Клинико-лабораторные особенности нозологической синтропии профессиональных аллергодерматозов и микотической инфекции Ивченко Елена Васильевна

Содержание к диссертации

Введение

Глава 1. Аналитический обзор литературы 10

1.1. Социальная значимость профессиональных аллергодерматозов 10

1.2. Причины развития профессиональных аллергодерматозов 14

1.3. Клинико-иммунологические особенности профессиональных аллергодерматозов 17

1.4.Клинико-иммунологические особенности микотической инфекции 22

1.5.Роль филаггрина в формировании барьерной функции кожи 31

Глава 2. Характеристика материала, объем и методы исследований 34

2.1. Краткая гигиеническая характеристика условий труда и контингентов обследованных групп 37

2.2. Клиническая характеристика больных профаллергодерматозами и микозами 41

2.3. Методы исследования состояния барьерной функции кожи 43

2.4. Аллергологические методы исследования 46

2.5.Методы иммунологических исследований 47

2.6. Метод микроскопического исследования соскобов с ногтевых пластин и кожи стоп на патогенные грибы 50

2.7.Методы молекулярно-генетических исследований 51

2.8. Статистические методы обработки результатов исследования 55

Глава 3. Результаты собственных клинико-функциональных исследований 58

3.1. Общая клиническая характеристика обследованных больных 58

3.2. Состояние барьерной функции кожи у больных обследованных групп 67

3.3. Результаты аллергологического обследования больных 68

3.4. Результаты иммунологических исследований 70

Глава 4. Результаты молекулярно-генетических исследований 81

4.1. Результаты исследования полиморфных вариантов гена филаггрина, ассоциированного с нарушением барьерной функции кожи 81

Глава 5. Обсуждение результатов 85

Выводы 93

Список сокращений 95

Список литературы

• Клинико-иммунологические особенности профессиональных аллергодерматозов
• Методы исследования состояния барьерной функции кожи
• Состояние барьерной функции кожи у больных обследованных групп
• Результаты исследования полиморфных вариантов гена филаггрина, ассоциированного с нарушением барьерной функции кожи

Введение к работе

Актуальность работы

В настоящее время в мире отмечается неуклонный рост частоты и распространенности аллергических заболеваний кожи: атопического дерматита, контактного дерматита, экземы, от которых по данным различных авторов страдает до 25 % населения (Скрипкин Ю.К., Кубанова А.А., Бутов Ю.С. и др., 2009, 2011, Apfelbacher С. J. и др., 2010, 2013). В структуре профессиональных дерматозов первое место занимают аллергические заболевания кожи, которые значительно снижают качество жизни пациентов. Финансовые потери, связанные с заболеваемостью профаллергодерматозами, затрагивают не только работника и работодателя, но и органы здравоохранения, и другие государственные структуры. Этим обусловлена высокая значимость мероприятий, направленных на снижение профессиональной заболеваемости, в том числе профаллергодерматозами (Измеров Н.Ф., Бухтияров И.В., Прокопенко Л.В., Селисский Г.Д., Измерова Н.И., Кузьмина Л.П. и др., 2014).

Одним из важных факторов, влияющих на эффективность профилактических мероприятий, является идентификация факторов риска развития профессиональных заболеваний кожи, а также факторов, отягощающих их течение, снижающих эффективность лечения и ухудшающих качество жизни пациентов.

Важным экзогенным фактором, оказывающим влияние на патогенетические звенья поддержания аллергологического процесса и развитие иммунопатологических реакций у больных профалергодерматозами, являются инфекционные агенты, в частности грибы, обладающие способностью проникать через нарушенный кожный барьер и сенсибилизировать организм за счет активации иммунокомпетентных клеток.

За последние десятилетия микозы стали важной клинической проблемой в дерматологии. По данным ВОЗ около 1/3 населения Земли страдает грибковыми заболеваниями.

По данным целевых обследований различных профессиональных контингентов (металлургов, железнодорожников, военнослужащих, шахтеров и др.) распространенность микоза стоп (включая онихомикоз) достигает 40-80% (Мамедов К.А., 2014, Малишевская Н.П., 2012, Бутов Ю.С, Васенова В.Ю., Измерова Н.И., Селисский Г.Д., 2011).

Длительно протекающий микотический процесс оказывает серьезное системное воздействие на организм человека. Все чаще встречаются сведения о развитии у людей тяжелых микотоксикозов на фоне диссеминации грибковой инфекции. Становится очевидным, что последствия локального микотического процесса могут быть самыми разнообразными вплоть до развития системного поражения. В исследованиях Измеровой Н.И., Поздняковой Н.В. (2000 г.) показана роль микотической инфекции как триггера в развитии профессиональных аллергодерматозов.

