Содержание к диссертации
Введение
1. Введение 7
2. Обзор литературы
2.1. Состояние и перспективы развития птицеводства 13
2.2. Роль S. аureus и бактериальных ассоциаций в этиологии желудочно-кишечных заболеваний птицы
2.3. Стафилококкоз сельскохозяйственной птицы
2.3.1. Этиология стафилокккоза 17
2.3.2. Патогенез 19
2.3.3. Диагностика стафилококкоза: клиническое, патоморфологическое и лабораторное исследование
2.3.4. Лечение и профилактика стафилококкозов цыплят-бройлеров
2.4. Иммунодефициты бройлеров и их коррекция 26
2.5. Эхинацея пурпурная и перспективы ее применения в животноводстве и птицеводстве
3. Собственные исследования 38
3.1. Материалы и методы 38
3.1.1. Условия и место проведения исследований 38
3.1.2. Отбор патологического материала для исследований 42
3.1.3. Бактериологическое исследование 42
3.1.4. Гематологическое и иммунологическое исследование 45
3.1.5. Гистологическое исследование 47
3.1.6 Статистическая обработка 48
3.2. Результаты собственных исследований 48
3.2.1. Этилогическая структура при вспышках желудочно- кишечных заболеваний цыплят-бройлеров в птицеводческих хозяйствах Луганской области
3.2.2. Влияние экстракта корня эхинацеи пурпурной на сохранность, привесы цыплят-бройлеров при экспериментальном стафилококкозе
3.2.3. Изучение влияния экстракта корня эхинацеи пурпурной на гематологические показатели крови цыплят-бройлеров при экспериментальном стафилококкозе
3.2.4. Коррекция клеточного и гуморального звеньев имунитета у цыплят-бройлеров экстрактом корня эхинацеи пурпурной при экспериментальном стафилококкозе
3.2.5. Макро- и микроскопическая характеристика тимуса, сумки Фабрициуса, селезенки у цыплят-бройлеров при лечении экспериментального стафилококкоза
3.2.5а. Макро- и микроскопическая характеристика тимуса 71
3.2.5б. Макро- и микроскопическая характеристика сумки Фабрициуса
3.2.5в. Макро- и микроскопическая характеристика селезенки
3.2.6. Гистологическая характеристика тимуса при лечении экспериментального стафилококкоза флороном в комплексе с экстрактом корня эхинацеи пурпурной
3.2.6а. Гистологические исследования тимуса цыплят второй группы
3.2.6б. Гистологические исследования тимуса цыплят третьей группы (стафилококкоз + антибиотик)
3.2.6в. Гистологические исследования тимуса цыплят 4-й группы (стафилококкоз + антибиотик+ экстракт эхинацеи пурпурной)
3.2.7. Гистологические исследования бурсы Фабрициуса при лечении экспериментального стафилококкоза антибактериаль ным препаратом в комплексе с экстрактом корня эхинацеи пурпурной
3.2.7а. Гистологические исследования бурсы Фабрициуса цыплят второй опытной группы (инфицированные без лечения)
3.2.7б. Гистологические исследования бурсы Фабрициуса цыплят 3-й группы
3.2.7в. Гистологические исследования бурсы Фабрициуса цыплят 4-й группы
3.2.8. Гистологическая характеристика селезенки при лечении экспериментального стафилококкоза антибактериальным препаратом в комплексе с экстрактом корня эхинацеи пурпурной
3.2.8а. Гистологические исследования селезенки цыплят 2-й группы
3.2.8б. Гистологические исследования селезенки цыплят 3-й группы
3.2.8в. Гистологические исследования селезенки цыплят 4-й группы
4. Обсуждение полученных результатов
5. Выводы 145
6. Сведения о практическом исполь- зовании результатов исследований
7. Рекомендации по использованию научных выводов
Список использованной литературы 148
- Диагностика стафилококкоза: клиническое, патоморфологическое и лабораторное исследование
- Гематологическое и иммунологическое исследование
- Гистологические исследования тимуса цыплят третьей группы (стафилококкоз + антибиотик)
- Гистологическая характеристика селезенки при лечении экспериментального стафилококкоза антибактериальным препаратом в комплексе с экстрактом корня эхинацеи пурпурной
Введение к работе
Актуальность проблемы. Одной из наиболее развитых и экономически эффективных отраслей сельского хозяйства является птицеводство. В промышленных условиях, при высокой концентрации поголовья, возрастает угроза вспышек бактериальных болезней, борьбу с которыми осуществляют, как правило, массовым применением антибактериальных препаратов. Неизбежным следствием массированного воздействия вакцинаций, антибиотикообработок и технологических стрессов на организм цыплят с первых дней жизни являются сбои в функционировании систем, ответственных за поддержание гомеостаза (Турицина Е.Г., 2010). В этой связи актуальность приобретают поиск средств и методов коррекции негативного воздействия на организм птицы интенсивных технологий и борьбы с бактериальными инфекциями птицы с минимизацией иммунотропного влияния.
