Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Современное состояние вопроса о выявлении следов биологического происхождения 9
Глава 2. Материалы и методы исследований .29
Глава 3. Результаты проведенных исследований .33
Заключение 70
Выводы .82
Практические рекомендации 83
Список литературы
- Современное состояние вопроса о выявлении следов биологического происхождения
- Материалы и методы исследований
- Результаты проведенных исследований
Введение к работе
Актуальность темы диссертации и степень ее разработанности:
При проведении осмотра трупа на месте происшествия, а также самого места где он был обнаружен, нередко удается выявить загрязнения, похожие на следы биологического происхождения, среди таковых загрязнений может встречаться и содержимое желудка. Желудочное содержимое может оказаться во внешней среде при возникновении рвоты, которая может возникать при черепно-мозговых травмах и отравлениях. Так же в случае повреждения желудка, при ранениях живота, торакоабдоминальных ранениях, проникающих в брюшную полость, взрывной травме, расчленении тела- с целью сокрытия следов преступления, желудочное содержимое может оказаться во внешней среде.
Кроме того, механическая асфиксия, а именно одна из ее разновидностей- аспирационная асфиксия, возникающая вследствие вдыхания желудочного содержимого, с развитием состояния асфиксии, вследствие перекрывания пищевыми массами из желудка, просвета дыхательных путей, занимает значительное место среди случаев насильственной смерти.
Выявление желудочного содержимого во внешней среде и при аспирации имеет значение для решения ряда следственных и экспертных вопросов, в частности, для реконструкции событий на месте происшествия, установления причины смерти.
При проведении судебно - медицинской экспертизы следов биологического происхождения, на первом этапе исследования разрешается вопрос о природе исследуемых следов. В отношении большинства следов биологического происхождения, вопрос о их происхождении, на настоящий момент развития судебно-медицинской науки, разработан в достаточно полном объеме. В то же время, отсутствуют достоверные методики идентификации происхождения биологических следов из желудка.
Для этого, обычно, применяется цитологический метод исследования, с помощью которого возможно определить клетки призматического каемчатого эпителия, выстилающего слизистую оболочку желудка. Однако применение этого метода на практике оказывается далеко не всегда эффективным, например при выявлении эпителия желудка в следах-наложениях на орудиях травмы.
При аспирационной асфиксии для выявления в легких желудочного содержимого традиционно используется гистологический метод исследования кусочков легких. Использование данного метода сопряжено с необходимостью приготовления микропрепаратов и их последующим исследованием, что требует как временных затрат, так и наличие сложного оборудования, дорогостоящих реактивов, и кроме того, персонала соответствующей квалификации- для качественно изготовления и изучения микропрепаратов.
В связи с отмеченным, актуальным представляется метод выявления в следах-наложениях на вещественных доказательствах так и в легких- при аспирационной асфиксии, не только клеток слизистой оболочки желудка, непосредственно самих пищевых масс, но и компонентов, входящих в состав содержимого желудка. Обнаружение этих компонентов желудочного содержимого значительно расширяет возможности экспертизы в плане возможности дачи объективных ответов на вопросы следствия, конкретизации выводов судебно-медицинского эксперта.
Цель исследования:
Разработать научно - обоснованные судебно - медицинские критерии выявления и экспертной оценки желудочного содержимого на вещественных доказательствах и во внешней среде, изучить влияние различных факторов на выявляемость содержимого желудка.
Задачи исследования
-
Разработать и внедрить в практику эффективный способ определения желудочного содержимого.
-
Изучить возможность выявления желудочного содержимого во внешней среде, в том числе и на орудиях травмы.
-
Изучить влияние эндогенных и экзогенных факторов на выявление желудочного содержимого.
-
Изучить возможность выявления желудочного содержимого в легких при аспирации.
-
Разработать практические рекомендации по выявлению желудочного содержимого с учетом влияния предмета-носителя и факторов внешней среды.
