Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1 Рецессия десны. Теории возникновения 12
1.2 Связь биотипа десны с возникновением рецессии 16
1.3 Лечение рецессии десны 18
1.4 Процессы регенерации
1.4.1 Регенерация эпидермальных ран 20
1.4.2 Регенерация пародонта
1.5 Участие молекулярно-генетических факторов в механизме возникновения рецессии 24
1.6 Общая характеристика цитокинов
1.6.1 Семейство интерлейкин-1 26
1.6.2 Интерлейкин-6 27
1.6.3 Фактор некроза опухоли- 28
1.7 Семейство матриксных металлопротеиназ 30
1.7.1 Матриксные металлопротеиназы и заболевания пародонта 32
1.7.2 Матриксная металлопротеиназа-9
1.8 Урокиназный активатора плазминогена uPA и его рецептор uPAR 33
1.9 Заключение. 35
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 38
2.1 Контингент исследования 38
2.2 Методика определения биотипа десны с использованием зонда Hu-Friedy PCP-UNC 15 42
2.3 Методика определения клинических показателей и индекса эффективности гигиены (РНР) з
2.4 Методика проведения операции по ликвидации рецессии десны коронально смещенным лоскутом со свободным десневым трансплантатом с неба 45
2.5 Выделение геномной ДНК 45
2.6 Определение полиморфизма исследуемых генов 46
2.7 Выделение тотальной РНК 2.8. Обратная транскрипция (получение кДНК) 50
2.9. Определение экспрессии исследуемых генов 50
2.10 Статистическая обработка данных 52
ГЛАВА 3. Результаты исследования 54
3.1 Анализ взаимосвязи класса рецессии десны и носительством вариантных аллелей исследованных генов. 56
3.1.1 Исследование полиморфизма генов IL-1 С(-511)Т, IL-6 G(-174)C, TNF- G(-238)A, MMP-9 С(-1562)Т, uPA С/Т 3 UTR, uPAR T(-516)C в группах пациентов с рецессией десны I-II класса, III класса по Миллеру игруппе пациентов с клинически здоровой десной 56
3.2 Анализ взаимосвязи биотипа десны с классом рецессии десны и полиморфизмом генов. 61
3.2.1 Исследование полиморфизма генов IL-1b С(-511)Т, IL-6 G(-174)C, TNF-a G(-238)A, MMP-9 С(-1562)Т, uPA С/Т 3 UTR, uPAR T(-516)C в группах пациентов с рецессией десны I-II класса, III класса по Миллеру и группе пациентов с клинически здоровой десной с тонким биотипом десны. 63
3.2.2 Исследование полиморфизмоа генов IL-1 С(-511)Т, IL-6 G(-174)C, TNF- G(-238)A, MMP-9 С(-1562)Т, uPA С/Т 3 UTR, uPAR T(-516)C в группах пациентов с рецессией десны I-II класса по Миллеру и группе пациентов с клинически здоровой десной с толстым биотипом десны 69
3.3 Анализ взаимосвязи молекулярно-генетических факторов с регенерацией пародонта. 73
3.3.1 Исследование взаимосвязи полиморфизма генов IL-1b С(-511)Т, IL-6 G(-174)C, TNF-a G(-238)A, MMP-9 С(-1562)Т, uPA С/Т 3 UTR, uPAR T(-516)C с экспрессией генов IL-1, IL-6, TNF-, MMP-9, uPA, uPAR и клиническими показателями в группе пациентов с рецессией I-II класса по Миллеру. 74
3.3.2 Корреляционные взаимосвязи между экспрессией генов IL-1, IL-6, TNF-, MMP-9, uPA, uPAR и клиническими показателями в группе пациентов с рецессией I-II класса по Миллеру 80
3.3.3 Исследование взаимосвязи полиморфизма генов IL-1b С(-511)Т, IL-6 G(-174)C, TNF-a G(-238)A, MMP-9 С(-1562)Т, uPA С/Т 3 UTR , uPAR T(-516)C с экспрессией генов IL-1, IL-6, TNF-, MMP-9, uPA, uPAR и клиническими показателями в группе пациентов с рецессией III класса по Миллеру. 83
3.3.4 Корреляционные взаимосвязи между экспрессией генов IL-1, IL-6, TNF-, MMP-9, uPA, uPAR и клиническими показателями в группе пациентов с рецессией III класса по Миллеру. 89
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов исследования 92
4.1 Корреляция молекулярно-генетических факторов с классом рецессии десны по Миллеру и биотипом десны. 93
4.1.1 Корреляция рецессии десны с полиморфизмом изученных генов 93
4.1.2 Корреляция рецессии десны с биотипом десны и полиморфизмом изученных генов . 95