Влияние на иммунную систему антибактериальных средств, широко применяемых в птицеводстве с профилактической целью, в научной литературе освещается недостаточно, хотя косвенные данные об их негативном влиянии появляются всё чаще (Лыдыш И.А., 2002; Федорова О.В., 2005). Большинство этих исследований относится преимущественно к области гуманной медицины и свидетельствует об иммунодепрессивном действии антибиотиков многих групп.
Одним из наиболее эффективных способов уменьшения влияния вредных факторов внешней среды на организм птицы в промышленных условиях и повышения естественной резистентности птицы является применение иммуномодулирующих препаратов. Сегодня предложен широкий круг иммуномодуляторов растительного и синтетического происхождения. Растительные препараты отличаются более низкой себестоимостью. Несмотря на то, что молекулярные механизмы их действия изучены недостаточно, эффективность от применения иммуномодуляторов растительного происхождения показана многими авторами (Карпуть И.М., 1986; Ладыш И.А., 2002; Постоенко В.О., 2012; Самородов В.Н., 1996).
Использование эхинацеи пурпурной является весьма перспективным в качестве дешевого природного возобновляемого источника для разработки средств, увеличивающих адаптивные возможности организма не только в обычных условиях, но и в неблагоприятной экологической обстановке (Постоенко В.О., 2012).
В связи с необходимостью использования в современном птицеводстве антибиотиков как с профилактической, так и с терапевтической целями, является актуальным поиск иммуномодулирующих препаратов, снижающих иммунодепрессив-ное действие на организм птицы от антибиотикообработок. Особый интерес в этом направлении представляет исследование эффективности сочетанного применения иммуномодулирующих препаратов и антибиотиков при лечении широко распространенных инфекций в птицеводстве, таких как стафилококкоз.
Цель исследования: изучить иммуноморфологические изменения в организме цыплят-бройлеров при экспериментальном стафилококкозе и иммунокорректи-рующие эффекты совместного применения с антибиотиками экстракта эхинацеи пурпурной.
Для достижения поставленной цели были сформулированы основные задачи:
1. Выделить и идентифицировать микроорганизмы, вызывающие желудочно-
кишечные болезни у цыплят-бройлеров в хозяйствах различного типа;
2. Изучить биологические свойства и антибиотикорезистентность у выделенных
патогенных возбудителей;
3. Изучить иммунный статус у цыплят при экспериментальном заражении
Staphylococcus aureus и морфологические изменения в иммунокомпетентных орга
нах при стафилококковой инфекции у цыплят-бройлеров;
4. Изучить влияние на органы иммунопоэза антибактериальных средств на ос
нове флорфеникола;
5.Изучить влияние экстракта корня эхинацеи пурпурной при совместном применении с флороном на морфологический состав крови, иммунологические показатели и реакцию органов гемоиммуногенеза в условиях экспериментального стафи-лококкоза;
6. Установить эффективность использования иммуномодулятора на основе экстракта корня эхинацеи пурпурной при комплексном лечении стафилококкоза цыплят-бройлеров.
Научная новизна работы. Впервые установлено отсроченное иммунодепрес-сивное влияние антибиотика флорфеникола на центральные органы иммунной системы птиц.
Впервые изучены гистологические изменения в тимусе, сумке Фабрициуса и селезенке у цыплят-бройлеров при экспериментальном инфицировании S. aureus и проведении лечебных мероприятий с использованием флорфеникола и экстракта корня эхинацеи пурпурной.
