Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 8
1.1. Анатомо-топографическая характеристика печени птиц 8
1.2. Морфофункциональная характеристика печени птиц 15
1.3. Распространение, применение и биологическая роль селена 20
1.4. Заключение к обзору литературы
2. Материалы и методы исследований 35
3. Результаты собственных исследований
3.1. Динамика живой массы гусей китайской серой породы от одно- до 120-суточного возраста при введении в рацион ДАФС-25к 39
3.2. Анатомо-топографическая характеристика и динамика массы печени гусей китайской серой породы от одно- до 120-суточного возраста при использовании ДАФС-25к 44
3.3. Морфометрическая характеристика печени гусей китайской серой породы от одно- до 120-суточного возраста при применении ДАФС-25к 51
3.4. Микроструктура печени гусей китайской серой породы от одно- до 120-суточного возраста на фоне ДАФС-25к 56
3.5. Морфологические и биохимические показатели крови гусей от одно- до 120-суточного возраста при применении ДАФС-25к 83
3.6. Экономический эффект при использовании в рационе гусей китайской серой породы препарата ДАФС-25к 92
4. Обсуждение рузультатов исследований 94
Выводы 103
Практические предложения 105
Список использованной литературы
- Морфофункциональная характеристика печени птиц
- Заключение к обзору литературы
- Анатомо-топографическая характеристика и динамика массы печени гусей китайской серой породы от одно- до 120-суточного возраста при использовании ДАФС-25к
- Морфологические и биохимические показатели крови гусей от одно- до 120-суточного возраста при применении ДАФС-25к
Введение к работе
Актуальность работы. Птицеводство – интенсивная и высокодоходная отрасль сельского хозяйства. В последние годы отечественное птицеводство развивается высокими темпами, благодаря чему в 2015 году Россия в мировом рейтинге по производству мяса птицы заняла четвертое место, а по производству яиц – шестое (Фисинин В.И., Бобылева Г.А., Ройтер Р.М., 2015; Суханова С.Ф., Азаубаева Г.С., 2015). Согласно Доктрине продовольственной безопасности Российской Федерации, утвержденной Указом Президента от 30 января 2010 г. №120, именно птицеводству отводится главная роль в пополнении ресурсов продовольствия (Доктрина…, 2010; Фисинин В.И., Бобылева Г.А., Ройтер Р.М., 2015).
Основным способом увеличения мясной продукции с наименьшими затратами, повышения питательных и потребительских свойств производимой продукции является коррекция рациона путем введения кормовых добавок с целью обогащения кормов, понижающих или незначительно повышающих себестоимость продукции (Суханова С.Ф., Азаубаева Г.С., 2015). Вместе с тем, невозможно поддержать высокий уровень производства без грамотного управления генетическим потенциалом живого организма. Промышленные масштабы птицеводства заставляют морфологов обратить внимание на необходимость проведения комплексного изучения строения, развития, морфофункциональных особенностей всех систем организма птиц (Селезнев С.Б., Ветошкина Г.А., Овсищер Л.Л., 2001). Знание биологических особенностей птиц зачастую является решающим при создании технологических приемов ее содержания (Кочиш И.И., Сидоренко Л.И., Щербатов В.И., 2005), а изучение индивидуальных особенностей развития тканей, органов и систем позволяет глубже понять протекающие в живом организме процессы, способствует разработке систем полноценного сбалансированного кормления и содержания, и, как следствие, обеспечивает максимальную продуктивность (Пронин В.В. и др., 2013; Фролова Л.В., 2013). Особое значение среди органов и систем организма имеет печень, что объясняется ее исключительной ролью в пищеварительных и обменных процессах.
Изучению морфологии печени птиц посвящено ряд работ (Вракин В.Ф., Сидорова М.В., 1984; Донкова Н.В., 2004; Косенкова Д.А., 2006; Ткачев Д.А., 2007; Гришина Д.Ю., 2009; Бородулина И.В., 2009; Жилина О.В., Зайцева Е.В., Крикливый Н.Н., 2009; Жилина О.В., 2010; Копылов А.С., 2011; Курилкин В.В., 2011; Давлетова В.Д., 2013; Хаматнуров А.С., Авзалов Р.Х., Ганиев С.Б., 2013; Красникова Л.В., 2015; Хамитова Л.Е., 2015; Губайдуллин А.С., Гребенькова Н.В., Сковородин Е.Н., 2016; Муллаярова И.Р., Гайфуллина А.Р., 2016). Однако сведений, касающихся морфологии этого органа у гусей, недостаточно (Красникова Л.В., 2015; Губайдуллин А.С., Гребенькова Н.В., Сковородин Е.Н., 2016; Муллаярова И.Р., Гайфуллина А.Р., 2016), а данных о морфологии печени гусей китайской серой породы в доступной нам литературе не обнаружены. Данная порода, благодаря высокой выносливости и неприхотливости к условиям содержания и кормления, широко распространена на территории Российской Федерации, особенно в фермерских и личных подсобных хозяйствах, в том числе и во Владимирской области, относящейся к биогеохимическим регионам с пониженным уровнем селена (Пронин В.В. и др., 2010). Использование неорганических форм селена зачастую малоэффективно ввиду низкой биодоступности (20-30%) и высокой токсичности. В последнее время в
птицеводстве стали широко использоваться органические форы селена, в том числе ДАФС-25к (Родионова Т.Н., 2004; Ошкина Л.Л., 2005; Мармурова О.М., 2006; Рубцов В.В., 2006), тем не менее сведений, касающихся применения этого препарата при выращивании гусей, не обнаружено.