4.2 Корреляция молекулярно-генетических факторов с процессами регенерации пародонта после операции по ликвидации рецессии десны 97
Выводы 103
Практические рекомендации 105 список сокращений и обозначений 106
Список литературы 108
- Связь биотипа десны с возникновением рецессии
- Методика определения биотипа десны с использованием зонда Hu-Friedy PCP-UNC
- Исследование полиморфизмоа генов IL-1 С(-511)Т, IL-6 G(-174)C, TNF- G(-238)A, MMP-9 С(-1562)Т, uPA С/Т 3 UTR, uPAR T(-516)C в группах пациентов с рецессией десны I-II класса по Миллеру и группе пациентов с клинически здоровой десной с толстым биотипом десны
- Корреляция рецессии десны с биотипом десны и полиморфизмом изученных генов
Связь биотипа десны с возникновением рецессии
Гистологически регенерация пародонта напоминает заживление резанных ран кожи, но при заживлении пародонтальных ран процесс осложнен наличием сообщающейся с внешней средой неваскуляризованной поверхностью корня [41; 44; 128]. Существенным отличием регенерации пародонта от эпидермальных ран является то, что одна из контактирующих поверхностей (поверхность корня) является неваскуляризованной и минерализованной. А также, в процессе заживления, необходимо восстановить периодонтальную связку и кость альвеолы. Первый этап регенерации начинается с адсорбции и адгезии протеинов плазмы, клеточных элементов крови на поверхности корня, формируется сгусток между корнем и слизисто-надкостничным лоскутом. Далее после травмы, в течение нескольких часов, развивается фаза раннего воспаления. Во время этой фазы на поверхности корня аккумулируются нейтрофилы и моноциты. Затем в последующие дни наступает фаза позднего воспаления, она характеризуется формированием грануляционной ткани с миграцией макрофагов. Через 7 дней фибриновый сгусток еще сохраняется и начинается формирование соединительнотканного прикрепления. Во многом степень созревания фибринового сгустка зависит от формы, размеров раны. При адекватоной адгезии протеинов плазмы крови к подготовленной поверхности корня возможно восстановление полноценного соединительнотканного прикрепления и регенерация периодонтальной связки [31; 35; 72; 123; 128]. Не всегда процесс заживления приводит к регенерации (восстановлению) тканей пародонта. Может произойти репарация (замещение) образование своеобразного рубца [36; 123; 139]. В свою очередь репарация может привести к фиброзной инкапсуляции или адгезии коллагена. При этом коллагеновые волокна не внедряются в цемент корня зуба, а плотно прилегают к нему, создавая физическое прикрепление, также может образоваться репаративный цемент, происходить резорбция или анкилоз корня с замещением части корня соединительной или костной тканью. Возможно увеличение ширины эпителиального прикрепления десны, рецессия десны. Эти варианты свидетельствуют об отсутствии регенерации тканей пародонта и являются неудачей лечения.
По мнению ряда ученых регенерацию затрудняет недостаточная механическая целостность раны, недостаточная адгезия фибринового сгустка к поверхности корня. После ушивания лоскута уже через 10 минут происходит преципитация эритроцитов к поверхности корня, через 1 час эритроциты присутствуют в фибриновом сгустке рядом с поверхностью корня. На ранней фазе воспаления (через 6 часов после операции) в организованной фибриновой сети отмечается слабая агрегация эритроцитов, фибриновый сгусток прикреплен к дентину, его поверхность выстлана большим количеством полиморфноядерных лейкоцитов. Через 3 дня наступает поздняя фаза воспаления. В эту фазу формируется грануляционная ткань. Поверхность корня покрыта фибриновым сгустком, цемент корня выстлан макрофагами. Через 7 дней соединительная ткань, богатая клетками, плотно прилежит к поверхности корня [47; 58].
