Введение к работе
Актуальность проблемы. Проблема стресса и адаптации к стрес-сорным ситуациям остается одной из актуальных, проблем биологии и медицины. Ей посвящены фундаментальные исследования ряда учета. (Меерсон Ф.З., 1978, 1984, 1991; Судаков К.В., 1981; Ведя-ев 55.П., Воробьева Т.Н., 1983; Kvetnar.sky R. . 1391). Данные литературы свидетельствует о тон, что около двух третей заболеваний чєловеїса в различной степени связаны с эмоциональным стрессом (Фурдуй Ф.И. и соавт., 1939; Vineenzo і. , 1990). В бодь-пои потоке информации по проблеме стресса и адаптации иыептся весы/л. ограниченные сведения о влиянии стрессоршх БОЗДейСТЕИЙ на орган зрения. Они в основном посвящены кзиененив офтатьыото— нуса при стрессе (Кивдрат О.В., 1980; Крыкановский Г.Н. и соавт., 1981). В ряде работ отражены нарушения'метаболизма в сетчатой оболочке в условиях стресса Шведова А.А. и соавт., 1932; %-ценко Н.С., Якушев B.C., 1991). На основе изучения последствий землетрясения в Армении, 2.С.Аветисов и соавтора-С1990) сделает вывод о том, что психогенный стресс способствует переходу ирешр-бидных состояний органа зрения в морбкдкые. Однако в литературе отсутствует данше о влиянии эмоционального перенапряжения КЗ состав внутриглазной хидкости, состояние светолрелокяяхз;кх сред глаза (роговица, хрусталик). Не раскрыты таете адаптивные реакции тканей глаза на стрессорные воздействия; не исследована вопросы предупреудения стрес сорных повреадижй глаза в свете современного учения о стреселкмитирухщих системах, поггатаварос устойчивость организма к стрессорнчи влияниям (Ыеерсок Ф.З., IS6I-1991; Меерсон $.3., Паенниксва Ы.Г., 1988).
Все эти нерешенные вопросы побудили нас есслєдоїать стрессор— аые реакции тканей глаза а хх коррекция.
Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы - изучить особенности и механизмы воздействия стрессорных факторов на ткани глаза, а также возможность, ограничения или устранения патогенных последствий стресса с помощьв предварительной адаптации к коротким сгресеорным воздействиям^ регуляторного пептида .; агопенти-на и актиоксиданта ионола.
В соответствии с поставленной цельв решались следущие задачи:
-
Изучить изменение внутриглазной жидкости при стрессе.
-
Изучить влияь.іє острой стрессорной ситуации на протеоли-тические процессы и состояние соединительнотканных структур в роговице и хрусталике.
-
Исследовать особенности реагирования сосудистой оболочки глаза на острое стреесорное воздействие.
-
Обосновать возиожность предупреждения или ограничения стрессорного повреждения тканей глаза, исходя из учения о стресс-лиштирущих системах с помощьв предварительной адаптации к стрессу, введения регуляторного пептида тимопентина 'и антиокск-данта ионола.
Научная новизна работы определяется следующими ее основными результатами. Вперше в эксперименте изучены особенности реакции роговицы и хрусталика на острое стрессорное воздействие, выражающиеся в усилении протеолитических процессов и деградации белко-воуглеводкых комплексов в них. Впервые при стрессе выявлены деструктивные изменения в роговице, хрусталике и цилиарном теле. Впервые показано, что в условиях эмоционального стресса претерпевает изменение состав внутриглазной жидкости, являющейся фактором питания аваскуляршх ТЕаней глаза. В ней увеличивается содержание общего белка, перекиси водорода, а также изменяется соотношение компонентов аденилатциклазной системы и нарушается про-теиназно-икгибиторный потенциал.
Впервые изучено защитное влияние на повреждение тканей глаза при стрессе предварительной адаптации к коротким стрессорным влияниям и регуляторного пептида тимопентина.
