Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Современные представления об этиологии, патогенезе, профилактике и лечении хронического рецидивирующего афтозного стоматита (обзор литературы) 13
1.1 Этиология стоматитов 14
1.2 Патогенез стоматитов 22
1.3 Современные методы профилактики и лечения стоматитов 24
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 28
2.1 Общая характеристика проведенных исследований 28
2.2 Материал и методы экспериментальной части исследования 28
2.3 Материал и методы клинической части исследования 36
2.4 Материалы и методы биохимических исследований
2.4.1 Биохимические методы исследования крови 40
2.4.2 Биохимические методы исследования ротовой жидкости 42
2.5 Методы статистического анализа 42
ГЛАВА 3. Разработка и обоснование к использованию нового средства для местной терапии поражений слизистой оболочки полости при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите 43
3.1 Разработка рецептуры и обоснование компонентного состава нового адгезивного лечебного средства для терапии пораженной слизистой оболочки полости рта при ХРАС 43
3.2 Клиническая апробация разработанного адгезивного лечебного средства для терапии пораженной слизистой оболочки полости рта при ХРАС 50
ГЛАВА 4. Экспериментальное исследование токсических, ранозаживляющих и регенераторных свойств разработанных средств терапии поражений слизистой оболочки полости рта при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите 66
4.1 Результаты исследования острой токсичности разработанных адгезивных лечебных средств при нанесении на кожу 66
4.2 Результаты исследования острой токсичности разработанных адгезивных лечебных средств при введении в желудок 68
4.3 Результаты исследования хронической токсичности разработанных адгезивных лечебных средств при нанесении на кожу 70
4.4 Результаты исследования хронической токсичности разработанных адгезивных лечебных средств при введении в желудок 72
4.5 Результаты исследования локального раздражающего действия разработанных адгезивных лечебных средств при втирании в кожу (индекс кожно-раздражающего действия) 77
4.6 Результаты исследования локального раздражающего действия разработанных адгезивных лечебных средств при втирании
в слизистую оболочку полости рта 78
4.7 Результаты оценки сенсибилизирующего действия разработанных адгезивных лечебных средств 79
4.8 Результаты исследования микробиологических показателей разработанных адгезивных лечебных средств 80
4.9 Исследование специфической активности разработанных адгезивных лечебных средств № 1 при остром воспалительном процессе на модели открытой раны 81
4.10 Изучение ранозаживляющей активности РАЛС № 2 на модели химического ожога 99
ГЛАВА 5. Клинико-биохимические аспекты использования разработанных средств терапии поражений слизистой оболочки полости рта при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите
ГЛАВА 6. Обсуждение результатов исследования 129
Выводы 141
Практические рекомендации 143
Список литературы 144
- Патогенез стоматитов
- Материал и методы клинической части исследования
- Клиническая апробация разработанного адгезивного лечебного средства для терапии пораженной слизистой оболочки полости рта при ХРАС
- Результаты исследования хронической токсичности разработанных адгезивных лечебных средств при введении в желудок
Введение к работе
Актуальность исследования. В течение последнего десятилетия проблеме профилактики и лечения хронических заболеваний слизистой оболочки полости рта уделяется значительное внимание в отечественных и зарубежных исследованиях (Е.В. Боровский, 2011; О.Ф. Рабинович, 2010; Н.Ф. Данилевский, 2010; G. Gehre, 2011). В повседневной клинической практике пациенты с заболеваниями слизистой оболочки полости рта, обратившиеся за стоматологической помощью, представляют одну из наиболее сложных проблем в стоматологии из-за трудностей в диагностике, лечении и частых рецидивов (А.И. Николаев, 2008; J.F. Reenen, 2013). Проблема усложняется еще и тем, что до настоящего времени каких-либо мер коммунальной профилактики болезней слизистой оболочки полости рта не разработано.
Хронический рецидивирующий афтозный стоматит (ХРАС) - инфекционное заболевание, возникающее в результате взаимодействия трех основных факторов: микроорганизмов, макроорганизма и окружающей среды (Е.Н. Силантьева, 2013; О.А. Успенская, 2015). Хронический рецидивирующий афтозный стоматит характеризуется частым рецидивированием высыпаний на слизистой оболочке полости рта и обьино сопровождается нарушением целостности эпителия, местной воспалительной реакцией и выраженным болевым синдромом, ухудшающим качество жизни пациентов (М.Т. Темирбаев, 2010; Е.В. Бахрушина, 2012; R. Hofmann, 2009).