Еще одним важным фактором, влияющим на регенерацю всех структур пародонта, является химическая обработка поверхности корня. Ее проводят после механического сглаживания поверхности корня при помощи кислотных (лимонная кислота, молочная кислота) или хелатных (ЭДТА) веществ [29; 34; 67; 136]. Такая обработка приводит к удалению смазанного слоя, обнажаются дентинные канальцы и коллагеновый матрикс, а адгезия фибринового сгустка к поверхности корня улучшается. Так же кислоты устраняют бактериальные эндотоксины, происходит уменьшение количества пародонтопатогенных бактерий.
В последнее время все чаще говорится о мультифакторности различных заболеваний. Так как не всегда удается установить первичную причину той или иной болезни то условия, способствующие ее возникновению, играют такую же важную роль, как и ее причина. Для этих заболеваний важны обе роли: среда и наследственность. Поэтому для таких заболеваний важно выяснить не только этиологический фактор, но и все условия, взаимодействующие с этим фактором, способствующие или препятствующих развитию болезни. На данный момент в литературе возникновение рецессии десны описывается в основном вредными привычками, неправильной чисткой зубов, истиранием, а о роли генетических факторов и влиянии биохимических процессов в организме на возникновение рецессии десны уделяется мало внимания [8; 79].
Фенотип человека складывается из взаимосвязи следующих факторов: 1. Воздействия окружающей среды (курение, гигиена полости рта, социально-экономический статус, сахарный диабет и т.д). 2. Генотип (включая ген-генные взаимодействия) [89]. В связи с этим оценивать возникновении рецессии десны необходимо с учетом влияния генотипа человека и его влияния на биохимические процессы в организме. Полиморфизм гена возникает в результате мутации. Различные типы полиморфизмов обычно называют по типу мутации, которая их создала. Простейший тип полиморфизма это замена одного нуклеотида на другой. "однонуклеотидный полиморфизм (ОНП)"[8; 69; 111]. ОНП может менять структуру, функцию или количество белка, но если замена произошла в кодирующей области гена, это может привести к замене аминокислоты и, следовательно, изменется структура белка, который затем может изменить свою функцию. Когда такие мутации происходят в промоторе гена, это может привести к изменению регуляции генов, например, полностью ингибировать или уменьшить экспрессию гена или, наоборот, увеличить экспрессию гена. ОНП встречаются чаще, чем любой другой тип генетического полиморфизма [89; 111].
Изучение ОНП используют в генетических исследованиях популяции. После генотипирования лиц и оценки частоты генотипов в группе интереса, можно также вычислить частоту N-аллеля и R-аллеля среди групп или групп населения в стадии изучения. Частоты генотипов и аллелей могут отличаться в группе с исследуемым заболеванием и в группе здоровых. Впоследствии, когда данные аллельные варианты определены, можно начать исследование и определить возможную роль этого гена в этиологии и патогенезе данного заболевания.
