Содержание к диссертации
Введение
I Обзор литературы 8
1.1. Особенности и различия в цикле развития рода Cryptosporidium класса Sporozoasida 8
1.2. Патогенез и патоморфология криптоспоридиоза лабораторных животных 16
1.3. Патогенез и патоморфология криптоспоридиоза сельскохозяйственных животных 21
II. Собственные исследования 37
2.1. Материалы и методы исследования 37
III. Результаты собственных исследований 41
3.1. Патоморфологические изменения в лимфоидных органах мышей при экспериментальном криптоспоридиозе 41
3.1.1 Патоморфологические изменения в селезенке мышей, экспериментально инвазированных С. parvum 41
3.1.2. Патоморфологические изменения в тимусе мышей, экспериментально инвазированных С. parvum 46
3.1.3. Патоморфологические изменения в лимфатических узлах мышей, экспериментально инвазированных С. parvum 53
3.1.4. Сравнительная патоморфологическая оценка влияния ципрофлоксаци-на и ампролиума на лимфоидные органы и органы, ответственные за гомеостаз, при криптоспоридиозе 55
3.1.5. Биохимические показатели сыворотки крови поросят при криптоспоридиозе 75
Обсуждение полученных результатов 78
Выводы 91
Практические предложения 93
Список использованной литературы 94
Приложение 113
- Особенности и различия в цикле развития рода Cryptosporidium класса Sporozoasida
- Патоморфологические изменения в селезенке мышей, экспериментально инвазированных С. parvum
- Сравнительная патоморфологическая оценка влияния ципрофлоксаци-на и ампролиума на лимфоидные органы и органы, ответственные за гомеостаз, при криптоспоридиозе
- Обсуждение полученных результатов
Введение к работе
Актуальность темы. В последние годы значительно возрос удельный вес криптоспоридиозов у животных. Столь широкое распространение и патогенность объясняются свойствами и жизненным циклом паразита. Криптоспоридии локализуются внутриклеточно и проходят три фазы развития. Этот цикл завершается выделением с фекалиями ооцист, устойчивых к действию неблагоприятных факторов, поэтому они способны длительно сохраняться во внешней среде и заражать новых хозяев, обладая при этом широкий хозяинной специфичностью (Васильева В. А., 1998, 2009, 2010; Бейер Т. В., 1987, 1989, 1998; Бочкарев И. И., 1996; Шибалова Т. А., 1987, 1997; Никитин В. Ф., Павласек И., 1983, 1989; Маннапова Р. Т., Калюжный С. И., 2010; Бородина О. Н., Жукова Э. В., Кравец З. Ф., 1994; Горбов Ю. К., Цыряпкин Б. С., 1984; Никитин В. Ф., Новикова Т. В., 1999; Романова Т. В., Шкарин В. В., 1991; Сидоренко Н. В., 1995; Чайка Н. А., Бейер Т. В., 1990; Ямпольский М. М., 1997; Dimander S.-O. et al., 1998; Gunter N. M., 1983; Ungar B. L. P., 2000; и др.).
Трудности борьбы с данной патологией связаны с непродолжительностью приобретаемого иммунитета, большой репродуктивной способностью паразита, его устойчивостью к терапевтическим средствам, недостаточным ассортиментам препаратов и способностью кокцидий постепенно адаптироваться к ним. Цикл развития и биология криптоспоридий достаточно хорошо изучены, предложен и исследован ряд антикокцидийных препаратов.
Однако, патоморфологические показатели и биохимические изменения в организме больных животных остаются малоизученными.
Цель исследований. Цель настоящей работы – провести сравнительный анализ влияния криптоспоридиозной инвазии, а также комплексной антибиотико-антикокцидантной терапии на динамику биохимических показателей поросят и патоморфологические изменения, происходящие в органах и тканях мышей.
Указанная цель определяет следующие задачи исследований.
1. Выявить характер патоморфологических изменений в лимфоидных органах мышей после воздействия на них возбудителя криптоспоридий.
2. Дать оценку влияния химических препаратов (ципрофлоксацина и ампролиума) на лимфоидные органы лабораторных животных.
3. Проанализировать динамику биохимических изменений до и после применения антибиотиков и кокцидиостатиков у поросят.
