Содержание к диссертации
Введение
CLASS ГЛАВА I Обзор литературы 1 CLASS 0
1. Аутофлуоресценция биологических объектов. Биологические и медицинские аспекты 10
2. Общие понятия о системном анализе, управлении и обработки информации в биологических системах позиций динамики адаптационных механизмов 44
2.1. Адаптация 44
2.2. Общие понятия теории автоматического управления и регулирования .,.49
2.3. Терминология и методы системного анализа 50
3. Лазерофорез биологически активных веществ 55
3.1.. Физические основы лазерного излучения 55
3.2. Биологические эффекты лазерного излучения 58
3.3. Определение лазерофореза 62
3.4. Биологически активное вещество - янтарная кислота 3.4.1. Физиологические эффекты янтарной кислоты 62
3.4.2. Системные эффекты янтарной кислоты 73
ГЛАВА II. Объект и методы исследования 75
1. Объект исследования 75
2. Методы исследования
2.1. Общеклинические методы 76
2.2. Биохимические методы
2.2.1. Окислительная и антиокислительная активность 76
2.2.2. Система свертывания и противосвертывания 76
2.2.3. Гормоны имедиаторы 76
2.3. Специальные инструментальные методы 77
2.3.1. Рео граф ия 77
2.3.2. Спектрофлуориметрия 2.3.3. Устройство для лазерофореза 83
23.4. Янтарная кислота 84
2,3.5. Лазерная допплеровская флоуметрия 84
3. Статистическая обработка 85
ГЛАВА III Результаты собственных исследований и их обсуждение 86
1. Стандартизация работы двухканального УФ-био спектрофотометра с кварцевым и стекловолоконным световодами 86
1.1. Доработка спектрофотометра 86
1.2. Оценка спектров флуоресценции биологических объектов
1.2.1. Свечение биологических объектов 87
1.2.2. Исследование спектров флуоресценции медицинских пиявок 89
1.2.3. Исследование спектров свечения белых беспородных крыс 90
1.2.4. Оценка киральности различных участков тела человека 90
1.2.5. Оценка особенностей спектров аутофлуоресценции лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов 91
2. Анализ технологий определения эффективности лазерофореза биологически активных веществ 100
2.1. Общеклинические и инструментальные методы 100
2.2. Лабораторные, биохимические методы 101
2.3. Специальные инструментальные методы
1 3. Механизмы воздействия янтарной кислоты в эксперименте 107
4. Аутофлуоресценция живых тканей при воздействии лазерофореза янтарной кислоты 109
4.1. Изменение аутофлуоресценции покровных тканей у спортсменов с психоэмоциональным стрессом при воздействии лазерофореза янтарной кислоты 109
4.2. При беременности 111
4.2.1. Показатели центральной гемодинамики 111
4.2.2. Показатели микроциркуляции 112
4.2.3. Показатели аутофлуоресценции
4.3. При сосудистых осложнениях сахарного диабета 114
4.3.1. Показатели центральной гемодинамики 115
4.3.2. Показатели микроциркуляции 116
4.3.3. Показатели аутофлуоресценции 117
Заключение 119
Выводы 127
Практические рекомендации 128
Список использованной литературы 129
Приложения 1
- Аутофлуоресценция биологических объектов. Биологические и медицинские аспекты
- Окислительная и антиокислительная активность
- Стандартизация работы двухканального УФ-био спектрофотометра с кварцевым и стекловолоконным световодами
- Анализ технологий определения эффективности лазерофореза биологически активных веществ
Введение к работе
Актуальность исследования. Изучение эффектов биологически активных веществ представляется актуальным в связи с кризисом лекарственной терапии, порождающей ятрогенную патологию, значительными осложнениями и формированием системных подходов к лечебно-профилактическим мероприятиям (Комаров Ф.И. и соавт., 1992; Морозов В.Н., 1999; Хадарцев А.А. и соавт., 2003; Чжан Цзяныдзгонь и соавт., 2000; Hubboter F., 1957).
Имеются детальные исследования системных биологических эффектов фитопрепаратов (Купеев В.Г., 2000; Валентинов Б.Г., 2005; Наумова Э.М., 2005), изучены возможности применения янтарной кислоты, в том числе при психоэмоциональном стрессе (Ивницкий Ю.ГО. и соавт., 1998; Корягин А.А., 2004). Определены возможности лазерофореза биологически активных веществ, лекарственных препаратов, в том числе при гестозах (Соколов В.П. и соавт., 1997; Купеев В.Г., 2000; Демушкина И.Г., 2004).