Впервые показано иммуномодулирующее и иммунопротекторное влияние экстракта корня эхинацеи пурпурной на лимфопоэтическую функцию центральных и периферических органов иммуногенеза, а также на гематологические показатели у птиц при комплексном лечении в условиях экспериментального стафилококкоза.
Определена роль стафилококков в развитии желудочно-кишечных заболеваний у цыплят-бройлеров на птицефабриках различной формы собственности. Выявлено, что стафилококкоз может протекать как моноинфекция, так и в ассоциации с другими микроорганизмами; установлены ассоциации при стафилококковых инфекциях в условиях птицеводческих хозяйств Луганской области.
Теоретическая и практическая значимость полученных результатов исследования. Применение иммуномодулирующего препарата на основе экстракта корня эхинацеи пурпурной для комплексного лечения стафилококкоза у цыплят-бройлеров обеспечивает положительное влияние на гематоиммунологические и иммуногистологические показателии, как следствие, это приводит к повышению сохранности и производительности птицы.
Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на различных научных конференциях и совещаниях:
на Международной научно-практической конференции «Транскордонные эмерджентные инфекционные болезни животных: риски, создание систем контроля и актуальные проблемы биологической безопасности» (Одесса, 2014);
на Международной научно-практической конференции, посвященной 85-летию со дня рождения Коробова Александра Петровича «Современные способы повышения продуктивных качеств сельскохозяйственных животных, птицы и рыбы в свете импортозамещения и обеспечения продовольственной безопасности страны» (Саратов, 2015);
- на XI Международной научно-практической конференции «Аграрная наука –
сельскому хозяйству» (Барнаул, 2016);
на Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы и методические подходы к диагностике, лечению и профилактике болезней животных» (пос. Персиановский, 2016);
на заседаниях кафедры физиологии и микробиологии, методических комиссий факультета ветеринарной медицины, отчетных научных конференциях ученого совета факультета ветеринарной медицины ЛНАУ (2011-2016 гг.).
Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 10 научных работах, в т.ч. в 3 изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Личный вклад. Диссертантом лично выполнена экспериментальная часть работы и проведена статистическая обработка полученных результатов, анализ полученных результатов, сформулированы выводы и практические предложения.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 177 страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, сведения о практическом использовании результатов исследований, рекомендации по использованию научных выводов, библиографической список. Материал иллюстрирован 13 таблицами, 61 макро- и микрофотографиями. Список использованной литературы включает 237 источников, в том числе 46 – на иностранных языках.
Диагностика стафилококкоза: клиническое, патоморфологическое и лабораторное исследование
Стафилококковая инфекция возникает при функциональном нарушении системы естественной защиты организма. Чаще всего это происходит при повреждении таких защитных барьеров как кожа или слизистые оболочки. S. aureus сначала проникает через поврежденные барьеры, а затем в глубжележащие анатомические структуры организма, где вызывает местные воспалительные процессы (например, остеомиелиты, которые часто локализуются в метафизарной зоне ближайших к ране суставов). У только что вылупившихся цыплят открытое незаращенное пупочное отверстие служит каналом для проникновения инфекции, что приводит к омфалиту, омфалофле-биту и к другим воспалительным процессам этой анатомической области. Небольшие хирургические манипуляции (обрезка когтей, клюва, удаление перьев и парентеральная вакцинация) также могут иметь значение в проникновении стафилококков в восприимчивый организм [70, 74, 174, 175].
Другой вид снижения защитных сил организма встречается при инфекционных заболеваниях птиц, например, инфекционной анемии цыплят или Болезни Марека, при которых повреждается сумка Фабрициуса, тимус или другие иммунокомпетентные органы.Это приводит к недостаточности иммунной системы. В таких условиях может возникнуть стафилококковая септицемия [1, 16, 152, 220, 223].