4. Провести сравнительный анализ патоморфологических показателей после действия химических препаратов на лимфоидные органы и гомеостатического обеспечения у лабораторных животных.
Научная новизна исследований. Впервые проведен сравнительный анализ патоморфологических изменений, происходящих в лимфоидных органах, и гомеостатического обеспечения до и после применения ципрофлоксацина и ампролиума при экспериментальном криптоспоридиозе.
Установлены некоторые вопросы механизма положительного воздействия на организм мышей оптимальных доз химических препаратов.
На основании патоморфологической характеристики лимфоидных органов (селезенка, тимус, лимфатические узлы) и гомеостатического обеспечения (печень, почки, надпочечники) дана фармакологическая оценка препаратов.
На основании использования биохимических методов исследования получены данные по изменению ферментов аминотрансфераз (АлАТ, АсАТ) до и после применения препаратов.
Практическая ценность работы. На основе биохимических и патоморфологических исследований установлена связь динамики болезни с определенными стадиями эндогенного развития криптоспоридий, расширено представление о патогенезе криптоспоридиоза животных.
Результаты проведенного исследования расширяют представление о фармакологии ципрофлоксацина и ампролиума.
На основании патологоморфологических данных установлена возможность применения при криптоспоридиозе данных препаратов.
Материалы исследований дополняют информацию о вредном воздействии криптоспоридий на организм животных.
Полученные результаты рекомендуем использовать при переиздании учебников по паразитологии и инвазионным болезням сельскохозяйственных животных и патологической анатомии. Кроме того, они используются при чтении лекций по курсу «Криптоспоридиозы сельскохозяйственных животных».
Основные положения диссертации, выносимые на защиту.
1. Патоморфологические изменения в селезенке, тимусе, лимфатических узлах при экспериментальном криптоспоридиозе.
2. Сравнительная характеристика патоморфологических изменений, происходящих в лимфоидных органах, и гомеостатического обеспечения.
3. Биохимический состав сыворотки крови поросят при криптоспоридиозе до и после воздействия ципрофлоксацина, ампролиума, аватека и цикостата.
Внедрение результатов исследований. Основные положения диссертационной работы достаточно полно отражены в 5 научных статьях, из них 3 опубликованы в рецензируемых журналах. Полученные результаты внедрены в 11 лабораториях РМ, а также используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедре ветеринарной патологии Аграрного института ГОУВПО «Мордовский государственный университет имени Н. П. Огарева».
Апробация работы. Основные положения работы доложены на Всероссийской научно-практической конференции «Эффективность адаптивных технологий в животноводстве» (Ижевск, 2004); Всероссийской научно-производственной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2004; 2005); Международной научно-практической конференции «Современные наукоемкие технологии» (ОАЭ, Дубай, 2005); XXXIV, XXXV, XXXVI Огаревских чтениях Мордовского университета (Саранск, 2006, 2007, 2008); XI, XII, XIII научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов МГУ имени Н. П. Огарева (Саранск, 2006, 2007, 2008); расширенном заседании кафедры ветеринарной патологии Аграрного института ГОУВПО «Мордовский государственный университет имени Н. П. Огарева» (протокол № 6 от 13 мая 2011 г.).
Личный вклад соискателя. Представленная диссертационная работа является результатом семилетних научных исследований автора. Патоморфологические исследования, изучение биохимических показателей выполнены соискателем лично.
В опубликованных совместно с научным руководителем В. А. Васильевой В.А. статьях основная часть описанной экспериментальной работы выполнена диссертантом (В. А. Васильева не возражает против использования результатов совместных исследований, соответствующие справки представлены в совет по защите докторских и кандидатских диссертаций).
Работа выполнялась под научным руководством доктора ветеринарных наук профессора В. А. Васильевой, которая оказывала научно-методическую помощь в проведении исследований и анализе полученных результатов.
Объем и структура диссертации. Диссертация включает общую характеристику работы, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения. Диссертация изложена на 116 страницах машинописного текста, иллюстрирована 40 рисунками.
Список использованной литературы включает 177 источников, включая работы иностранных авторов.