Контроль эффективности лазерофореза осуществляется комплексом лабораторных и инструментальных исследований с достаточной степенью достоверности, в т.ч. методами компьютерной термографии, газоразрядной визуализации, фрактальной нейродинамики, лазерной доплеровской флоуметрии, интегральной реографии, определением коэффициента активности синтоксических программ адаптации и др. (Короткое К.Г., 1995; Морозов В.Н. и соавт., 2002; Хадарцев А.А. и соавт., 2003; Борисова О.Н., 2004; Бехтерева Т.Л., 2004; Смирнова И.Е., 2005).
Изучен способ определения аутофлуоресценции живых объектов для выявления степени участия живого организма в биологическом окислении (Кида-лов В.Н. и соавт., 2005).
Не проведен сравнительный анализ различных способов определения эффективности лазерофореза биологически активных веществ, среди них не установлено место спектрофотометрического способа диагностики аутофлуорес-
-7-ценции биологических объектов, а также организма человека в норме и при патологии.
Цель исследования. Осуществить комплексную системную диагностику эффективности лазерофореза биологически активных веществ на примере янтарной кислоты.
В соответствии с целью определены задачи исследования,
Адаптировать стандартный отечественный биоспектрофотометр к задачам определения флуоресценции живых объектов.
Дать оценку спектров флуоресценции живых объектов.
Провести анализ технологий определения эффективности лазерофореза биологически активных веществ.
Изучить механизмы воздействия янтарной кислоты в эксперименте.
Определить возможности комплексной диагностики эффективности лазерофореза янтарной кислоты при стрессах, при осложненной и не осложненной беременности, при сосудистых осложнениях сахарного диабета 2 типа.
Научная новизна. Впервые осуществлена оценка спектров флуоресценции биологических объектов на модифицированном спектрофотометре.
Осуществлено сравнительное исследование имеющихся способов диагностики эффективности лазерофореза биологически активных веществ.
Впервые в эксперименте установлена синтоксическая направленность влияния янтарной кислоты на модификацию программ адаптации.
Впервые проведена системная (включая определение аутофлуоресценции) диагностика эффектов воздействия янтарной кислоты на организм человека в состоянии условной нормы, при психоэмоциональных стрессах, при не осложненной и осложненной гестозом беременности, при сосудистых осложнениях сахарного диабета 2 типа.
Практическая значимость исследования. Исследования аутофлуорес-ценции тканей на модифицированном спектрофотометре позволяют внедрить
-8-этот метод в комплексную систему интегральной диагностики состояния биологических объектов и человека.
Факт участия янтарной кислоты в модуляции программ адаптации с получением синто ксическо го эффекта позволяет использовать ее соединения в практической и научной деятельности для управляющей коррекции в процессе лечения и профилактики.
Установленный комплекс системной диагностики эффективности применения биологически активных веществ позволяет использовать реальную, зависящую от имеющегося технического оснащения, технологию при практическом применении.
Способ аутофлуоресценции живых тканей может с достаточной точностью широко применяться при анализе эффективности воздействия биологически активных веществ на человеческий организм при стрессах, беременности, сосудистых осложнениях сахарного диабета 2 типа.
Внедрение результатов исследования. Результаты исследований используются в работе сотрудников МСЧ №5 г. Тулы, ГУП ТО НИИ новых медицинских технологий, г. Тула, в учебном процессе на кафедре внутренних болезней медицинского факультета Тульского государственного университета, в Медин-центре при ГлавУГТДК Министерства иностранных дел РФ,
Апробация работы. Результаты исследования доложены на 8 научных форумах, из них на 5 международных и на 3 всероссийских: на III Общероссийской конференции с международным участием «Новейшие технологические решения и оборудование» (Кисловодск, 19-21 апреля 2005); V Сибирском физиологическом съезде (Томск, 29-30 июня, 1 июля 2005); на научной конференции с международным участием «Технологии 2005» (Турция, 22-29 мая 2005); VII Международной конференции «Циклы» (Ставрополь, 25-27 мая 2005); на Международном симпозиуме «Функциональные нарушения тканей тела человека и восстановление функций организма» (Санкт-Петербург, 10-13 июня 2005); II научной конференции «Современные медицинские технологии
-9-(диагностика, терапия, реабилитация и профилактика)» (Хорватия, Умаг, 2-9 июля 2005); III научной конференции «Приоритетные направления развития науки, технологий и техники» (Хургада, Египет, 22-29 октября 2005); I Съезде физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека» (Сочи, 19-23 сентября 2005). Работа апробирована на совместной конференции Ученого Совета ГУП ТО НИИ новых медицинских технологий и кафедры внутренних болезней Тульского государственного университета (2005).