Форма проявления стафилококкоза в значительной степени зависит от возраста птицы. Острое, септическое течение заболевания встречается у цы-22 плят раннего возраста. У взрослой птицы преимущественно регистрируют хроническую инфекцию. При остром течении заболевания у птицы отмечают угнетение, диарею, воспаление суставов задних конечностей и крыльев с последующим развитием периартритов, дермального инфильтрата, а, иногда, гангрены кожи. При попадании возбудителя в кровь возникает септицемия и токсемия. Цыплята погибают в течении 2-3 суток. Смертность достигает 10 % [21, 79, 195, 224, 233].
При хроническом и подостром течении наблюдаются ухудшение аппетита, снижение производительности, снижение привесов, анкилоз суставов, артриты, дерматиты, воспаления тканей сережек и межчелюстного пространства. На неоперенных участках тела, особенно конечностей, обнаруживают гангренозно-геморрагические поражения, струпья, на месте которых позже образуются эрозии. В то же время могут отмечаться абсцессы. У цыплят регистрируют стафилококковый омфалит, который характеризуется воспалением пупочного кольца, образованием отека с цианотичным оттенком, очагами некроза [20, 73, 79].
Респираторную форму стафилококковой инфекции наблюдают у кур-несушек и петухов 6-10-месячного возраста [79, 234].
Поражение конечностей – одна из основных проблем у бройлеров. С появлением кроссов мясного направления продуктивности и селекции птицы с большей массой грудных мышц эти проблемы стали более распространенными. Некоторые диагностические лаборатории в своих докладах указывают, что S. aureus – самый характерный возбудитель, выделяемый из поврежденных конечностей и суставов у цыплят-бройлеров [152].
Гистологические исследования печени крыс при экспериментальном стафилококкозе свидетельствуют о развитии дистрофических и некротических изменений гепатоцитов, воспалительной инфильтрации портальных трактов и долек. В мезентеральных лимфатических узлах животных выявлены изменения структурно-функционального типа у лимфатического узла с промежуточного на компактный, увеличение площади корковой зоны за счет роста численной и объемной плотности фолликулов с герминативными центрами и без них [14, 61, 63, 122].
Так, например, по данным С. В. Цыгановой [177], у цыплят-бройлеров при септическом течении экспериментального стафилококкоза наблюдалось истощение, гипертрофия сердца и коронарных сосудов, фибринозный перикардит, регистрировали спайки внутренних органов, переполненный желчный пузырь, увеличенную печень глинистого цвета.
Предварительный диагноз на заболеваемость птицы стафилококкозом устанавливают на основании эпизоотологических данных, клинических проявлений болезни и патологоанатомических изменений, а заключительный – по результатам бактериологических исследований (выделение и идентификация возбудителя, определение его вирулентности). Для лабораторного исследования отбирают трупы больных птиц, эмбрионы, сердце, трубчатую кость и другие пораженные органы и ткани. Выделение стафилококков из патологического материала проводят на МСА (молочно-солевом агаре), ЖСА (жел-точно-солевом агаре), агаре Baird-Parker. Для подтверждения принадлежности выделенных культур к семейству Staphylococcacea используют тест на наличие каталазы.
Характер роста выделенных культур на элективных средах, морфология бактерий, способность ферментировать глюкозу в анаэробных условиях и наличие гемолитической активности позволяют подтвердить их принадлежность к роду Staphylococcus. Биопробу проводят на цыплятах суточного возраста путем внутримышечного или интраорбитального инфицирования; на белых мышах, которых инфицируют подкожно, или на кроликах, которых инфицируют внутрикожно. Патогенные штаммы стафилококков вызывают гибель 75-100 % цыплят в течение 3-5 суток после заражения. [20, 122, 143, 178].
Гематологическое и иммунологическое исследование
На 21-е сутки эксперимента у цыплят 4-й группы, не получавших в течение 7-ми дней никаких препаратов, после окончания курса антибиотикоте-рапии совсместно с экстрактом корня эхинацеи пурпурной на фоне отсутствия клинических признаков стафилококкоза были отмечены следующие изменения в бурсе Фабрициуса: в складках слизистой оболочки значительно увеличились размеры лимфоидных фолликулов за счет увеличения площади мозговой зоны (см. рис. 37). Корковая зона имела неодинаковую ширину не только в рядом расположенных фолликулах, но и в пределах одного фолликула. В большинстве фолликулов базальная мембрана образовывала выпячивания, которые, замыкаясь, формировали зоны образования новых фолликулов (см. рис. 38). Корковая и мозговая зоны равномерно заполнены лимфоцитами, среди которых определяются малые, средние и большие лимфоциты, лимфобласты, а также фигуры митоза. Такое состояние лимфоидных фолликулов соответствует достаточно высокому уровню антигензависимой имму-нореактивности органа. Морфологическим подтверждением этому предпо 105 ложению является наличие большого количества фолликулов, имеющих трансэпителиальный контакт с просветом бурсы Фабрициуса.