Хронический рецидивирующий афтозный стоматит считается одним из самых частых заболеваний слизистой оболочки полости рта. Так, еще по данным А.И. Рыбакова и Г.В. Банченко (1978), он составлял до 5 % от всех заболеваний слизистой оболочки полости рта. По мнению других исследователей почти у 20 % населения появляются афты в тот или иной период жизни. Установлено, что возраст большинства больных колеблется от 20 до 40 лет. До полового созревания болеют одинаково часто лица обоего пола, но среди взрослых преобладают женщины (И.М. Рабинович, И.И. Бабиченко, О.Ф. Рабинович, 2011).
Этиология и патогенез хронического рецидивирующего афтозного стоматита окончательно не выяснены. Существенная роль в патогенезе хронических воспалительных процессов принадлежит состоянию микробиоценоза слизистой оболочки полости рта (И.М. Быков, 2013, 2015; R. Arnone, 2013; Н. Kimura, 2014). Кроме того, по наблюдениям отечественных и зарубежных ученых рецидивы ХРАС нередко связаны с какими-то провоцирующими факторами, в том числе инфекционной природы (О.А. Успенская, 2015; C.J. Thomas, 2014). О роли желудочно-кишечной патологии и заболеваний печени в патогенезе хронического рецидивирующего афтозного стоматита свидетельствуют клинические и экспериментальные данные (Л.А. Цветкова, 2006; Е.В. Боровский, 2011).
В то же время, проблема свободнорадикальных процессов и антиоксидантной защиты в слюне при данной патологии остается малоизученной. Известно, что нарушения иммунологического и свободнорадикального статуса могут влиять на течение и прогноз хронических заболеваний слизистой оболочки полости рта (А.Ф. Гаспарян, 2010; Г.В. Банченко, 2010; И.М. Быков, 2015; Т.Е. Emmer, 2015).
Лечение хронического рецидивирующего афтозного стоматита всегда представляет трудную задачу, поскольку необходимо достижение стойкой и длительной ремиссии под контролем клинико-иммунологического и клинико-биохи-мического обследования больного. Одним из направлений в лечении дисбиоза слизистых оболочек на современном этапе развития медицинской науки ученые считают применение комплексных препаратов бактериального происхождения,
которые действуют по принципу вакцин, например, имудона (Н.О. Абашидзе, 2006; О.Ф. Рабинович, 2010, 2012; R.P. Feller, 2014).
Кроме этого, для эффективной терапии поражений слизистой оболочки полости рта при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите необходимо использовать препараты и вещества, разрешенные к использованию в медицинской практике с уже известными свойствами (например, адгезивными), а также разработать и предложить новые перспективные средства, обладающие универсальными свойствами.
Не лишены актуальности научные работы в области поиска новых средств местной терапии поражений слизистой оболочки полости рта, обладающих противовоспалительными, антибактериальным, ранозаживляющим, кровоостанавливающим, противоотечным, местнообезболивающим, разжижающим слюну свойствами, позволяющими эффективно использовать их в случаях сочетанной патологии тканей пародонта и слизистой оболочки полости рта в виде хронического рецидивирующего афтозного стоматита.
В связи с этим изучение патогенетических механизмов местной терапии поражений слизистой оболочки полости рта больных хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом и разработка дифференцированных принципов лечения данного заболевания, являются актуальной задачей современной стоматологии.
Цель исследования: повысить эффективность терапии поражений слизистой оболочки полости рта у больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом на основании объективных данных местного иммунитета и состава ротовой жидкости путем разработки и клинического применения новых адгезивных лечебных средств.
Задачи исследования
-
Разработать состав и способ изготовления новых адгезивных лечебных средств для терапии пораженной слизистой оболочки полости рта при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите, с учетом их влияния на биохимические и иммунологические показатели ротовой жидкости.
-
В эксперименте на животных изучить токсическое и раздражающее воздействие разработанных адгезивных лечебных средств на организм при длительном их применении.
-
В эксперименте на животных исследовать ранозаживляющие и регенераторные свойства разработанных адгезивных лечебных средств.
-
Изучить степень дисбиоза полости рта по показателям активности уреазы и лизоцима, дать оценку состоянию антиоксидантных систем и процессов перок-сидации липидов при использовании РАЛС у больных ХРАС.
