Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы 13
1.1 Корма, используемые в оленеводстве в современных условиях 13
1.2 Клинический статус и показатели крови северных оленей 19
1.3 Морфологическая и гистологическая характеристика печени и селезенки северных оленей 24
1.4 Качественная характеристика и гистологические особенности мяса
.северных оленей 29
1.5 Резюме по обзору литературы 34
2 Собственные исследования 36
2.1 Материал и методы исследований 36
2.1.1 Материал исследований 36
2.1.2 Методы исследований 37
3 Результаты собственных исследований 42
3.1 Клинические и гематологические показатели северных оленей 2,5-2,7 летнего возраста контрольной и опытной группы при применении разных типов кормления 42
3.1.1 Морфогистологическая характеристика печени и селезенки северных оленей 2,5-2,7-летнего возраста контрольной и опытной группы при применении разных типов кормления 47
3.1.2 Дегустационная оценка, химический состав и гистологическая характеристика мяса северных оленей 2,5-2,7-летнего возраста контрольной и опытной группы при применении разных типов кормления .. 80
4 Обсуждение полученных результатов 91
Выводы 107
Практические предложения
- Клинический статус и показатели крови северных оленей
- Материал исследований
- Морфогистологическая характеристика печени и селезенки северных оленей 2,5-2,7-летнего возраста контрольной и опытной группы при применении разных типов кормления
- Дегустационная оценка, химический состав и гистологическая характеристика мяса северных оленей 2,5-2,7-летнего возраста контрольной и опытной группы при применении разных типов кормления
Введение к работе
Актуальность работы. Северное оленеводство – одна из основных отраслей хозяйственной деятельности населения проживающего в условиях Крайнего Севера. С целью получения экологически чистой продукции в хозяйственный оборот вовлекаются растительные ресурсы, которые не используются в качестве корма другими сельскохозяйственными животными (Н.Н Лизунова, 1999; Г.Я. Брызгалов, 2012). Мясо оленей включает в себя целый комплекс биологически активных веществ и является полноценным пищевым белковым продуктом (Е.Д. Алексеев, С.А. Петрова, 2008, 2009; С.В. Колобов, Г.В. Шорникова, 2009; К.А. Лайшев и др., 2008; Е.В. Марцеха, В.Г. Шелепов, Т.В. Александренко, 2009; Е.В. Полянская, Д.Д. Байнашев, И.Л. Полянская, 2010; Г.В. Гринькова, Е.В. Марцеха, В.Г. Шелепов, 2014). В последние годы продукцию оленеводства все больше используют в производстве мясных деликатесов, детского питания и лекарственных препаратов (А.А. Южаков, 2006). Как для отечественного рынка, так и для экспорта в значительных объемах поступает пантовая, кожевенно-меховая и эндокринная продукция оленей (Э.К. Бороздин и др., 1979; А.А. Южаков, 2006; Н.А. Бабин и др., 2006).
В отличие от других сельскохозяйственных животных, северный олень в течение года питается подножным кормом, видовой состав и питательная ценность которого меняется не только по сезонам года, но и по маршрутам кочевок оленьих стад (Р.П. Щелкунова, 2000; С.С. Холод, 2007; А.А. Смирнов, 2009; Т.М. Романенко и др., 2012; Т.Д. Румянцева и др., 2014). Самым неблагоприятным, в кормовом отношении, и длительным (около 8 месяцев) является зимне-весенний период (Ф.М. Подкорытов, 1982). В это время рацион оленя на 80-90% состоит из ягеля и лишь на 10-20% – из подснежной зелени и ветоши (А.А. Алексеев, 2000; Т.Д. Румянцева и др., 2014). При относительно высоком количестве энергии зимне-весенний рацион оленя крайне беден протеином, минеральными веществами и витаминами (А.Д. Мухачев, 1990; Ф.М. Подкорытов, 1995; M. Nieminen, U. Heiskari, 1989; M. Nieminen, A. Risto, 1990; H. Staaland, H. Sletten, 1991). Кроме того, в этот период на 20-30% увеличиваются затраты энергии на добывание корма из-под снега и терморегуляцию организма в условиях низких температур (Ф.М. Подкорытов, 1995; П.И. Васильев, Г.Т. Дягилев, 2010). При этом, ежегодно корма на большей части территорий пастбищ становятся недоступными для оленей (А.Д. Мухачев, 1990; Ф.М. Подкорытов, 1995; Т.Ф. Василенко и др., 2013; K.L. Parker, P.S. Barbora, T.R. Stephenson, 2005).