Как видно на рисунке 39 в покровном эпителии количество активно секретирующих клеток заметно меньше по сравнению с препаратами бурсы цыплят на 14-е сутки эксперимента, однако еще обнаруживаются единичные кистозноподобные полости.
Выявленные изменения свидетельствуют, что применение антибиотика флорона угнетает иммунопоэтическую функцию бурсы Фабрициуса, что сопровождается уменьшением количества лимфоидной ткани, приводящее к уменьшению размеров органа в целом. При этом не активируются железистые компоненты бурсы. Представленные в современной научной литературе данные о роли бурсопоэтинов дают основание говорить об угнетении регуля-торной функции бурсы при использовании взятого антибиотика – флорона.
Гистологическая характеристика селезенки при лечении экспериментального стафилококкоза флороном в комплексе с экстрактом корня эхинацеи пурпурной Селезенка – периферический орган иммунопоэза, обеспечивающий ан-тигензависимую пролиферацию и дифференциацию Т- и В-лимфоцитов, а также образование эффекторных клеток. Морфофункциональное состояние селезенки является показателем иммунореактивности организма, способности к формированию адекватного иммунного ответа антигенному воздействию. Функции биологического фильтра, а, в большей степени, – биологического контролера на пути тока крови, селезенка выполняет благодаря особенностям строения паренхимы (пульпы селезенки) и микроциркуляторного русла. Основу пульпы образует ретикулярная ткань. В зависимости от преобладания в ней форменных элементов, выделяют белую пульпу, «заселенную» лимфоцитами, и красную пульпу, содержащую все форменные элементы крови. Морфофункциональные изменения в органе в ответ на использованные в эксперименте воздействия: септическое воспаление, индуцированное Staphylococcus aureus, и воздействие флороном, как препаратом выбора для противомикробной терапии, а также сочетание этих факторов с препаратом эхинацеи пурпурной, мы оценивали по состоянию пульпы и микроциркуля-торного русла селезенки.
У цыплят 2-й группы, которым не проводили антибиотикотерапию, на фоне септического воспаления, к 14-м суткам эксперимента в селезенке со стороны микроциркуляторного русла имели место: венозный застой, сопровождающийся сладжами в пульпарных венах и венозных синусах, плазмор-рагия, а также признаки эндотелиальной дисфункции. Показателем продолжительности расстройств гемоциркуляции в органе является наличие внекле-точно расположенных кристаллов гематоидина, как в участках красной пульпы, пропитанных плазмой крови и продуктами лизиса эритроцитов, так и в составе внутрисосудистых клеточных агрегатов (см. рис. 40). Морфологические признаки функциональных нарушений эндотелия проявлялись набуханием эндотелиоцитов и вазоконстрикцией внутриорганных артерий (см. рис. 41) а также уменьшением и даже закрытием просвета эллипсоидных арте-риол, являющихся терминалями кисточковых артериол, на которые распадаются центральные артерии после выхода из лимфоидного узелка.
Селезенка цыплёнка 2-й группы, 14 сутки эксперимента. Гистопрепарат (гематоксилин и эозин). Обозначения: А(280): 1 – плазморрагия красной пульпы; 2 – кристаллы гематоидина; 3 – эллипсоидная артериолла, Б (40): сладжи в венозном русле селезенки с вк лю чениями гематоидина
Как иллюстрируют результаты гистологических исследований, отсутствие анастомозов между кисточковыми артериолами обусловливало недостаточность внутриорганного коллатерального кровообращения, что привело, в случае их закрытия, к ишемии, а, при длительном закрытии, – к некрозу пульпы. Такие участки мы наблюдали как на макроскопическом, так и на микроскопическом уровнях (см. рис. 42). На гистопрепаратах они определялись преимущественно в подкапсулярной зоне пульпы и характеризовались обеднением клеточными элементами. В некоторых из них отмечены очаги некрозов, где большинство лимфоцитов имеют пикнотизированные ядра, а ретикулярные клетки находятся в состоянии лизиса (см. рис. 43).
