Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Таксономическое положение и история изучения бактерий Pseudomonas aeruginosa...
1.2. Факторы вирулентности Pseudomonas aeruginosa...
1.3. Распространение Pseudomonas aeruginosa в природе, источники и пути заражения животных и человека ...
1.4. Чувствительность Pseudomonas aeruginosa к антибактериальным препаратам ...
1.5. Заключение по обзору литературы 37
Собственные исследования 39
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Методы индикации и идентификации Pseudomonas aeruginosa... 3940
2.2. Методы изучения патогенных свойств Pseudomonas aeruginosa...
2.3. Методы изучения антагонистических свойств бактерий ...
2.4. Методы изучения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам 2.5. Методы статистической обработки результатов исследований 50
Глава 3. Результаты исследований
3.1. Результаты исследований морфологии колоний бактерий Pseudomonas aeruginosa
3.2. Результаты индикации и идентификации Pseudomonas aeruginosa, выделенных из сырья и пищевых продуктов
3.3. Результаты изучения патогенных свойств Pseudomonas aeruginosa...
3.4. Результаты изучения антагонистических свойств бактерий ...
3.5. Результаты изучения чувствительности к антибактериальным препаратам
3.5.1. Результаты изучения чувствительности Pseudomonas aeruginosa к антибиотикам
3.5.2. Результаты изучения антибактериальной активности желчи и лекарственных растений
3.5.3. Результаты изучения чувствительности Pseudomonas aeruginosa к дезинфицирующим препаратам 65656971
Обсуждение
Результатов 74
Выводы 87
Практические предложения...приложения 8990
Список литературы 90
- Распространение Pseudomonas aeruginosa в природе, источники и пути заражения животных и человека
- Чувствительность Pseudomonas aeruginosa к антибактериальным препаратам
- Методы изучения антагонистических свойств бактерий
- Результаты изучения антагонистических свойств бактерий
Распространение Pseudomonas aeruginosa в природе, источники и пути заражения животных и человека
Патогенность – потенциальная способность микроорганизмов вызывать инфекционный процесс, для характеристики степени патогенности определенного штамма микроорганизмов предложен термин вирулентность(Авакян А.А., 1972). Вирулентность (лат. virulentus – ядовитый) характеризует индивидуальное качество патогенных штаммов микроорганизмов, способность реализовать свойства патогенности при определенных условиях заражения животных. Свойства и факторы микроорганизмов, связанные с патогенным действием, довольно разнообразны. Выделяют три наиболее важные группы факторов патогенности (вирулентности): адгезивность – продукция антигенов адгезии, с помощью которых бактерии прикрепляются к эпителиальным клеткам макроорганизма; инвазивность – способность микроорганизмов преодолевать защитные приспособления организма и размножаться in vivo; токсигенность – способность микроорганизмов продуцировать вещества, нарушающие постоянство внутренней среды организма, путем изменения метаболических функций (Петровская В.Г., 1967; Сидоров М.А., 1980; Езепчук Ю.В., 1985). Особенностью псевдомонад является наличие широкого спектра факторов вирулентности (Bodey G.RP. et al., 1983; Rocha C.L. et al., 2003; Scharmann W. 1976). Адгезия P. aeruginosa к абиотическим поверхностям обусловлена неспецифическими взаимодействиями (например, за счет разницы заряда), адгезия к живым тканям осуществляется путем контакта с рецепторами эукариотической клетки (Езепчук Ю.В.,1985; Малышева Э.Ф., 1988; DholakiaP.M., 1985). Сравнительное электронно-микроскопическое исследование штаммов P. aeruginosa показало, что клетки вирулентных штаммов имеют слизеподобную капсулу, в которой различимы два слоя – внутренний ригидный, тесно связанный с клеточной стенкой, и наружный, более тонкий, гомогенный. На поверхности наружного слоя были обнаружены множественные мелкие шаровидные образования (Дзюбак С.Т., 1983). Данные образования определяют адгезивные свойства, обеспечивающие прикрепление бактерий к различным субстратам. Клетки авирулентных штаммов слизеподобной капсулой не обладают и имеют типичную для большинства грамотрицательных бактерий структуру.