Методика определения биотипа десны с использованием зонда Hu-Friedy PCP-UNC
Венозную кровь в объеме 5 мл забирали в пробирки, содержащие ЭДТА в качестве антикоагулянта (1 объем раствора 0,5 М Na2-ЭДТА, рН 8,0 + 9 объемов крови). После тщательного перемешивания образцы помещали в морозильную камеру и хранили при -20С. Выделение геномной ДНК проводили из периферической венозной крови, стабилизированной ЭДТА, с помощью коммерческого набора QIAmp DNA Blood Mini Kit и автоматической станции QIAcube (QIAGEN). В прибор QIAcube помещали 200 мкл образцов крови в пробирках объемом 2 мл, комплект адапторов с колонками и 1,5 мл пробирками, наконечники, и необходимые реагенты (QIAGEN), после чего запускали автоматизированный протокол для выделения ДНК из крови с объемом элюции раствора ДНК 100 мкл. Для лизиса к образцам крови добавлялось 20 мкл свободной от ДНКаз протеазы QUAGEN (или протеиназа К) и 200 мкл буфера AL, полученная смесь перемешивалась и инкубировалась при 56оС в течение 10 минут. Далее в пробирки добавлялось 200 мкл 96% этилового спирта с последующим перемешиванием на встроенном в прибор шейкере. Для связывания ДНК с сорбентом весь объем полученной смеси переносился в колонки и центрифугировался в течение 1 минуты при 6000g. Фильтрат оказывался на дне адаптера, в который изначально была помещена колонка. Далее автоматически последовательно проводилось 2 шага промывки колонок буферами AW1 и AW2 объемом 500 мкл с центрифугированием в течение 1 и 3 минут при 6000g и 20000g соответственно. Промытая колонка переносилась прибором в отдельную чистую пробирку, после чего ДНК элюировали с сорбента колонки добавлением 100 мкл буфера AE и инкубацией при комнатной температуре в течение 1 мин с последующим центрифугированием при 6000g в течение 1 минуты. Концентрацию ДНК определяли по поглощению раствора ДНК при длине волны 260 нм (А260) с помощью прибора NanoDrop2000("Thermo Scientific"). Чистота ДНК определялась по соотношению поглощений при 260 и 280 нм соответственно (А260/А280). Полученное отношение находилось в пределах 1,7-1,9, что свидетельствовало об отсутствии контаминации. Выделенная ДНК помещалась в морозильную камеру и хранилась при -20С до проведения ПЦР.
Определение полиморфизмов С(-511)Т (rs16944) гена IL-1, G(-238)A (rs361525) гена TNF-, G(-174)C (rs1800795) гена IL-6, С(-1562)T (rs3918242) гена MMP-9 проводили при помощи метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в реальном времени. Использовались готовые наборы для определения однонуклеотидных полиморфизмов («ДНК-технология», Россия). Подготовка к ПЦР осуществлялась в соответствии с рекомендациями производителя наборов. Объём вносимого в реакцию раствора ДНК был уменьшен до 2 мкл, недостающий объём (до 5 мкл) был замещён деионизованной водой. ПЦР проводилась в детектирующем термоциклере ДТ-96 («ДНК-технология», Россия) по программе, рекомендованной производителем наборов. Определение генотипов по окончании реакции осуществлялось автоматически при помощи программного обеспечения прибора.
Определение полиморфизмов С/Т 3 UTR (rs4065) гена PLAU и T(-516)C (rs344781) гена PLAUR проводили при помощи ПЦР с детекцией в реальном времени, применялись аллельспецифичные гидролизуемые зонды. Ниже приведены последовательности праймеров и зондов:
Амплификацию проводили в детектирующем термоциклере RotorGene Q («Qiagen», Германия) с использованием готовой ПЦР-смеси Maxima Probe qPCR Master Mix (Fermentas). Температурный профиль реакции включал в себя денатурацию (95С, 10 мин.) и 60 циклов амплификации (денатурация (95С, 15 с), отжиг праймеров и элонгация, совмещённые с детекцией (65,2С, 15 с).
Оценка и интерпретация результатов производились при помощи качественного анализа по конечной точке. Наличие сигнала красителя FAM свидетельствовало о присутствии аллели (-516)C, а наличие сигнала красителя HEX – о присутствии аллели (-516)T гена PLAUR. Для гена PLAU о наличии аллели (-422)С говорило присутствие сигнала красителя ROX, а о наличии аллели (-422)T – присутствие сигнала красителя Cy5 (Рисунок 8).