Публикации. По материалам исследований опубликовано 13 печатных работ, из них 1 монография, 1 статья, 11 тезисов докладов.
Основные положения, выносимые на защиту.
L Метод аутофлуоресценции на модифицированном спектрофотометре отражает состояние тканевого дыхания и позволяет изучать его у биологических объектов.
Технологии определения эффективности лазерофореза биологически активных веществ разнятся по степени достоверности.
Янтарная кислота относится к адаптогенам - синтоксинам.
Метод определения аутофлуоресценции живых объектов имеет определенную значимость в комплексе диагностических технологий при стрессах, беременности, сосудистых осложнениях сахарного диабета.
Аутофлуоресценция биологических объектов. Биологические и медицинские аспекты
На протяжении многих лет отмечается рост заболеваемости и смертности при различных заболеваниях. Одна из причин - ухудшающаяся экологическая обстановка. Только в отношении загрязнения атмосферы превалируют три основных источника: промышленность, бытовые котельные и транспорт (Антонов Н.С. и соавт., 1998). Кроме того, источником пыли и ядовитых газов служат массовые взрывные работы. В результате одного среднего по массе взрыва в атмосферу выбрасывается около 12 тыс. м условного оксида углерода и более 1150 т. пыли. Аэрозольные частицы от этих источников отличаются большим разнообразием химических компонентов. В их составе обнаруживаются соединения кремния, кальция и углерода, реже - оксиды металлов: железа, магния, марганца, цинка, меди, никеля, свинца, сурьмы, висмута, селена, мышьяка, бериллия, кадмия, хрома, кобальта, молибдена, а также асбест. Продолжают действовать факторы Чернобыльской катастрофы (Доршакова Н.В., 1997; Гичев Ю.П., 1999). Интенсивно загрязняются водные бассейны. Так, например, грунтовые воды на территории Москвы характеризуются слабой углекислотной, сульфатной и общекислотной агрессивностью. Имеют место загрязнения подземных вод нефтепродуктами на значительных участках городских и сельскохозяйственных территорий. Городское население страдает от изменения качества и структуры питания, гиповитаминозов, которые являются одними из важнейших факторов, обеспечивающих изменение здоровья. Кроме того, в атмосфере концентрируются различные перекиси, которые в сумме образуют характерные длл фотохимического тумана оксиданты. Фотохимический туман (смог) по своему физиологическому воздействию на организм человека крайне опасен для дыхательной и кровеносной системы и часто бывает причиной преждевременной смерти городских жителей с ослабленным здоровьем (Бретшнайдер Б., Курфюрст И., 1989; Малахова М.Я., 1995). Все эти экологические неблагоприятные изменения изменяют ход энергетических, информационных и биохимических процессов в организме человека, в том числе и участвующих в обеспечении процессов дыхания.
Широко используемым в биологии и медицине биомаркером нарушений дыхательных функций легких считаются показатели внешнего дыхания. В научных и клинических исследованиях предпочтение в наблюдениях отдается оценке прогрессирующего снижения пиковой скорости выдоха, а также нарушению оксигенации тканей. Для объективизации степени тяжести заболеваний легких и бронхов имеет большое значение функциональное исследование показателей внешнего дыхания. Однако эти методики исследования часто не могут быть использованы для оценки процессов внешнего дыхания в условиях стресса. И еще меньше эти показатели применимы для оценки процессов биологического окисления или внутриклеточного дыхания.
Это обусловлено тем, что изменение обменных процессов в клетках и тканях организма обусловлено не только внешними механизмами дыхания, но и цепью других процессов, например, связанных с сенсибилизацией организма к чужеродным веществам. Так, при попадании аллергена в дыхательные пути он может соединяться в комплексы со специфическими антителами. Когда комплексы аллерген - Ig Е соединяются с рецепторами мембран тучных клеток на поверхности этих клеток, начинается их активация. Это ведет к дегрануляции тучных клеток, увеличению проницаемости мембраны для ионов кальция, изменению соотношения внутриклеточного циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) и циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ), активному синтезу медиаторов воспаления. Возникает местное нарушение энергообменных процессов в клетках. Это сопровождается выделением гистамина и других медиаторов тучных клеток, что усиливает гипоксемию (Черногрядская Н.А. и соавт;, 1978; Chance В., Schoener В., 1966), и ухудшает условия биологического окисления в других клетках организма.
