Введение к работе
Актуальность проблемы. Описторхоз - заболевание, вызываемое трематодой Opistorchis felineus, в ряде областей России приобрело значение краевой патологии. Показано, что описторхозная инвазия вызывает значительные изменения в гепатобилиарной системе и предрасполагает к развитию хронического панкреатита, гастрита, язвы желудка и двенадцатиперстной кишки, пилородуодекига (Озерецковская Н.Н. с соавт., 1971, 1972; Белобородова Э.И. с соапт., 1996), а также способствует развитию рака поджелудочной железы, большого дуоденального соска и печени (Белозеров Е.С., 1981; Лепехин А.В. с соавт., 1992). Кроме того, установлено, что описторхозная инвазия сопровождается значительным увеличением числа клеток с цитогенетнческими нарушениями (Ильинских Н.Н. с соавт., 1981, 1984; Бычков В.Г.. 1992; Кудрявцев Д.П. 1992; Степанова Т.Ф., 1998). Поскольку описторхис не может непосредственно воздействовать на генетический аппарат клеток организма, возникает обоснованное предположение, что цитогенетические поражения, наблюдаемые при опис-торхозион инвазии, обусловлены опосредованными механизмами. Известно, что способностью индуцировать цитогенетические нарушения за счет непосредственных механизмов обладают вирусы. Имеются литературные данные, согласно которым описторхис может находиться в ассоциации с вирусом простого герпеса (Иванских В.И.-, Близнюк В.В., 1996). В связи с этим, обращают на себя-внимание результаты исследований представленные В.Д. Подоплемшым (1939, 1990) и СЛО.Ильиным (1995), свидетельствующие о том, что у жителей населенных пунктов в бассениах рек Обь, Иртыш и Томь, где пораженность местного населения достигает- 86,5% (Генецинская Т.А., 1978), наблюдается усиление циркуляции потенциально онкогенного вируса Эпштейна-Барр (ЭБ), также относящегося к семейству герпесвирусов. Поэтому нельзя исключить, что.вирус ЭБ, возможно, играет определенную роль в патогенезе описторхозной инвазии. Результаты исследований в этом направлении, по-ввдммому, могут позволить внести некоторые коррективы в существующие представления о патогенезе опис-торхоза.
Цель и задачи исследования. Цель работы - изучить роль вируса ЭБ в цитогйстологическнх и цитогенетических изменениях прн хроническом описторхозе.
Для реализации этой цели был» поставлены следующие задачи;
2 I. Исследовать роль вируса ЭБ в цитогенетических последствиях при описторхозной инвазии у человека и экспериментальных животных.
-
Изучить цнтогенетичесхие последствия сочетанного воздействия вируса ЭБ и антигенов описторхисов в условиях культуры лимфоцитов человека, стимулированной к делению фнтогемагглютшшном.
-
Изучить пито- и гистологические изменения печени людей, больных хроническим описторхозом и инвазироваиных маритами с инкорпорированным вирусом ЭБ, а также в печени экспериментально инвазироваиных животных, которых одновременно заражали вирусом ЭБ.
-
Изучить особенности Эпштейн-Барр внрусспецнфического иммунного ответа у больных хроническим описторхозом.
Научная новизна работы. Впервые установлено, что у больных хроническим описторхозом наблюдается достоверное повышение уровня антител к антигенам вируса ЭБ по сравнению со здоровыми людьми. Особенно высокие титры антител к капсидному антигену вируса ЭБ отмечены у больных с суперинвазнонной формой описторхоза, с продолжительностью инвазии более 10 лет, а также с хроническими тонзиллитами и фарингитами. При этом у больных описторхозом с высокими титрами G-антител к капсидному антигену вируса ЭБ с помощью метода непрямой реакции иммунофлюоресценции антигены вируса ЭБ были обнаружены в ядрах эпителиальных клеток ротоглотки. Кроме того, в вышеназванной группе больных выявлены наиболее значительные кариопатологические и цнтогеиетические изменения в эпителиоцитах ротоглотки и лимфоцитах периферической крови. Аналогичные нарушения были отмечены в культурах лимфоцитов, полученных от здоровых людей после заражения вирусом ЭБ и введения антигенов описторхисов. Специфическая иммунофлюоресиенция капсидного антигена вируса ЭБ выявлена также в яйцах Opisthorchis felineus у людей с массивной интенсивностью иивазии. Морфологическое исследование печени людей больных описторхозом, инвазироваиных маритами с инкорпорированными антигенами вируса ЭБ, свидетельствует о наличии характерного для этого заболевания холангита, морфологически проявляющегося в виде аденоматозного разрастания эпителия слизистой оболочки внутрипеченочных желчных протоков, десквамации эпителиальных клеток в местах контакта гельминта с их стенкой, а также воспалительной реакции и признаков склероза соединительной ткани по ходу желчных протоков.