Цель и задачи исследований. Целью исследования явилось изучение морфологии печени гусей китайской серой породы на фоне применения селеноорганического препарата ДАФС-25к. Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:
-
Определить абсолютные и относительные показатели динамики живой массы и массы печени гусей китайской серой породы от одно- до 120-суточного возраста на фоне применения селеноорганического препарата ДАФС-25к.
-
Изучить анатомо-топографическую характеристику печени гусей китайской серой породы.
-
Выявить морфологические изменения печени гусей китайской серой породы при использовании препарата ДАФС-25к.
4. Изучить влияние селеноорганического препарата ДАФС-25к на
морфологические и биохимические показатели крови гусей китайской серой породы.
5. Определить экономическую эффективность применения добавки ДАФС-25к в
рационе гусей китайской серой породы.
Научная новизна. С помощью комплекса анатомических, морфометрических, гистологических, гистохимических и статистических методов исследования впервые изучено строение печени гусей китайской серой породы в раннем постнатальном онтогенезе при применении селеноорганического препарата ДАФС-25к. Выявлены возрастные адаптационные изменения микроструктуры печени птиц с учетом критических периодов развития. Установлено положительное влияние кормовой добавки ДАФС-25к на мясную продуктивность гусей, морфологические показатели печени, морфологический и биохимический состав крови.
Теоретическая и практическая значимость. Полученные сведения о морфологии печени гусей китайской серой породы расширяют, дополняют и углубляют отдельные положения теории онтогенеза систем организма и могут быть применены на практике. Установленные морфологические и биохимические изменения в организме гусей свидетельствуют о необходимости применения селеноорганического препарата ДАФС-25к в биогеохимических провинциях с пониженным уровнем селена для предотвращения возникновения метаболических нарушений и повышения продуктивности гусей, начиная с первых дней после вывода. Результаты исследований могут быть использованы в учебном процессе и научно-исследовательской работе на ветеринарных и зоотехнических факультетах, при написании учебных пособий, монографий и справочных руководств.
Внедрение результатов исследования. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе и научно-исследовательской деятельности на кафедрах ФГБОУ ВО Ивановская ГСХА, ФГБОУ ВО Башкирский ГАУ, ФГБОУ ВО Костромская ГСХА, ФГБОУ ВО Омский ГАУ, ФГБОУ ВО Пензенская ГСХА, ФГБОУ ВО Пермская ГСХА, ФГБОУ ВО Саратовский ГАУ, ФГБОУ ВО Санкт-Петербургская ГАВМ, ФГБОУ ВО Ставропольский ГАУ, ФГБОУ ВО Уральский ГАУ, УО Гродненский ГАУ.
Степень достоверности и апробация результатов работы. Степень достоверности полученных результатов подтверждена методами вариационной статистики. Уровень достоверности различий показателей в контрольной и опытной группах вычисляли с помощью критерия t-Стьюдента. Основные положения диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на: 66-й международной научно-практической конференции ФГБОУ ВПО Костромская ГСХА «Актуальные проблемы науки в агропромышленном комплексе» (пос. Караваево, 2015), конференции ФГБОУ ВО Ивановская ГСХА «Ветеринарная медицина и зоотехния: новое слово в науке и практике» (г. Иваново, 2016), международной научно-практической конференции ФГБНУ Владимирский НИИСХ «Системы интенсификации земледелия и биотехнологии как основа инновационной модернизации аграрного производства (г. Суздаль, 2016), Всероссийских конкурсах на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства Российской Федерации в номинации «Ветеринарные науки» (г. Санкт-Петербург, 2015; г. Ставрополь, 2016).
Публикация результатов исследований. По материалам диссертационной работы опубликовано шесть печатных работ, три из которых в ведущих рецензируемых научных журналах и сборниках, рекомендованных ВАК РФ. Результаты собственных исследований использованы при написании методических рекомендаций «Диагностика субклинических гепатозов у птиц» (рекомендации рассмотрены и одобрены службой ветеринарии Ивановской области (протокол № 562-027/05-22 от 27.10.2015 года)).
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Динамика живой массы и массы печени гусей китайской серой породы при
введении в рацион селеноорганического препарата ДАФС-25к.