По данным тульских исследователей Г.Н. Якушиной, Е.А. Панкиной (2001) и В.Н. Щеглова (1997) при использовании для обработки получаемых результатов математических приемов интуитивистской логики (АМКЛ), первыми на самые различные функциональные, клеточные и биохимические изменения в организме отвечают клеточные пулы крови. Так лейкоциты (судя по анализу морфологического показателя реактивности лейкоцитов - МПР) существенно изменяются при изменениях показателей ФВД, холестерина, глюкозы, билирубина и числа эритроцитов в периферическом русле. При этом выраженная зависимость обнаруживается и между состоянием эритроцитов и различными функциональными и биохимическими параметрами организма.
Данный материал подтверждает наличие множественных связей клеток кроаи, обеспечивающих дыхание и газообмен с самыми различными биохимическими и физиологическими параметрами организма.
Установленной общебиологической закономерностью является то, что ряд болезней млекопитающих сопровождается изменениями в функциональном статусе эритроцитов, гемореологическими нарушениями, дисбалансом системы оксидазы - антиоксидазы и целым рядом других нарушений внутриклеточного обмена веществ (Заидель А.Н. и соавт., 1976; Антонов Н.С. и соавт., 1998). Это может быть и следствием взаимодействия организма с неестественно большим числом новых, возникших с развитием промышленности, антропогенных факторов внешней среды (новых стрессирующих преформированных факторов -НПФ) (Щеглов В.Н., 1997; Зуев B.C. и соавт., 2001). Однако переход острых заболеваний в хронические, происходит не у всех заболевших. Поэтому считается важной постановочной задачей изучение реактивности организма, зависимостей ее изменений от работы органных и клеточных биологических фильтров и других процессов, способных оказать влияние на биологическое окисление в тканях и клетках (Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 1992; Гичев Ю.П., 1999; Владимиров В.А., Измалков В.И., 2000).
Окислительная и антиокислительная активность
Волоконно-оптическая телевизионная спектрофлуориметрия используется для контроля флуоресценции тканей живого организма, его клеточного состава, отдельных участков (компартментов). При этом фиксируется спектр естественной флуоресценции живых объектов в форме несимметричной кол околообразной кривой, на которой выделяют свечение двух участков длин волн Я = 520-530 нм и X = 455 70 нм (Заидель А.Н. и соавт., 1976; Карнаухов В.Н., 1978). Принято считать, что первый участок отражает интенсивность обмена электронов и протонов во флавопротеидах (ФП), а интенсивность свечения (I) во втором участке зависит от окислительно-восстановительных процессов в группе пиридиннуклеотидов (ПН).
Интенсивность клеточного дыхания косвенно определяют по соотношению интенсивностей свечения ФП и ПН: = 1520-530/1465 70 нм. Значение остальных участков спектра флуоресценции дискутируется (Карнаухов В Л., 1978; Лисовский В.А. и соавт., 1984; Aizava R., 1983).
Для оценки спектров растительных и живых биообъектов (преимущественно покровных тканей) разработаны различные приборные комплексы.
В настоящей работе использовались следующие установки: 1) Комплекс па основе бинокулярного микроскопа ЛЮМАМ-Р1 с контактным эпиобъективом 10x0,30 ДТ 190 (ГОИ), освещаемым ртутной лампой ДРШ-250-3 и соответствующим блоком питания производства ЛОМО. Комплекс снабжен 2 телекамерами: ПЗС (черно-белая) и Panasonic NV-R 100 (цветная), видеомагнитофоном Panasonic Р5, видеокамерами, монитором (бытовой телевизор) и компьютером фирмы IBM с видеоплатой (framegrabber). Основным узлом комплекса является многоканальная светооптическая микроспектрофото-метрическая установка, имеющая источники видимого света и ультрафиолетового излучения.