Особенности и различия в цикле развития рода Cryptosporidium класса Sporozoasida
Данный класс включает паразитов в основном позвоночных животных.
Род Cryptosporidium (от греч. скрытая спора) принадлежит к семейству Cryptosporidiidae, типу Apicomplexa (в связи с тем, что спорозоиты имеют апикальные комплексы), классу Sporozoasida, подклассу Coccidiasina, отряду Coccidiida.
Ниже приводим расшифровку отряда Coccidiida.
Отряд , COCCIDIIDA Leuckart, 1879
Ключ для определения некоторых семейств отряда Coccidiida Признаки
Ряд I. Наличие жгутиков у микрогамет:
0 — микрогаметы не имеют жгутиков;
1 - микрогаметы имеют жгутики.
Ряд 11. Локализация в клетке хозяина:
1 — развитие эндогенных стадий происходит под плазматической мембраной клетки хозяина - экстрацитоплазматически;
2 - развитие эндогенных стадий происходит в цитоплазме клетки хозяина.
Ряд III. Наличие специальной прикрепительной органеллы у меронтов и ооцист:
0 - прикрепительная органелла отсутствует;
1 - прикрепительная органелла имеется.
Ряд IV. Гомоксенность и гетероксенность:
1 - гомоксенны или без агамного множественного размножения в недефинитивном хозяине;
2 - гегероксенны. Ряд V. Наличие в жизненном цикле цист и саркоцист;
0 — цисты и саркоцисты отсутствуют;
1 — цисты и саркоцисты имеются.
1. Семейство Cryptosporidiidae Leger, T911
Диагноз. Развитие происходит внутриклеточно под плазматической мембраной клетки хозяина — экстрацитоплазматически; ооцисты и меронты имеют прикрепленную органеллу; спороцист нет; спорозоиты лежат свободно в ооцисте; микрогаметы не имеют жгутиков; гомоксенны.
1. Род Cryptosporidium Tyzzer , 1910
Диагноз. Характеристика семейства.
До настоящего времени считалось, что из 19 описанных видов кокци-дий этого рода реально существуют четыре: Cryptosporidium crotali, Cryptosporidium nasorum, Cryptosporidium meleagridis и Cryptosporidium muris, два паразитируют у домашних животных, a Cryptosporidium muris, помимо того, у человека (Levin, 1984). Синоним рода Cryptosporidium Tyzzer, 1910, вид Hoareospotidium должен называться Cryptosporidium pellerdyi. У цыплят описан новый вид Cryptosporidium baileye, у кошек - Cryptosporidium curyi.
Таким образом, валидных видов в роде Cryptosporidium в настоящее время насчитывается семь. Заражение происходит при заглатывании ооцист, предполагается аутоинвазия.
Ключ для определения видов рода Cryptosporidium
Признаки
Ряд I. Стенка ооцист: — однослойная;
2 - двухслойная.
Ряд П. Размеры длины ооцист:
1 — до 7,2 мкм;
2— 12-17 мкм;
3 — свыше 25 мкм. Ряд III. Место эндогенного развития:
1 - железистый желудок;
2 - тонкая кишка, респираторные органы;
3 - подвздошная и толстая кишки, клоака, фабрициева сумка, синус, трахея, конъюнктива.
Ряд IV. Хозяева:
1 — птицы;
2 — млекопитающие.
1. Cryptosporidium muris Tizzer, 1910
Распространение: всесветное.
Хозяева: Mus musculus (мышь домовая), Bos taurus (крупный рогатый скот), Capra hircus (коза), Cavia porcellus (морская свинка), Cervus elaphus (благородный олень), Eguus caballus (лошадь), Felis catus (кошка), Homo sapiens (человек), Macaca mulata (макака резус), Mesocricetus auratus (золотистый хомячок), Oryctolagus cuniculus (кролик), Ovis aries (овца), Sus scrofa domestica (свинья), Rattus norvegicus (серая крыса).
Описание. Ооцисты овоидные, эллипсоидные или сферические (рис. 1); Размеры их варьируют, бывают мелкие ооцисты 2,5 - 3 мкм в диаметре и относительно крупные 5 х 7 мкм: Стенка ооцист гладкая, состоит из одного слоя. На полюсе, прикрепленном к цитоплазме клетки хозяина; имеется кнопкообразнаягприкрепительная.органелла. В; ооцисте содержится остаточное тело. Спороцист нет, 4 спорозоита лежат свободно в ооцисте.