Несмотря на актуальность данной проблемы, в настоящее время отсутствуют рекомендации по особенностям профилактики, лечения и трудоустройства больных аллергическими дерматозами, осложненными

микотической инфекцией, не разработаны ранние клинико-лабораторные маркеры риска присоединения грибковой инфекции у больных профаллергодерматозами.

Целью работы явилось изучение клинико-лабораторных особенностей нозологической синтропии профессиональных аллергодерматозов и микотической инфекции.

В соответствии с целью данной работы предстояло решить следующие задачи:

1. Изучить архивные данные за последние 10 лет, провести анализ историй болезней и отобрать больных профессиональными аллергодерматозами с частыми рецидивами и торпидным течением.

2. На основании особенностей клинического течения профессиональных аллергодерматозов выделить основные нозологические формы, а также группу с клиническими проявлениями микотической инфекции и дать клиническую характеристику выделенным группам больных.

3. Провести исследование специфических IgE и IgG к грибковым аллергенам методом автоматического иммунохемилюминисцентного анализа для оценки микотической сенсибилизации больных профаллергодерматозами без проявлений и с клиническими проявлениями микотической инфекции.

4. Изучить роль полиморфного варианта гена филаггрина и эозинофильного катионного протеина в патогенезе профессиональных аллергодерматозов с микотической сенсибилизацией.

5. Проанализировать тяжесть клинического течения профессиональных аллергодерматозов в зависимости от степени сенсибилизации к грибковым аллергенам и производственным факторам, от вариантов генетически полиморфной системы филаггрина и уровня эозинофильного катионного протеина.

6. Определить информативные клинико-лабораторные показатели тяжести клинического течения нозологической синтропии профаллергодерматозов и микотической инфекции.

Научная новизна

В работе впервые показано, что профаллергодерматозы и дерматофитии характеризуются общностью патогенетических механизмов и представляют собой нозологическую синтропию с взаимоотягощающим клиническим течением.

В работе изучены клинико-лабораторные особенности нозологической синтропии профессиональных аллергодерматозов и микотической инфекции. Проведены исследования микотической сенсибилизации у больных профессиональными аллергодерматозами с клиническими проявлениями микотической инфекции и без таковых при помощи определения IgE, IgG к группам грибковых аллергенов.

Впервые исследована роль нарушения экспрессии гена филаггрина в патогенетических механизмах развития профаллергодерматозов в сочетании с микотической сенсибилизацией.

Определены информативные клинико-лабораторные показатели тяжести клинического течения профаллергодерматозов, осложненных микотической сенсибилизацией.

Практическая значимость

Полученные результаты исследований клинико-функциональных показателей, молекулярно-генетических и иммунологических особенностей у больных профессиональными аллергодерматозами в сочетании с микотической инфекцией внедрены в практику обследования больных профессиональными аллергодерматозами для оценки тяжести клинического течения, индивидуального прогноза риска развития нозологической синтропии профессиональных аллергодерматозов и микотической инфекции, а также выбора патогенетической терапии.

Патент на изобретение №2585960 от 17 февраля 2015г. «Способ определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи».

Методические рекомендации «Микотическая сенсибилизация как фактор, отягощающий течение профессиональных аллергодерматозов». -Москва. - 2014. Утверждены Решением Научного совета 45 по Медико-экологическим проблемам здоровья работающих.

Медицинская технология: Способ определения наследственной предрасположенности к нарушению барьерной функции кожи». - Москва. -2015. Утверждена Решением Научного совета 45 по Me дико-экологическим проблемам здоровья работающих. Технология внедрена в клинике ФГБНУ «НИИ МТ» (акт внедрения от 23.03.2015 г.), результаты исследований включены в курс лекций и практических занятий на кафедре медицины труда Первого МГМУ имени И.М. Сеченова.

Медицинская технология: Определение эозинофильного катионного протеина в оценке тяжести клинического течения профаллергодерматозов». -Москва. -2015 г. Утверждена Решением Научного совета 45 по Медико-экологическим проблемам здоровья работающих. Технология внедрена в клинике ФГБНУ «НИИ МТ» (акт внедрения от 23.03.2015 г.), результаты исследований включены в курс лекций и практических занятий на кафедре медицины труда Первого МГМУ имени И.М. Сеченова.

Медицинская технология: Клинико-лабораторные критерии нозологической синтропии профаллергодерматозов и микотической инфекции». - Москва. - 2015. Утверждена Решением Научного совета 45 по Медико-экологическим проблемам здоровья работающих. Технология внедрена в клинике ФГБНУ «НИИ МТ» (акт внедрения от 05.10.2015 г.), результаты исследований включены в курс лекций и практических занятий на кафедре медицины труда Первого МГМУ имени И.М. Сеченова.