Этот комплекс позволяет исследовать функциональное состояние объектов на нескольких свето оптических каналах, одновременно анализировать форму биообъекта или клетки, их динамические характеристики. Регистрируется скорость изменения собственных спектральных характеристик объекта, а также изменения спектра излучения во времени. Фиксируются оптические характеристики: поток проходящего света, поток отраженного света, поток света люминесценции, монохроматический поток проходящего света, монохроматический поток отраженного света, монохроматический поток люминесценции, спектрально-энергетические характеристики этих потоков (определяемые с помощью фотоэлектронного умножителя). Возможно исследование поляризации отраженного потока, проходящего потока, поляризации люминесценции, различные варианты их комбинаций.
2) Комплекс 2 на основе — волоконно-оптического флуорометра, используется для биоспектрофотометрии и оценки спектров растительных и живых биообъектов (преимущественно покровных тканей) при помощи двухканалыюго УФ-биоспектрофотометра с кварцевым и стекловолоконным световодами.
В основу оценки аутофлуоресценции живых объектов положке способ, ос нованный на разработках группы сотрудников Государственного оптического института им. СИ. Вавилова с использованием в рабочей модели установки волоконно-оптического флуориметра, предназначенного для УФ-биоспектро фотометрии.
Излучение ртутной лампы, инициируемое в блоке питания, проходит сквозь светофильтры (теплозащитный и возбуждающий), поступает по наружному кольцу коаксиального волоконно-оптического жгута через защитное кварцевое стекло на объект, возбуждая его флуоресценцию. Свет флуоресценции по волоконно-оптическому жгуту через запирающие светофильтры поступает на монохроматор с дифракционной решеткой, фотоэлектронным умножителем и системой развертки для построения графического изображения на экране дисплея.
Фотоприемное устройство содержит приемник, усилитель фототока, фильтр низкой частоты и буферный каскад, сопряженные с персональным компьютером. Это позволяет графически или в цифровом выражении учитывать изменения флуоресценции в стандартизованных относительных единицах (е).
Осветительный блок включает в себя регулируемый источник питания лампы осветителя, оптикомеханический узел, обеспечивающий освещение приемного конца осветительного щупа, тепловой и возбуждающий светофильтры, маломощный источник питания регистрирующей системы. Блок имеет регулятор яркости лампы и переключатель чувствительности системы регистрации. Для калибровки прибор снабжен люминесцирующим объектом сравнения — стеклом ЖС-19, вмонтированным в темную камеру.
Стандартизация работы двухканального УФ-био спектрофотометра с кварцевым и стекловолоконным световодами
При исследовании кожи представителей белой и негроидной рас установлен факт более высокой интенсивности (на 5-15 %) аутофлуоресценции кожи человека белой расы во всех исследуемых участках тела. Исключением оказались участки кожи ладоней в области проекции биологически активных точек Лаогун. Спектры флуоресценции этих участков оказались практически одинаковыми у представителей обеих рас.
Сравнение аутофлуоресценции кожи в симметричных участках тела у здоровых людей проведено у 18 мужчин и 14 женщин среднего возраста, условно здоровых. Установлено, что интенсивность свечения симметричных участков кожи поверхности головы, туловища, верхних и нижних конечностей идентична.
При исследовании ушной раковины интенсивность свечения симметричных участков кожи отличается на 4-6 % у одних и тех же людей, независимо от пола.
Флуоресцещия кожи в симметричных участках тела у больных людей, отличия в интенсивности свечения не отличались более чем на 4-5 %, но отдельные симметричные точки тела показывали заметные отличия спектров свечения, особенно если они находились в зонах Захарьина-Геда (проекции на поверхность тела больного органа).
В сегментах тела, как на передней, так и на задней поверхности имеет место более высокий уровень аутофлуоресценции в верхней (головной) и несколько сниженный уровень флуоресценции в нижней (ножной) области сегмента. При измерении спектра флуоресценции на ушной раковине в верхней части ладьевидной чаши 1тах составила 160+2,5 е., в ее центре 1тах составила 135+3,5 е., а в центре мочки ушной раковины - 1тах составила 115+3,5 е. Учитывая, что в область мочки уха проецируется голова, а в области верхушки ушной раковины - нижняя часть тела (о чем свидетельствуют данные аурикулопунк-туры (Бецкий О.В., 1998), то полученные данные подтверждают результаты измерений.
При исследовании верхней конечности интенсивность свечения Ітах в центре ладонной поверхности на сгибе запястья составила 200+7,1 е., а в центре ладони 160+7,2 е.
Оценка особенностей спектров аутофлуоресценции лейкогщтов, эритроцитов и тромбоцитов
Проведена оценка особенностей спектров аутофлуоресценции лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов человека (п = 71) и беспородных белых крыс (n = 83).