2. Характеристика макро- и микроструктуры печени гусей китайской серой
породы на фоне применения ДАФС-25к.
3. Влияние препарата ДАФС-25к на морфологические и биохимические
показатели крови, мясную продуктивность гусей китайской серой породы.
Личный вклад соискателя. Диссертационная работа является результатом трехлетних исследований автора. Представленные в диссертации экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены диссертантом самостоятельно. В работах, опубликованных в соавторстве, материалы исследований В.В. Пронина, Л.В. Фроловой, Е.Н. Вареник, Л.В. Клетиковой, М.С. Дюмина в настоящую работу не вошли (в диссертационный совет представлены справки от соавторов об отсутствии заимствования их материалов в нашей диссертации).
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 125 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические предложения и библиографический список, включающий 188 наименований, в том числе 21 иностранное. Работа содержит 12 таблиц, иллюстрирована 45 рисунками (14 диаграмм, 31 макро- и микрофотография).
Морфофункциональная характеристика печени птиц
Промышленное птицеводство, используя интенсивные методы содержания, проявляет жесткие требования к птице, и тем самым наносит ощутимый вред ее организму. В связи с этим В.Ф. Вракин и М.В. Сидорова (1984) отмечают необходимость применения в птицеводстве знаний морфологии и физиологии птиц. Авторы подчеркивают, что понимание принципов структурной организации тела позволяет целенаправленно влиять на морфофункциональные показатели организма, а следовательно, и на продуктивные качества птиц.
По мнению ряда авторов, особое значение среди всех органов и систем организма имеет печень. Так, M. Hochleithner, C. Hochleithner (2005) считают, что печень является жизненно необходимым органом, объясняя это многообразием и важностью выполняемых ею функций. С.Д. Андреева, А.Н. Шестакова и А.Ф. Сапожников (2012) подчеркивают ее центральное положение в гомеостазе, а А.С. Губайдуллин, Н.В. Гребенькова и Е.Н. Сковородин (2016) указывают на ее основное значение в регуляции процессов метаболизма, обмена гормонов, витаминов, ферментов и микроэлементов, нейтрализации эндогенных и экзогенных токсинов.
Печень – самая крупная застенная железа организма. А. Ромер и Т. Парсон (1992) отмечают, что ее строение сильно отличается у разных видов позвоночных. Авторы пишут, что печень у них не имеет устойчивой формы и не нуждается в ней, она подстраивается по форме под окружающие ее внутренние органы. Так, печень птиц, занимающих особое место в животном мире, характеризуется индивидуальными особенностями строения. Б.Ф. Бессарабов, С.А. Алексеева и Л.В. Клетикова (2011) объясняют это длительным эволюционным процессом, в результате которого птица приобрела отличный от млекопитающих экстерьер и строение внутренних органов, особенности в пищеварении и размножении. Одной из таких особенностей является наличие недоразвитой диафрагмы в виде тонкого соединительнотканного образования. В связи с этим, согласно данным А.А. Ткачева, Д.А. Ткачева и Н.С. Ткачевой (2009) в единой грудобрюшной полости располагается множество органов, которые находятся между собой в тесной связи и взаимосвязи, оказывая влияние на анатомическое строене и внешний рисунок друг друга, в том числе и печени.
Анализ отечественной и иностранной литературы показал, что печень птиц является крупным, хорошо развитым органом, который в полости тела удерживается при помощи связок. Согласно данным В.Ф. Вракина, М.В. Сидоровой (1984); В.А. Гудина, В.Ф. Лысова, В.И. Максимова (2010); В.Ф. Лысова, Т.В. Ипполитовой, В.И. Максимова, Н.С.Шевелева (2012) ее масса у взрослых кур составляет 40-60 г, уток – 70-80 г, гусей – 110-120 г, что соответствет 1,7-2,3% живой массы взрослых кур, 2-3% – массы уток и гусей. По мнению большинства авторов, цвет печени птиц зависит от их видовой принадлежности, возраста, физиологического состояния, условий содержания и кормления. Так, Н.Н. Гуртовой (1992) у голубей отмечает темно-красный цвет печени, В.Д. Давлетова (2013) у мускусных уток – бурый или темно-коричневый. О.В. Жилина (2010) и А.С. Копылов (2011) в своих работах указывают, что печень суточных и 5-суточных цыплят кросса «Смена-7» бледная, серовато-желтого цвета, с коричневыми вкраплениями, 10- и 15-суточных – бледно-розового цвета с красными вкраплениями, взрослых цыплят-бройлеров – от красного до буро-красного цвета. А.В. Акулов, В.М. Апатенко, Б.Ф. Бессарабов и др. (1978), Вракин В.Ф., Сидорова М.В. (1984) у кур и индеек отмечают темно-красно-коричневый цвет печени, у гусей – каштановый, у уток – желто-коричневый, у вылупившихся птенцов и у взрослых птиц в период откорма или интенсивной яйценоскости – желтоватый, порой охряный цвет. Hani M. Hamodi et al. (2013) у обыкновенной цесарки отмечают темно-красный цвет печени, у попугая-неразлучника – светло-красный, у сизой чайки – темно-красный.