Перечисленные факторы вызывают усиленный расход и снижение питательных веществ, накопленных в организме оленей в летне-осенний период, происходит снижение живой массы (до 20% и более) и упитанности животных (Ф.М. Подкорытов, 1995; К.А. Лайшев и др., 2013). Непроизводительная убыль из-за неблагоприятных условий зимне-весеннего периода может составлять от 5 до 20% поголовья (А.Д. Мухачев, 1991).
Сравнительный анализ мероприятий, способствующих предотвращению падежа в бескормные периоды, показал, что наиболее эффективным способом является организация кормления оленей кормосмесями, включающими фуражное зерно, продукты рыбного и морского зверобойного промыслов, азотистые и минеральные вещества (Д.И. Сыроватский, 2000; И.И. Кочиш и др., 2008; G. Finstad et al., 2007).
Ф.М. Подкорытов и Н.О. Дьяченко (1980) указывают, что эффективность
применения комбинированных кормов обусловлена, прежде всего тем, что
благодаря подкормке оленей восполняется дефицит протеина и минеральных
веществ в рационе. Это способствует нормальному течению процессов роста,
развития, обмена веществ и физиологических функций в организме животных
(А.Д. Мухачев, 1990; V. Maijala, M. Nieminen, 2001). Кроме того, подкормка
положительно сказывается на поедаемости пастбищных кормов и
переваримости питательных веществ (С.А. Эленшлегер, 2003; Г.Н. Мачахтыров, 2006; Е.Д. Алексеев, С.А. Петрова, 2008; К.А. Лайшев, В.А. Забродин, Т.М. Романенко, 2012).
Степень разработанности проблемы. Анализ работ отечественных и зарубежных авторов, посвященных изучению влияния комбинированных кормов на организм и кроветворные органы северных оленей в зимний период, выявил недостаточную информативность в этой области знаний (П.И. Васильев, Г.Т. Дягилев, 2010; Т.М. Романенко и др., 2012; A. Nilsson, 2003; G. Finstad et al., 2007). До настоящего времени остается ряд нерешенных проблем, касающихся всестороннего и углубленного изучения структуры внутренних органов оленей с использованием современных методов исследования. Все исследования, имеющие подобные разработки, зачастую имеют фрагментарный и противоречивый характер.
В связи с большим научно-практическим интересом, для детального
изучения показателей клинического статуса, крови, печени, селезенки и
мышечной ткани нами выполнены клинические, гематологические,
морфометрические, гистологические, гистохимические и статистические исследования, которые позволили определить влияние пастбищного и пастбищно-концентратного типов кормления на организм, сохранность и продуктивность поголовья животных находящихся в экстремальных условиях Ямала.
Актуальность проблемы, а также недостаточность сведений в доступной
литературе определило тему диссертационной работы и проведенных
исследований, которая вошла самостоятельным разделом комплексной темы
«Структурно-функциональная адаптация, видовая и индивидуальная
изменчивость млекопитающих и птиц в зависимости от породы, возраста, пола,
функционального состояния, условий содержания и экологии (номер
государственной регистрации 01.2.01156733) ФГБОУ ВО «Омский
государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина».
Цель и задачи исследования. Изучить клинические и гематологические показатели, морфогистологическую характеристику печени, селезенки и мышечной ткани северных оленей при применении разных типов кормления.