В присутствии очищенного полисахарида слизи адгезивные свойства мукоидных штаммов P.aeruginosa повышаются на 30-50 % (Ramphai R., 1985). Экстрацеллюлярная слизь псевдомонад представляет собой макромолекулярный комплекс, покрывающий поверхность клетки, легко выделяющийся во внешнюю среду. Слизистое вещество P.aeruginosa было выделено путем осаждения этанолом с последующей гель-фильтрацией и ионообменной хроматографией на целлюлозе, содержало преимущественно углеводный компонент и небольшое количество белка (Adam M., 1971). В составе полисахарида обнаружены рамноза, глюкоза, манноза, глюкозамин, галактозамин, глюкуроновая кислота. В значительном количестве в полисахариде обнаружены N- и О-ацетильные группировки (Atic M., 1968). Химический состав слизи вирулентных и авирулентных штаммов P.aeruginosa различен (Hingst V., 1987; Morihapa K., 1963, 1965). Продукция слизи является одним из характерных видовых признаков псевдомонад (Савицкая К.И. и соавт., 1981). Слизь придает характерную вязкость бульонным культурам и колониям мукоидных штаммов. Электронно-микроскопическое исследование показало, что слизь гелеобразной консистенций, окружающая неравномерным слоем бактериальную клетку мукоидных штаммов псевдомонад, благодаря непрочным связям с клеточной стенкой диффундирует в окружающую среду. При культивировании псевдомонад наличие в питательной среде серосодержащих соединений влияет на продукцию слизи, ответственным компонентом слизи за токсигенные и антигенные свойства является гликолипопротеид (ГЛП) (Bartell P.F.,1968; Bartell P.F. et al., 1968). Экстрацеллюлярная слизь псевдомонад наряду с капсулами и капсулоподобными образованиями относится к группе факторов патогенности, выполняющих функцию защиты клеток от фагоцитоза (Езепчук Ю.В.,1985). Штаммы псевдомонад продуцируют фимбрии или пили – выросты нитевидной формы, расположенные на полюсах бактериальной клетки в количестве 2–12 на каждом полюсе диаметром 5,2 нм, длиной 2,5 мкм, состоящие из белковых субъединиц с молекулярной массой 15000–18000, содержащие свыше 50% гидрофобных аминокислот. У псевдомонад обнаружено два типа пилей: полярные, тонкие выросты и неполярные более толстые пили, с которыми связывают передачу плазмид лекарственной резистентности. С помощью электронной микроскопии устоновлено, что пили расположены перитрихиально на наружной мембране стенки в количестве от 1 до 60 на клетку, значительно меньше, чем у Е.coli. Длина пилей 6 нм. Связи между пилеобразованием и вирулентностью штаммов, а также связи между наличием пилей и О-серогруппами или иммунотипами не установлено. Вирулентность Р. аeruginosa определяется в основном внеклеточной слизью, экзотоксином А и другими экзопродуктами метаболизма (Костюкова Н.Н., 1991; Афонин Э. А., 1999; Борисова O.K. и соавт., 1983; Гвоздяк Р.И., 1987; Николаева Н. В., 2011).
Инвазивные свойства P. aeruginosa обусловлены протеолитическими ферментами, которые относятся к группе факторов патогенности, способных деполиметризовать субстрат, препятствующий проникновению и распространению возбудителя (Езепчук Ю.В., 1977,1985). Для локального продвижения возбудитель деградирует ткани макроорганизма с помощью ферментов (протеазы и фосфолипазы), а также системы секреции III, которая может доставлять синтезированные токсины и ферменты непосредственно в эукариотическую клетку (Эль-Базза, 1987; Акатова Н.С.,1975; Pace J.L. et al., 2005; Акатова Н.С., 1975; Pasmans F. et al., 2012) . Протеолитические ферменты псевдомонад связаны с патогенностью самого возбудителя и действуют как агрессины, подавляя функцию иммунной системы и увеличивая инвазию бактерий. На этапе локальной инвазии происходит размножение возбудителя и достижение количества, достаточного для системной инфекции, характерным механизмом для этой стадии является образование биопленки. Отмечено, что снижается вирулентность микроорганизмов, включается большая группа механизмов, направленных на защиту от иммунной системы и стрессовых факторов, происходит распространение бактерий по всему организму, биопленка диспергируется и разносится с кровотоком (табл. 4).
Чувствительность Pseudomonas aeruginosa к антибактериальным препаратам
Чувствительность микроорганизмов к желчи и экстрактам растения изучали методом диффузии в агар (Навашин С. М., Фомина И. П., 1982). Для приготовления суспензии использовали суточную культуру микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa, выросших на плотных питательных средах. Суспензию наносили пипеткой на поверхность чашки Петри с МПА в объеме 1-2 мл, равномерно распределяли по поверхности стерильным шпателем. Приоткрытые чашки подсушивали при комнатной температуре в течение 10-15 мин. В плотной питательной среде пробойником делали отверстия (лунки). В лунки заливали медицинскую консервированнню желчь (ООО «Самсон-Мед», Санкт-Петербург) и экстракт растения (Японская жимолость, коптис китайский, шлемник байкальский). в различных концентрациях. Чашки Петри культивировали в термостате при 37 С в течение 24 ч. Результаты учитывали по наличию или отсутствию зон задержки роста культур вокруг лунок.