Имеющиеся сведения в отношении топографии печени птиц весьма вариабельны. Cогласно данным Д.М. Автократова (1928), печень птиц располагается позади сердца, касаясь мышечного желудка и петель кишечника, удерживаясь в своем положении серповидной связкой. На ряду с этим, по мнению автора, печень, находясь в своем положении, прикрепляется особыми связками к желудку и к стенкам воздухоносных мешков. Наличие серповидной связки, при помощи которой печень птиц сохраняет свое положение в полости подтверждают и другие авторы (Климов А.Ф., 1951; Вракин В.Ф., Сидорова М.Ф., 1984; Климов А.Ф., Акаевский А.И., 2003, 2011; Красникова Л.В., 2015). Так, В.Ф. Вракин и М.Ф. Сидорова (1984) пишут, что в полости печень удерживается при помощи связок и недоразвитой диафрагмы. При этом авторы выделяют два вида связок – парная треугольная и непарная серповидная. Первая отходит с боковых краев печени и соединяет орган с боковыми стенками тела, последняя идет от внутренней поверхности грудины, глубоко проникая между долями печени, соединяясь, тем самым, с ее серозной оболочкой. Л.В. Красникова (2015), также отмечает наличие парной треугольной и непарной серповидной связок. Автор пишет, что своей выпуклой поверхностью печень прикрепляется серповидной связкой, которая отходит от перикарда и, проходя по внутренней поверхности грудины, проникает между долями печени. Правая и левая треугольные связки прикрепляют орган к медиальной поверхности последних позвоночных ребер.
Н.Н. Гуртовой (1992), В.Н. Писменская, Е.М. Ленченко и Л.А. Голицына (2007) в своих работах указывают, что печень птиц лежит позади сердца и занимает всю передневентральную часть грудобрюшной полости, что обусловлено достаточно крупными размерами органа. При этом В.Д. Давлетова (2013) отмечает, что печень позади сердца располагается в виде купола. Более точное описание положения органа в полости тела дают В.Ф. Вракин, М.Ф. Сидорова (1984) и Л.В. Красникова (2015). Согласно их данным, печень у птиц располагается в грудобрюшной полости в вентро-каудальном направлении: вентрально она прилегает к грудной кости, дорсо-краниально – к сердцу, легким и железистому желудку, дорсо-каудально – к селезенке, мышечному желудку и петле двенадцатиперстной кишки. В.Ф. Вракин и М.Ф. Сидорова (1984) отмечают, что у кур и индеек печень простирается от третьего межреберья до конца грудной кости, у уток – от второго до девятого ребра, а у гусей – от второго до седьмого межреберья. Л.В. Красникова (2015), в свою очередь, обозначает границы печени курицы со второго по шестой межреберный промежуток, утки – от третьего межреберного промежутка по девятое ребро, гуся – с третьего по седьмой межреберный промежуток.
Согласно данным большинства авторов, печень птиц своей гладкой, выпуклой поверхностью вперед и вниз направлена к брюшной стенке, а вогнутой назад и вверх обращена к желудку и кишечнику. А.В. Акулов, В.М. Апатенко, Б.Ф. Бессарабов и др. (1978); В.Ф. Вракин , М.В. Сидорова (1984), О.В. Жилина (2010), А.С. Копылов (2011) выпуклую сторону печени называют передней или диафрагмальной поверхностью, а вогнутую – задней или висцеральной. Д.А. Ткачев (2007) и Л.В. Красникова (2015), в свою очередь, полагают, что первую поверхность, ввиду отсутствия у птиц диафрагмы, лучше называть париетальной или грудинной. На висцеральной поверхности печени отмечается ряд вдавлений от прилегающих внутренних органов. Так, Д.А. Ткачев (2007) в печени кур кросса «ИЗА-браун» выделяет шесть вдавлений: от сердца, железистого и мышечного желудка, селезенки, желчного пузыря и нисходящей ветви двенадцатиперстной кишки. В свою очередь, О.В. Жилина (2010) и А.С. Копылов (2011) в строении печени цыплят-бройлеров кросса «Смена-7» отмечают лишь четыре вдавления: сердечное, два желудочных и вдавление от желчного пузыря. Л.В. Красникова (2015), изучая строение печени кур кросса «Сибиряк-2», пекинской породы уток и итальянской породы гусей, установила, что на висцеральной поверхности левой половины органа имеется желобоватое и округлое вдавление от прилегающих в этом месте железистого и мышечного желудка, на висцеральной поверхности правой половины – округлое вдавление для каудальной полой вены, углубление для ворот печени и неглубокое овальное отверствие для селезенки. Кроме того, автор, в кранио-медиальной части органа, обозначает глубокое воронкообразное углубление для верхушки сердца.