Научная новизна диссертационного исследования:
Изучена возможность выявления желудочного содержимого, как во внешней среде, так и в тканях трупа (в легких), с помощью выявления фермента, входящего в состав желудочного сока (пепсина). Разработаны методики выявления желудочного содержимого, как во внешней среде, так и в тканях трупа (в легких), с помощью выявления фермента, входящего в состав желудочного сока (пепсина).
Теоретическая и практическая значимость:
Использование разработанной методики выявления желудочного содержимого на вещественных доказательствах и во внешней среде расширяет возможности идентификации следов биологического происхождения, позволяет полнее и конкретнее ответить на вопросы, разрешаемые при проведении судебно-медицинских экспертиз следов-наложений
Разработан эффективный и в то же время малозатратный, как в отношении оборудования и расходных материалов, так и в отношении затрат времени на проведение экспертных
5 исследований, метод определения содержимого желудка, с помощью выявления входящего в его состав фермента пепсина
Методология и методы диссертационного исследования.
Проведены исследования желудочного содержимого от 610 трупов скоропостижно скончавшихся мужчин и женщин в возрасте от 25 лет до 75 лет
Изучено определение желудочного содержимого во внешней среде с помощью выявления пепсина, а именно на различных объектах-носителях (стекло, дерево, грунт, ткань, линолеум), в зависимости от условий внешней среды и самого организма, а так же на орудиях травмы (клинках ножей).
Изучено определение желудочного содержимого в легких, при аспирации путем выявления пепсина.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту
-
Наличие пепсина в исследуемом материале, является диагностическим критерием присутствия в нем желудочного содержимого.
-
Выявление желудочного содержимого, с помощью определения фермента пепсина возможно как во внешней среде, так и в самом организме- в ткани легких при его аспирации.
-
Экзогенные и эндогенные факторы могут оказывать влияние на выявляемость желудочного содержимого, с помощью определения пепсина.
Связь работы с научными программами, планами.
Диссертационная работа выполнена по проблеме идентификации биологических следов, шифр 208.052.03, входит в план НИР ГБОУ ВПО НижГМА Минздрава России (№ государственной регистрации 01201063254).
Проведенное исследование на тему: «Определение желудочного содержимого на вещественных доказательствах и во внешней среде» было одобрено Комитетом по этике ГОУ ВПО НижГМА Минздрава России 18.02.2013 (протокол заседания №2).
Соответствие диссертации паспорту научной специальности
Научные положения диссертации соответствуют паспорту научной специальности 14.03.05 - «Судебная медицина» (медицинские науки).
Личный вклад соискателя:
Все проведенные в ходе научной работы эксперименты проведены лично автором. Автор принимал участие в проведении двух экспертиз, с применением разработанной методики.
Степень достоверности и апробация результатов.
Достоверность полученных результатов, поученных в ходе проведения диссертационной работы подтверждается достаточным объемом исследуемого материала (всего исследовано
6 2200 объектов) Первичная документация и материалы статистической обработки проверены и признаны достоверными.
Диссертация апробирована и рекомендована к защите на заседании кафедры клинической судебной медицины ГБОУ ВПО НижГМА Минздрава России (протокол № 9 от 05.05.2016).
Основные положения проведенных исследований были изложены и одобрены на заседаниях кафедры клинической судебной медицины ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия» Минздрава России (в 2014 году, в 2015 году).
Результаты диссертационного исследования доложены на Всероссийском съезде судебных медиков (Москва, 21-24.10.2013); на 4 заседаниях научного общества судебных медиков Нижегородского областного бюро судебно-медицинской экспертизы;.
Внедрение результатов исследования
Результаты диссертационной работы внедрены в практическую деятельность бюро судебно-медицинской экспертизы: ГБУЗ НО «Нижегородское областное бюро судебно-медицинской экспертизы», КОГБСЭУЗ «Кировское областное бюро судебно-медицинской экспертизы» ГКУЗ Республики Мордовия «Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы», в учебный процесс кафедры «Клинической судебной медицины» ГБОУ ВПО «Нижегородской государственной медицинской академии».