При изучении чувствительности к антибиотикам для приготовления суспензии использовали 18-ти часовые культуры микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa, выросших на плотных питательных средах. Суспензию наносили пипеткой на поверхность чашки Петри с МПА в объеме 1-2 мл, равномерно распределяли по поверхности стерильным шпателем, после чего удаляли избыток суспензии пипеткой. Приоткрытые чашки подсушивали при комнатной температуре в течение 10-15 мин. Аппликацию дисков проводили с помощью стерильного пинцета. Непосредственно после аппликации дисков чашки Петри помещали в термостат кверху дном и культивировали при 37 С в течение 24 ч. Диаметр зон задержки роста измеряли с точностью до 1,0 мм. При измерении зон задержки роста ориентировались на зону полного подавления видимого роста. Метод позволяет определять чувствительность исследуемой культуры микроорганизмов к нескольким антибиотикам одновременно. К недостаткам можно отнести невозможность применения метода в случае, если антибиотики слабо диффундируют в агар (аминогликозиды). При определении чувствительности микроорганизмов к антибиотикам с помощью «Е-теста» использовали полоску, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной. В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской «Е-тест» получали значение минимальной подавляющей концентрации (МПК). При изучении чувствительности к антибиотикам с применением экспресс-теста «HexaDisc», представляют собой набор из 6 одиночных дисков, радиально прикрепленных к центру ("ромашка"). Комбинации антибактериальных препаратов в гексадисках составлены с учетом Методических указаний («Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» МУК 4.2.1890-04).
Для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам макрометодом серийных разведений 0,5 мл рабочего раствор антибиотика вносили в пробирку, содержащую 0,5 мл 0,7 %-ного МПА. Процедуру повторяли для приготовления ряда необходимых разведений. Для инокуляции использовали взвесь микроорганизмов – 106 КОЕ, по 0,1 мл каждого разведения высевали в чашки Петри на поверхность плотной питательной среды, культивировали при 35 С в течение 24 ч. Минимальную подавляющую концентрация (МПК) определяли по наименьшей концентрации антибактериального препарата, подавляющей видимый рост микроорганизма. При использовании микрометода исследуемую культуру микроорганизмов (106 КОЕ) вносили в лунки планшета, содержащие антибиотики, культивировали при 35 С в течение 24 ч. Учет результатов проводили спектрофотометрически, сравнивая рост микроорганизмов в лунке, содержащей антибиотик, с отрицательным контролем. Преимуществом микрометода является высокая производительность и возможность длительного хранения планшет.
При использовании метода серийных разведений в агаре исследуемую культуру микроорганизмов (104 КОЕ) высевали на чашки Петри с агаром, содержащим последовательные разведения антибиотика. Параллельно для контроля роста производили посев на агар, не содержащий антибиотики, культивировали при 35 С в течение 24 ч, затем определяли МПК препарата.
Методы определения чувствительности к дезинфицирующим средствам. Исследования по устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам проводили в соответствии с методическими указаниями «О порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики» (М., 1987), «Проведение дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора» (М., 2002).