Заключение к обзору литературы
Работа выполнена на кафедре морфологии, физиологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГБОУ ВО Ивановская ГСХА в период с 2013 по 2016 годы. Объектом для исследования послужили клинически здоровые гуси китайской серой породы, выращиваемые на гусиной ферме ФГБНУ Владимирский НИИСХ, благополучной по инфекционным и инвазионным заболеваниям. Условия содержания и кормление гусей соответствовали требованиям и нормам, представленным в методических рекомендациях по технологическому проектированию птицеводческих предприятий РД-АПК 1.10.05.04-13.
С целью изучения влияния селена на интенсивность роста гусей, развитие и функциональную активность печени в летне-осенний период был проведен научно-производственный опыт. Эксперимент выполнен на 85 птицах от одно- до 120-суточного возраста, разделенных по принципу аналогов на две группы. Каждая насчитывала восемь возрастных периодов по пять голов гусей с интервалом между возрастами 15 суток. В начале эксперимента исследованы пять гусят суточного возраста.
Для определения фактического содержания селена в кормах, используемых в хозяйстве для выращивания гусей, в аккредитованном испытательном центре (Аттестат аккредитации - № РООС RU 0001.21 ПЦ51) Владимирской областной ветеринарной лаборатории был проведен их анализ. Результаты исследования показали дефицит селена в рационе кормления птиц в среднем 0,31±0,02 мг/кг, что составляет 77,5% от физиологической потребности.
Контрольная группа получала основной рацион, принятый в хозяйстве. Гусятам опытной группы ежедневно в комбикорм, путем тщательного многоступенчатого смешивания, вводилась кормовая добавка – селеноорганический препарат ДАФС-25к, в 1 грамме которого содержится 0,24 г селена. Препарат применялся в дозе 1,3 мг/кг к массе корма, что удовлетворяло суточную потребность птиц в данном микроэлементе. Ежедневно проводили клинический осмотр птицы, с пятнадцати суточным интервалом, перед утренним кормлением, из подкрыльцовой вены отбирали кровь, осуществляли взвешивание гусей и убой пяти голов из каждой группы, с последующим извлечением печени. Обескровливание птицы осуществляли по методике А.В. Комарова (1981), анатомическое вскрытие тела проводили согласно технике, предложенной А.В. Жаровым (2000). Печень подвергали препарированию с определением ее топографии, извлеченный орган подвергался визуальной оценке: наличие долей, вырезок, состояние желчного пузыря. Живую массу гусей определяли путем взвешивания на торсионных весах с точностью до 1,0 г. Абсолютный среднесуточный прирост живой массы определяли по формуле: А = (W1 – W0) / t; где А – среднесуточный прирост живой массы (г), W0 – начальная живая масса (г), W1 – живая масса в конце периода (г). Абсолютную массу органа определяли с помощью электронных весов Scout Pro SPU202 (сертификат об утверждении типа средств измерений CN.C.28.010.A №16438/2) с точностью до 0,01 г, относительную массу рассчитывали по формуле Г.Г. Автандилова (1990): mo = mn / M 100, %; где mn и M абсолютные показатели живой массы и массы печени, соответственно. Линейные параметры (длина, ширина и толщина) долей печени определяли при помощи штангенциркуля с ценой деления 1 мм. На основании полученных данных определяли динамику относительного прироста живой массы и массы печени в процентах по формуле Броди (К.Б. Свечин, 1961): где: К – относительный прирост в процентах за определенный отрезок времени, Wt – масса в данном возрасте, W0 – масса начальная.
С целью определения уровня селена в скелетной мускулатуре и печени вырезали кусочки массой не менее 1,0 г: отбор образцов мышечной ткани осуществляли в области большой грудной мышцы, а печеночной – левой доли печени. Исследования проводились в испытательной лаборатории ОГБУ «Костромская областная ветеринарная лаборатория» на атомно-абсорбционном спектрометре «МГА 915-МД» методом атомно-абсорбционной спектрометрии. Для проведения микроскопического исследования вырезали кусочки печени в однотипных местах (с латеральной стороны правой доли печени отступив от заднего края 0,5-1 см, глубина – до 1,5 см), фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина. Кусочки обезвоживали и заливали в парафин. С помощью роторного микротома готовили срезы толщиной 5-8 мкм. Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Исследования на наличие липидов в ткани печени проводили в Центре доклинических исследований ООО МБЦ «Генериум». Срезы толщиной 5-8 мкм готовили на криостате Leica CM1520 с последующим их окрашиванием суданом III и гематоксилином. Микроструктуру печени изучали на бинокулярном микроскопе «Микромед (3 вар. 3-20)». Микрометрию проводили с помощью окуляр-камеры DSM300 и программы ScopePhoto. Учитывая рекомендации К. Ташкэ (1980) и Г.Г. Автандилова и др. (1981), на гистологических препаратах осуществляли измерение большого и малого диаметра гепатоцитов и их ядер, вычисляли объем клеток, ядер и цитоплазмы, ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО), соотношение стромы и паренхимы. Для определения объема гепатоцитов и их ядер использовали формулу К. Ташкэ (1980): V = /6LB2; где: L – большой диаметр клеток и их ядер, B – малый диаметр клеток и их ядер.