Для выполнения поставленной цели определены следующие задачи:
– изучить влияние пастбищного и пастбищно-концентратного типов кормления на клинический статус, гематологические и биохимические показатели крови оленей (зимний период);
– определить характер морфогистологических изменений в печени, селезенке и мышечной ткани животных в зимний период при пастбищном и пастбищно-концентратном типе кормления;
– выявить влияние исследуемых кормов на химический состав и гистологическую характеристику мяса.
Научная новизна. Дополнены сведения по клинико-гематологическим и биохимическим показателям крови оленей. Выявлены изменения показателей гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, общего белка и минеральных веществ в зависимости от рациона кормления животных;
Впервые получены комплексные сведения по гистологической и гистохимической характеристике печени, селезенки и мышечной ткани северных оленей при применении разных типов кормления;
Установлено положительное влияние пастбищно-концентратного типа кормления на химический состав мяса северных оленей;
Экспериментально доказана возможность адаптации организма животных к получаемым комбинированным кормам в зимних условиях Ямала.
Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты уточняют, дополняют и позволяют понять механизм развития морфологических изменений на клеточном уровне в печени, селезенке и мышечной ткани у оленей при применении разных типов кормления в зимний период года.
Практическая ценность работы состоит в том, что полученные результаты научно обосновывают применение разных типов кормления в оленеводческой отрасли Крайнего Севера с целью повышения продуктивности, сохранности и получения продукции высокого качества.
Дополнены сведения по клинико-гематологическим показателям у
северных оленей при применении разных типов кормления. В результате
проведения гистологических, гистохимических и морфометрических
исследований получены новые сведения о структурно-функциональной характеристике печени, селезенки и мышечной ткани у северных оленей. Получены новые сведения по пищевой ценности мяса северных оленей при применении разных типов кормления. Результаты исследований могут использоваться при изучении морфологии печени, селезенки и мышечной ткани животных, а также в учебном процессе на ветеринарном, зооинженерном и биологическом факультетах высших учебных заведений.
Методология и методы исследования. При изучении влияния разных типов кормления на организм оленей использован системный принцип анализа
с последующим обобщением полученной информации. Для достижения поставленных целей и задач проведено комплексное исследование с системным анализом результатов по гистологии, гистохимии и морфометрии печени, селезенки и мышечной ткани у исследуемых животных. Объектом исследования были северные олени ненецкой породы. Исследования проведены в хозяйстве ОАО «Салехардагро» и на кафедре диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО Омского ГАУ в 2012-2016 гг.
Для выполнения поставленной цели и задач применили комплексный подход с использованием клинических, гематологических, биохимических, гистологических, гистохимических, морфометрического методов, а также проведено исследование химического состава мяса оленей с последующим статистическим анализом цифрового материала.
Основные положения, выносимые на защиту:
– оценка клинико-гематологических и биохимических показателей крови оленей при пастбищном и пастбищно-концентратном типах кормления в зимних условиях Ямало-Ненецкого автономного округа;
– сравнительная гистологическая и гистохимическая характеристика печени и селезенки животных содержащихся на пастбищном и пастбищно-концентратном типе кормления;
– органолептическая и дегустационная оценка, химический состав, гистологическая, гистохимическая и морфометрическая характеристика мяса оленей при разном типе кормления.
Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность представленных в диссертационной работе результатов подтверждается достаточным количеством экспериментальных животных аналогичных по возрастным характеристикам, содержащихся в стандартных условиях промышленного северного оленеводства, а также комплексом поставленных задач, методов исследования и статистическим анализом полученных данных.
Результаты исследований доложены и обсуждены на VI Всероссийской
научно-практической конференции молодых ученых «Наука молодых –
инновационному развитию АПК» (Уфа, 2013); Международной научно-
практической конференции «Современная наука – агропромышленному
производству» (Тюмень, 2014); Международной научно-практической
конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы повышения
продуктивности животных и конкурентоспособности продукции
животноводства в современных экономических условиях АПК РФ» (Ульяновск, 2015).