Апробация работы проведена на заседании специалистов клинического отдела профессиональных и производственно обусловленных заболеваний ФГБНУ «НИИ МТ» 29 мая 2015 г.

Материалы диссертации докладывались и обсуждались на - V Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов с международным участием «Окружающая среда и здоровье. Здоровая среда - здоровое наследие», г. Москва, 25 - 26 сентября 2014 г. - на Третьем Международном Микологическом Форуме, г. Москва, 14-15 апреля 2015 г., - на XIII Всероссийском конгрессе с международным участием «Профессия и здоровье» в г. Новосибирск, 17-26 сентября 2015 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ, 5 из них - в изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией при Министерстве образования и науки Российской Федерации.

Объем и структура работы.

Клинико-иммунологические особенности профессиональных аллергодерматозов

Этиология и патогенез многих дерматозов до настоящего времени не изучены окончательно. В настоящее время многочисленными исследованиями показано, что профессиональные аллергические дерматозы являются мультифакториальными заболеваниями, которые развиваются при сложном взаимодействии эндогенных факторов и факторов внешней среды.

Часто в качестве разрешающих, запускающих механизмы развития дерматозов, выступают вредные производственные факторы [18, 64].

Анализ причин развития профаллергодерматозов показал, что дерматозы в 82,5 % случаев вызываются химическими веществами, в 9,1% - производственной пылью. Ведущими среди химических и биологических веществ являются соединения хрома (22,1 %), смазочно-охлаждающиеся жидкости (22,1%), антибиотики (14,2 %), эпоксидные смолы (5,3 %), соединения никеля, кислоты и щелочи, формальдегид, хлор (по 4,0 %). На долю перечисленных веществ приходилось в сумме 83,4% от числа всех причин профаллергодерматозов. В числе остальных веществ, составляющих 16,6% и вызывающих профессиональную экзему и дерматиты, встречались керасин, ацетон, кобальт, ксилол, толуол, скипидар, нитрокраски, цемент и реже другие вещества. [18]. Причинами наиболее распространенных профессиональных заболеваний кожи в большинстве случаев являются несовершенство технологического процесса и оборудования, несовершенство или отсутствие средств индивидуальной защиты, нарушение техники безопасности. По данным многочисленных исследований последних лет средства индивидуальной защиты кожного покрова работающих в контакте с раздражающими и сенсибилизирующими веществами имеют важное значение в профилактике профессиональных заболеваний кожи.

Среди множества химических соединений, которые в производственных условиях вызывают аллергический дерматит, значительное место занимают соединения металлов (хром, никель, кобальт и др.) [163]. В Испании у 1161 обследованных взрослых больных аллергическим дерматитом наиболее частыми причинами развития болезни оказались сульфат никеля (25,88%), дихромат калия (5,31%), хлорид кобальта (5,10%), смесь душистых веществ (4,64%) и перуанский бальзам (4,44%) [110].В Германии при обследовании 1141 взрослых пациентов было обнаружено, что самым значимыми аллергенами были смесь душистых веществ (16% сенсибилизированных), никель (13%), тимерозал (4,7%) и перуанский бальзам (3,8%) [138]. Аналогичная картина отмечена при обследовании больных экземой в Таиланде, где ряд самых значимых аллергенов составили сульфат никеля (26,8% сенсибилизированных), хлорид кобальта (7,6%), парафенилендиамин (7,0%) и смесь душистых веществ (7,0%) [102].

В развитии профессиональных аллергических заболеваний кожи важное значение придается образованию комплексных соединений промышленных веществ с белками кожи [35].

Известно, что многие химические вещества являются гаптенами и только после присоединения к белку образуют полный антиген. Простые химические вещества при взаимодействии их с тканями кожи могут приобретать свойства сложных по структуре антигенных комплексов и по аналогии с истинными антигенами, представляющими сложные азотистые соединения с большими молекулами, вызывать образование специфических антител [8, 35]. Несмотря на то, что большинство аллергенов, присутствующих на рабочих местах, являются классическими гаптенами, необходимо иметь в виду, что ряд значимых профессиональных аллергенов в различных профессиях имеет свои особые пути формирования сенсибилизации и развития аллергических реакций, проявляющихся в виде аллергодерматозов. Среди наиболее значимых профессиональных аллергенов называют металлы (хром, никель и кобальт), системы эпоксидных смол, формальдегид и формальдегидные смолы, химикаты, добавляемые при производстве резины, красители, биоциды (в том числе изотиазолиноны), душистые вещества, растения (в том числе древесная пыль), метакрилаты [28, 148]. В настоящее время изучено значительное количество химических веществ, обладающих аллергенными свойствами: соли хрома, никеля, кобальта, парафенилендиамин (урсол), многие полимеры, соединения формалина, золота, лекарственные препараты, различные антибиотики и др. Путь введения промышленного аллергена в организм оказывает определенное влияние на характер развивающегося аллергического процесса [28, 35, 41]. В развитии профессионального аллергического дерматита и экземы преимущественную роль играет контактный (трансдермальный) путь проникновения химических и других аллергенов - чаще всего через кожу тыльной поверхности кистей. Наряду с контактным имеют значение ингаляционный, пероральный и парентеральный пути поступления промышленного аллергена (токсикодермия, крапивница) [27, 49, 81].