-
В клинических условиях оценить сроки эпителизации слизистой оболочки полости рта и количество рецидивов при использовании разработанных и традиционных средств терапии ХРАС.
Научная новизна полученных результатов
Впервые на основе лабораторных испытаний, токсико-гигиенических, экспериментальных и клинических исследований разработан оптимальный состав адгезивных лечебных средств для терапии пораженной слизистой оболочки полости рта при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите, с учетом их влияния на биохимические и иммунологические показатели ротовой жидкости (патент РФ на изобретение № 2542469).
Впервые установлено, что включение в план комплексного лечения больных ХРАС разработанных средств, устраняющих болевой фактор, ускоряющих процессы регенерации элементов поражения, нормализующих иммунологическую реактивность, повышающих структурную резистентность слизистой оболочки
полости рта предупреждает и уменьшает количество рецидивов и облегчает тяжесть течения заболевания.
Впервые доказано, что использование РАЛС не только нормализует метаболические нарушения, лежащие в основе появления афт при ХРАС, но и позволяет достичь хорошего гигиенического состояния полости рта и зубов.
Впервые установлены показатели ротовой жидкости и крови, которые подвержены изменениям при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите и факторы, которые способствуют ускорению эпителизации элементов поражения слизистой оболочки полости рта.
Установлено, что включение разработанных адгезивных лечебных средств в комплексное лечение больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом способствует устранению явлений гипосаливации, дисбиоза и воспаления за счет активации защитных систем ротовой жидкости, представителями которых являются лизоцим и каталаза.
Практическая значимость полученных результатов
Доказана необходимость индивидуального подхода и тщательного анализа показателей ротовой жидкости и крови больных ХРАС при определении схемы общей и местной терапии.
Показана необходимость разработки лечебно-профилактических мероприятий, направленных на стимуляцию скорости саливации, повышение структурной резистентности тканей полости рта и нормализацию микробиоценоза у больных ХРАС.
Установлено, что применение разработанных адгезивных лечебных средств в клинике патогенетически обосновано и эффективно для включения их в комплексную терапию при лечении больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом. Назначение РАЛС ускоряет процессы эпителизации афт и снижает количество рецидивов.
Результаты клинических испытаний свидетельствуют о быстрой ремиссии заболевания, уменьшении скорости образования зубного налета и улучшении гигиенического состояния полости рта сразу после начала использования РАЛС.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту
-
Уменьшение скорости саливации приводит к снижению неспецифической резистентности тканей полости рта, возрастанию обсемененности и агрессивных свойств микроорганизмов у больных хроническим афтозным стоматитом.
-
Использование разработанных адгезивных лечебных средств улучшает гигиеническое состояние полости рта у пациентов с ХРАС, как за счет прямого антимикробного действия компонентов РАЛС, так и за счет их способности стимулировать саливацию и повышать местный иммунитет.
-
Местную терапию поражений слизистой оболочки полости рта при ХРАС необходимо проводить под контролем биохимических и иммунологических показателей ротовой жидкости.
-
Использование РАЛС у больных ХРАС обеспечивает снижение уровня общего кальция, неорганического фосфора, лизоцима и SigA, а также активности щелочной фосфатазы в составе ротовой жидкости через 5 суток после начала лечения до уровней, сопоставимых с показателями, выявленными в группе практически здоровых лиц.
-
Применение в комплексном лечении больных с ХРАС разработанных адгезивных лечебных средств позволяет сократить сроки эпителизации элементов поражения слизистой оболочки полости рта.
Личный вклад соискателя. Автором лично проанализирована научная литература и проведен патентно-информационный поиск по теме диссертации. Оп-
ределена актуальность проблемы, сформулирована цель и задачи данной работы. Самостоятельно проведены экспериментальные, биохимические, клинические и лабораторные исследования, осуществлена статистическая обработка, систематизация, анализ и обобщение полученных результатов. Сформулированы выводы и рекомендации для научного и практического использования результатов исследования. Оформлена диссертация и опубликованы научные работы по всем разделам диссертации. Результаты оригинальных исследований зафиксированы в операционных протоколах, картах больных. Диссертант принимала непосредственное участие в разработке рецептурных композиций адгезивных лечебных средств и проведении их доклинических испытаний. Статистическая обработка и анализ полученных данных выполнены автором самостоятельно. Вклад в проведенное исследование составляет 85 %.
