Введение к работе
Актуальность проблемы. Известно, что все клетки организма еловека и животных выделяют цитокины - комплекс низкомолеку-ярных веществ.обеспечивающих межклеточные взаимодействия. В тдельную группу соединений были вынесены цитомедины - пептиды, олучаемые методом уксусно-кислой экстракции и обладающие тка-евой специфичностью (Морозов В.Г. Хавинсон В.X.,1983). Разра-отана концепция, предполагающая наличие в организме регулятор-ой системы, обеспечивающей определенную совокупность физиоло-ических свойств пептидов организма (Цыбиков Н.Н.. 1985, Калаш-иков С.Г., 1986, Яковлев Г.М. Морозов В.Г. Хавинсон В.X., 987, Кузник Б.И.и др..1985-1994).
Тканеспецифичность цитомединов и отсутствие видоспецифич-ости позволяет использовать пептиды разных животных (свиней, упного рогатого скота и пр.) в клинической практике (Кузник І.И.. 1986. Павленко B.C. и соавт.. 1987. Горбачев А.Г.. Агу-іянский Л.Н., 1987, Витковский Ю. А., Михальцов А.И.. 1988, Нахимова О.П. и соавт., 1989, Андреева Л.И. и соавт., 1991, Аюше-в О.Д., 1991, Галактионов С.Г.. Николайчук В.В., 1991, Petrov :.V. Mikhailova А.А., 1991, Valentin J-P. et al. 1991).
В лимфатических узлах (ЛУ) также образуются низкомолеку-іярньїе соединения, играющие важную роль в регуляции иммунного ітвета и в поддержании гомеостаза организма ( Новиков В.И. и оавт., 1990, Антоненко и соавт., 1993, Delemarre F. С. 1993 ). Сдельные группы пептидов ЛУ воздействуют на иммунологическую іеактивность, активно влияют на тонус нервных центров головного юзга,повышают устойчивость животных к стресс-воздействиям, ре-улирют состояние коагуляционного гемостаза, значительно увели-іивают работоспособность животных (Кузник Б.И.. 1986, Новиков І.И. Сидорович И. Г.. 1990. Zwimer J. etal., 1989, Claverie '-M, 1990, Rouy D. et al., 1993).Тем не менее остаются практи-іески не исследованными свойства цитомединов из ЛУ и лимфы.
Лимфатическая система выполняет в основном дренажную и їлиминационно-деструктивную функции. Известно, что разрушение іужероднмх агентов факторами неспецифической защиты сопровождайся локальными или диссеминированными гиперкоагуляционными :двигами в ЛУ, лимфе и, в конечном счете, в кровотоке. (Левин
Ю.М., 1989-1992). В условиях патологии значимость лимфатическо системы в регуляции гемостаза еще более возрастает. Срыв регу ляторных механизмов гемостаза в ЛУ и лимфе может привести лимфадениту и развитию слоновости.
Тем не менее известно, что цитомедины активно вовлекайте в модуляцию коагуляционного, тромбоцитарно-сосудистого гемоста за и фибринолиза (Колбина Н.А., Мельников В.В.. Мельников С.С, 1991, Кудряшев Б.А. и соавт., 1992, Кузник Б.И. и со авт.,1990-1994). Кроме того, полипептиды в значительной мер определяют состояние неспецифического звена защиты организм (Витковский Ю.А., 1990. Кульберг А.Я., 1993, Повевещиков А. В. др.. 1993). Выявление новых механизмов регуляции защитной функ ции лимфатической системы актуально в плане разработки новы эффективных методов лечения заболеваний, сопровождающихся нару шением трофики, гиперкоагуляцией и ослаблением защитных сил ор ганизма.
Цель и задачи, исследования. Целью настоящей работы явилос изучение роли пептидной фракции ЛУ и лимфы в регуляции коагуля ционного гемостаза, фибринолиза и механизмов неспецифическо защиты.
Были поставлены следующие задачи.
-
Выделить пептиды из лимфы и лимфоузлов, определить диа пазон их молекулярной массы. Провести хроматографический анали пептидных фракций и сравнить их биохимическую активность.
-
Изучить механизм действия пептидов ЛУ и лимфы на реал ции коагуляционного каскада и фибринолиза.
-
Выявить изменения в составе и активности пептидов пос; свертывания лимфы; сравнить с отклонениями свойств пептиде после свертывания плазмы.
-
Проследить, какое действие оказывают пептиды лимфа ческой системы на факторы неспецифической защиты организма фагоцитоз, комплемент, лизоцим, катионные белки, общую бактер* цидную активность сыворотки.