Гистологические исследования тимуса цыплят третьей группы (стафилококкоз + антибиотик)
Проведенные нами исследования свидетельствуют, что селезенка в условиях снижения патогенного воздействия культуры Staphylococcus aureus проявляла высокие адаптивные и пластические свойства, направленные на восстановление функции органа и поддержание иммунного статуса организма.
Исследования селезенки цыплят при использовании для лечения цыплят-бройлеров при экспериментальном стафилококкозе антибиотика флорона показали неоднозначные результаты в различные периоды после окончания антибиотикотерапии.
На 14-е сутки эксперимента в селезенке цыплят мы отмечали уменьшение гемолитичского и гемостатического эффектов. Внутрисосудистые клеточные агрегаты наблюдали единично в мелких пульпарных венах. В целом венозное русло, по морфологическим признакам, проявляло способность к выполнению коллекторной функции, что снизило уровень гипоксии тканей селезенки. На гистопрепаратах это, соответственно, проявлялось почти полным отсутствием кристаллов гематоидина, которые в незначительном количестве встречались локально в пульпе органа и просвете вен. При этом, мы обнаружили эффект влияния флорона на морфологию эритроцитов, что проявлялось наличием в сосудистой крови большого количества клеток округлой формы вместо овальной, свойственной птицам (см. рис. 48). В пульпе отмечали признаки стимуляции лимфопоэза. Белая пульпа превалировала над красной. В ее составе хорошо выражены Т- и В-зависимые зоны с высокой плотностью лимфоцитов. Количество и размер реактивных узелков больше по сравнению с группой цыплят аналогичного периода эксперимента, которым не проводилось лечение. Одновременно отмечали увеличение площади и плотности скоплений лимфоцитов вблизи кисточковых артериол, а также вдоль стенок венозного русла пульпы селезенки, что указывает на высокую активность миграции лимфоцитов как в селезенку, так и из нее в периферический кровоток (см. рис 49, 50).
Селезенка цыплёнка 3-й группы, 14 сутки эксперимента. Гистопре-парат (гематоксилин и эозин 100). Обозначения: А. 1 – красная пульпа; 2 – лим-фоидный узелок белой пульпы; 3 – его центральная артерия (косой срез); 4 – пери-артериальная зона; 5 – скопления лимфоцитов возле кисточковых артериол; Б . 1 – трабекулярная артерия; 2 – пульпарная артерия, 3 – пульпарная вена; трабеку-лярная ве на
На 21 сутки эксперимента, что соответствует 12-м суткам после прекращения антибиотикотерапии, падеж птицы снизился до 2,25 %, но, при этом, птица заметно отставала в росте. У большинства цыплят, выведенных из эксперимента, отмечали спленомегалию и множественные очаги некроза, имеющие на поверхности органа беловатый цвет (см. рис. 51А).
На гистопрепаратах отмечали обширные некрозы, как в белой, так и красной пульпе. Венозные сосуды заполнены клеточными конгломератами на стадии лизиса (см. рис. 51Б). Красная пульпа пропитана плазмой крови с большим количеством кристаллов гематоидина. В наиболее тяжелых случаях некроз охватывал пульпу на всей площади среза селезенки. При этом степень деструкции пульпы более выражена в области ворот органа. В этой части среза селезенки область некроза, составляющая примерно 1/3 его площади, уже утратила способность окрашиваться гистологическими красителями адекватно тинкториальным свойствам гистологических элементов, что обусловило отсутствие дифференцировки паренхимы органа на красную и белую пульпу (см. рис. 52). Среди элементов внутриорганного сосудистого русла наибольшие альтеративные изменения в очаге этого некроза мы наблюдали в кисточковых артериолах. Последние имели зияющий просвет, в котором, как правило, просматривалась клеточная масса отслоившегося эндотелия (см. рис. 53). На периферии селезенки очаги некроза также сопровождали арте-риолы, в просвете которых наблюдалась десквамация эндотелия. Данные наблюдения позволяют предположить, что именно артериолярная недостаточность, обусловленная функциональными нарушениями эндотелия (в этих сосудах специализированный высокий эндотелий) является пусковым механизмом нарушения тканевого гомеостаза.