Внедрение результатов исследований. Полученные результаты используются в ГБУЗ «Краевая клиническая стоматологическая поликлиника» министерства здравоохранения Краснодарского края (г. Краснодар); СП ГБОУ ВПО Куб-ГМУ Минздрава России (г. Краснодар); в учебном процессе на профильных стоматологических кафедрах ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России и ГБОУ ВПО СтГМУ Минздрава России, кафедре фундаментальной и клинической биохимии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России (г. Краснодар). Результаты исследования внедрены и используются в лечебной работе государственных и частных учреждений г. Краснодара и Ставрополя.
Публикации и апробация диссертационной работы. По теме диссертации опубликованы 14 печатных работ, из них 9 - в изданиях, включенных в Перечень российских рецензируемых научных журналов, в которых должны быть опубликованы основные научные результаты диссертаций на соискание ученых степеней доктора и кандидата наук, получен патент РФ на изобретение.
Материалы диссертации доложены на конференции «Современные проблемы амбулаторной хирургической стоматологии» (г. Ростов-на-Дону, 2010 г), VII Всероссийском научном форуме с международным участием «Стоматология 2012» (г. Москва, 2012), XV итоговой (межрегиональной) научной конференции студентов и молодых ученых (Краснодар, 2014); IV Открытой межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Краснодар, 2015), а также на XXI Всемирном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореа-билитации (Сингапур, 2015).
Апробация диссертации проведена на расширенном заседании сотрудников стоматологических кафедр, кафедры фундаментальной и клинической биохимии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 178 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы материалы и методы исследования, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Список использованной литературы включает 295 источников, из них 179 отечественных и 116 иностранных автора. Диссертация иллюстрирована 49 рисунками, содержит 20 таблиц. Диссертационное исследование выполнено на кафедрах пропедевтики и профилактики стоматологических заболеваний и фундаментальной и клинической биохимии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России в рамках отраслевой научно-исследовательской программы № 22 «Стоматология». Номер государственной регистрации: 01206861421.
Патогенез стоматитов
Многообразие клинических форм стоматитов и большое число этиологических факторов и патогенетических цепей развития воспалительно-дистрофических заболеваний в слизистой оболочке полости рта делают проблему профилактики и лечения стоматитов чрезвычайно трудной для практического решения [8, 212]. Учитывая решающую роль микробного фактора в этиологии стоматитов, очевидно, что антимикробная терапия должна занимать ведущее место в комплексе лечебных мероприятий при этих заболеваниях [1, 54, 56, 201, 207]. Поскольку в патогенезе стоматитов очень важную роль играет снижение неспецифического и специфического иммунитета, то это предопределяет широкое использование различных иммуномодуляторов для повышения уровня антимикробной защиты тканей полости рта [30, 161, 174, 208]. С целью им-муностимуляции при стоматитах используются различные адаптогены [21]. Чаще всего препараты адаптогенов применяют в виде зубных эликсиров, гелей, мазей и полосканий [26, 72, 114, 131].
Наличие дисбактериоза полости рта у больных стоматитами, как правило, является следствием кишечного дисбиоза и поэтому требует обязательного устранения дисбиотических явлений в организме, что достигается применением пребиотиков и пробиотиков [102, 166, 168, 208].
Поскольку стоматиты возникают в большинстве случаев на фоне общесоматических заболеваний, то это обстоятельство требует одновременного лечения сопутствующих заболеваний [39, 82, 144].
За последние годы было предложено большое количество лекарственных препаратов как для местного так и общего применения при лечении заболеваний слизистой оболочки полости рта. В то же время в стоматологической практике не всегда удается достигнуть ожидаемого эффекта от применения этих препаратов.
Ряд исследователей используют низкие температуры для купирования поражений слизистой оболочки полости рта при ХРАС. Так, например, Ста-рокожева Л.Ю. предложила современные криотехнологии в комплексной терапии хронических афт слизистой оболочки полости рта [147], а в исследовании Токмаковой СИ. (2012) разработаны способы оценки эффективности криообезболивания афт при лечении хронического рецидивирующего афтоз-ного стоматита [157, 158]. Известно, основной принцип лечения заболеваний слизистой оболочки полости рта - это комплексный подход, учитывающий полиэтиологичность этих заболеваний и их тесную взаимосвязь с общесоматической патологией [5, 93]. Поэтому лечение таких больных должно происходить с учетом субъективных и объективных данных всестороннего обследования с привлечением специалистов из других отраслей медицины [5].