Установлено, что по интенсивности аутофлуоресценции исследованные клетки можно расположить в следующем порядке (от высокой интенсивности свечения к низкой): лейкоциты крови, эритроциты.
Установлен ряд особенностей, характерных для свечения эритроцитов, по отношению к клеткам других тканей.
Учитывая, что эритроциты эволюционно специализировались на газообменных функциях (Загрядский В.П., Сулимо-Самуйлло З.К., 1974), прослежены изменения конфигурации, ультраструктуры клеток.
Исследования релаксационных процессов крови здоровых лиц (n = 47) показали, что в течение суток эритроциты-дискоциты (рис. 6, 7) медленнее превращались в эхиноциты (рис. 8) в препаратах типа «раздавленная капля» с доступом к ним воздуха и быстрее (эхиноцитов оказалось больше в 9 раз, Р = 0,001) в герметизированных препаратах, в которых доступ к клеткам кислорода извне был исключен. Помещение тех же проб крови на 30 мин. в барокамеру прирОг — 0,25 Мпа замедляло переход дискоцитов в эхиноциты.
В барокамеру на 90 мин. помещали гепаринизированную кровь 14 здоровых мужчин и подвергли эти пробы воздействию сжатого кислорода. Пробы извлекали для анализа через 30, 60 и 90 мин.
При воздействии в течение 90 мин. на кровь сжатого кислорода срО} 0,7 Мпа установлено выраженное дисгармонизирующее влияние этого режима на эритроциты. Число дискоцитов достоверно понизилось до 18 % (норма - 62 %), а число стоматоцитов и пойкилоцитов увеличилось, соответственно, до 68,55 % и 12,56 %. Большая часть эритроцитев-дискоцитов подверглась трансформации до пойкилоцитов и шизоцитов, что свидетельствует о почти полном исчерпании их трансформационного запаса.
В крови, не подвергшейся воздействию сжатого кислорода, преобладали дис-котороидальные формы, планоциты, стомато- и эхиноциты начальных стадий трансформации, макроплано- и макроовалоциты, а среди дискоцитов наблюдались единичные клетки с овальными и ангулярными условно-полиморфными стомами (УПС). После полуторочасового воздействия на эти гепаринизированные пробы крови сжатым кислородом в квантитативной эритрограмме оставались лишь единичные дискоциты, как правило с УПС отросчато-звездчатой формы. В единичных экземплярах оказались также стоматоциты (рис. 9) (преимущественно гребневидные), размеры многих макропланоцитов превышали естественные размеры эритроцитов (около 7,2 мкм) в 2-2,5 раза, отмечено появление моно- и биполярно-вытянутых серпообразных клеток (как при серповидно-клеточной анемии), клеток в форме «шапки Полишинеля», астроцитов. В каждой из этих проб 10-20 % клеток различной конфигурации составляли формы с многочисленными пузырькооб-разными вздутиями плазмолеммы. Число клеточных теней возросло по сравнению с фоном в 3 раза и достигало в отдельных препаратах 8-Ю %.
Характер свечения эритроцитов до и после воздействия повышенного давления кислорода соответствовал спектральным характеристикам, типичным для крови в обычных условиях, с той лишь разницей, что при высоких уровнях гипербарии снижался общий выход флуоресценции, который, очевидно, был обусловлен необратимой трансформацией эритроцитов в пойкилоциты.
Анализ технологий определения эффективности лазерофореза биологически активных веществ
Общеклинические исследования , сбор анамнеза, результаты объективного обследования, применение лабораторных, инструментальных и функциональных методов диагностики (электрокардиография) - дают общее не специфическое представление о динамике клинической симптоматики.
Исследование функции внешнего дыхания — на персональных компьютерах по специальным программам, (спироанализаторы Fucuda (Япония), бронхоск-рин, пневмоскрин и др.) — дают характеристику состояния системы дыхания и применимы у пациентов с патологией системы дыхания с нарушенной вентиляционной функцией.
Электроэнцефалографические и реоэ}щефалографические исследования — предоставляют косвенную информацию о состоянии церебральной гемодинамики, не отражают непосредственно воздействие биологически активных веществ доставленных при помощи лазерофореза.