Для исследования морфологического состава крови гусей контрольной и опытной групп были использованы методы: 1. Подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов – в камере Горяева с 0,9% раствором натрия хлорида, раствором Тюрка; 2. Определение гемоглобина – по методу Сали; 3. Определение гематокрита – с применением центрифуги «MPW-310»; 4. Цветной показатель рассчитывали по формуле: Биохимические показатели крови (общий белок, альбуминовая фракция, холестерол, глюкоза, общий кальций, неорганический фосфор, общий билирубин, аланинаминотрансфераза и аспартатаминотрансфераза, щелочная фосфатаза) определяли с помощью фотометрического автоматического анализатора ChemWell T (серийный номер 4600-0391, производитель - Awareness Technology Inc., США, год выпуска – 2011, производительность до 100 тест/час).
Исходя из результатов эксперимента, себестоимости и затрат кормов, выхода мясной продукции рассчитывали экономическую эффективность использования селеносодержащей добавки в рационе гусей.
Анатомо-топографическая характеристика и динамика массы печени гусей китайской серой породы от одно- до 120-суточного возраста при использовании ДАФС-25к
В стартовый период постнатального развития гусей длина правой доли печени составляет 26,8±0,4 мм, левой – 23,2±0,9 мм. За весь период исследований данный показатель в контрольной группе увеличивается в 3,73 раза и составляет 100,0±1,4 мм, в опытной – в 4,11 раза и достигает 110,2±2,4 мм. Таким образом, к окончанию исследований разница между группами составляет 10,2 мм, или 9,26% (P0,01). Отметим, что максимальный рост длины наблюдается до 15-суточного возраста: в контрольной группе показатель увеличивается на 50,74% и составляет 54,4 мм, что на 4,8 мм меньше, чем у подопытных гусей (P0,05). К 30-суточному возрасту динамика роста снижается, тем не менее показатель абсолютного прироста остается на высоком уровне и составляет в контрольной группе 23,6 мм, или 30,27%, опытной – 26,0 мм, или 30,52%. Период с 30- до 105-суточного возраста характеризуется низкой интенсивностью роста, за это время длина правой доли печени гусей контрольной группы увеличивается на 9,4 мм, или 10,76%, опытной – на 11,0 мм, или 11,43%. В следующие 15 суток показатель абсолютного прироста вновь возрастает (рис. 10).
Аналогичные изменения наблюдаются в динамике роста длины левой доли печени: активный рост отмечается до 30-суточного возраста с последующим замедлением вплоть до 120-суточного возраста. За все время исследований длина левой доли в контрольной группе увеличивается в 3,03 раза и равна 70,2 мм, в опытной – в 3,31 раза и достигает отметки 76,8 мм. Из этого следует, что к 120-суточному возрасту подопытные гуси, по показателю роста длины левой доли печени, превосходят аналогов из контроля на 6,6 мм, или 8,59% (P0,05).
Анализ данных, представленных в таблицах 3 и 4, показывает, что скорость роста ширины обеих долей печени повторяет закономерность изменения их длины (рис. 11). В суточном возрасте ширина правой доли печени составляет 19,0±0,7 мм, левой – 17,60±0,6 мм. К 30-суточному возрасту показатель в контрольной группе увеличивается на 23,6 мм, или 55,40%, опытной – на 27,8 мм, или 59,40%. Тем самым, разница между группами составляет 4,2 мм, или 15,11%. За 120 суток постнатального развития контрольных гусей показатель правой доли увеличивается в 2,82 раза и составляет 53,6±1,8 мм, подопытных – в 3,21 раза и достигает 61,0±1,5 мм. Таким образом, гуси опытной группы по показателю ширины правой доли печени превосходят аналогов из контроля на 7,4 мм, или 12,13% (P0,05). Ширина левой доли печени контрольных гусей в течение 30 суток после вывода увеличивается на 19,4 мм, или 52,43%, подопытных – на 23,4 мм, или 57,7%. Разница составляет 4,0 мм, или 8,13% (P 0,05). К 120-суточному возрасту ширина левой доли печени в опытной группе увеличивается в 3,40 раза и составляет 59,8±1,8 мм, что на 8,4 мм, или 14,05% (P0,05), выше, чем в контроле.