Мерогония. Развитие эндогенных стадий происходит на железистом эпителии желудка. Эти стадии располагаются внутриклеточно - экстрацито-плазматически. Паразит окружен паразитоформной вакуолью, сформированной соседними микроворсинками. Меронты 7 х 6 мкм дают начало 8 банано-образным мерозоитам, располагающимся вокруг остаточного тела. Мерозои-ты прикрепляются одним концом к поверхности желудочного или.кишечного эпителия и округляются. Число агамных генераций точно не известно, многие описывают вторую генерацию меронтов, содержащую 4 мерозоита, однако эта стадия может быть спутанас развивающимися-ооцистами.
Гаметогония начинается через 72 ч после заражения. Цитоплазма га-монтов связана с эпителиальной клеткой зоной прикрепления, представляющей собой плотный слой 15 нм толщиной. Зона прикрепления между паразитом и эпителиальной клеткой формируется путем слияния наружных мембран соседних микроворсинок и плазматической мембраны эпителиальной клетки, вследствие чего невозможен никакой прямой контакт с цитоплазмой клетки хозяина (Goebel, Braendler, 1982). Наружный слой пелликулы гамонта связан с внутренней мембраной микроворсинки утолщенным осмиофильным участком. Этот слой формирует питающую органеллу, содержащую множество складок в основании тела паразита и имеющую везикулярные эвагина-ции, иногда здесь,можно видеть эндоцитозные пузырьки. Микрогаметоциты 5 х 3,5 мкм формируют 16 микрогамет, располагающихся вокруг большого остаточного тела. Микрогаметы не имеют жгутиков. Макрогаметы 4,6 мкм в диаметре, сферические или эллипсоидные, имеют на одном из полюсов при крепительную органеллу
Патоморфологические изменения в селезенке мышей, экспериментально инвазированных С. parvum
Селезенка является одним из самых «древних» периферических органов иммунной системы, так как имеется у всех позвоночных и впервые появляется у круглоротых в виде лакун (расширений сосудов), заложенных в толще стенки средней кишки. У более высокоорганизованных селезенка обособляется в самостоятельный орган, который и сохраняется у всех животных, до млекопитающих включительно. В виде оформленного органа селезенка выделяется только у хрящевых рыб и состоит из долек, разделенных соединительнотканными трабекулами.
Так как селезенка закладывается в дорзальной брыжейке средней кишки, то у разных животных ее можно обнаружить или близ желудка (птицы, млекопитающие), или близ задней кишки (бесхвостые амфибии, черепахи), или в средней части кишки (рептилии). Развивается селезенка из скопления мезенхимных клеток в области дорзальной части брыжейки. В начальный период происходит формирование волокнистого каркаса, сосудистого русла и ретикулярной стромы. Последняя заселяется стволовыми клетками и макрофагами. Вначале селезенка — это орган миелоидного кроветворения. Затем идет интенсивное вселение из тимуса лимфоцитов, которые сначала располагаются вокруг центральных артерий. Немного позднее происходит образование лимфоидных узелков и красной пульпы.
Селезенка представляет собой плоский орган красно-фиолетового цвета лентовидной формы. Располагается селезенка в левом подреберье слева от желудка. На селезенке различают две поверхности: париетальную, или диа-фрагмальную и висцеральную; два конца - дорсальный и вентральный и два края — краниальный и каудальный. С поверхности селезенка прикрыта серозной оболочкой, которая переходит в большую кривизну желудка. Под серозной оболочкой, окружающей селезенку, находится капсула, or которой внутрь органа отходят трабекулы, разграничивающие селезенку на сегменты. В каждом сегменте выделяют: красную пульпу, белую пульпу и маргинальную зону, разделяющую их. Красная пульпа составляет около 75%, а белая пульпа — 17% от объема селезенки.