Патогенез экземы привлекал внимание многих исследователей. Они выдвигали различные теории ее происхождения и связывали возникновение экземы с преобладающими нарушениями в той или иной системе организма [54, 67].

Экзема формируется в результате воздействия сложного комплекса этиологических и патогенетических факторов. Она характеризуется поливалентной сенсибилизацией, в развитии которой играют роль как экзогенные (бактериальные и грибковые инфекционные агенты, химические вещества, физические факторы, лекарственные средства, пищевые продукты и др.), так и эндогенные факторы (антигенные детерминанты микроорганизмов из очагов хронической инфекции) [47, 103].

Генетическая предрасположенность определяет нарушение иммунной регуляции, функции нервной и эндокринной систем. При экземе отмечают полигенное мультифакториальное наследование с выраженной экспрессивностью и пенетрантностью генов. В работе М.М. Коляскиной [32] были выявлены полиморфные гены системы биотрансформации ксенобиотиков у больных профаллергодерматозами и доказана их роль в патогенезе профессиональных аллергических дерматозов, также выявлена зависимость между некоторыми биохимическими показателями и конкретной генотипической принадлежностью, свидетельствующая о механизме реализации наличия определенных генетико-биохимических вариантов ферментов цитохром Р-450 зависимой монооксигеназной системы, включающем индивидуальные особенности показателей системы оксиданты-антиоксиданты.

На данном этапе исследователи пришли к выводу, что необходим комплексный подход к изучению патогенеза экземы [86].

Обобщая эти данные, можно сказать, что профессиональные аллергические дерматозы являются заболеваниями мультифакториальной природы с комплексом иммунологических, гуморальных, нейровегетативных, обменных нарушений, с вовлечением в патологический процесс ЦНС, пищеварительной, эндокринной и других систем. Таким образом, несмотря на имеющиеся в литературе данные о механизмах развития профаллергодерматозов, изучение и уточнение патогенеза этих заболеваний, безусловно, представляет большой научный и практический интерес.

Методы исследования состояния барьерной функции кожи

Актуальность дальнейшего изучения патогенетических особенностей формирования профессиональных аллергодерматозов и поиск клинико-лабораторных критериев оценки тяжести клинического течения указанной патологии обуславливается распространённостью кожной патологии в структуре профессиональной заболеваемости. Изучение эозинофильного катионного протеина (ЭКП) при различных аллергических заболеваниях представляет большой интерес для исследователей. Эозинофильный катионный протеин обладает иммуномодулирующими свойствами, стимулирует иммунный ответ, являясь одним из белков, входящих в состав цитоплазматических гранул эозинофилов [37, 38, 82]. Эозинофилы, или эозинофильные гранулоцитарные лейкоциты, как и все другие клетки крови, образуются в костном мозге, созревание длится 3-4 дня, далее они попадают в кровь, где циркулируют в среднем в течение 10 часов, затем мигрируют в ткани. Отделение эозинофилов на ранних этапах миелопоэза, по-видимому, связано с их специальным назначением. Основная роль эозинофилов — защита организма от внешних воздействий — определила главное место их расположения — в покровных тканях, где они окончательно созревают и выполняют свои функции. Эозинофилы отвечают за уничтожение чужеродного белка в организме. Они поглощают белок, после чего растворяют его своими ферментами.

Эозинофилия возникает вследствие усиленной продукции эозинофилов в костном мозге – защитной реакции организма в ответ на поступление в кровь продуктов чужеродного белка. При этом из эозинофильной зернистости высвобождаются простагландины, обладающие антигистаминной активностью (гистамин – основное вещество, выделяющееся при аллергических реакциях).

Во время аллергических заболеваний и реакций эозинофилы осуществляют транспортную и антитоксическую функции. Они способны переносить продукты распада белка, которые обладают антигенными свойствами, предотвращают местное скопление антигенов, и кроме этого обладают способностью к активному фагоцитозу [82].