Теоретическое и практическое значение. Полученные в настоящем исследовании данные о механизмах возникновения цитогенетических нарушений при описторхозной инвазии вносят новые сведения в существующие
представлення о патогенезе описторхоза и могут служить основанием для разработки новых, патогенетически обоснованных подходов к терапии данного заболевания. Роль вируса ЭБ в описторхозной инвазии должна учитываться специалистами при определении тактики лечения больных описторхозом, поскольку показана связь между уровнем антител к антигенам вируса ЭБ и клиническим вариантом течения хронического описторхоза. Определение уровня антител к антигенам вируса ЭБ вместе с цитогене-тическимн исследованиями (хромосомный анализ, микроядерный тест, исследование патологии митоза и ядра) у больных описторхозом могут использоваться в качестве дополнительных диагностических тестов для прогнозирования риска развития неопластической трансформации.
Внедрение результатов работы в практику. Результаты исследования используются в обучении студентов и клинических ординаторов по разделу "Гельминтозы" на кафедре инфекционных болезней и эпидемиологии Сибирского медицинского университета.
Основные положения, выносимые на зашиту:
1. У больных хроническим описторхозом с высокими титрами антител к
антигенам вируса Эпштейна-Барр повышено количество Т-лимфоцитов с
цитогенетическими нарушениями в периферической крови.
-
Хромосомные нарушения у больных описторхозом с высокими титрами антител к капсидному антигену вируса Эпштейна-Барр преимущественно локализуются в определенных зонах хромосом 2,3, б, 8, 14, и 22.
-
В условиях культуры лимфоцитов здоровых доноров введение вируса Эпштейна-Барр вместе с антигенами, описторхисов вызывает значительные кариопатологнческие и цитогенетическне изменения клеток.
-
С помощью непрямой реакции иммунофлюоресценции выявлено специфическое свечение ка'псидногб:.антигена вируса Эпштейна-Барр в эпителиальных клетках ротоглотки у людей, имеющих высокие титры антител к этому вирусу, а также -в яйцах Opistorchis felineus.
-
Морфологическое нсследованиё.печени людей больных описторхозом, инвазированных маритамн с инкорпорировани'ыми антигенами вируса ЭБ, свидетельствует о наличии характерного для 'этого заболевания холангита, морфологически проявляющегося в віще аденоматозного разрастания эпителия слизистой оболочки внутрипеченочиых желчных протоков, десквамацію эпителиальных клеток в местах контакта гельминта с нх стенкой, а также воспалительной реакции и признаков склероза соединительной ткани по ходу желчных протоков.
6. Наиболее высокий уровень антител к антигенам вируса Эпштейна-Барр обнаружен у больных суперинвазионной формой хронического опи-сторхоза.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы докладывались на: 2-ой международной научно-практической конференции "Безопасность жизнедеятельности в Сибири и на крайнем Севере", Тюмень 1997; 13-ой российской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях", Челябинск, 1997 ; Всероссийской научно-практической конференции "Экологоэавйсимые заболевания (биохимия, фармакология, клиника)", Чита, 1997; Юбилейной конференции "Медико-биологические аспекты нейро-гуморальной регуляции", посвященной 35-летию ЦНИЛ, Томск, 1997; 2-ой республиканской научно-практической конференции, посвященной 75-летию инфекционной службы Удмуртии, Ижевск, 1998; Конференции, посвященной 50-летию кафедры детских инфекции СГМУ, Томск, 1998; 6-ой научно-практической конференции "Актуальные вопросы гастроэнтерологии и особенности заболеваний органов пищеварения в Сибирском регионе", Томск, 1998; Mutation Detection'97, The 4th International workshop, Brno, Czech Republic, 1997; The Society of Environmental Toxicology and Chemistry (SETAC), 18th Annual Meeting, San Francisco, CA, 1997; The International Symposium on Environmental Epidemiology in Central and Eastern Europe: Critical Issues for Improving Health, Smolenice, Slovak Republic, 1997; Conference on Genetic aspects of autoimmune diseases, Noordwijkerhout, The Netherlands, 1998; The ISth Annual Meeting of the European Association for Cancer Research (EACR), Stockholm, Sweden, 1998; The 10th NCI-EORTC Symposium on New Drugs in Cancer Therapy, Amsterdam, 1998.
Публикации, По материалам диссертации опубликовано 19 работ.
Структура работы. Диссертация состоит из введения, четырёх глав, списка литературы из 236 наименований, из которых на- иностранных языках - 125, а также включает в себя 41 рисунок и 20 таблиц.