Толщина правой доли печени гусят суточного возраста составляет 11,4±0,4 мм, левой – 9,6±0,2 мм. С возрастом линейные параметры толщины долей печени претерпевают ряд изменений: максимальный рост отмечается с 1- до 15-суточного возраста, далее происходит волнообразное снижение роста (рис. 12). В первые 15 суток толщина правой доли печени гусей контрольной группы увеличивается на 3,0 мм, или 20,83%, опытной – на 3,4 мм, или 22,97%. Показатель левой доли контрольных гусей возрастает на 2,6 мм, или 21,31%, подопытных – на 3,0 мм, или 23,81%. За все время исследований толщина правой доли печени контрольный гусей увеличивается в 1,96 раза до 22,4±0,6 мм, подопытных – в 2,14 раза и достигает 24,4±0,7 мм. Показатель левой доли в контрольной группе возрастает в 2,06 раза, опытной – в 2,29 раза и соответствуют 19,8±0,7 мм и 22,0±0,6 мм. Толщина долей контрольной и опытной групп во все изучаемые возрастные отрезки не имеет достоверно значимых различий.
Динамика абсолютного прироста толщины долей печени гусей китайской серой породы контрольной и опытной групп. В процессе изучения морфометрических показателей печени установлено, что у контрольных и подопытных гусей всех возрастных групп правая доля имеет большие размеры в сравнении с левой. Это свидетельствует о выраженной асимметрии в анатомическом строении печени гусей китайской серой породы. Динамика роста длины, ширины и толщины долей носит нелинейный характер и повторяет закономерность изменения массы печени. На протяжении исследований линейные параметры обеих долей выше у гусей опытной группе. 3.4. Микроструктура печени гусей китайской серой породы от одно- до 120-суточного возраста на фоне ДАФС-25к
В ходе исследований установлено, что печень гусей китайской серой породы состоит из стромы и паренхимы. Строма, образованная соединительной тканью, развита достаточно слабо и встречается лишь по периферии органа, где формирует тонкую капсулу, а также в области портальных зон. Междольковые соединительнотканные перегородки не выявляются, в связи с чем печень гусей не обладает выраженным дольчатым строением. Паренхима органа представлена гепатоцитами. Они имеют многогранную форму с одним или двумя овальными ядрами. Ядра, как правило, расположены эксцентрично и содержат по 1-4 ядрышка. Рядом расположенные гепатоциты формируют радиально направленные структуры – трабекулы, которые имеют не балочный вид, как у млекопитающих, а клубочковый. Следует отметить, что микроструктура печени гусей китайской серой породы в разные возрастные периоды имеет свои особенности. С помощью гистологических и гистохимических методов исследования определены ее возрастные изменения, а также доказана повышенная чувствительность органа к факторам внешней среды и рациону кормления (табл. 5, 6).
В печени гусей суточного возраста соединительная ткань едва заметна, ее относительный объем в среднем составляет 5,29±0,62%, на долю паренхимы приходится 94,71±0,62%. Сосуды, образующие печеночные триады, а также центральные вены расширены. В просвете центральных вен и ветвей воротной вены отмечается скопление форменных элементов крови (рис. 13). Трабекулярное строение печени нарушено, границы гепатоцитов не различаются, цитоплазма имеет пенистый вид (рис. 14). При окраске Суданом III вакуоли приобретают оранжевое окрашивание, что подтверждает жировую природу этих капель (рис. 15). Данный факт связан с особенностью питания эмбрионов птиц – потребление липидов яичного желтка ведет к развитию физиологической жировой дистрофии печени суточных гусят.
Морфологические и биохимические показатели крови гусей от одно- до 120-суточного возраста при применении ДАФС-25к
Известно, что морфологические и биохимические показатели крови подвержены значительным колебаниям и зависят от климата, времени суток, условий содержания, кормления, индивидуальных особенностей и физиологического состояния организма. Ввиду этого, для изучения влияния селеноорганического препарата ДАФС-25к на функциональную активность печени и состояние организма гусей в целом, проведен морфологический и биохимический анализ крови. Из результатов исследования морфологических показателей крови гусей китайской серой породы, представленных в таблице 7, следует, что в суточном возрасте содержание эритроцитов составляет 2,17±0,081012/л, гемоглобина – 110,74±0,91 г/л, цветной показатель, выражающий уровень насыщенности эритроцитов гемоглобином, равен 1,53±0,06, гематокрит – 36,80±0,12%. К окончанию эксперимента содержание эритроцитов в крови гусей контрольной группы увеличивается на 15,89% и составляет 2,58±0,091012/л, опытной – на 19,63% и достигает 2,70±0,091012/л. Таким образом, преимущество подопытных гусей над аналогами из контроля в 120-суточном возрасте составляет 0,121012/л, или 4,44% (P 0,05). Понижение количества эритроцитов в единице объема крови на 2,43% у контрольных и 1,97% у подопытных гусей в 60-суточном возрасте, вероятно, связано