Для определения количества эозинофилов крови использовался автоматический гематологический анализатор Sysmex 2000i, принцип метода которого основан на проточной цитофлуориметрии. Эозинофильный катионный протеин является компонентом специфических секреторных гранул эозинофилов. Обладает рибонуклеазной активностью, стимулирует секрецию слизи в бронхах, тормозит пролиферацию Т – клеток лимфоцитов, оказывает сильное цитотоксическое действие, приводя к повреждению клеточных мембран гельминтов. Белок попадает в кровь при дегрануляции эозинофилов и отражает степень выраженности этого процесса. Его содержание возрастает в крови при БА, аллергическом рините, аллергическом дерматите, гельминтозах. В сыворотке крови больных уровень ЭКП повышен даже в тех случаях, когда уровень эозинофилов крови оставался нормальным.

Уровень ЭКП в большинстве случаев коррелирует с тяжестью клинических симптомов астмы, отражая выраженность эозинофильного компонента воспаления. Во время экспозиции к аллергену концентрация ЭКП в крови растёт, отражая активацию эозинофилов. Показано, что уровень ЭКП превышает норму как при IgE-опосредованной, так и при не-IgE опосредованной атопии. Таким образом, уровень эозинофильного катионного белка (протеина) является объективным и достоверным критерием не только для диагностики заболеваний, но и для мониторинга эффективности проводимого лечения.

Определение содержания в сыворотке крови эозинофильного катионного протеина (нг/мл), общего IgE и специфических IgE к группам грибковых аллергенов (Candida аlbicans, Aspergillus niger, Trichoderma viride, Trichosporon pululans, Trichophyton rubrum) проводили методом хемилюминесцентного анализа на иммунохимическом анализаторе Immulite 2000 (USA). Принцип метода основан на связывании одного из реагентов с хемилюминесцентной меткой, изменяющей энергетическое состояние во время иммунологической реакции антиген-антитело. Затем для связанной метки выполняется количественная оценка с помощью диоксетанового субстрата, испускающего световое излучение, которое фиксируется трубкой фотоумножителя. 2.6. Метод микроскопического исследования соскобов с ногтевых пластин и кожи стоп на патогенные грибы

Микроскопическое исследование представляет собой наиболее удобный и распространенный метод исследования на грибы. Исследование патологического материала на наличие микотической инфекции от 103 больных было произведено на базе ООО «Лаборатория Гемотест».

Микроскопическое исследование патологического материала на грибы производят как в нативных, так и в окрашенных препаратах. Полученный материал измельчают при помощи скальпеля или препаровальной иглы. Как правило, для более четкой визуализации элементов гриба производят просветление (мацерацию) данного материала при помощи едкой щелочи (КОН, NaOH), которая растворяет эпидермальные чешуйки, слизь, гной, просветляет пигмент волоса и тем самым делают грибы доступными для исследования [2].

На размягченные чешуйки кожи или ногтя, которые помещают на середину предметного стекла, наносят 1-3 капли 20 - 30% раствора КОН (NaOH). Прогревают подготовленный образец патологического материала над пламенем спиртовой горелки до появления нежного белого ободка из кристаллов щелочи по периферии капли, избегая кипячения. Далее исследуемую каплю накрывают покровным стеклом, избегая попадания пузырьков воздуха. Приготовленные препараты длительному хранению не подлежат. Информативен способ просветления патологического материала, не требующий подогревания, заключающийся в длительной экспозиции ногтевых пластин и роговых чешуек в 5% растворе КОН в течение 24 ч [2].

Микроскопическое исследование производят на обычном лабораторном микроскопе без иммерсии. Конденсор микроскопа должен быть опущен, диафрагма сужена. В начале препарат находят на стекле при малом увеличении (40х), последующее исследование производят при большем увеличении (100х); детально препарат изучают при увеличении 400х. Необходимо исследовать несколько образцов препара с тем, чтобы увеличить надежность анализа и избежать ложноположительных результатов.

Состояние барьерной функции кожи у больных обследованных групп

С помощью критерия Манна-Уитни найдены значимые различия в парах показателей между группой больных профессиональными аллергодерматозами в сочетании с микотической инфекцией и группой больных профессиональными аллергодерматозами: медиана показателя специфического Ig Е к Tr. rubrum в группе больных профессиональными аллергодерматозами была значимо ниже таковой в группе больных профессиональными аллергодерматозами в сочетании с микотической инфекцией — 0,17 (0,10;0,30) против 0,29 (0,20;0,50) (p = 0,01) (Табл.3.1.1.).