Публикации
Содержание диссертационной работы отражено в 4 статьях, из которых 3 опубликованы в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ. Получен патент на изобретение №2426987 «Способ определения содержимого желудка на объектах внешней среды при проведении судебно-медицинской экспертизы» от 20.08.2011г.
Объем и структура работы
Современное состояние вопроса о выявлении следов биологического происхождения
Судебная медицина является одной из динамично развивающихся специализированных областей медицины. Применяемый арсенал методик исследования, использующихся в судебно-медицинской практике, непрерывно расширяется.
Одной из основных задач судебно-медицинской экспертизы следов биологического происхождения является решение вопроса об их природе, так как без установления происхождения следов невозможно проведение каких-либо исследований их.
В связи с тем, что кровь является наиболее частым объектом исследования, были предложены многочисленные методы установления её наличия. Все эти методы подразделяются на ориентировочные (позволяющие только предположить, что исследуемый объект является кровью) и доказательные методы.
Ориентировочные методы подразделяются на 2 группы: изучение следов в ультрафиолетовых лучах и постановка химических реакций [Туманов А.К., 1955].
Исследование в ультрафиолетовых лучах основано на том, что гемоглобин крови гасит люминесценцию, в связи с чем следы крови имеют бархатистый вид и тёмно-коричневую окраску. Однако подобная картина наблюдается и со следами ржавчины и другими веществами, в составе которых содержится железо.
Ориентировочные химические реакции главным образом основаны на наличии в крови фермента пероксидазы, катализирующей процесс расщепления перекиси водорода (Н2О2) на воду и атомарный кислород. Поэтому при нанесении на кровяной след капли перекиси водорода наблюдается появление белой пены. Также для индикации наличия атомарного кислорода могут быть использованы вещества, например, бензидин, меняющие при окислении окраску, или люминол, обладающий в окисленном виде способностью к люминесценции.
Доказательные методы установления наличия крови основаны на выявлении гемоглобина и его производных.
В историческом аспекте первоначально установление наличия крови базировалось на изучении абсорбционных спектров гемоглобина и его производных [Законов А.И., 1945; Туманов А.К., 1955; Васильев М.А., 1957, 1960; Туманов А.К., 1975; Томилин В.В., Барсегянц Л.О., Гладких А.С., 1989 и др.] или спектра люминесценции гематопорфирина [Сидоров В.Л., Заславский Г.И., Маяцкая М.В., Попов В.Л., 2003].
Затем был разработан способ выявления гемоглобина с использования методики восходящей хроматографии на бумаге [Fiori A., 1961; Джалалов Д.Д., 1971, 1977; Джалалов Д.Д., Абдуллаев Б.С., 1982 и др.] или в слое силикагеля [Кисин М.В., 1974; Кисин М.В., 1981; Кисин М.В., Паршиков Ю.И., Егоров В.В., 1981; Бронникова М.А., Кисин М.В., Стегнова Т.В., 1982] с последующей индикацией наличия гемоглобина путём обработки хроматограмм раствором бензидина или азопирама [Павлова А.З., Тишинова Л.А., 1984] с добавлением раствора перекиси водорода.
Хроматографические методики позволяют установить наличия крови в разведениях 1:10-5 – 1:10-6 [Кисин М.В., Барсегянц Л.О., Загрядская А.П. и др., 1985].
В настоящее время выявление крови в следах на вещественных доказательствах методом восходящей хроматографии на пластинах «Силуфоль» и «Сорбфил» широко применяется в работе судебно-биологических отделений бюро судебно-медицинской экспертизы.
С.В.Гуртовой и Л.Н.Тылецкой [1992] предложена методика выявления крови в следах с помощью тест-полосок «Гемофан», применяемых в клинической практике для обнаружения скрытой крови в кале и моче. Однако в практике тест-полоски используются, в основном, как ориентировочный метод установления наличия крови. В последние годы были разработаны тест-системы для установления не только наличия крови, но и принадлежности её человеку.