Важно также помнить, что развитие стоматитов всегда происходит на фоне существенного ослабления адаптационно-трофических систем тканей слизистой оболочки полости рта и организма в целом [92, 94]. Это необходимо учитывать при назначении лечения.
Для ускорения процессов регенерации широко используют витамины группы А, Е. Из жирорастворимых витаминов при стоматитах, как правило, используют препараты витамина Е (токоферол ацетата) в ампулах или флаконах как для инъекций, так и для местного применения в виде аппликаций, фонофореза [30].
По данным литературы, для местного лечения, ускорения процессов регенерации используют следующие методы введения препаратов: орошение, ингаляции, аппликации, фонофорез, а также иммобилизацию различных биологически активных веществ на пленки на основе природных полисахаридов. При эрозивно-язвенных элементах поражения используют пленки на основе коллагена и метилурацила, пленки депонирующие атропин, влияющие на процессы микроциркуляции. Для ускорения процессов регенерации элементов поражения используются пленки содержащие солкосерил [7, 231,249,250,256].
С целью повышения неспецифической резистентности организма и тканей полости рта используют иммуномодуляторы. С целью стимуляции -полиоксидоний, ликопид [236]. С целью усиления процессов регенерации слизистой оболочки полости рта широко используют иммуномодулятор ти-малин и вилон [30].
Для местного применения предлагают препараты в виде мазей, содержащих цитокины. С целью влияния на функциональную активность макро фагов используют иммуномодулятор Галавит, обладающий противовоспалительными свойствами и иммуномодулирующими свойствами [46, 59].
Банченко Г.В. с соавт., для ускорения процессов регенерации элементов поражения при красном плоском лишае применяли фонофорез витамина Е и аминокапроновую кислоту, которая обладала противоаллергическим, имму-нокоррегирующим и нормализующим действием. Аминокапроновая кислота использовалась в виде ротовых ванночек в течение 3-5 минут как ингибитор протеолитических ферментов для профилактики рецидивов у больных хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом [15, 175, 176].
Высокую терапевтическую эффективность в клинике для лечения заболеваний слизистой оболочки полости рта и тканей пародонта отмечали при применении биофлавониода кверцетина как местно, так и внутрь [119].
Патогенетически обоснованную терапию хронического рецидивирующего стоматита предложил А.И. Рыбаков: под элементы афт вводят атропин, его раствором обрабатывают афты и по 8 капель принимают внутрь. Лечебный эффект объясняется тем, что при этом прерывается патологическая им-пульсация с поврежденной слизистой оболочки [164].
Все исследователи и клиницисты сходятся в едином мнении, что всем больным хроническим рецидивирующим стоматитом необходимо проводить тщательную санацию полости рта, противовоспалительные мероприятия, особое внимание уделить лечению основного заболевания и проведению рациональной гигиены полости рта.
Материал и методы клинической части исследования
Исследования проводили на белых половозрелых крысах линии Вистар. Сформированы 3 группы: 2 опытных и 1 контрольная. В каждой группе 5 самцов и 5 самок, возраст животных - 2-3 месяца, масса тела 150-200 г.
Цель опыта состояла в определении возможного раздражающего действия испытуемого вещества при непосредственном контакте со слизистой оболочкой полости рта. У животных перед началом испытаний проверяли состояние слизистой оболочки полости рта, а затем производили обработку полости рта исследуемым средством 4 раза в день в течение 4 суток, которое вносили в ротовую полость животных и равномерно распределяли по слизистой оболочке рта с помощью ватной турунды в течение 30 секунд. Период наблюдения 7 суток (4 опытных дня и 3 после окончания обработки полости рта). Учитывалась степень раздражения слизистой рта и слизистой в области соединения губ. По специальной оценочной шкале выставляли баллы (от 1 до 3). Степень раздражения ротовой полости оценивали в баллах:
Состояние слизистой оболочки полости рта: 0 - отсутствие раздражения; 1 - потеря цвета, легкое шелушение; 2 - шелушение в различных областях; 3 - появление язв.
Коэффициент раздражения подсчитывали путем суммирования среднего ежедневного группового балла по двум показателям (слизистой оболочкой полости рта и соединения губ) и деленного на количество дней наблюдения (7). белых крысах линии Вистар в возрасте 2,5 месяца массой тела 150-200 г - 30 особей.