Обосновано, что стрессорная реакция органа зрения развивается с участием ведущих механизмов клеточного повреждения - активации пєрекисного окисления липидов и протеолитических процессов, что приводит- к деструкции тканей глаза.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Острый эмоциональный стресс нарушает гомеостаз внутренней среды глаза, о чем свидетельствует изменение состава внутриглазной яидкостиі повышение содержания общего белка, перекиси водорода, а таккэ протеиназно-ингнбиторной системы.
-
В условиях эмоционального стресса повышается общая про-теолитическая активность и содержание сиалошх кислот в роговице и хрусталике, возникают в них дезорганизация биополимеров соединительнотканных структур, а така» дистрофические изменения эпителиальных и эндогелиальных клеток.
-
В стрессорнуп реакцию тканей глаза вовлекаится сосудистая оболочка и цилиарное тело. Сосудистая оболочка глаза реагирует активацией процессов пєрекисного окисления я сунероксид-
дисмутазы, усилением антиагрегационной активности.
4. Предварительная адаптация к коротким' стрессорным воздей
ствиям, введение регуляторного пептида тимопентина и антионеи-
данта ионола повыпаат устойчивость органа зрения к стрессорноиу
повреядекив.
Практическое значение работы. Экспериментально обоснована
ВОЗМОЖНОСТЬ КЛИНИЧеСКОГО Применения реГуЛЯТОрНОГО пепТИДа ТГІИО-
пентина в качестве стресспротективного средства в офтальмологли.
Ряд выводов о еысоксй чувствительности органа зрения к стрессорным влияниям, о повреждении тканей глаза при стрессе и
4.-
возможности их коррекции с помощью предварительной адаптации к стрессу, тимопентина и ионола внедрены в учебный процесс на ряді кафедр медицинских вузов МЗ Украины.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Республиканской научной конференции "Роль эйкозаноидов в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний" (Харьков, 1991); Всесоюзной научной конференции "Регуяяторные пептида в норме и патологии (ци-тсмедины)" (Чита, 1991), Всесоюзной конференции "Физиология и патология гемостаза". (Полтава, 1991), УІ Межвузовской конференции молодых ученых"Физиология и патология перекисного окисления лилидов, гемостаза и иммуногенеза" (Полтава, 1990), областной научно-практической конференции офтальмологов (Полтава, 1992), на менкафедральном совещании Полтавского государственного меди-, цинского стоматологического института.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ.
Объем работы. -Диссертация выполнена по плану НИР Полтавского государственного медицинского стоматологического института и является фрагментом темы "Изучить в эксперименте и клинике влияние физиологически- активных веществ антиоксидантного действия на процессы адаптации и развитие хронической возрастной патологии и разработать рекомендации по их применэнию как средств фар-макопрофилактики* (номер госрегистрации 01.9.10.006301).
Диссертация выполнена на 115 страницах машинописного текста и состоит из введения,, ? глав, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы, включающего 230 отечественных и 56 иностранных источника. Фактические данные сведены в 16 таблицах и иллюстрированы 7 рисунками.
шшшш и ыЕгода ИССЛЕДОВАНИЯ .
Исследования выполнена на 107 половозрелых кроликах породы шиншилла массой от 1,8 до 3,5 кг и 186 белых крысах-самцах линии Вистар массой 150-270 г.
Воспроизводили две модели стресса:
I) острый эмоциональный стресс у кроликов по Д.И.Бельченко и В.И.Лазареву (1989) и 2) острый ишобилизационный стресс у крыс по Kurijama (1984). Адаптацию к коротким стрессорным воздействиям у кроликов воспроизводили ка основе кммобилизаца-онного стресса по Kurijama , ежедневно увеличивая експозицій на 5 минут, начиная с 2,5 минут и доводя ее до 30 минут. Общая продолжительность воздействия - 14 дней.