Как показывают экспериментальные исследования, она является главным источником антител при внутривенном введении антигена. Именно в селезенке раньше, чем в каком-либо другом органе иммунной системы, в ответ на введения антигенных частиц начинается синтез иммуноглобулинов класса М. Селезенка играет роль биологического фильтра на пути тока крови из артериального русла в систему воротной вены печени.
На 5-е сутки после заражения у мышей второй опытной группы отмечали поверхность селезенки относительно ровную, тонкие капсулы. Структура смазана, особенно белой пульпы, лимфатическая фолликула практически отсутствует, ткань пульпы гипертрофирована, красная пульпа с явлениями хронического ми юза, с признаками гемостаза повышенной клеточностью и пролиферации элементов ретикулярной стромы (рис.2).
На 8-е сутки в селезенке мы выявили следующее: поверхность крупнобугристая, капсулы тонкие, структура относительно сохранена, в белой пульпе отмечается полиморфизм лимфатических фолликулов со значительным угнетением центров размножения, с атрофией их красной пульпы, губчатой клеточностью с признаками хронического полнокровия и пролиферации элементов ретикулярной стромы (рис. 3).
На 10-е сутки после заражения структура смазана, особенно белой пульпы, где лимфатические фолликулы практически отсутствуют, ткань ее значительно гипертрофирована, клетки красной пульпы с явлениями полнокровия, губчатой клеточностью, признаками пролиферации элементов ретикулярной стромы, но поверхность ровная, капсула гладкая (рис. 4, 5). На 12-е сутки после заражения в белой пульпе отмечается полиморфизм лимфатических фолликулов, большая их часть резко гипертрофирована, с крупными реактивными центрами размножения, красная пульпа относительно мелкоклеточная, резко полнокровная, с явлениями гемостаза и очагами геморрагии, структура сохранена, капсула тонкая, поверхность грубо-бугристая.
У мышей, убитых на 16-е сутки после инвазирования, структура практически сохранена, поверхность относительно ровная, капсула тонкая, белая пульпа атрофична, с мелкими атрофическими лимфатическими фолликулами, которые резко расширены в фолликулярной артерии, с явлениями гемостаза. Красная пульпа резко полнокровна, расширенными кровеносными сосудами и явлениями гемостаза и лимфостаза, строма бедна клеточными элементами.
У мышей, убитых на 20-е сутки после инвазирования, поверхность ровная, капсула гладкая, структура относительно сохранена, белая пульпа хорошо выражена, с большим числом-полиморфных фолликулов, с активны- . ми реактивными центрами размножения, красная пульпа довольно полнокровна, с явлениями гемостаза, относительно-мелкоклеточная, с явлениями пролиферации элементов ретикулярной стромы.
В более поздние сроки исследования (24-30-е сутки) мы отмечали, что поверхность селезенки относительно ровная, капсула тонкая, структура стромы практически не нарушена, белая пульпа представлена полиморфными лимфатическими фолликулами с атрофичными центрами размножения, с наличием резко расширенных центральных фолликулярных артерий с явлениями гемостаза, красная пульпа довольно полнокровна, с гемостазом, относительно мало клеточной стромы.
Наши исследования показали, что в селезенке отмечаются гипертрофия, полиморфизм лимфатических фолликулов и гемостаз с очагами геморрагии.
Сравнительная патоморфологическая оценка влияния ципрофлоксаци-на и ампролиума на лимфоидные органы и органы, ответственные за гомеостаз, при криптоспоридиозе
Для уточнения деталей развития болезни, а также апробации новых терапевтических средств нами была разработана экспериментальная модель криптоспоридиоза на белых мышах и проведено тщательное патоморфоло-гическое исследование, так как разработка и внедрение новых лекарственных препаратов, ускоряющих восстановительные процессы в поврежденных органах и тканях, является актуальной задачей ветеринарной науки (Бейер Т. В., Пашкин П. И., Рахманова А. Г., 1987; Шибалова Т. И., 1997; Васильева В. А., 2004 и др.).
Поскольку лечение паразитарных болезней вызывает необходимость применения специфических препаратов, то знание механизма их воздействия на органы имеет принципиальное значение, т.к. трудности терапии при криптоспоридиозе обусловлены рядом особенностей жизненного цикла этого паразита.