Исследование полиморфизмоа генов IL-1 С(-511)Т, IL-6 G(-174)C, TNF- G(-238)A, MMP-9 С(-1562)Т, uPA С/Т 3 UTR, uPAR T(-516)C в группах пациентов с рецессией десны I-II класса по Миллеру и группе пациентов с клинически здоровой десной с толстым биотипом десны
В нашей работе мы исследовали полиморфизм генов С(-511)Т IL-ip, G(-238)A TNF-a, G(-174)C IL-6 , C(-1562)T MMP9, C/T 3 UTR uPA и T(-516)C uPAR, однонуклеотидные замены которых расположены в промоторной области гена и могут повлиять на увеличение или уменьшение экспресссии генов. Для проверки этой гипотезы и оценки влияния экспрессии, выбранных нами генов, на ткани десны мы провели определение относительно экспрессии генов цитокинов (IL-ip, IL-6, TNF-a), металлопротеиназы-9 (ММР-9), генов урокиназного компекса uPA, uPAR. Сопоставили экспрессию с генотипами и с изменением клинических показателей (ширины прикрепленной десны, высоты рецессии, ширины рецессии и индексом эффективности гигиены (РНР)) после проведения операции в группах пациентов с рецессией десны I-II и III класса по Миллеру. Данные об относительной экспрессии изученных нами генов представлены в таблице
Экспрессия генов IL-ip, IL-6, TNF-a, ММР-9, uPA, uPAR в группах пациентов: 1 группа с рецессией десны I-II класса по Миллеру, 2 группа с рецессией десны III класса по Миллеру и в 3 группе с клинически здоровой десной Признак 1 группа N=34 2 группа N=22 3 группа N=35 Р для ТкритерияСтьюдента Относительная эксперссия (Expr) IL1-P 1,01±1,64 1,81±2,74 3,50±3,02 0,01 дляlvs30,04 для 2vs3 Expr IL-6 1,38±2,51 1,33±3,92 1,35±2,32 0,05 Expr TNF-a 0,51±1,44 3,72±10,81 0,45±1,49 0,05 Expr ММР-9 0,94±2,33 0,27±0,67 0,77±2,08 0,05 Expr uPA 0,34±0,80 0,37±0,51 0,80±2,03 0,05 Expr uPAR 0,65±1,86 0,56±0,79 0,28±0,60 0,05 Из данных таблицы видно, что экспрессия генов IL-6, TNF-, MMP-9, uPA, uPAR статистически значимо не отличалась между группами. Имеются достоверные отличия по экспрессии гена IL-1. Самая высокая экспрессия наблюдается в группе здоровых пациентов 3,50±3,02, она достоверно отличается от экспрессии в 1 группе 1,01±1,64 (р 0,01) и 2 группе 3,50±3,02 (р=0,04). Достоверных отличий между 1 и 2 группами выявлено не было.
Исследование взаимосвязи полиморфизма генов IL-1b С(-511)Т, IL-6 G(-174)C, TNF-a G(-238)A, MMP-9 С(-1562)Т, uPA С/Т 3 UTR, uPAR T(-516)C с экспрессией генов IL-1, IL-6, TNF-, MMP-9, uPA, uPAR и клиническими показателями в группе пациентов с рецессией I-II класса по Миллеру
Мы поделили пациентов в первой группе с рецессией I-II класса по Миллеру в зависимости от генотипа на подгруппы (1 – дикий генотип (генотип в котором присутствуют 2 нормальных аллели), 2 – гетерозиготный генотип (генотип, в котором присутствует одна нормальная, другая – мутантная аллель), 3 – мутантный генотип (генотип в котором присутствуют 2 мутантных аллели)) для оценки влияния генотипа на экспрессию генов и клинические показатели десны.
Данные о взаимосвязи полиморфизма генов IL-1 С(-511)Т, IL-6 G(-174)C, TNF- G(-238)A, MMP-9 С(-1562)Т, uPA С/Т 3 UTR, uPAR T(-516)C их экспрессии, ширине прикрепленной десны, высоте и ширине рецессии, высоте и ширине рецессии через 1 и 3 месяца после операции по ликвидации рецессии десны представлены в таблице 18.