с наступлением критического периода развития, обусловленного ювенальной линькой. Напротив, содержание гемоглобина в этот период повышается, в связи с чем интенсивность тканевого дыхания сохраняется на заданном уровне. В целом, на протяжении всего периода исследований показатель гемоглобина в крови гусей изучаемых групп претерпевает ряд изменений. Так, в крови гусят в первые 30 суток уровень гемоглобина снижается в контрольной группе на 13,69%, в опытной – на 9,73% и составляет 95,58±0,56 г/л и 99,96±0,77 г/л, соответственно. Подобное уменьшение концентрации гемоглобина в крови, обусловлено наступлением критического Р 0,05; Р 0,01 (в сравнении с контрольной группой) периода развития, заключающегося в адаптации гусят к измененным условиям и последующей смене их эмбрионального пуха на первичное перо. Разница между группами в этот период характеризуется высокой степенью достоверности (P0,01) и составляет 4,38 г/л, или 4,38%. К окончанию исследований содержание гемоглобина в крови подопытных гусей увеличивается на 16,60% и составляет 132,78±0,82 г/л, что превышает показатель контрольных гусей на 7,00 г/л, или 5,27% (P0,01). Цветной показатель, обусловленный концентрацией эритроцитов в периферической крови и содержанием гемоглобина, за 120 суток постнатального развития гусей характеризуется рядом изменений. По аналогии с гемоглобином, в первые 30 суток после выведения гусят наблюдается его снижение: в контрольной группе – на 18,67%, в опытной – на 22,22%. К окончанию исследования интенсивность тканевого дыхания возрастает, цветной показатель в контрольной группе увеличивается на 10,88%, в опытной – на 9,59% и составляет 1,47±0,06 и 1,46±0,05, соответственно. Возрастная динамика гематокрита имеет тенденцию к увеличению, что наблюдается в обеих изучаемых группах. К 120-суточному возрасту в контрольной группе данный показатель увеличивается на 6,84% и составляет 39,50±0,16%, в опытной – на 8,23%, достигая 40,10±0,10%. Незначительное его понижение отмечается в 30-суточном возрасте и составляет в контрольной группе 37,00±0,08%, опытной – 37,30±0,12%. Следует отметить, что превосходство опытной группы по показателю гематокрита в отдельные изучаемые возрастные периоды носит достоверный характер (P0,05) и составляет в среднем 1,36%. Таким образом, селеноорганический препарат оказывает стимулирующее влияние на гемопоэз и оксигенацию крови и тканей организма. Содержание лейкоцитов в крови суточных гусят составляет 20,74±0,1710/л. На протяжении всего периода исследований их уровень плавно повышается и не имеет достоверных различий (P 0,05) между группами. К 120-суточному возрасту у контрольных гусей данный показатель увеличивается на 23,89% и достигает 27,25±0,2010/л, подопытных – на 22,93% и составляет 26,91±0,1610/л. Из этого следует, что введение в рацион гусей препарата ДАФС-25к не оказывает токсического влияния на лейкопоэз. Динамика изменения концентрации биохимических показателей крови гусей представлены в таблицах 8, 9 и 10. Из анализа полученных данных следует, что с возрастом эти показатели претерпевают ряд изменений и, подобно морфологической картине крови, не выходят за пределы референтных значений для данного вида птиц центрального региона России (Пономарев В.А. и др., 2014). Так, у суточных гусят содержание глюкозы в сыворотке крови составляет 4,66±0,15 ммоль/л, к 15-суточному возрасту ее уровень значительно возрастает и составляет в контрольной группе 11,32±0,18 ммоль/л, опытной – 11,74±0,16 ммоль/л. Подобное резкое возрастание показателя глюкозы в обеих изучаемых группах, очевидно, связано с критическим периодом в развитии гусей: смена среды обитания и типа питания, интенсивный рост живой массы. Далее, в связи со стабилизацией углеводного обмена, уровень глюкозы несколько снижается и у 120-суточных гусей его концентрация составляет в контроле – 10,20±0,19 ммоль/л, в опыте – 11,03±0,22 ммоль/л. Следует отметить, что во все изучаемые возрастные периоды у гусей опытной группы наблюдается более высокий уровень глюкозы в сыворотке крови относительно контрольных гусей. Данная разница приобретает достоверный характер (P0,05) с 30-суточного возраста птиц и составляет 0,83-0,97 ммоль/л, или 7,52-9,28%.
Концентрация общего белка в сыворотке крови гусят суточного возраста составляет 41,62±0,79 г/л. С возрастом его уровень растет и к окончанию эксперимента в крови гусей опытной группы достигает 47,67±0,82 г/л, что на 4,57 г/л, или 9,59%, больше, чем в контроле (P0,01). Некоторое снижение данного показателя у 75- и 90-суточных гусей обеих изучаемых групп обусловлено наступлением ювенальной линьки. Тенденция увеличения содержания белка в сыворотке крови подопытных гусей, по-видимому, связана с усилением синтетической функции печени под действием селеноорганического препарата. Наряду с повышением концентрации общего белка повышается и альбуминовая фракция, свидетельствующая о резерве аминокислот в организме.