До настоящего времени остается открытым вопрос специфического лечения криптоспоридиоза из-за отсутствия эффективных этиотропных препаратов, обладающих выраженным избирательным действием на криптоспори-дий, хотя в ряде экспериментальных исследований были получены положительные результаты.
Данные литературы показывают (Haberkon A., Mundt Н., 1988; Camma-rota С, 1989; Gobel Е., 1991; Небайкина Л. А., Васильева В. А., 1994, 1995; Васильева В. А., 1998, 2000, 2001, 2002; Васильева В. А., Малахов Н. С, 2005; Кулясов П. А., 2008; Маннапова Р. Т., Калюжный С. И., 2010; и мн.др.), что при криптоспоридиозе испытаны в качестве лечебно-профилактических препаратов лазалоцид, толтразурин, цигро, сульфадимезин, метилурацил, кокцидиовит, фтазин и др. Эффективность большинства лекарственных препаратов была низкой, либо отсутствовала.
Исходя из этого, мы поставили цель изучить действие ципрофлоксаци-на и ампролиума на лимфоидные органы и гомеостатическое обеспечение в сравнительном аспекте.
У мышей третьей и пятой опытных групп, получавших ципрофлокса-цин и ампролиум, патологических изменений в исследуемых органах не установлено.
У мышей четвертой опытной группы, зараженных С. parvum и получавших ципрофлоксацин, на момент дачи препарата в селезенке фолликулы белой пульпы были со значительным количеством бластовидных клеток, с выраженным митозом. В красной пульпе происходило опустошение фолликулов, их своеобразное разрыхление. У некоторых мышей лимфатические фолликулы представляли собой шарообразные скопления лимфоцитов с просматривающимися светлыми центрами. Сеть венозных синусоидных капилляров красной пульпы переполнена кровью. Центральные и трабекулярные артерии сокращены. У остальной опытной группы границы фолликулов нечеткие, реактивные центры не выражены, центральные артерии запустевшие, а трабекулярные вены расширены и заполнены форменными элементами крови. Сеть венозных капилляров в той или иной степени переполнена эритроцитами (рис. 14, 15).
В печени на момент дачи препарата ципрофлоксацина были выражены признаки венозной гиперемии. При этом впадающие в центральные вены внутридольковые капилляры расширены и заполнены кровью. В просвете желчных ходов в желчных капиллярах незначительное скопление желчи. Просвет большинства центральных вен расширен, с явлениями гемостаза (рис. 16, 17, 18, 19,20,21).
В мазках-отпечатках, полученных из кусочков печени животных этой группы, не найдены ооцисты С. parvum.
У отдельных животных в брыжеечных лимфатических узлах наблюдали большое количество макрофагов и эозинофилов в синусах и мякотных тяжах, у других в брыжеечных лимфатических узлах серозного воспаления не обнаружили, но явления лимфостаза диагностировали. В соматических лимфатических узлах центры лимфоидных фолликулов характеризовались фигурами митоза и наличием единичных макрофагов. В тимусе корковое вещество значительно гипертрофировано, а мозговое представлено узкой полоской из атрофичных эпителиоидных клеток с единичными тельцами Гассаля (рис. 22, 23).
В корковом веществе почек у одних животных границы клеток, формирующих извитые канальцы, выражены неясно, просвет их практически незаметен. Эпителиоциты набухшие, увеличены в объеме. Цитоплазма эпителио-цитов тусклая, с зернистостью.
В наиболее пораженных клетках ядра не обнаруживаются или находятся в состоянии кариолизиса. Просвет некоторых канальцев содержит мелкозернистую массу, а в нижележащих отделах канальцев обнаруживаются гомогенные структуры (рис. 24, 25, 26, 27).
В клубочках и строме органа изменений не отмечено. У части животных различные зоны коркового и мозгового вещества приближались к контролю, но было характерно расширение капилляров в пучковой и сетчатой зонах коркового вещества. При этом явления жировой дистрофии и атрофи-ческие изменения не обнаруживались, что свидетельствует о синтезе и выделении прежде всего альдостерона и стероидных гормонов, купирующих воспалительные процессы.