С помощью критерия Манна-Уитни найдены значимые различия в парах показателей между группой больных профессиональными аллергодерматозами в сочетании с микотической инфекцией и группой больных аллергодерматозами не профессионального генеза, осложненными микотической инфекцией:

1. Медиана показателя специфического Ig Е к Candidа в группе больных профессиональными аллергодерматозами в сочетании с микотической инфекцией была значимо ниже среднего значения показателя в группе больных аллергодерматозами не профессионального генеза, осложненными микотической инфекцией — 18,10 (12,40;35,80) против 42,75 (21,28) (p = 0,02) (Табл.3.1.1.).

2. Медиана показателя специфического Ig Е к Tr. rubrum в группе больных профессиональными аллергодерматозами в сочетании с микотической инфекцией была значимо выше таковой в группе больных аллергодерматозами не профессионального генеза, осложненными микотической инфекцией — 0,29 (0,20;0,50) против 0,17 (0,12;0,25) (p = 0,03) (Табл.3.1.1.).

С помощью критерия Манна-Уитни найдены значимые различия в парах показателей между группой больных ПАД+М и группой больных микозами (М):

Обращает на себя внимание тот факт, что самый высокий уровень микогенной сенсибилизации среди всех групп обследованных отмечался в первой группе (ПАД+М) к грибковым аллергенам Tr. rubrum. Среднее значение уровня специфического IgE к Tr. rubrum было значительно выше в первой группе обследованных лиц (40,7±2,85 кЕ/л) по сравнению с другими группами: ПАД – 14,3±4,20 кЕ/л (p = 0,032), М – 23,5±6,29 кЕ/л (р=0,023), А+М – 14,3±3,15 кЕ/л (p = 0,035) (Табл. 3.1.2.).

Среднее значение уровня специфического IgE к C. albicans в третьей группе (М) превышало таковое значение в остальных группах обследованных больных 32,4±2,57 кЕ/л против 18,5±2,67 кЕ/л в первой группе (ПАД+М) (р=0,020), 23,8±6,82 кЕ/л во второй группе (ПАД), 23,8±5,23 кЕ/л в четвертой группе (А+М), (Табл. 3.1.2.).

Средние значения уровня специфического IgE к Aspergillus niger в группах ПАД, М и А+М были примерно на одном уровне - 28,6±4,76 кЕ/л; 26,5±2,83 кЕ/л; 28,7±2,46 кЕ/л (p=0,021) соответственно. Среднее значение уровня специфического IgE к Aspergillus niger в группе ПАД+М составляло 18,5±3,15 кЕ/л (Табл. 3.1.2.).

Достоверность различий 3 и 1 групп Q р 0,05 Медиана показателя и средние значения специфического Ig Е к Tr. rubrum были достоверно выше значений данного показателя в других группах обследованных лиц, что коррелировало с тяжестью клинического течения профаллергодерматозов и микозов в группе ПАД+М, где отмечалось более раннее начало развития профессионального заболевания кожи по сравнению со второй группой обследованных лиц (ПАД). С помощью критерия Спирмена были найдены значимые корреляции в парах показателей «Ig Е к Tr. rubrum – Степень тяжести ПАД» в группе ПАД+М, t = 3,05, r=0,90, (p = 0,001). Средний срок дебюта аллергодерматоза от начала контакта с производственными аллергенами в первой группе 3,75±2,27 лет по сравнению с аналогичным показателем во второй группе (ПАД) - 9,85±8,76 лет. =5,38, р=0,020 при сравнении 1 и 2 групп больных. =3,911, р=0,048 при сравнении 1 и 3 групп больных. Рисунок 3.8. Доля лиц с моновалентной и поливалентной сенсибилизацией к грибковым аллергенам

В группе больных профессиональными аллергодерматозами в сочетании с микотической инфекцией у большинства больных встречалась поливалентная сенсибилизация (51,86%): у 9 человек (33,33%) к двум грибковым аллергенам, у 3 человек (11,11%) - к трем грибковым аллергенам, у 1 человека (3,7%) - к четырем грибковым аллергенам, у 1 человека (3,7%) - к пяти грибковым аллергенам. Моновалентная сенсибилизация наблюдалась у 13 человек (48,14%)

В группе больных профессиональными аллергодерматозами моновалентная сенсибилизация наблюдалась у большинства больных - 11 человек (52,38%), реже встречалась поливалентная сенсибилизация (47,62%): у 5 человек (23,81%) к двум грибковым аллергенам, у 3 человек (19,05%) - к трем грибковым аллергенам, у 1 человека (4,76%) - к четырем грибковым аллергенам.

В группе больных грибковыми заболеваниями кожи и ее придатков моновалентная сенсибилизация наблюдалась у большинства больных - 20 человек (58,82%), реже встречалась поливалентная сенсибилизация (41,18 %): у 9 человек (26,47%) к двум грибковым аллергенам, у 4 человек (11,76%) - к трем грибковым аллергенам, у 1 человека (2,94%) - к пяти грибковым аллергенам.