При оценке чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующим средствам на первом этапе исследования проводили методом диффузии в агар (Вашков В. И., 1956). В плотной питательной среде пробойником делали отверстия (лунки). В них заливали дезинфицирующее средство в различных концентрациях, а поверхность агара контаминировали суточными культурами тест-микроорганизмов. Чашки Петри культивировали в термостате при 37 С в течение 2 суток. Результаты учитывали по наличию или отсутствию зон задержки роста культур вокруг лунок после культивирования. Наряду с общепринятым методом диффузии в агар, нами были апробированы «Дип-слайды», предназначенные для бактериологического исследования поверхностей. При исследовании полимерную пластину слайда, покрытую плотной питательной средой, плотно прижимали к поверхности, а затем помещали в контейнер и культивировали при 37 С 18-24 ч. При бактериологическом контроле качества дезинфекции определяли наличие на поверхностях обеззараживаемых объектов жизнеспособных клеток санитарно-показательных микроорганизмов-бактерий группы кишечной палочки (Escherichia, Citrobacter, Enterobacter), S. aureus, S. epidermatis, S. saprophiticus, микобактерий или спорообразующих аэробов рода Bacillus. Пробы отбирали стерильными ватно-марлевыми тампонами, смоченными в стерильном нейтрализующем растворе или воде. Участки площадью 10х10 см тщательно протирали до полного снятия с поверхности всех имеющихся на ней загрязнений, после чего тампоны помещали в пробирку с нейтрализующей жидкостью. Для индикации E. coli 0,5 мл центрифугата высевали в пробирки со средой Кесслера. Посевы культивировали 12-18 ч при 37 С. Для индикации стафилококков 0,5 мл центрифугата высевали в 5 мл мясо-пептонного бульона с 6,5 % хлористого натрия. Через 24-48 ч культивирования посевов при 37 С делали пересевы бактериологической петлей на 8,5% солевой мясо-пептонный агар. Посевы выдерживают в термостате 24-48 ч при 37 С. Из выросших культур для подтверждения роста стафилококков готовили мазки, окрашивали по Граму и микроскопировали. Для индикации спорообразующих аэробов из центрифугата каждой пробы делали посевы в одну пробирку с мясо-пептонным бульоном (МПБ) и на две чашки с мясо-пептонным агаром (МПА). Посевы культивировали 24-48 ч при 37 С.
Методы изучения антагонистических свойств бактерий
При изучении контаминации бактериями пищевых продуктов использовали три способа: способ I – серийные разведения в 0,9 % NaCl; способ II – серийные разведения в 0,7 % МПА; способ III – посев на тест-пластины «Petrifilm». При учете контаминации бактериями пищевых продуктов в исследованных пробах фарша из мяса птицы КМАФАнМ составило 72х103 КОЕ/г, фарша из свинины – 84х105 КОЕ/г, фарша из говядины – 90х105 КОЕ/г, фарша из мяса рыбы – 26х103 КОЕ/г; креветок – 31 х 103 КОЕ/г. Определение контаминации бактериями пищевых продуктов показало, что КМАФАнМ пищевых продуктов, определенное тремя способами, существенно не отличалось, однако применение в качестве раствора для разведения 0,7 % раствора МПА и тест-пластин «Petrifilm» позволило сократить расход питательных сред, стерильной бактериологической посуды и времени проведения анализа. При первичной идентификации изолятов на среде «Hi Chrom Medium» установлено, что из пищевого сырья и продуктов выделены 43 культур микроорганизмов, из которых 27 культур отнесены к семейству Pseudomonaceae: P.aeruginosa 19 (44, 3 %); P. fluorescens 5 (11,6 %); P. putida 3 (7,0 %); 16 – семейства Enterobactericeae: C. freundii 4 (9,3%); E. aerogenes 4 (9,3 %), P. mirabilis 5 (11,6 %), E. tarda 3 (7,0 %) . При изучении видового состава бактерий на среде «Cetrimide agar» выделено и идентифицировано 19 культур микроорганизмов P.aeruginosa (44, 2 %), из числа которых 13, 9 % культур были выделены из продукции птицеводства; 7,0 % – фарша свинины; 11,6 % – фарша говядины; 7,0 % – мяса рыбы; 4,6 % – креветок.