Клинические показатели, экспрессия генов IL-lp, IL-6, TNF-a, ММР-9, uPA, uPAR в зависимости от генотипа в 1 группе пациентов с рецессией десны I-II класса по Миллеру IL-ip С(-511)Т По гену IL-1 С(-511)Т достоверно отличалась высота рецессии. Гетерозиготному генотипу (–511)СТ соответствовала высота рецессии (3,42±0,99 мм), тогда как мутантному генотипу (-511)ТТ соответствовали более высоки цифры высоты рецессии (4,60±0,55мм), р=0,03. Это может свидетельствовать о том, что с наличием мутантной аллели (-511)Т увеличивается экспрессия провоспалительного цитокина IL-1, что приводит к увеличению высоты рецессии, хотя достоверных отличий экспрессии гена IL- между подгруппами выявлено не было.
По гену MMP-9 С(-1562)Т достоверные отличия были выявлены сразу по нескольким показателям: ширине прикрепленной десны; ширине прикрепленной десны и высоте рецессии через 1 месяц после операции. Достоверные отличия по ширине прикрепленной десны были выявлены в подгруппах дикий генотип (-1562)СС (4,10±0,70 мм) и мутантный генотип (-1562)ТТ (2,50±0,71 мм), р 0,01; гетерозиготный генотип (–1562)СТ (4,18±0,87 мм) и мутантный генотип (-1562)ТТ (2,50±0,71 мм), р=0,03. Из этих данных следует, что с наличием одной или двух мутантных аллелей ширина прикрепленной десны уменьшается, что может говорить о повышении экспрессии гена ММР-9, которое приводит к формированию менее широкого десневого прикрепления, что может способствовать образованию рецессии десны. Также ширина прикрепленной десны через месяц достоверно меньше у мутантного генотипа (-1562)ТТ (4,55±0,35 мм) по сравнению с диким генотипом (-1562)СС (5,80±0,56 мм), p 0,01. Высота рецессии через месяц больше у мутантного генотипа (-1562)ТТ (0,29±0,10 мм) по сравнению с диким генотипом (-1562)СС (0,45±0,07 мм), р=0,05 (Рисунок 13).
Распределение значения высоты рецессии десны через 1 месяц после операции у пациентов в первой группе с рецессией I-II класса по Миллеру в зависимости от генотипа ММР-9 С(-1562)Т Имелась тенденция к достоверным отличиям экспрессии гена MMP-9 в зависимости от генотипа: (-1562)СС 0,03±0,04 vs (-1562)TT 0,01±2,26, (p 0,1); (-1562)СС 0,03±0,04 vs (-1562)CT 0,99±2,82), p 0,1). Это свидетельствует о том, присутствие мутантной аллели (-1562)Т способствует увеличению экспрессии гена ММР-9, которая может сказаться на увеличении рецессии десны и уменьшении ширины прикрепленной десны, что может удлинить сроки регенерации у пациентов 1 группы с рецессией десны I-II класса по Миллеру (Рисунок 14).
Распределение относительной экспрессии гена ММР-9 С(-1562)Т соответственно генотипу у пациентов в первой группе с рецессией I-II класса по Миллеру По гену uPA С/Т 3 UTR достоверные отличия были обнаружены в экспрессии гена. Мутантному генотипу соответствовала более высокая экспрессия (3 UTR)ТТ 1,16±1,57 по сравнению с гетерозиготным генотипом (3 UTR)СТ (0,23±0,61), р=0,04. Это подтверждает то, что мутантная аллель (3 UTR)Т увеличивает экспрессию гена uPA на пост-транскрипционном уровне путём изменения стабильности 3UTR или его сродства к РНК-стабилизирующим факторам. Достоверных отличий в подгруппах по клиническим показателям выявлено не было.
По гену uPAR T(-516)C достоверно отличалась высота рецессии через 1 месяц после операции. Рецессия была больше у мутантного генотипа (-516)СС (0,40±0,18 мм) по сравнению с диким генотипом (-516)ТТ (0,26±0,09 мм), р=0,02. 3.3.2 Корреляционные взаимосвязи между экспрессией генов IL-1, IL-6, TNF-, MMP-9, uPA, uPAR и клиническими показателями в группе пациентов с рецессией I-II класса по Миллеру Данные о корреляционной взаимосвязи экспрессии генов IL-1, IL-6, TNF-, MMP-9, uPA, uPAR с шириной прикрепленной десны, высотой и шириной рецессии, высотой и шириной рецессии через 1 и 3 месяца, индексом эффективности гигиены (РНР) до операции, через 1 и 3 месяца после операции по ликвидации рецессии десны представлены в таблице 19.