Исследуемое вещество вводили один раз в подслизистый слой полости рта в количестве 0,2 мл. Контрольным животным, в том же объеме вводили стерильный физраствор. Для контроля использовали адьювант Фрейнда.
Результаты оценивали в баллах: 0 баллов - отсутствие воспаления (отсутствие сенсибилизирующего действия) (Is = 0). 1 балл - слабо заметное воспаление (слабое сенсибилизирующее действие) (Is = 1). 2 балла - хорошо заметное воспаление (умеренное сенсибилизирующее действие) (Is = 2). 3 балла и 4 балла - ярко заметное воспаление, ярко выраженное везикулярное воспаление (выраженное сенсибилизирующее действие) (Is = 3).
Исследование специфической активности РАЛС № 1 при остром воспалительном процессе на модели открытой раны.
В условиях клиники кафедры паразитологии и ветсанэкспертизы, анатомии и патологической анатомии Ставропольского государственного аграрного университета и научно-диагностического и лечебного ветеринарного центра ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет» проведены испытания ранозаживляющих свойств разработанных средств на белых лабораторных крысах. Оперативное вмешательство проводили под общей анестезией препаратом «Золетил» из расчета 10 мг/кг массы тела, разрешенным для официального применения в ветеринарии.
Крыс фиксировали на специальном столике. На наружной поверхности правого и левого бедра проводили удаление волосяного покрова. Дезинфекцию операционного поля проводили 70 % спиртовым раствором.
Для опытов взяли 40 крыс линии Вистар массой 180-200 г. Все животные были разделены на 2 группы: контрольную и основную. Во всех группах для создания модели открытой раны использовали стандартную процедуру: производили разрез кожи бедра крысы (справа и слева) и вводили в рану ватный шарик, смоченный в 2 % формалине на 10 минут.
У основной группы животных для исследования использовали РАЛС № 1 в виде аппликаций. Изучаемые объекты наносили местно на очаг воспаления 3 раза в сутки. Сроки забора материала 3, 6 и 9 суток.
В контрольной группе находились животные, не получавшие лечения. Изучение ранозаживляющей активности РАЛС № 2 на модели химического ожога. Ранозаживляющую активность разработанной лечебной композиции изучали на 40 белых беспородных крысах, обоего пола, массой 180-200 гр. Распределение животных по группам осуществляли согласно алгоритму, описанному выше.
Животным на депилированный участок правого и левого бедра контактным способом с помощью концентрированной серной кислоты создавали химический ожог; время экспозиции кислоты - 5 с. Модель химического ожога близка по структурным проявлениям к характеру повреждения слизистой оболочки полости рта при различных заболеваниях, в том числе, сопровождающихся гиперемией, отеком, изъязвлением. Исследуемый РАЛС № 2 наносили на место повреждения, не втирая. Лечение проводили ежедневно в течение 7 суток. Контролем служили животные с естественным заживлением раны. О ранозаживляющем действии судили по изменению площади раны, регистрируемой каждые сутки после химического повреждения. Площадь ожога определяли в весовых показателях (в мг).
В послеоперационном периоде животные находились под наблюдением, с акцентом внимания на характер заживления ожоговых ран правого и левого бедра. На 3, 6 и 9 день после операции по 5 крыс путем эвтаназии выводили из эксперимента в соответствии с Директивой 2010/63/EU ЕВРОПЕЙСКОГО ПАРЛАМЕНТА И СОВЕТА ЕВРОПЕЙСКОГО СОЮЗА по охране животных с отбором проб тканей в месте ожогового дефекта правого и левого бедра для гистологических исследований.
Материал, взятый для гистологических исследований фиксировали в 10 %-ном водном растворе нейтрального формалина, проводили через спирты возрастающей крепости и ксилол, а затем заливали в гистологическую среду «Гистомикс» с использованием гистологического процессора замкнутого типа Tissueek VIP 5 Jr. производства Sakura (Япония).