Так, немецкой фирмой SERATEC был разработан иммунохроматографический тест HemDirect первоначально предназначенный для выявления крови человека в кале с целью диагностики рака кишечника. Основу теста составляет реакция гемоглобина человека с двумя иммобилизированными на мембране антигемоглобиновыми антителами, меченными коллоидным золотом. При положительном результате (то есть при наличии гемоглобина человека) на мембране появляется окрашенная полоска. В дальнейшем Тест HemDirect был использован в судебно-медицинской практике для установления наличия крови человека в следах на вещественных доказательствах [Hochmeister В. et al.,1999; Misencik A., Laux D.L., 2007; Михайлова Н.Н., Зороастров О.М., 2009; Грезина Н.Ю., Сулейменова Г.М., 2011; Михайлова Н.Н., 2012].
С помощью теста HemDirect кровь человека может быть выявлена при разведении 1:10-6.
Кроме тест-системы SERATEC HemDirect фирма «GORDIZ» предлагает тест-систему RSID (Rapid Stain Identification) BLOOD для установления наличия крови человека в следах. В основе теста лежит иммунохроматографическое выявление гликофорина А – трансмембранного сиалогликопротеина эритроцитов. Применение тест-системы для выявления крови в следах показало его высокую чувствительность (положительный результат при наличии 1 мкл крови в следе) и специфичность [Орехов В.А., 2013].
Несомненным преимуществом отмеченных тест-систем является возможность использования их на месте происшествия, так как наличие крови человека может быть установлено в течение 10 минут. При половых преступлениях (изнасилованиях, насильственных действиях сексуального характера) возникает необходимость выявления спермы. Методы установления наличия спермы подразделяются на ориентировочные и доказательные.
Материалы и методы исследований
Для определения принадлежности к желудочному содержимому различных следов наложений на объектах внешней среды возможно применение методики их непосредственного визуального осмотра и микроскопического исследования, а также путем изготовления микропрепаратов для выявления в следах клеток, входящих в состав эпителия желудка.
Однако, указанные методики не обладают достаточной специфичностью, позволяющими дать ответ на вопрос, являются ли исследуемые следы биологического происхождения действительно содержимым желудка. Данные методики позволяют лишь высказаться о том, что следы происходят из желудочно-кишечного тракта, без уточнения, из какого именно его отдела (ротовой полости, пищевода, желудка или кишечника) попали во внешнюю среду [Королева Е.И., Федоровцев А.Л., 1998; Федоровцев А.Л., 2002].
В связи с изложенным, специфичной для идентификации именно содержимого желудка представляется методика выявления пепсина –основного фермента желудочного содержимого. Это связанно это с тем, что пепсин вырабатывается только клетками желудка, сохраняя свою активность именно в этом органе и инактивируясь в щелочной среде двенадцатиперстной кишки.
Окружающая человека среда отличается огромным многообразием различных предметов и материалов, на которые возможно попадание содержимого желудка, с связи с чем исследовать конкретно каждый из всего спектра объектов внешней среды, с точи зрения выявления на них желудочного содержимого, безусловно не представляется возможным.