Как видно на рисунке 54, в белой пульпе, наряду с некрозом клеток ретикулярной ткани, отмечали делимфотизацию путем апоптоза лимфоцитов. Этот процесс более показателен в лимфоидных узелках, где обнаруживаются лимфоциты на всех стадиях апоптоза, начиная с маргинации хроматина и заканчивая фрагментацией клеток и фагоцитозом апоптозных телец макрофагами (см. рис. 54).
Выявленные характеристики гистопрепаратов, в целом, обозначили, что применение препарата корня эхинацеи пурпурной (Echincea purprea) одновременно с антибиотиком флорон оказало положительное влияние на селезенку, при этом сохранилась тенденция отсроченного иммунодепрессив-ного эффекта после окончания антибиотикотерапии, нивелируемая эхинаце-ей (21-е сутки эксперимента).
На 14-е сутки эксперимента паренхима селезенки цыплят, получавших препарат корня эхинацеи пурпурной (Echincea purprea) одновременно с антибиотиком, отличалась на гистопрепаратах высокой степенью заселения Т- и В-зависимых зон белой пульпы, хорошо выраженными реактивными центрами по ходу пульпарных артерий, отсутствием кристаллов гематоидина в красной пульпе (см. рис. 55). Значительные скопления последних обнаруживали в просвете пульпарных вен, что указывает на выведение из селезенки продуктов лизиса эритроцитов, образовавшихся в более ранние сроки развития заболевания. Венозные сосуды микроциркуляторного русла умеренно кровенаполнены, без сладжей и признаков внутрисосудистой агрегации форменных элементов крови, что можно наблюдать на рисунке 55.
Гистологическая характеристика селезенки при лечении экспериментального стафилококкоза антибактериальным препаратом в комплексе с экстрактом корня эхинацеи пурпурной
После окончания курса антибиотикотерапии лимфопоэтическая функция бурсы Фабрициуса проявляла тенденцию к восстановлению. Увеличивался объем лимфоидной ткани в органе. Однако, в корковой зоне большинства фолликулов, которая рассматривается как антигеннезависимая, имели место признаки нарушения дифференцировки В-лимфоцитов, проявляющиеся повышенным их апоптозом и, как следствие, появлением дырчатых просветлений подобных картине «звездного неба». На наш взгляд, это может быть результатом нарушения гуморальной регуляции процессов цитодиффе-ренциации вследствие угнетения антибиотиком железистых компонентов бурсы Фабрициуса. В научной литературе роль эозинофилов в апоптозе лимфоцитов при их отрицательной и положительной селекции в тимусе и бурсе Фабрициуса практически не освещается.
Необходимо отметить, что именно в группе цыплят, где применяли флорфеникол, мы наблюдали делимфотизацию мозгового вещества и повышенный апоптоз лимфоцитов в корковом веществе долек тимуса и узелков бурсы Фабрициуса.
Морфофункциональные изменения в селезенке в ответ на использованные в эксперименте воздействия: септическое воспаление, индуцированное Staphylococcus aureus, воздействие флороном, как препаратом выбора для противомикробной терапии, а также сочетание этих факторов с препаратом эхинацеи пурпурной, мы оценивали по состоянию пульпы и микроциркуля-торного русла органа. Следует отметить, что селезенка – периферический орган иммунопоэза, обеспечивающий антигензависимую пролиферацию и дифференциацию Т- и В-лимфоцитов, а также образование эффекторных клеток.