Клиническая апробация разработанного адгезивного лечебного средства для терапии пораженной слизистой оболочки полости рта при ХРАС
Клинический пример 1. Пациентка Н., 40 лет, амб. карта № 2312 обратилась с жалобами на боль при пережевывании пищи, неприятное чувство жжения и сухости во рту, неприятный запах изо рта, а также кровоточивость десен и появление на слизистой оболочке белесоватых пятен. Со слов больной, указанные симптомы появились 2-3 дня назад. Больная указывает на повышение показателей температуры тела до 37,5-38 С в первые 2 суток, слабость, вялость, апатию, головную боль, головокружение.
Объективно: На слизистой оболочке красной каймы нижней губы - белесоватая болезненная, кровоточащая афта, слизистая оболочка полости рта нижней челюсти гиперемирована, отечна, в области 33-43 зубов - определяются точечные кровоизлияния, кровоточащие эрозии и болезненные афты как с язычной, так и с вестибулярной стороны. На уздечке нижней губы также определяется афта размером 1 х 0,5 см. Афта на нижней губе размером 4 х 5 см при поверхностном осмотре располагается с нарушением целостности поверхностных слоев эпителия с неровными, фестончатыми краями и ги перемированным ободком. При пальпации афта мягкой консистенции и резко болезненна. Вокруг афты наблюдается участок покраснения. На поверхности афты виден налет, который достаточно плотно соединен с ее дном. При по-скабливании шпателем по поверхности афты очищения от налета не происходит. При попытке удаления его насильственно афта кровоточит (рис. 3). Клиническая картина афты позволяет диагностировать ее как афту Сеттона, которая характеризуются поражением глубоких слоев слизистой оболочки полости рта. На слизистой оболочке щек - единичные четко отграниченные от неизмененных тканей слизистой оболочки полости рта афты с характерной округлой и овальной формой (рис. 4). Регионарные лимфатические узлы не увеличены. ИГ (OHI-S) составил 2,5 балла (неудовлетворительная гигиена полости рта). Для уточнения поставленного предварительного диагноза больной проведены: общий и биохимический анализы крови, определение уровня глюкозы крови, общий анализ мочи, аллергологическое обследование с целью определения наличия бактериальной аллергии, иммунологические исследования, серологическое исследование крови (RW), исследование крови на антитела к ВИЧ.
Больная Н. Крупная афта Рис. 4. Та же больная, слизистой оболочки нижней губы Афта слизистой оболочки щеки в проекции 33-43 зубов с неровными, фестончатыми краями Окончательный диагноз: язвенная/рубцующаяся форма хронического рецидивирующего афтозного стоматита, афта Сеттона.
Общее лечение. Пациентке назначена десенсибилизирующая терапия, лекарственные средства с детоксицирующим эффектом, противоаллергические лекарственные средства (Зоракс, Цетрин), витаминные препараты (витамины С, Д), поливитаминные комплексы (Кальций ДЗ Никомед), общеукрепляющие средства, обильное питье.
Предварительный диагноз: хронический рецидивирующий афтозный стоматит, афта Сеттона.
Местное лечение: антисептическая обработка, очищение поверхности афт слизистой от омертвевших тканей с помощью шпателя, а также химическим путем с помощью ферментных средств, аппликации РАЛС № 1 по 5 раз в день. Следующее посещение: уже на вторые сутки после применения разработанного средства больная отмечает резкое уменьшение боли и жжения слизистой оболочки, уменьшение размера афты на слизистой оболочке щеки (рис. 5).
Со слов больной, сразу после начала использования РАЛС № 1 она отметила его обезболивающий эффект, особенно выраженный в области пораженных участков слизистой оболочки полости рта. Через 4 суток при объек тивном исследовании афты щек уменьшились в размерах, при дотрагивании не кровоточат. Гнойно-серозного отделяемого при зондировании десневых карманов не определяется (рис. 6).
Афта в области уздечки нижней губы не определяется, афта Сеттона на слизистой оболочке нижней губы определяется лишь в виде контуров без налета, слегка кровоточит при пальпации, безболезненная, не выступает над поверхностью слизистой оболочки (рис. 7).
Результаты исследования хронической токсичности разработанных адгезивных лечебных средств при введении в желудок
Сенсибилизирующее действие оценивали путём воспроизведения локальных реакций. Опыт проводили на белых крысах, возраст 2,5 месяца.
Исследуемое вещество вводили один раз в подслизистый слой полости рта в количестве 0,2 мл. Контрольным животным в том же объёме вводили стерильный физиологический раствор. На 12-е сутки на выстриженном участке боковой поверхности туловища размером 1,5 см проводили аппликации РАЛС № 1 и РАЛС № 2 путём втирания их в поверхность кожи. Результаты исследования показаны в таблице 13.