В ходе исследований из объектов внешней среды были выбраны такие, вероятность попадания на которые содержимого желудка представляется наиболее частой: 1.Текстильная ткань, в состав которой входили хлопок и синтетическое волокно полиэстер. Выбор ткани как «объекта-носителя» не случаен и обусловлен тем, что на одежду пострадавших наиболее часто попадают различные загрязнения биологического происхождения. Кроме того, ткань, являющаяся элементом обивки различной мебели, часто загрязняется биологическими наложениями. Содержимое желудка может попадать на предметы одежды, элементы мебели, обтянутые тканью как при повреждениях стенок брюшной полости, в том числе и желудка, так и при рвоте. Ткань указанного состава обладает способностью впитывать различные вещества, имеющие жидкую или близкую к ней консистенцию, в том числе и содержимое желудка. 2. Грунт (почва). Этот материал был выбран как один из наиболее встречающихся материалов открытой местности. Грунт, также как и вышеуказанная ткань обладает гигроскопическими свойствами. 3. В следующую группу «объектов-носителей» вошли материалы, часто встречающиеся в повседневной жизни человека, и совсем не впитывающие или практически не впитывающие жидкие или близкие к жидкой консистенции вещества. В эту группу были отнесены предметы, изготовленные из стекла, полимерного материала (линолеум, полистирол), а также необработанного дерева.
Использовались фрагменты указанных материалов размерами 2х5см. Грунт располагался в пластиковых контейнерах, размерами 9х9см, толщиной слоя 1см. Фрагменты линолеума, пластика, стекла и необработанного дерева имели гладкую ровную поверхность (Рисунок 3-8).
В эксперименте производился забор содержимого желудка у 90 умерших скоропостижно лиц мужского и женского пола с давностью наступления смерти сроком от одних до двух суток, с отсутствием гнилостных изменений.
Содержимое желудка, в количестве 10мл, равномерно наносили на поверхности различных материалов: впитывающих влагу (ткань, грунт), поверхность необработанного дерева и на поверхности материалов не обладающих гигроскопическими свойствами (стекло, пластик, линолеум).
Фрагменты указанных материалов с нанесенным на них желудочным содержимым содержали в условиях лаборатории (температура 18-22, влажность 60-75%) в течение 30 суток. По истечении 30 суток поверхности фрагментов с нанесенным на них содержимым желудка смачивали 0,1н раствором соляной кислоты и прикладывали к ним фрагменты засвеченной и проявленной фотопленки, размерами 2х5см. Выявление пепсина проводилось по методике, изложенной в разделе «Материалы и методы исследования».
При наличии на пленке участков просветления, указывающих на произошедшую реакцию гидролиза, результат признавался положительным.
Перед нанесением желудочного содержимого на поверхность «объектов-носителей» производились его контрольные исследования, непосредственно после секции трупа с применением вышеизложенной методики выявления пепсина. Во всех наблюдениях контрольные исследования были положительны.
Результаты проведенных исследований
В ходе ранее проведенных опытах исследовалось влияние внешней среды на возможность определения желудочного содержимого путем выявления пепсина. В связи с тем, что содержимое желудка может подвергаться воздействию биологических факторов, заслуживает внимания вопрос о влиянии ряда биологических веществ на выявление пепсина в содержимом желудка.
В качестве этих биологических веществ нами рассматривались те субстанции, которые могут попасть в желудок, смешиваясь с его содержимым, а именно, кровь и желчь.
Попадание крови в желудок может происходить экзогенным путем вместе с пищей, например, не полностью прожаренное мясо (мясо «с кровью») или популярные у некоторых кочевых народов Азии напитки с добавлением свежей крови, а также непосредственно сама свежая кровь, употребляемая этими народами как напиток-деликатес. Также кровь может попасть в желудок и эндогенным путём. Это может происходить при заболеваниях желудочно-кишечного тракта (попадание собственной крови в желудок): язвенная болезнь, осложненная кровотечением, синдром Маллори-Вейсса, шоковые язвы желудка, при черепно-мозговых и черепно-лицевых травмах, сопровождающихся кровотечением в полость рта, в носовые ходы, с последующим заглатыванием крови и попаданием ее в полость желудка.
Попадание желчи в желудок может происходит при заболевания желудочно-кишечного тракта, например, воспалительных заболеваниях двенадцатиперстной кишки, желчного пузыря, при недостаточности привратника желудка с возникновением рефлюксов желчи в его полость.