В надпочечниках у мышей, получавших ципрофлоксацин, поверхность органа ровная, капсула гладкая, корковое вещество малокровно, все зоны коркового вещества хорошо различимы. Мозговое вещество полнокровное, с выраженным клеточным и ядерным полиморфизмом.
Ядра клеток разрыхлены, с характерным сетчатым хроматином, признаками пикноза и кариолизиса. Цитоплазма клеток резко набухшая, гомоге-незирована, местами с грубой зернистостью, выраженными явлениями гид-ролитической и гиалиново-капельной дистрофии (рис. 28, 29, 30).
Обсуждение полученных результатов
На современном этапе развития науки биологическое моделирование болезней становится важнейшим методом научного познания. Это обусловливает необходимость создания на лабораторных животных таких экспериментальных моделей, которые наиболее адекватно отражали бы механизм возникновения и развития заболеваний или отдельные их патогенетические звенья, а также механизмы выздоровления (Давыдовский И.В., 1962; Сарки-сов Д.С., 1990). Большинство исследователей (Шибалова Т.А., 1968, 1969; Алиев А.А., 1993; Бочкарев И.И., 1996; Ямпольский М.М., 1997; Васильева В.А., 2000, 2002; Fayer R., 1997, и др.) в качестве такой модели использовали культуры клеток, что сопряжено с определенными трудностями.
Известно, что впервые криптоспоридии были обнаружены у мышей (Tyzzer Е.Е., 1907) следовательно, белые лабораторные мыши могут быть использованы для воспроизведения криптоспоридиоза. Вопрос лишь в том, как подобрать оптимальную дозу криптоспоридии, получаемых от поросят, телят, и в каком возрасте наиболее ярко проявляется заболевание, вызываемое простейшими класса Sporozoasida, отряда Eucoccidiorida, и в частности крип-тоспоридиями (Шибалова Т.И., 1987; Никитин В.Ф., Павласек И., 1988, 1989; Тайчинов У.Г., 2000; Landverk Т., 1987; Castro-Hermida J.A., 2000; Lindsay D.S., 2000, и др.).
Усилия многих ученых направлены на изыскание новых эффективных и безопасных биологически активных веществ разнообразной природы, обладающих свойствами повышать защитные силы организма, особенно на ранних стадиях развития животных.
Разработана и апробирована коррекция иммунного статуса больных криптоспоридиозом животных и профилактики болезни ИЛ-IB в экспериментальных и производственных условиях, с учетом специализации зональных и экологических особенностей ведения животноводства. Показано, что препарат ИЛ-IB стимулирует неспецифическую резистентность, а также способствует ускоренному созреванию предшественников лимфоцитов (Бочкарев И.И., 1992; 1996).
Давкаев Р.Ш. (2002), Вильданов Р.Х. (2002), Малов Д.В. (2002) в опытах на беспородных белых мышах, облученных гамма — лучами в дозе 7,0 Гр, изучали влияние средств микробного и растрітельного происхождения на выживаемость. В процессе опыта они выявили, что испытанные препараты обладают радиозащитным эффектом, обеспечивая высокую выживаемость леченых облученных животных, что свидетельствует о перспективности дальнейшего изучения их на сельскохозяйственных животных.
Гафаров А.З., Тимохин М.А. (2000), изучая влияние лиенолизата на некоторые клинико-гем ато логические показатели у растущих крыс при одно- и двухкратном введении, установили, что лиенолизат оказывает стимулирующее влияние на энергию роста, эритро- и лейкопоэз и синтез гемоглобина, более выраженное при его двухкратном введении.
Гизатуллин P.P. (2002), изучая влияние натрия сульфида на иммунологическую реактивность организма животных (кроликов), пришел к выводу, что после однократного введения сульфида натрия в дозах 10 мг/кг и 40 мг/кг в первые 10 дней стимулирует иммунобиологическую реактивность животных.
Тюрина Т.В. (2002) проведя ряд опытов по изучению влияния ципроле-та-250 вместе с иммуномодулятором тактивн, выявила, что антибиотик способствует уничтожению C.parvum в кишечнике и восстановлению его функций.
Васильева В.А. (2004) проведя сравнительную характеристику влияния на организм мышей при экспериментальном криптоспоридиозе циплина и цигро, установила, что лучше использовать циплин, так как он обладает эффективном терапевтически эффектом и меньшей токсичностью.