Примечание, р - достоверность рассчитана по отношению к контролю. Из представленных в таблице 13 данных, видно, что индекс сенсибилизирующего действия для разработанных адгезивных лечебных средств составил меньше единицы, это достоверно указывает на отсутствие сенсибилизирующего действия.
Разработанные адгезивные лечебные средства, как и средства по уходу за полостью рта могут стать хорошей питательной средой для роста патогенной микрофлоры.
С целью предотвращения данного эффекта в состав средств для ухода за полостью рта вводят антисептические добавки (консерванты), которые, кроме того, придают разработанным средствам антимикробные свойства.
Однако введение консервантов не всегда обеспечивает указанные свойства. Поэтому в нашем случае помимо введения в состав разработанных адгезивных лечебных средств сорбиновой кислоты (консервант), мы использовали дополнительный ингредиент - антимикробное средство бензоат натрия, обладающее бактерицидным свойством.
Целью микробиологических исследований явилось определение микробной обсемененности разработанных адгезивных лечебных средств.
Для исследований микробной обсемененности РАЛС учитывали как её интенсивность, так и наличие отдельных видов патогенных микроорганизмов. Результаты исследования представлены в таблице 14.
Как видно из данных, представленных в таблице 14, разработанные адгезивные лечебные средства № 1 и № 2 не содержат патогенных микроорганизмов, что свидетельствует об их относительной микробной чистоте, которая обеспечивается содержанием в их составе бензоата натрия - средства, обладающего бактерицидным свойством. Таблица 14
Исследование специфической активности разработанных адгезивных лечебных средств № 1 при остром воспалительном процессе на модели открытой раны
Исследование специфической активности разработанных лечебных адгезивных средств проведено нами при остром воспалительном процессе на модели открытой раны.
В результате исследований установлено, что после выхода из наркоза уже через 10-15 минут животные становились достаточно активны. Через 30-60 минут они уже потребляли корм, что позволяет заключить о полном выходе экспериментальных животных из наркоза и удовлетворительном их состоянии. После проведения клинических исследований на третьи сутки эксперимента 5 животных выведены из дальнейшего наблюдения с целью отбора материала для гистологических исследований.
В результате гистологических исследований на 3 сутки в основной группе область раневого дефекта покрыта рыхлым фрагментированным струпом, состоящим из двух фракций. Часть струпа прилегающего к раневой поверхности состоит из клеточного детрита, а поверхностная часть струпа представлена массой состоящей из фибрина. В некоторых местах визуализи руется отторжение струпа от подлежащего эпидермиса (рис. 14, А). Под струпом наблюдается картина активной эпителизации эпидермиса раневого дефекта. Эпителиальный регенерат имеет вид клина, расположен на толстой базальной мембране. Регенерат значительно утолщен по отношению к здоровому эпителию. В области дна клина эпидермис рыхло спаян со струпом (рис. 14, Б).
В эпидермисе отчетливо различимы базальный, шиповатый, зернистый и роговой слои. Базальный слой имеет форму небольших овальных эпидер-мальных гребешков проникающих в дерму. Состоит он из клеток веретено-видной формы с выраженной митотической активностью (рис. 15, А, Б).
Шиповатый слой состоит из 3 слоев клеток в области дна клина и 5 слоев клеток по боковым его поверхностям (по его периферии). В эпите-лиоцитах шиповатого слоя, расположенных в области дна клина, наблюдаются процессы гипертрофии и гидропической дистрофии (рис. 16, А). Зернистый слой отчетливо просматривается только на боковых поверхностях клина и представлен одним слоем клеток. Роговой слой состоит из одного слоя
Окраска гематоксилином и эозином. Ув. х 400 В области раневого дефекта визуализируется незначительное количество производных кожи. В волосяных фолликулах просматривается гиперплазия волосяных луковиц за счет выраженного митоза в эпиителиоцитах корневых влагалищ. В большинстве влагалищ просматриваются неповрежденные стержни волос. Количество их колеблется от 1 до 3 (рис. 17, А).
Однако они не достигают свободной поверхности эпидермиса. Только в одном месте просматривается волосяной фолликул на периферии стенки дефекта, в котором имеются два неповрежденных стержня волоса, один из которых выходит на поверхность эпидермиса (рис. 17, Б).