Следующим этапом исследований явилось изучение факторов вирулентности P. aeruginosa. Особенностью P. aeruginosa является наличие широкого спектра факторов вирулентности (Bodey G.RP. et al., 1983; Rocha C.L. et al., 2003; Scharmann W. 1976). Адгезия P. aeruginosa к абиотическим поверхностям обусловлена неспецифическими взаимодействиями (например, за счет разницы заряда), адгезия к живым тканям осуществляется путем контакта с рецепторами эукариотической клетки (Езепчук Ю.В.,1985; Малышева Э.Ф., 1988; DholakiaP.M., 1985). Токсины и токсические продукты P. aeruginosa дифференцируются на экзо- и эндотоксины. Экзотоксины представлены продуктами жизнедеятельности с широким спектром активности: экзотоксин А – нарушает организацию матрицы белкового синтеза; экзотоксин S – вызывает патологические процессы в легких; цитотоксин – повышает проницаемость клеточных мембран, что приводит к структурному изменению клеток, гемолизины – приводят к развитию некротических поражений печени и легких (Езепчук Ю.В., 1985; Мавзютов А.Р., 2001; Тимченко Н.Ф., 2004; Павлова И. Б., Ленченко Е.М., 2007; Волкова Е.А., 2011; Smith H.R., Scotland S.M., Willshaw G.A. et al., 1988; Моrаn А.Р., 1995; Sears C.X., Kaper J.B., 1996; Fekete P.Z., Gerardin J., Jacquemin E., 2002). Изучение токсигенных свойств P. aeruginosa проводили с использованием лабораторных моделей «кожнореактивный фактор», «эмбрионы птиц», «проницаемость сосудов». При оценке наличия токсина в тесте «кожнореактивный фактор» исследуемый материал в объеме 0,1 мл вводили внутрикожно в участки депиляции кожи беспородным белым крысам, через 24 ч учитывали результаты изменений кожного покрова (положительный результат – показатель коэффициента толщины кожи (мм), К1,6). Установлено, что показатели коэффициента средних величин толщины кожи колебались в пределах от 1,7±1,8 до 1,9±1,12. При оценке наличия токсинов с применением модели «эмбрионы птиц» 0,2 мл надосадочной жидкости вводили в аллантоисную оболочку 14-суточных эмбрионов уток «Пекинская» и помещали в термостат при 37 С. При учете жизнеспособности эмбрионов в овоскопе установили, что через 24 ч после заражения летальность эмбрионов составила 100,0 %. Динамика развития патологических процессов сопровождалась развитием признаков септицемии, при наличии бактериальной эмболии и нарушения кровообращения в тканях и органах дыхательной, сердечно-сосудистой системы наблюдали обширные кровоизлияния в зародышевых оболочках, наличие гиперемии, гемоциркуляторных изменений, развитие перикардита, серозно-фибринозного аэросаккулита, перигепатита, катарально-фибринозного энтероколита, гиперплазии селезенки. При витальном исследовании продукции токсинов с применением лабораторной модели «проницаемость сосудов» исследуемую жидкость вводили интраназально 5-суточным цыплятам породы «Белый леггорн», через 24 ч внутривенно вводили раствор красителя «синего Эванса», не проникающего через неповрежденный эндотелий кровеносных сосудов, результаты оценивали, сравнивая разность массы легких опытных и контрольных животных – тест «проницаемость сосудов». При наличии токсинов бактерий коэффициент проницаемости кровеносных сосудов колебался в пределах от 1,09±0,11 до 1,24±0,14. Действие токсинов P. aeruginosa на ткани и органы цыплят и лабораторных мышей характеризовалось преобладанием процессов, развивающихся по типу реакции гиперчувствительности замедленного типа, токсической дистрофией кардиомиоцитов, кровоизлияниями и застойной гиперемией, лимфоидно-клеточной инфильтрацией рыхлой волокнистой соединительной ткани, периваскулярным отеком тканей, образовавшимся вследствие выхода плазмы и форменных элементов крови, диссеминированным тромбозом. В тимусе отмечали признаки расстройства кровообращения, атрофические процессы, акцидентальную трансформацию, характеризующуюся уменьшением долек, исчезновением коркового вещества, перемещением лимфоцитов в мозговое вещество и формированием кист. На начальном этапе экспериментальных исследований (24-32 ч после введения токсина) признаки скопления значительного количества серозно-геморрагического экссудата в просвете желудочно-кишечного тракта, сочетание общей сосудистой реакции с дистрофическими и некротическими изменениями собственного слоя слизистой оболочки, лимфоидной инфильтрацией ворсинок тонкого отдела кишечника28, скоплением плазматических клеток и экссудативно-инфильтративными процессами тканей и органов иммунной, сердечно-сосудистой, дыхательной системы, лейкоцитарной инфильтрацией и пролиферацией фибробластов перибронхиальной и периваскулярной рыхлой волокнистой соединительной ткани.
Результаты изучения антагонистических свойств бактерий
При изучении чувствительности P. aeruginosa к действию экстрактов лекарственных растений применяли метод диффузии в агар. На поверхности агара формировали лунки диаметром 6,0±0,1 мм, в которые вносили 0,05 мл исследуемого раствора активного экстракта растения. По окончании культивирования определяли диаметр зоны задержки роста. В результате эксперимента было установлено, что для P. аeruginosa антибактериальной активностью обладали Коптис китайский (Coptis chinensis) – 11,5±0,97 мм, Шлемник байкальский (Scutellariabaicalensis Georgi) – 7,0±0,59 мм; для энтеробактерий (E. coli, C. freundii, Y. enterocolitica) – Японская жимолость (Honeysuckle aqueous) – 8,0±0,64 – 10,0±0,83 мм, Коптис китайский (Coptis chinensis) – 11,0±0,91 – 13,0±1,1, Шлемник байкальский (Scutellariabaicalensis Georgi) – 9,0±0,75 – 11,0±0,91, Чай Пуэр (Var.Assamica) – 9,5±0,79 – 10,0±0,83. При изучении чувствительности микроорганизмов к антибиотикам в сочетании с экстрактом растения Honeysuckle aqueous установлено, что при сочетанном действии антибиотиков и экстрактов Honeysuckle aqueous диаметр зоны задержки роста (мм) P. аeruginosa к ципрофлоксацину составил 25,50±2,12; цефтазидиму – 24.0±2,00; гентамицину – 18,50±1.54.