Научная новизна. Установлено, что пептиды брыжеечных, трг хео-бронхиальных, печеночных ЛУ и лимфы участвуют в регуляц» свертывающей системы крови. Пептиды содержат антикоагулят воздействующий на контактную фазу коагуляционного гемостазе Кроме того, пептиды лимфы тормозят формирование протромбина;
іо внешнему и внутреннему пути и потребляются в процессе свер-ывания лимфы, что свидетельствует об участии пептидов в регу-[яции микроциркуляторного русла.
Установлено, что пептиды лимфы способны в 10-12 раз тормо-іить Хагеман-зависимый и лишь слегка - тотальный эуглобулиновый іибринолиз.
Цитомедины лимфатической системы значительно стимулируют ^агЪцитоз и метаболическую активность нейтрофилов, тем самым >пределяя фоновый уровень основного звена неспецифической ре-шстентности организма.
Показано, что пептиды лимфы ингибируют активацию компле-іента как по классическому, так и по альтернативному пути, что предотвращает развитие воспаления в жидкой фазе. Пептиды ЛУ регулируют (активируют или ингибируют) классический путь комплементарного каскада.
Биохимически активные пептиды имеют молекулярную массу ме-*ее 20 кД. Установлено, что пептиды разделяются на 6-11 фракций, различающихся по молекулярной массе и степени гидрофобнос-ги. Хроматографический профиль пептидов брыжеечных, тра-хео-бронхиальных и печеночных ЛУ сходен. Пептиды сыворотки лимфы и сыворотки крови отличаются от пептидов цитратной лимфы и плазмы большим содержанием гидрофобных компонентов.
На основании полученных данных сделан вывод о налички в цитомединовой фракции пептидов лимфатической системы мощного антигепаринового и антикоагулянтного фактора, воздействующего преимущественно на фактор Хагемана и/или калликреин. Физиологическая значимость этих факторов доказана в частичном или полном их потреблении в процессе свертывания лимфы. В пептидах лимфатической системы содержатся не только биохимические, но и клеточные регуляторы, стимулирующие деятельность фагоцитов.
Практическое значение работы. Антнгепарнновый фактор ЛУ н лимфы нейтрализует низкомолекулярный гепарин, благодаря чему можно использовать этот пептид для ликвидации гипергепарииемш.
Дальнейшие исследования позволят выделить антикоагулянт-ный, антигепариновый факторы и активатор фагоцитоза в чистом виде для применения в клинической практике.
Выявленные свойства пептидов, а также изменения этих свойств в процессе свертывания крови углубляют лаки представле-
ния о механизмах регуляции гемостаза и факторов неспецифическс защиты. Результаты проведенных экспериментов создают методичес кие предпосылки для последующего расширения и углубления иссле дований свойств пептидов лимфатической системы.
Полученные данные внедрены в учебный процесс кафедр микрс биологии, нормальной и патологической физиологии Читинского п сударетвенного медицинского института, а также на кафедре hoj мальной физиологии Читинского государственного педагогическої института.
Положения, ешосшше на защиту.
-
Пептиды брыжеечных, трахео-бронхиальных. печеночных J и лимфы содержат в своем составе антикоагулянтный фактор, бл< кирующий контактную фазу свертывания крови и Хагеман-зависиш фибринолиз. Пептиды лимфы, тормозящие формирование протромбин; зы как по внешнему, так и по внутреннему пути, потребляются процессе ее свертывания.
-
Пептиды лимфатической системы содержат антигепаринові фактор, сохраняющий свою активность после свертывания лимфы.
З.Цитомединовая фракция ЛУ и лимфы значительно стимулируї фагоцитарную и метаболическую активность нейтрофилов.
4. Пептиды лимфы тормозят активацию комплемента как і классическому, так и по альтернативному пути. Пептиды ЛУ і влияют на альтернативный путь и способны модулировать классі ческий путь активации комплемента.
Апробация работы. Материалы исследований были доложены і X межвузовской конференции молодых ученных по проблеме "Физиі логия и патология иммуногенеза и гемостаза"(Чита. 1988), конфі ренции "Система комплемента" (Москва, 1988), "Актуальные вопр сы хирургии, анестезиологии и реаниматологии детского возраст; (Днепропетровск. 1989). Советско-Корейской конференции "Пои новых лекарственных средств и их исследование в клинике" 199 на 53-ой студенческой конференции (Тбилиси 1990), конференці молодых ученых по проблеме "физиология и патология перекисно: окисления липидов, гемостаза и иммуногенеза" (Полтава, 1993 съезде физиологов России (1994), международной конференции і иммунореабилитации (Сочи, 1994).
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 1 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литератур
іатериала и методов исследования,трех глав собственных резуль-атов, обсуждения полученных данных, выводов, указателя литера-уры. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 26 рисунками. Список итературы включает 182 источника.