Материалы диссертационной работы используются сотрудниками ВГБНУ ВНИИБТЖ при внедрении научных разработок и передового опыта в отрасли северного оленеводства; приняты к внедрению в научный и учебный процесс на кафедрах: анатомии и гистологии ФГБОУ ВО Алтайский ГАУ; терапии и клинической диагностики ФГБОУ ВО «Бурятская ГСХА им. В.Р. Филиппова»; морфологии, физиологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГБОУ ВО
Ивановская ГСХА; анатомии, патологической анатомии и гистологии ФГБОУ ВО «Казанская ГАВМ им. Н.Э Баумана»; анатомии и физиологии ФГБОУ ВО Уральский ГАУ; морфологии и физиологии животных ФГБОУ ВПО «МГУ им. Н.П. Огарева»; анатомии, акушерства и хирургии ФГБОУ ВО Самарская ГСХА; анатомии животных ФГБОУ ВО СПбГАВМ; паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы, анатомии и патологической анатомии ФГБОУ ВО Ставропольский ГАУ; ветеринарной медицины СХИ ФГБОУ ВПО «ХГУ им. Н.Ф. Катанова»; незаразных болезней ИВМ ФГБОУ ВО ЮжноУральский ГАУ; общей и частной зоотехнии ФГБОУ ВО Белгородский ГАУ.
Публикации результатов исследований. По материалам
диссертационной работы опубликовано 15 печатных работ, из которых 7 работ издано в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки России. Статья «Биохимические показатели крови северных оленей при применении различных типов кормления» отмечена дипломом участника международной научно-практической конференции «Современная наука – агропромышленному производству» (Тюмень, 2014).
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 136 страницах компьютерного текста. Состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы. Список литературы включает 260 источников, в том числе 59 работ зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 4 таблицами и 60 рисунками (графики, фотографии).
Клинический статус и показатели крови северных оленей
Температура животных поддерживается на относительно постоянном уровне независимо от температуры окружающей среды (Лысов В.Ф. и соавт., 2012). Термический гомеостаз в организме животных осуществляется благодаря деятельности сложного физиологического механизма терморегуляции (Голиков А.Н. и соавт., 1991; Soppela P., Nieminen M., Timisjrvi J., 1986). Колебания температуры тела в пределах физиологической нормы вызывают следующие факторы: сезон года, рацион кормления, возраст, половой статус животного, время суток (Шварц С.С., 1963; Скопичев В.Г. и соавт., 2004; Лысов В.Ф. и соавт., 2012). Источниками теплопродукции организма северного оленя в зимний период является энергия, связанная с процессом пищеварения, продуктивным обменом, а также мышечной активностью (Жигунов П.С. и соавт., 1961; Иванов К.П., 1972; Михайлов В.В., 2013). Высокие изоляционные свойства меха, слой подкожного жира и совершенная система перераспределения крови обеспечивают стабильность температуры тела при различной активности и изменчивых условиях внешней среды (Друри И.В., Митюшев П.В., 1963; Соколов А.Я., Кушнир А.В., 1986; Овсов А.С., 1990; Михайлов В.В., 2009, 2013; Михайлов, А.В. Пестерева В.В., 2013). А.Я. Соколов и А.В. Кушнир (1992) отмечают, что поддержание баланса температуры в организме оленя в зимний период достигается за счет регуляции внешнего дыхания, увеличения тканевой и внешней теплоизоляции.
Сердце оленя является центральным органом всей системы кровообращения, приводящим в движение кровь (Акаевский А.И., 1939; Жигунов П.С. и соавт., 1961). Частота сердечных сокращений зависит от возраста, пола, физиологического состояния и физической нагрузки, а также от времени года, температуры и влажности окружающего воздуха (Жигунов П.С. и соавт., 1961).