Для успешной борьбы с простейшими и во избежание появления резистентных изолятов Калюжный СИ., Ларионов СВ., Маннапова Р.Т. (2002, 2003); Нестерович СГ. (2002); Маннапова Р.Г., Калюжный СИ. (2010) предлагают иметь набор препаратов разной химической1 природы и механизма действия. Исходя- из приведенных данных некоторыми авторами можно сделать вывод, что до настоящего временишет эффективныхпрепаратов при. этой инвазии.
Общеизвестно; что патоморфологическая; оценка влияния фармакологических препаратов на организм животных является.наиболее объективным критериемразличных спектров действия лекарственных средств.
Исходя из этого, нами было изучено действие ооцист криптоспоридий на лимфоидные органы до применения препаратов и после, а также было проведена сравнительная патоморфологическая оценка между лимфоидными органами и гомеостатического обеспечения.
Первый;.начальный период, характеризуется»незначительным увеличением активности ферментов, вскоре после заражения;поросят.
Полученные данные свидетельствуют о том, что в первый (начальный) период, когда происходит внедрение спорозоитов в, клетки; кишечника и формирование трофозоитов, которые, получая необходимые вещества через питающую органеллу эпителиальной клетки, увеличиваются в размерах и становятся меронтами, которые представлены двумя типами. Меронты первого типа распадаются на 6 — 8 мерозоитов (0,1 — 5 мкм), которые способны к циклическому развитию, т.е. вновь дают начало меронтам первого типа (бесполое размножение). Число таких циклов неизвестно, однако в результате происходит значительное увеличение мерозоитов первого типа, часть которых дает начало меронтам второго типа (рис. 40).
Последние распадаются на 4 мерозоита, способных развиваться в клетки половой фазы цикла, -макро- и микрогамонтов. Макрогамонт без мета-гамного деления ядра превращается в макрогамету (женскую гамету). У мак-рогамонта ядро делится, причем каждое из 16 дочерних ядер-становится ядром безжгутиковой микрогаметы (мужской гаметы). В результате копуляции гамет образуется зигота, которая покрывается оболочкой и становится ООЩІСТОЙ.
Процесе споруляции, т.е. формирования инвазионных спорозоитов, совершается у криптоспоридий при внутриклеточной локализации ооцисты. Это имеет большое эпидемиологическое и.эпизоотологическое значение, т.к. выделяемые во внешнюю среду ооцисты являются инвазионными (способными заражать нового хозяина при попадании в его пищеварительный тракт).
Весь процесс развития от попадания ооцисты в организм хозяина до выделения ооцисты нового поколения у криптоспоридий млекопитающих занимает 4-7 суток, у человека — чаще всего 5 суток. Не все сформировавшиеся ооцисты выделяются во внешнюю среду, часть ооцист с тонкими оболочками могут вызвать аутоинвазию макроорганизма, обуславливая тем самым хроническое течение криптоспоридиоза.
Таким образом, в цикле развития криптоспоридий наблюдаются, по крайней мере, две особенности, значительно повышающие репродуктивный потенциал этого возбудителя: во-первых, способность мерозоитов первого типа к циклическому развитию, и во-вторых, возможность аутоинвазии организма тонкостенными ооцистами. Это объясняет длительное сохранение паразита в организме хозяина даже при отсутствии повторных заражений.
Толстостенные ооцисты выделяются во внешнюю среду, где могут сохранять свою инвазионность от 4-6 месяцев до 1 года (S. Tzipori, I. Campbell, D. Sherwood et al., 1980; H.M. Gunter, 1983).
Для уточнения деталей развития болезни, а также апробации новых терапевтических средств нами была разработана экспериментальная модель криптоспоридиоза на белых мышах и проведено тщательное патоморфоло-гическое исследование, так как разработка и внедрение новых лекарственных препаратов, ускоряющих восстановительные процессы в поврежденных органах и тканях, является актуальной задачей ветеринарной науки (Бейер Т. В., Пашкин П. И., Рахманова А. Г., 1987; Шибалова Т. И., 1997; Васильева В. А., 2004 и др.).
