу I вошли животные (n=3), имеющие какие-либо клинические признаки (вялость, снижение или полное отсутствие аппетита). В одном случае на приеме с животного было снято 4 клеща; в двух других случаях владельцы не отмечали случаи нападения клещей. В группу II вошли клинически здоровые собаки (n=7).
По сравнению с собаками из контрольной группы, у животных c клиническими признаками был достоверно ниже альбумин, а также достоверно выше АЛТ. Гипоальбуминемия является характерным признаком многих трансмиссивных заболеваний, и анаплазмоза в том числе (148; 50). В исследованиях отечественных и зарубежных авторов (7;117) в описании биохимических изменений у клинически больных собак, серопозитивных по анаплазмозу, также присутствует гипоальбуминемия. В исследовании Волгиной (172), посвященном различным трансмиссивным заболеваниям, у 60% серопозитивных собак с клиническими признаками отмечались повышение АСТ, АЛТ и щелочной фосфатазы. В исследовании Jensen в число биохимических изменений у серопозитивных по анаплазмозу животных (из группы собак с проявленной симптоматикой) входят: азотемия, повышение активности АЛТ и щелочной фосфатазы, гипербилирубинемия, гипоальбуминемия, гипо- и гиперпротеинемия (88).
У двух животных из трех в группе собак с клиническими признаками была выявлена анемия средней степени тяжести. При этом концентрация гемоглобина в данной группе была достоверно ниже, чем в контрольной. Это коррелирует с отечественными и зарубежными данными. Например, в работе Волгиной (172), в группе клинически больных собак, положительных по анаплазмозу (методом SNAP 4DX), все эритроцитарные показатели (количество эритроцитов, концентрация гемоглобина, гематокрит), были достоверно ниже, чем в контрольной группе. В исследовании Mazepa (117) анемия была выявлена у 24% положительных по анаплазмозу собак, причем в половине случаев (12% от всех серопозитивных животных) был подтвержден её иммуноопосредованный характер. В работе Ravnik (144) снижение гематокрита отмечалось у 16,8% клинически больных собак. В исследовании Jensen (88) у клинически больных серопозитивных животных наблюдалась анемия (у 50% животных), тромбоцитопения (75%), лейкоцитоз (54,2%), лейкопения (16,7%).
В группе серопозитивных животных без клинической картины (группа II) выявлена статистически достоверная разница для концентрации креатинина в сыворотке крови. Креатинин в исследуемой группе был достоверно выше, чем в контрольной; при этом только у двух животных из 7 концентрация креатинина превышала пределы референсного диапазона. Это достаточно интересный факт, учитывая, что в исследуемой группе только одна собака относилась к возрастной группе пожилых животных (10 лет); при этом у данного животного концентрация креатинина не отличалась от нормальных значений. Возраст остальных собак не превышал 5 лет. Таким образом, нельзя отнести данное отличие от контрольной группы к возрастным изменениям в почечной ткани. В то же время, в работах Волгиной и Jensen в группе серопозитивных клинически здоровых животных каких-либо отклонений в биохимических показателях не наблюдалось (172; 88).
При общем клиническом анализе крови у серопозитивных клинически здоровых животных достоверные отличия выявлены для двух эритроцитарных индексов: среднего эритроцитарного объема (MCV) и среднего содержания гемоглобина в эритроцитах (МСНС). MCV был достоверно выше, чем у собак в контрольной группе, а МСНС – достоверно ниже (несмотря на то, что у всех животных данный индекс был в пределах референсных значений). Эти показатели взаимосвязаны между собой, и данная картина, как правило, наблюдается у животных с регенеративной анемией. В нашем случае, однако, можно говорить о завершении регенеративного ответа, поскольку анемии не было выявлено ни у одного животного. Наиболее часто при анаплазмозе встречается нерегенеративная анемия, однако в редких случаях упоминается регенеративный тип анемии (148). Для других гематологических параметров не было выявлено достоверного отличия между исследуемой группой и контрольной. В работе Jensen (88) у клинически здоровых серопозитивных собак при общем клиническом анализе крови не было выявлено отклонений от референсного интервала ни для одного показателя. В работе Волгиной (172) у данной группы собак не было выявлено достоверно значимой разницы с контрольной группой при определении количества эритроцитов, гемоглобина и гематокрита; однако число лейкоцитов было достоверно выше, чем в контрольной. В исследовании Galke (60) у клинически здоровых серопозитивных собак были выявлены следующие отклонения в гематологических параметрах: лейкопения (2%), лейкоцитоз (2%), анемия (2%), полицитемия (8%), тромбоцитопения (13%), тромбоцитоз (1%). Тем не менее, ни для одного этого показателя не было выявлено достоверной разницы по сравнению с группой клинически здоровых серонегативных животных.