При исследовании чувствительности к дезинфицирующим препаратам микроорганизмов использовали методы диффузии в агар и серийных разведений. Для контроля качества дезинфицирующих препаратов применяли пластины «Дип-слайд» («Oxoid», Англия). Для изучения чувствительности микроорганизмов, выделенных из сырья и пищевых продуктов, использовали препарат «Дезант», содержащий 1,6,3,8-диметано-1,3,6,8-тетраазациклодекан – четвертичное аммониевое соединение (ЧАС) по активному действующему веществу. Установлено, что бактерицидное действие ЧАС связано с дезактивацией ферментов, денатурацией клеточных белков и разрушением оболочки бактериальных клеток. На основании результатов исследований установлено, что зоны задержки роста микроорганизмов P. аeruginosa составляли 7,20±1,34 – 9,90±2,33 мм; P. putida – 8,80±1,36 мм; C.freundii– 17,90±2,11мм; E. аerogenes – 18,20±1,55 мм. При оценке чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующему препарату «Дезант», наряду с общепринятым методом диффузии в агар, нами были апробированы тест-пластины «Дип-слайд», предназначенные для бактериологического исследования поверхностей. «Дип-слайды» содержали следующие питательные среды: Цетримидный агар («Cetrimide agar») – селективный агар с цетримидом для выделения P. aeruginosa в различных образцах; Цистин-лактозный агар («CLED») – среда для выделения и дифференциации возбудителей (E.coli, Klebsiellaspp., Proteuss pp., Salmonella spp., Ps. aeruginosa, E. fuecalis, S. aureus, Carynebaсteria, Lactobacillus); Мак Конки («Mac Conkey») – среда для выделения и дифференциации колиформных бактерий и возбудителей кишечных инфекций в пищевых продуктах. Метод индикации и идентификации псевдомонад с использованием пластин «Дип-слайдов» позволял сократить время проведения эксперимента (поскольку посев на несколько сред происходит одновременно), расход питательных среды и расходные материалы на этапе первичного посева, облегчал транспортировку проб в лабораторию. Метод прост в исполнении, информативен, за счет комбинаций дифференциально-диагностических питательных сред, которые позволяли одновременно определить количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), псевдомонады и энтеробактерии. «Дип-слайды» возможно использовать для проведения контроля дезинфекции.
На основании результатов собственных исследований установлено, что для дифференциации P.aeruginosa эффективной является среда «Cetrimide agar», которая обладает ростообеспечивающими свойствами, ингибирует рост грамположительной бактерий, позволяет дифференцировать P.aeruginosa от бактерий, чувствительных к четвертичным аммониевым соединениям, специфичность среды – 94,8 %. Из числа культур микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa, выделенных из пищевого сырья и продуктов, 79,8% чувствительны к антибиотикам группы -лактам (цефоперазон, цефотаксим, цефепим, азтреонам, имипенем, меропенем); 51,8% – аминогликозидам (гентамицин, тобрамицин, нетилмицин), 88,4% – хинолонам (норфлоксацин, пефлоксацин, ципрофлоксацин, левофлоксацин, ломефлоксацин); в то время как 58,1 % устойчивы к хлорамфениколу, тетрациклину, доксициклину. Установлена антиадгезивная активность 1,0 – 4,0 % растворов желчи и антибактериальная активность лекарственных растений: Коптис китайский, Шлемник байкальский, Японская, Чай Пуэр. Исследование контаминированных бактериями P. aeruginosa жидкостей и поверхностей эффективно при применении пластин «Дип-слайд», т.к. позволяет сократить на этапе первичного посева время проведения эксперимента, расход питательных сред и расходные материалы на этапе первичного посева, за счет комбинаций дифференциально-диагностических питательных сред для количественного учета и дифференциации псевдомонад от сходных видов грамотрицательных бактерий.