Органы дыхания млекопитающих животных разделяют на дыхательные (воздухоносные) пути и органы газообмена (альвеолы легких), (Скопичев В.Г. и соавт., 2004). Число дыхательных движений северного оленя колеблется и зависит от физической нагрузки, влажности и температуры окружающего воздуха (Жигунов П.С. и соавт., 1961). В результате понижения обмена веществ в организме объем легочной вентиляции северных оленей зимой уменьшается на 35,9%, а количество потребляемого кислорода снижается на 27,5% (Квиткин Ю.П., 1950).
Кровь, тканевая жидкость и лимфа образуют внутреннюю среду организма, характеризующуюся постоянством свойств и компонентов. Они принимают непосредственное участие в процессе обмена веществ и поддерживают постоянство внутренней среды (Лысов В.Ф. и соавт., 2012). Циркулируя по замкнутой системе кровеносных сосудов кровь, выполняет транспортную и защитную роли (Лысов В.Ф. и соавт., 2012; Юдичев Ю.Ф., Дегтярев В.В., Гончаров А.Г., 2013). Участвует в переносе биологически активных веществ, благодаря чему осуществляется гуморальная регуляция функций всех структур организма, а также способствует распределению тепла по организму и поддержанию определенной температуры тела (Друри И.В., Митюшев П.В., 1963; Слоним А.Д., 1971; Голиков А.Н. и соавт., 1991; Скопичев В.Г. и соавт., 2004). Реакция крови сельскохозяйственных животных слабощелочная или кислая (Кочанов Н.Е., 1974; Слоним А.Д., 1971; Зеленевский Н.В., Васильев А.П., Логинова К.Л., 2009; Бессонова Н.М. и соавт., 2010).
В состав форменных элементов крови входят эритроциты, которые транспортируют респираторные газы, аминокислоты, витамины, липиды и гормоны к клеткам и тканям организма (Бобровский А.Я., Лебедева Н.А., Писменская В.Н., 1992; Скопичев В.Г. и соавт., 2004). Количественный и качественный состав клеток красной крови зависит от сезона года, возраста, пола, производственного использования, зон разведения и рациона питания оленей (Афанасьев В.П., 1964; Квиткин Ю.П., 1957; Липунова Е.А., Скоркина М.Ю., 2004; Скопичев В.Г., Шумилов Б.В., 2004; Мачахтыров Г.Н., 2006). По сравнению с другими домашними животными характерной особенностью северных оленей является высокий уровень гемоглобина и эритроцитов (1,5% от массы тела) в течение зимнего периода (Друри И.В., Митюшев П.В., 1963). Данный факт рассматривается, как приспособление, обеспечивающее необходимый уровень жизненных процессов в суровых условиях зимнего содержания (Друри И.В., Митюшев П.В., 1963; Шварц С.С., 1963; Монгалев Н.П., 1983; Корякина Л.П., Максимов В.И., Мачахтыров Г.Н., 2008).
Лейкоциты играют важнейшую роль в защитных и восстановительных процессах организма (Базанова Н.У. и соавт., 1967; Голиков А.Н. и соавт., 1991; Кондрахин И.П. и соавт., 2004). Общее количество лейкоцитов в крови северных оленей изменяется под влиянием ряда факторов: сезона года, пола, возраста, функционального состояния организма (Квиткин Ю.П., 1957; Афанасьев В.П., 1964; Скопичев В.Г. и соавт., 2004; Бажибина Е.Б. и соавт., 2005).