Объекты исследования и изучаемые показатели:
-
внутриглазная жидкость (ВШ) (уровень циклических нукле-отидов, перекись водорода, общая протеолитическая активность, активность aj-антитрипсина, общий белок)}
-
роговица, хрусталик (общая протеолитическая активность, сиаловые кислоты, гистологическая структура с приыонениеа гистохимических методов);
-
сосудистая оболочка (ТЕК-активнне продукты, оэтиваость супероксиддисыутазы, антиагрегационная активность)}
-
сыворотка крови (общая протеолитическая активность, активность aj-антитрипснна, уровень циклических нухяесткдов, сва-ловые кислоти).
В части исследований для оценки тяжести стресса к citnfwsx адаптации к нему учитггаяи наличие язвенных поражении гелу;зх. Внутриглазную жидкость отбирали мидронарицеи сразу после забоя кроликов под гексеналовым наркозом,- у части крслхк^в - приязненно после инстилляции в кокъюяггкБажьнуп полость 0,5? раіт*гі— pa дихаина.
Дія коррекции стресс-синдрома у кроликов применяли регуляторний пептид тимопентин, синтезированный в НИИ органического
синтеза Латвийской АН, представляющий собой фрагмент тимусного
32 гормона, состоящий из 5 аминокислотных остатков (-Arg -Lys-Asp-
-Yai-Tyx-'j'. Пептид вводили внутрибршинно за 30 минут дс начала воспроизведения стресса в дозе 100 мкг/кг массы.тела. У крыс коррекцию стресса проводили с помощью предварительной адаптации, а такте.введения антиоксиданта ионола в дозе 100 мг/кг массы тела внутрибрюшинно і виде водного раствора с твином-80 один раз в сутки за 3 дня до воспроизведения стресса.
Концентрация циклических нуклеотидов во ВГЖ и сыворотке крови определяли радиоизотопным методом, используя набор реактивов
Ria Kit (Чехословакия). Общую проїеолитическую активность биологических Еидкостей и гошгенатов тканей определяли колориметрически по методу Мура и Стейна (Уголев A.M., 1969) и выражали в мкмолях отщепленного глицина за I минуту инкубации на I мл жидкости или I г ткани. Активность aj-антитрипсина (aj-AI) во БПЕ и сыворотке крови определяли спектрофотсметрически унифицированным методом, разработанным на кафедре биохимии ЦОЛИУВ (Москва). Метод основан на способности aj-AT подавлять гидролиз этилового зфира и-L-бензоил-Ь-аргинина (БАЭЭ) трипсином; активность ij-AT выражали в ИЕ на I мл жидкости..
Для определения перекиси водорода во БІЖ и сыворотке крови использовали метод иодометрического титрования (Graf и Jta , 1980). Общий белок в сыворотке крови определяли биуретовым методом (Меньшиков В.В., 1967), во влаге передней камеры - по методу lotnry о. et аіЦ95І). Сиаловые кислоты в сыворотке крови и тканях глаза определяли унифицированным, резорциновым методом (Меньшиков В.В., 1987). ТБК-активные продукты в сосудистой оболочке исследовагп б течение 1,5-часовой интубации гомогената
ткани по методу И.Д.Стальной и Т.Г.Гаришвили (1977). Активность сулероксиддисмутазы (СОД) определяли по методу О.С.Брусоза и соавторов (1975).
Для морфологических исследований ткани глаза фиксировали в 10 растворе нейтрального формалина, изготавливали серийные парафиновые срезы и окрааивали гематоксилином и эозином по Зан Гизону. Высокополимерные углеводсодержацие вещества выявляли с псмоцью комплекса гистохимических методов с повышающими их специфичность контролями (Пирс Э., 1965). Морфологические исследования выполнена совместно с д.млі. Колесовой Н.А.
Материал исследований подвергнут математико-статистическому анализу на ЭВМ типа IBM.