Корреляция рецессии десны с биотипом десны и полиморфизмом изученных генов
В нашем исследовании была проведена оценка влияния генотипа изученных генов на клинические показатели и оценка корреляционных взаимосвязей экспрессии генов и клинических показателей. В первой группе пациентов мы выявили корреляцию высоты рецессии десны с полиморфизмом гена IL-1 С(-511)Т, достоверные различия были выявлены между генотипами (-511)СТ (3,42±0,99 мм) и (-511)ТТ (4,60±0,55 мм), р=0,03. Причем с наличием мутантной аллели высота рецессии увеличивалась. Выявлены различия по ширине прикрепленной десны. Однако корреляционной взаимосвязи экспрессии IL-1 c высотой рецессии выявлено не было. Самая маленькая ширина прикрепленной десны была выявлена у пациентов с мутантным генотипом (-1562)ТТ ММР-9 (2,50±0,71 мм) и имелись достоверные отличия с генотипами (-1562)СС (4,10±0,70 мм) и (-1562)СТ (4,18±0,87 мм), р=0,03. Ширина прикрепленной десны через 1 месяц после операции также отличалась в зависимости от генотипа (-1562)СС (5,80±0,56 мм) vs (-1562)TT (4,55±0,35 мм), p 0,01; высота рецессии через 1 месяц (-1562)СС (0,29±0,10 мм) vs (-1562)TT (0,45±0,07 мм), р=0,05. Это дает нам возможность предположить, что наличие мутантной аллели (-1562)Т приводит к повышению экспрессии ММР-9 и увеличению рецессии за счет влияния ММР-9 на деградацию экстрацеллюлярного матрикса, тем самым ухудшая стабильность результата после операции. Хотя достоверной корреляции генотипа ММР-9 с экспрессией данного гена выявлено не было. Это можно объяснить малым количеством пациентов с мутантным генотипом (-1562)ТТ (n=2) в нашем исследовании, так как данная мутация встречается не часто. Высота рецессии через 1 месяц после операции отличалась, значения у мутантного генотипа (-516)CC uPAR выше (0,26±0,09 мм), чем у дикого генотипа (-516)TT (0,40±0,18 мм), р=0,02. Была обнаружена слабая положительная корреляционная взаимосвязь экспрессии uPAR и высоты рецессии через 1 и 3 месяца после операции, достоверных различий по величине экспрессии в зависимости от генотипа uPAR выявлено не было. Однако слабая отрицательная корреляционная связь была обнаружена только между экспрессией IL-6 и шириной прикрепленной десны до операции и через 1 и 3 месяца после хирургического вмешательства, но связь генотипа с величиной экспресси по гену IL-6 установлена не была. В свою очередь ширина прикрепленной десны имеет сильную положительную корреляционную связь с шириной прикрепленной десны через 1 и 3 месяца после операции. На увеличение высоты рецессии через 3 месяца оказывает влияние повышенная экспрессия гена uPAR, повышение индекса РНР. На увеличение ширины рецессии через 1 месяц влияет повышение экспрессии MMP-9.