В группе больных аллергодерматозами не профессионального генеза, осложненными микотической инфекцией, моновалентная сенсибилизация наблюдалась у большинства больных - 13 человек (61,9 %), реже встречалась поливалентная сенсибилизация (38,1%): у 3 человек (14,29%) к двум грибковым аллергенам, у 5 человек (23,81%) - к четырем грибковым аллергенам.

Наиболее высокий процент лиц с поливалентной сенсибилизацией (к двум и более грибковым аллергенам) был выявлен в группе с сочетанной патологией (профессиональные аллергодерматозы с микотической инфекцией) в сравнении со второй группой (=5,38, р=0,020), и в сравнении с третьей группой больных (=3,911, р=0,048) (Рис.3.8.). Полученные данные свидетельствуют о значительной разбалансировке иммунной системы у лиц с сочетанной профессиональной аллерго- и грибковой патологией, что коррелирует с тяжестью протекания не только профессионального аллергодерматоза, но и грибкового процесса. В первой группе больных (ПАД+М) наблюдалось большее число больных с тяжелым течением профаллергодерматоза в сравнении со второй группой (ПАД). Доля лиц с экземой верхних конечностей в первой группе составляла 70,37%, в то время как во второй группе таких больных было почти вдвое меньше (38,1%). Во второй группе процент больных аллергическим дерматитом (38,09%) преобладал над таковым в первой группе (11,1%).

Также в первой группе (ПАД+М) отмечался самый высокий процент выявления онихомикоза стоп в структуре заболеваемости грибковой инфекцией (92,59%) по сравнению с другими группами: 67,65% - в группе М и 71,43% - в группе А+М. При этом, количество больных с поражением от 7 до 10 ногтевых пластин превалировало в первой группе обследованных лиц (ПАД+М) - 14,78%, по сравнению с другими группами обследованных лиц: третья группа (М) - 12,52%, четвертая группа (А+М) 10,87%. Также следует отметить, что в первой группе больных тотально – дистрофическая форма онихомикоза стоп (51,1%) чаще зарегистрирована, чем в остальных группах обследованных лиц: третья группа (М) - 32,02%, четвертая группа (А+М) - 21,04%.

Результаты исследования полиморфных вариантов гена филаггрина, ассоциированного с нарушением барьерной функции кожи

Уровень липидов был самым низким также в первой (2,36±0,31 мкг/см, в 2,80 раз ниже по сравнению с группой контроля) и четвертой группах обследуемых(3,62±0,18 мкг/см, в 1,82 раз по сравнению с группой контроля). Повышение уровня рН кожи наиболее выражено в группе больных профессиональными аллергодерматозами, осложненными микотической инфекцией (6,74±0,08). Повышение рН кожи в группе ПАД+М отмечалось в 1,35 раз – до 6,74±0,08, в группе ПАД в 1,17 раз - до 5,87±0,19, в группе больных микотической инфекций (М) в 1,23 раз - до 6,17±0,42, в группе больных дерматозами непрофессионального генеза, осложненные микозами, в 1,08 раз - до 5,39±0,64 (p 0,05). В формировании кожного барьера в виде корнифицированного эпителия немаловажную роль играет белок филаггрин, который распадаясь на аминокислоты и их производные, участвует в создании естественного увлажняющего фактора кожи (natural moisturizing factor — NMF), препятствующего избыточной трансэпидермальной потере влаги. Образовавшийся роговой слой является барьером, который предотвращает не только потерю воду, но и проникновение различных инфекционных агентов и алллергенов [94, 156].

Всем обследованным больным профаллергодерматозами было проведено генотипирование на наличие мутации 2282del4 в гене филаггрина методом ПЦР с применением реакции пиросеквенирования. Генотип ins/del был выявлен у 7,4% обследованных лиц, тогда как встречаемость указанного генотипа в популяции составляет всего лишь 2% (2=8,622, p 0,01). При этом у всех больных с вариантом гена филаггрина ins/del наблюдали нарушение показателей барьерной функции кожи (гидратантность, уровень pH, содержание липидов на поверхности кожи).

Таким образом, снижение барьерной функции кожи выявлено у всех обследованных групп в сравнении с популяционным контролем. Наиболее выраженные изменения выявлены у больных профессиональных аллергодерматозами, осложненными микотической инфекцией.

Как известно, эозинофилия возникает вследствие усиленной продукции эозинофилов в костном мозге – защитной реакции организма в ответ на поступление в кровь продуктов чужеродного белка. Эозинофильный катионный протеин является одним из белков, входящих в состав цитоплазматических гранул эозинофилов, обладает иммуномодулирующими свойствами, воздействует на лимфоциты и стимулирует иммунный ответ [37, 38].