При исследовании морфологических показателей крови домашних северных оленей Якутии Г.Н. Мачахтыров (2006) установил, что количество лейкоцитов крови оленей в зимний период, при содержании которых применялась подкормка было выше на 1,7%, по сравнению с показателями, где подкормка животных не производилась, что связано с адаптивной реакцией и усилением иммунитета организма животных. Из всех факторов внешней среды наиболее сильное воздействие на процесс кроветворения и гематологические показатели животных оказывает полноценность кормления (Жуков В.М. и соавт., 2010; Ps A.R. et al., 2001; Skkinen H. et al., 2005). С кормом должно поступать достаточно органических, минеральных и биологически активных веществ в соответствие с потребностями животных (Луницын В.Г., Санкевич М.Н., Кузнецов Д.В., 2011). Колебание показателей крови и снижение белка у северных оленей в разные сезоны года является следствием неполноценного питания в зимний период (Квиткин Ю.П., 1957; Жигунов П.С. и соавт., 1961; DelGiudice G.D. et al., 1992; Nieminen M., Timisjrvi J., 1983). В.П. Афанасьев (1964) указывает, что сезонные изменения морфологической и биохимической картины крови северных оленей имеют алиментарную этиологию. Низкий уровень гемоглобина (10,22 г%), эритроцитов (6,80 млн/мм3), лейкоцитов (5,27 тыс/мм3) и белка крови оленей (5,75%) в зимний период обусловлен скудностью рациона данного периода (Афанасьев В.П., 1964). По данным Ю.П. Квиткина (1957) показатели морфологического и биохимического состава крови, уровень газового и энергетического метаболизма северных оленей получавших в зимний период вдоволь лишайники, листья березы, хорошее сено, пшеничные отруби и поваренную соль был выше зимой, чем летом. По утверждению исследователя изменения картины крови соответствуют понижению содержания протеина, кальция, фосфора и каротина в поедаемых кормах.
Г.Н. Мачахтыров (2006) указывает, что показатели красной крови оленей таежной зоны, при проведении подкормки животным в зимний период года были выше показателей животных, где подкормка не проводилась: эритроцитов на 18,3%, гемоглобина на 23,3%. В ходе исследований установлено, что количественные и качественные показатели гематологических показателей северных оленей изменяются в зависимости от сезонов года, зон разведения и связанных с ними рационов кормления. Н.М. Бессонова, С.Н. Зыкович и Н.С. Петрусева (2013) отметили, увеличение в пределах физиологической нормы содержания эритроцитов и гемоглобина в крови пантовых оленей получавших дополнительную кормовую добавку. Дача кормовой добавки способствовала повышению интенсивности обменных процессов, улучшению поедаемости кормов и нормализации биохимических показателей крови животных (Луницын В.Г., Санкевич М.Н., Кузнецов Д.В., 2011; Бессонова Н.М., Зыкович С.Н., Петрусева Н.С., 2013).
Материал исследований
В период проведения экспериментального опыта контроль за состоянием здоровья животных осуществлялся с помощью следующих методов: - общее исследование животных: проведение клинического осмотра, с измерением температуры тела, подсчета числа дыхательных движений и частоты пульса с определением общего состояния здоровья. Живую массу оленей определяли с помощью взвешивания на напольных весах марки «РП-100Ш13» с применением деревянной платформы; - гематологические и биохимические исследования крови: определение гемоглобина, количества эритроцитов и лейкоцитов проведено с использованием гематологического анализатора «Animal Blood Counter Veterinary». Определение общего белка, кальция, фосфора, магния и калия выполнено на автоматическом анализаторе «Cobas Mira Plus». При проведении клинических исследований использовали утвержденные Департаментом ветеринарии МСХ РФ методы и методики исследования. От убитых оленей 2,5 и 2,7-летнего возраста взят материал (кусочки печени, селезенки и мышечной ткани). Фиксировали материал в 4%-ном растворе нейтрального формальдегида. Заливкой в парафин проводили уплотнение материала. Для изготовления срезов (5-7 мкм) использовали санный микротом МС-2. Структуру печени, селезенки, мышечной ткани изучали с помощью окраски срезов гематоксилином и эозином. Морфологические изменения в органах выявляли с помощью полихромного метода окраски для выявления общей гистоструктуры (Акимченков Н.А., 1973; Бодрова Л.Ф., Хонин Г.А., Шестаков В.А., 2009). По Ван-Гизон, Вейгерту и Маллори изучали волокнистую соединительную ткань, эластические и коллагеновые волокна (Меркулов Г.А., 1956, 1961; Хонин Г.А., Барашкова С.А., Семченко В.В., 2004; Коржевский Д.Э., Гиляров А.В., 2010).