При проведении экспериментов во время секции трупов производился забор содержимого желудка у 100 скоропостижно умерших лиц мужского и женского пола с давностью смерти около одних суток, при отсутствии у трупов гнилостных изменений. Содержимое желудка в количестве 40 мл изымалось от трупов, разделялось на две равные части по 20мл и помещалось в чашки Петри. Затем к содержимому желудка добавлялась изъятая от этих же трупов кровь или желчь в количестве 5мл. Таким образом, происходило разведение крови или желчи содержимым желудка в соотношении 1:4. Содержимое перемешивалось.
Далее содержимое желудка с примесью соответственно крови или желчи равномерно наносилось на всю поверхность предметных стекол. Далее предметные стекла с желудочным содержимым с примесью крови или желчи находились в течение одних суток в условиях лаборатории. При этом происходило высыхание смешанных следов.
Выявление наличия желудочного содержимого на фрагментах стекла проводилось с использованием ранее применявшейся нами методики.
При наличии на пленке участков просветления, свидетельствующих о произошедшей реакции гидролиза, результат пробы признавался положительным.
Было произведено 100 экспериментов, в каждом из которых к содержимому желудка добавлялась кровь или желчь. Полученные результаты представлены в таблице 7.
Влияния примесей биологического происхождения на выявляемость содержимого желудка Примесь к желудочному содержимому Количество положительных проб на пепсин Количество отрицательных проб на пепсин крови Параллельно во всех опытах проводилось исследование контрольной пробы желудочного содержимого, с применением вышеописанной методики. Отрицательные результаты опытов наблюдались только в тех случаях, когда контрольная проба была отрицательной, при этом во всех этих случаях желудок трупа был переполнен пищевыми массами. Отрицательные результаты опытов наблюдались только при отрицательной контрольной пробе, при этом во всех случаях отрицательных результатов желудок был переполнен пищевыми массами. Результаты исследований свидетельствуют об отсутствии влияния примеси крови и желчи на выявляемость пепсина в следах желудочного содержимого.
Актуальным представляется вопрос о влиянии веществ, принимаемых вместе с пищей (так называемых «вкусовых веществ»), а именно, этилового спирта и уксуса на выявление пепсина в содержимом желудка. Отмеченные вещества часто употребляются человеком вместе с пищей.
Этиловый спирт в различной концентрации содержится в целом ряде алкогольных напитков (пиво, вино, водка и другие), в кисломолочных продуктах (кефир, кумыс), используется в кондитерской промышленности.
Уксусная кислота, а именно пищевой уксус, является одним из компонентов многих блюд, в частности, консервированных и маринованных овощей, различных салатов, маринадов для мясных блюд и т.д.
При проведении экспериментов во время секции трупов, производился забор содержимого желудка у 100 скоропостижно умерших лиц мужского и женского пола с давностью смерти около одних-двух суток. У трупов отсутствовали гнилостные изменения. Содержимое желудка забирали в количестве 40мл. Далее изъятое от трупа желудочное содержимое разделяли на две равные части по 20 мл и помещали в чашки Петри, после чего в одну из полученных порций добавлялось 5мл пищевого уксуса, в другую 5 мл водного раствора 40% этилового спирта. Таким образом, происходило разведение 40% этанола и пищевого уксуса содержимым желудка в соотношении 1:4. Содержимое перемешивали и наносили на предметные стекла.
Выявление желудочного содержимого на предметных стекла проводилось через 1 сутки с использованием ранее применявшейся методики. При наличии на пленке участков ее просветления, свидетельствующих о произошедшей реакции гидролиза, результат пробы признавался положительным.
Нами было произведено 100 экспериментов, в каждом из которых к содержимому желудка добавлялись либо водный раствор 40% этилового спирта, либо пищевой уксус. Полученные результаты представлены в таблице 8 .
Параллельно во всех опытах проводилось исследование контрольной пробы желудочного содержимого. Отрицательные результаты опытов наблюдались только в тех случаях, когда контрольная проба была отрицательной, при этом во всех этих случаях желудок трупа был переполнен пищевыми массами.