В результате аллергологических исследований in vitro, проводившиеся путем исследования и анализа процентных значений содержания эозинофилов крови, выявили, что средние значения количества эозинофилов в крови превышали референтные значения (0,8 – 5%) в группе больных профессиональными аллергодерматозами в сочетании с микотической инфекцией в 1,31 раз. В остальных группах средние значения количества эозинофилов крови не превышали референтных значений.

Анализ полученных результатов показал, что средние значения уровня эозинофильного катионного протеина превышали референтные значения (0 – 24 нг/мл) только в первой группе обследованных, что возможно связано с поддержанием аллергологического процесса инфекционными агентами, такими, как грибы, способные проникать через нарушенный кожный барьер у больных профалергодерматозами, и сенсибилизировать организм за счет активации иммунокомпетентных клеток.

Проведенные исследования выявили достоверное превышение уровня ЭКП в группе больных с профессиональными аллергодерматозами, осложненными микотической инфекцией в сравнении со второй группой (t=2,013, р 0,05), и в сравнении с контрольной группой обследуемых (t=2,30, р 0,05). Обращает на себя внимание, что у лиц с выраженным превышением уровня ЭКП наблюдаются частое рецидивирующее течение и распространенные формы профаллергодерматозов.

Найдена положительная сильная корреляция между показателями уровня эозинофилов в крови и уровня эозинофильного катионного протеина в группе больных профессиональными аллергодерматозами в сочетании с микотической инфекцией. Коэффициент корреляции Пирсона=1, r=0,86. Различия в уровне эозинофилов между группами обследуемых и контрольной группой статистически не значимы. Полученные данные свидетельствуют о том, что определение уровня ЭКП у больных профаллергодерматозами может служить маркером оценки тяжести клинического течения профаллергодерматозов и контроля эффективности проводимой терапии.

Проведенные исследования также выявили достоверное превышение уровня общего IgE в группе больных с профессиональными аллергодерматозами, осложненными микотической инфекцией в сравнении с контрольной группой обследуемых (t=3,55, р 0,05), достоверное превышение уровня общего Ig E в третьей группе исследуемых по сравнению с группой контроля (t=3,39, р 0,05, ). Так в группе больных профессиональными аллергодерматозами, осложненными микотической инфекцией, средний показатель уровня IgE повышен в 1,16 раз – до 139,37± 23,31, в группе больных профессиональными аллергодерматозами средние показатели содержания сывороточного IgE не превышают референтных значений. В группе больных грибковыми заболеваниями кожи и ее придатков в 1,3 раза – до 155,41±29,89. В группе больных аллергодерматозами не профессионального генеза, осложненнми микотической инфекцией, средние показатели содержания сывороточного IgE не превышают референтных значений.

Наиболее высокий процент лиц с поливалентной сенсибилизацией (к двум и более грибковым аллергенам) был выявлен в группе с сочетанной патологией (профессиональные аллергодерматозы с микотической инфекцией) в сравнении со второй группой (=5,38, р=0,020), и в сравнении с третьей группой больных (=3,911, р=0,048). Полученные данные свидетельствуют о значительных нарушениях иммуной системы у лиц с сочетанной профессиональной аллерго- и грибковой патологией, что коррелирует с тяжестью протекания не только профессионального аллергодерматоза, но и грибкового процесса.

Среди всех грибковых аллергенов наблюдалась наиболее выраженная сенсибилизация к Tr. rubrum, уровень среднего значения Ig Е к Tr. rubrum был самым высоким в первой группе обследуемых лиц (критерий Манна-Уитни - 0,29 (0,20;0,50) (p = 0,01) по сравнению со второй группой (критерий Манна-Уитни - 0,17 (0,10;0,30) (p = 0,01); по сравнению с 4й группой (критерий Манна-Уитни - 0,29 (0,20;0,50) против 0,17 (0,12;0,25) (p = 0,03); по сравнению с третьей группой (критерий Манна-Уитни -0,29 (0,20;0,50) против 0,19 (0,12;0,28) (p = 0,03).

Таким образом, наиболее выраженные изменения уровня ЭКП, общего Ig E, поливалентной и моновалентной сенсибилизации к грибковым аллергенам выявлены в группе больных профессиональными аллергодерматозами и микотической инфекцией. Наиболее выраженная сенсибилизация выявлена к Tr. rubrum, что коррелирует с тяжестью клинического течения как профессионального аллергодерматоза, так и микоза у обследованных лиц первой группы. Результаты полученных исследований позволяют рассматривать данные показатели, как информативные маркеры оценки риска развития нозологической синтропии профаллергодерматозов и микозов.