Для гистохимического исследования взятый материал от оленей в 2,5 и 2,7-летнем возрасте (кусочки печени, селезенки и мышечной ткани) фиксировали в жидкости Карнуа, уплотняли заливкой в парафин. Срезы (толщина 5-7 мкм) окрашивали по Микель-Кальво с целью выявления основных и кислых белков (Кононский А.И., 1975). Проводили ШИК-реакцию по Шабадашу для дифференциации углеводов. Фиксацию агранулированных форм гликогена перед проводкой срезов через реактивы выполнили путем целлоидинирования по схеме Шабадаша. Для контроля по методу Г.И. Роскина использовали препараты обработанные амилазой слюны. Сульфатированные и карбоксилированные гликозаминогликаны выявляли по Стидмену и Шубичу (Луппа Х., 1980).
Нуклеиновые кислоты выявляли по Эйнарсону. Учитывали особенности цвета ядер ДНК, ядрышек и цитоплазмы РНК. С целью дифференциации нуклеиновых кислот проводили окраску по Браше. В качестве контроля были использованы препараты, подвергнутые ферментному гидролизу в растворах рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы (Меркулов Г.А., 1956, 1961; Хонин Г.А., Барашкова С.А., Семченко В.В., 2004). Срезы толщиной 15-20 мкм готовили на санном микротоме с замораживающим столиком ТОС-2 для обнаружения нейтрального жира и липопротеидов. Окраску срезов проводили суданом III и 1V по Лилли с докраской гематоксилином (Лилли Р., 1969; Меркулов Г.А., 1969; Семченко В.В., Барашкова С.А., Артемьев В.Н., 2003).
Измерение площади клеток печени, ядер гепатоцитов, белой пульпы селезенки и толщины мышечных волокон у животных проводили с помощью окуляр-микрометра МОВ 1-15 , используя морфометрический метод исследования (Вибе К.Г., 1963; Ташке К., 1980; Автандилов Г.Г., 1990).
Отбор проб и органолептическое исследование мяса оленей проводили в соответствии с требованиями ГОСТ 7269-79 «Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести». Дегустационную оценку мяса определяли по методике рекомендованной В.М. Позняковским (2001, 2005). Химический состав мышечной ткани изучали согласно действующих стандартов по определению: массовой доли белка – методом Къельдаля (ГОСТ 25011-81 «Мясо и мясные продукты. Методы определения белка»), массовой доли жира – методом с использованием бинарных смесей (ГОСТ 23042-86 «Мясо и мясные продукты. Методы определения жира»). Определение влаги проводили высушиванием в сушильном шкафу при 105±2 0C до постоянной массы (ГОСТ 9793-74), а золы – методом сухого озоления проб мяса в муфельной печи при 500-550 0C (Забалуева Ю.Ю., Павлова С.Н., Лескова С.Ю., 2005).
С помощью гистологического метода изучали структуру мышечной ткани (ГОСТ 19496-2013 «Мясо и мясные продукты. Метод гистологического исследования»; Хвыля С.И., Донскова Л.А., Менухов Н.В., 2006; Бодрова Л.Ф. и соавт., 2007). Для проведения исследования от убитых оленей в возрасте 2,5-2,7 лет взят материал (кусочки мышечной ткани), который фиксировали в 4%-ном растворе нейтрального формальдегида и уплотняли заливкой в парафин. Срезы толщиной 5-7 мкм готовили на санном микротоме МС-2 (Бодрова Л.Ф. и соавт., 2007).
Морфогистологическая характеристика печени и селезенки северных оленей 2,5-2,7-летнего возраста контрольной и опытной группы при применении разных типов кормления
Печеночные балки определяются с помощью синусоидных капилляров, которые заполнены кровью. Более крупные кровеносные сосуды имеют разную степень наполнения (Рисунок 5). У центральных вен печеночные балки располагаются радиально. Цитоплазма гепатоцитов в пределах печеночной балки может окрашиваться либо интенсивно, либо неравномерно, либо равномерно (Рисунок 7). При интенсивном окрашивании цитоплазмы гепатоцитов зернистости не определяется, но при равномерной окраске выявляется базофильная зернистость. У животных контрольной группы (2,7-летний возраст) ширина гепатоцитов 50-42 мкм, высота – 40-55 мкм. ЯЦО 0,64±0,25 мкм (Рисунок 6).