Во второй группе пациентов с III классом рецессии по Миллеру на увеличение высоты рецессии через 1 месяц влияет повышение экспрессии ММР-9, уменьшение ширины прикрепленной десны через 1 месяц. На увеличение высоты рецессии через 3 месяца влияет повышение экспрессии IL-1b, причем нами была выявлена достоверная взаимосвязь генотипа IL-1 С(-511)Т во второй группе пациентов с увеличением экспрессии (диким генотипом (-511)СС (0,81±1,72) и мутантным генотипом (-511)ТТ (7,68±1,04), p 0,01; гетерозиготным генотипом (-511)СТ (1,64±2,37) и мутантным (-511)ТТ (7,68±1,04), p 0,01. Наши данные соответствуют данным Hu Y.Y. и соавт., 2015, они показали, что при пародонтите у пациентов с генотипом (-511)ТТ экспрессий IL-1b выше, чем у пациентов с генотипом (-511)СС (p 0,05) [80]. Это поможет в прогнозе результата после операции, так как выявив мутацию в гене IL-1b С(-511)Т и определив генотип (-511)СТ и (-511)ТТ у пациентов с рецессией десны III класса будет известно о повышенной экспрессии гена IL-1 и возможно ожидать высокую вероятность увеличения рецессии через 3 месяца, соответственно необходимо выбирать правильную тактику ведения таких пациентов.
Во второй группе пациентов на ширину прикрепленной десны оказывал влияние полиморфизм гена IL-6 G(-174)C достоверные различия между подгруппами были выявлены по ширине прикрепленной десны между генотипом (-174)GG (3,44±0,73 мм) и гетерозиготным генотипом (-174)GA (4,25±0,71 мм), p=0,04. Из этих данных видно, что с наличием мутантной аллели (-174)А, которая уменьшает экспрессию IL-6, ширина прикрепленной десны увеличивается, но достоверно значимой корреляции между экспрессией IL-6 и шириной прикрепленной десны выявлено не было.
При наличии мутантной алелли (-238)А гена TNF- увеличивалась экспрессия TNF-: (-238)GG (2,10±7,70) vs (-238)GA (19,86±27,46), p=0,02. По данным литературы мутантная аллель (-238)А гена TNF- отвечает за снижение экспрессии [63; 160]. В нашей работе мы получили иные данные, поэтому установление этой взаимосвязи нуждается в дальнейшем изучении. Были обнаружены достоверные отличия между генотипами (-238)GG и (-238)GA по высоте рецессии через 3 месяца после операции ((-238)GG (0,30±0,10 мм) vs (-238)GA (0,55±0,07 мм), p 0,01)) и ширине рецессии через 3 месяца после операции ((-238)GG (0,93±0,41 мм) vs (-238)GA (2,05±1,91 мм), p=0,02). Это говорит, что наличие мутантной аллели (-238)А увеличивает экспрессию TNF-, и происходит увеличение высоты и ширины рецессии через 3 месяца после операции, но в нашем исследовании не было выявлено достоверной корреляционной взаимосвязи экспрессии TNF- c высотой и шириной рецессии десны через 3 месяца после операции.
Высота рецессии десны была ассоциирована с полиморфизмом гена uPA С/Т 3 UTR были обнаружены достоверные различия между генотипом дикого типа (3 UTR)СС (3,67±0,82) и гетерозиготным (3 UTR)СТ (2,78±0,67), р=0,04. Высота рецессии меньше в подгруппе с гетерозиготным генотипом по сравнению с генотипом дикого типа. Это подтверждает то, что мутантная аллель (3 UTR)Т увеличивает экспрессию гена uPA [11; 23, 156]. По нашим данным при наличии мутантной аллели Т высота рецессии уменьшается, но это противоречит описанному выше механизму, что может говорить о наличии другой взаимосвязи с высотой рецессии в группе пациентов с III классом рецессии по Миллеру.
Высота рецессии до операции и через 1 месяц после операции была ассоциирована с полиморфизмом гена uPAR T(-516)C. Достоверные отличия имеются по высоте рецессии между генотипами (-516)ТТ (4,00±0,82 мм) vs (-516)CC (3,08±0,51 мм) р=0,02 и высоте рецессии через 1 месяц после операции по ликвидации рецессии (-516)ТС (0,35±0,08 мм) vs (-516)СС (0,17±0,05 мм), р 0,01. При наличии данная мутации уменьшается экспрессия гена uPAR [70; 129]. По нашим данным с наличием мутантной аллели (-516)С уменьшается показатель высоты рецессии и высоты рецессии через 1 месяц, что может быть связано с уменьшением экспрессии uPAR. Достоверной корреляции между уровнем экспрессии uPAR и клиническими показателями выявлено не было.