Согласно существующему представлению реактивные (герминативные) центры формируются в ответ на антигенное воздействие в уже имеющихся в селезенке первичных (без светлых центров) узелках. По имеющимся многочисленным научным исследованиям, у цыплят морфогенез узелков белой пульпы завершается только к 20-м суткам, а у некоторых пород даже к 30-м суткам постэмбрионального онтогенеза. В связи с этим, мы рассматриваем описанные нами узелки, как реактивные центры, формирующиеся первично, мантийная и маргинальные зоны будут формироваться вокруг них в дальнейшем. Такая последовательность морфогенеза узелков белой пульпы, по нашему мнению, является показателем высокой иммунореактивности органа в ответ на интенсивное антигенное воздействие, и возможно присуща молодым организмам в период морфофункционального становления органа. В пользу этого свидетельствует обнаружение таких узелков на разных стадиях формирования.
Проведенные нами исследования свидетельствуют, что у цыплят, которым применяли комплексное лечение, селезенка в условиях снижения патогенного воздействия культуры Staphylococcus aureus проявляла высокие адаптивные и пластические свойства, направленные на восстановление функции органа и поддержание иммунного статуса организма.
Исследование селезенки цыплят при использовании для лечения экспериментального стафилококкоза антибиотика флорона показало неоднозначные результаты в различные периоды после окончания антибиотикотерапии.
Венозное русло, по морфологическим признакам, проявляло способность к выполнению коллекторной функции, что снизило уровень гипоксии тканей селезенки. На гистопрепаратах это, соответственно, проявлялось почти полным отсутствием кристаллов гематоидина, которые в незначительном количестве встречаются локально в пульпе органа и просвете вен. При этом мы обнаружили эффект влияния флорона на морфологию эритроцитов, что проявлялось наличием в сосудистой крови большого количества клеток округлой формы вместо овальной, свойственной птицам.
На 21 сутки эксперимента, что соответствует 12-м суткам после прекращения антибиотикотерапии, падеж птицы снизился до 2,25 %, но при этом птица заметно отставала в росте. У большинства цыплят, выведенных из эксперимента, отмечали спленомегалию и множественные очаги некроза, имеющие на поверхности органа беловатый цвет
Мы обратили внимание, что в воротах селезенки у всех исследованных цыплят более высокая плотность расположения лимфоидных узелков. Кис-точковые артериолы являются дистальными ветвями центральных артерий после выхода за пределы узелков, и, соответственно, их количество и плотность расположения в этой зоне также больше, чем на периферии органа. Данная картина дает основание полагать, что при определенных условиях развитие обширных некрозов в селезенке может начинаться именно от ворот селезенки, архитектоника артериолярного русла и функциональное состояние его эндотелия является определяющим фактором в динамике развития некрозов.
Таким образом, проведенные нами исследования свидетельствуют о высокой эффективности препарата «Флорон» по отношению к Staphylococcus aureus. В ранние сроки после завершения антибиотикотерапии гистологическая картина селезенки характеризуется отсутствием в красной пульпе ге-моррагий и признаков лизиса эритроцитов, в венозной части микроциркуля-торного русла – сладжей и стазов, что свидетельствует о восстановлении реологических свойств крови. При этом полученные нами результаты гистологических исследований дают основание предположить вероятность отсроченного иммунодепрессивного действия антибиотика флорфеникола на им-мунокомпетентные органы цыплят, наблюдаемом нами на 13-е сутки после окончания его применения. Наиболее выражено его влияние в селезенке с проявлением значимых деструктивных изменений, которые могут носить необратимый характер и стать причиной атрофии органа. Требует дальнейшего изучения вопрос: является ли флорфеникол индуктором некроза ретикулярных клеток и апоптоза лимфоцитов или он усугубляет на фоне острого септического воспаления развитие эндотелиальной дисфункции, которая становится причиной глубоких метаболических расстройств и некробиотических изменений, обусловленных тканевой гипоксией.
Отсутствие в диффузных скоплениях лимфоцитов признаков образования бластных форм и их пролиферации, а так же клеточной дегенерации могут являться показателем повышенной миграции клеток из центральных органов иммуногенеза в селезенку, но при этом имеет место нарушение рецеп-торноопосредованной внутрипульпарнной миграции лимфоцитов с формированием Т- и В-зависимых зон и последующей клональной дифференцировкой клеток лимфоидного ряда. На наш взгляд, данные нарушения могут быть следствием влияния тканевой гипоксии, обусловленной дисфункцией эндотелия кровеносных сосудов.