2.2.1. Система свертывания и противосвертывания: концентрация фибриногена в мкмоль/л, растворимого фибрина в мкмоль/л, продуктов деградации фибрина в нмоль/л, гепарина в Е/мл, антитромбина III в %, а2-макроглобулина в мкмоль/л, а 1-антитрипсина в мкмоль/л - отражает в данный момент баланс показателей свертывания-противосвертывания, лишь частично может свидетельствовать о синтаксической, или кататоксической принадлежности биологически активного вещества.
2.2.2. Окислительная и антиокислительная активность: концентрация малонового диальдегида (МДА) в мкмоль/л, общая антиокислительная активность крови (АОА) в % - отражает в данный момент баланс показателей окислительной и антиокислительной активности, лишь частично может свидетельствовать о синтоксической, или кататоксической принадлежности биологически активного вещества.
2.2.3. Гормоны и медиаторы: серотонин в мкмоль/л, кортизол в нмоль/л, ацетилхолин в нмоль/л, адреналин в нмоль/л, норадреналин в нмоль/л - определяются флуориометрическим методом, так же несут косвенную информацию о медиаторном обеспечении программ адаптации.
2.2.4. Коэффициент активности программ адаптации (КАСПА) рассчитывался по методике, описанной в (Морозов В.Н., 1999):
где Сет концентрация серотонина в крови (%); ААТ.щ - активность антитромбина III (%); ААОА - общая антиокислительная активность плазмы; CCDS+ концентрация Т-супрессоров (%); САД - концентрация адреналина крови (%); С -иг - концентрация агмакроглобулина (%); СщЛ - концентрация малонового диаль-дегида (%); ССо4+ - концентрация Т-хелперов (%).
Этот интегрированный коэффициент отражает системную динамику показателей деятельности различных систем организма и достоверно отражает синтаксическую и кататоксическую составляющие системы управления жизнедеятельностью.
2.3.1. Географические исследования можно осуществлять на 6-канальном реографе «Реан-Поли» (НПКФ «Медиком МТД», г. Таганрог). В его состав входит блок пациента с набором реографических каналов и программно-методическое обеспечение. Осуществляются анализы: количественный, диаграммный, гистограмм ный, двухкомпонентный, спектральный. Метод отражает состояние центральной гемодинамики и мало чувствителен по отношению к определению эффектов биологически активных веществ.
2.3.2. Лазерная доппперовская флоуметрия — позволяет исследовать микроциркуляцию крови. Прост и относительно дешев для этих целей отечественный прибор ЛАКК-01, производства НПП «Лазма» (длина волны лазерного излучения 0,63 мкм, мощность лазерного излучения до 0,5 мВт). Согласно мнению некоторых авторов (Мач Э.С., 1996; Бранько В.В,, 2000), область наружной поверхности предплечья является как бы обобщающей для оценки состояния микроциркуляции, поэтому всегда рекомендуется для исследования. Световод фиксируется штативом и специальным креплением, обеспечивающим его неподвижность. Производится запись кровотока в состоянии покоя в течение не менее 5 минут. Определяются: параметр микро циркуляции (ПМ), амплитуда вазомоторных колебаний (ALF), амплитуда пульсовых колебаний (ACF), индекс эффективности микроциркуляции (ИЭМ), индекс сосудистого тонуса (ИСТ) и индекс концентрации пульсовых колебаний (ИК-CF). Проводятся функциональные пробы — дыхательная, постуральная и окклюзионная с расчетом резерва капиллярного кровотока (РКК) и определением гемодинамического типа микроциркуляции (ГТМ) (Маколкип В.И. и соавт., 1999; Бранько В.В., 2000).
2.3.3. Компьютерная термография: цветное видеоконтрольное устройство является устройством реального времени, обеспечивающим количественное изображение в 10 выбираемых цветах, соответствующих определенному тем пературному уровню. Дистанционная компьютерная термография (КТ) прово дится с помощью тепловизоров. Отечественные — «Радуга-4», «Радуга-5». Реги страция полученных термограмм производится на жесткий диск персонального компьютера. Анализ результатов исследования проводится визуально (качест венно) и путем расчета перепада температур (ДТ) между различными сегмен тами конечностей и их симметричными участками (количественно). При каче ственной оценке термограмм конечностей учитывались: симметричность теп лового рисунка, наличие гипо- и гипертермии дистальных отделов, «пятни стость» теплового изображения (Купеев В.Г., 2003). Для поставленной цели анализа эффективности лазерофореза биологически активных веществ метод значим, но имеет определенную сложность в стандартизации.