Ядра в гепатоцитах круглые и структура в них различима. Цитоплазма базофильная. В составе печеночных триад хорошо определяется вена, артерия и желчный проток. В них четко выявляется апикальная поверхность эпителия протоков. В печени северных оленей контрольной группы (2,7-летний возраст) обнаруживается особенность, которая проявляется тем, что вблизи междольковой вены обнаружен один участок, на котором границы гепатоцитов плохо различимы (Рисунок 5). Цитоплазма имеет мелкую ацидофильную зернистость. Ядра определяются с трудом или в форме фона. Балочная структура в этом участке нарушена (Рисунок 5, 8).
В капсуле и серозной оболочке печени имеется волокнистая соединительная ткань. Нечеткие волокна соединительной ткани выявляются в желчных протоках и стенке кровеносных сосудов (Рисунок 9). Локализация волокон в них рыхлая.
В стенке центральных вен обнаруживаются тонкие интенсивно окрашенные коллагеновые волокна. Вокруг печеночных балок имеются коллагеновые волокна с менее интенсивной окраской. Эластические волокна выявляются в капсуле и серозной оболочке печени, под эндотелием центральных и некрупных междольковых вен (Рисунок 10). Архитектоника эластических волокон различная
Локализация в печени оленей 2,7-летнего возраста контрольной группы волокнистой соединительной ткани. Окраска по Ван-Гизон (х 100). 1 – капсула; 2 – междольковая вена; 3 – серозная оболочка. и имеет вид длинных, коротких и зигзагообразных линий. В артериях и венах с большим диаметром эластические волокна окрашиваются менее интенсивно и выявляются в виде рыхлой ячеистой сети.
Карбоксилированные гликозаминогликаны в виде фона обнаруживаются в цитоплазме и на поверхности эпителиоцитов желчных протоков. При большом увеличении в гепатоцитах определяется крупная зернистость, которая интенсивно окрашена фуксином. В цитоплазме гепатоцитов ШИК-позитивные вещества создают однородный тон. В артериях и венах, в которых имеется кровь, содержатся кислые белки. В участках печени северных оленей контрольной группы, где выявлена белковая дистрофия, имеются и основные, и кислые белки, но основные белки преобладают.
В ядрах гепатоцитов количество ДНК различное и поэтому на фоне ДНК кариоплазмы отчетливо определяются два-три ядрышка РНК. Количество РНК в гепатоцитах одной дольки разное и фон окраски мало интенсивный. Максимальное количество РНК имеется в цитоплазме эритроцитов, которые обнаруживаются в просвете артерий. В ядрах эритроцитов, которые имеются в просвете вен, выявляется лишь ДНК. Нейтральный жир в паренхиме печени у оленей 2,5-летнего возраста (начало опыта) и животных контрольной группы (2,7-летний возраст) не обнаруживается.
Заключаем, что у оленей контрольной группы (2,7-летний возраст) структура печени соответствует здоровому органу, однако у некоторых животных контрольной группы вблизи междольковой вены были выявлены участки с белковой дистрофией.
У животных опытной группы (2,7-летний возраст) капсула печени ровная и к ней плотно прилегает серозная оболочка. Фон окраски слабо базофильный. От капсулы вглубь органа отходят соединительнотканные перегородки, лежащие на границе соседних долек. Щелевидные лимфатические сосуды и кровеносные капилляры выявляются между паренхимой и капсулой. В дольках гепатоциты распределяются в виде пластинок. Ядра округлые и определяются ядрышки. Рисунок 10 – Структура печени оленей 2,7-летнего возраста контрольной группы. Локализация эластических волокон. Окраска по Вейгерту (х 200). 1 – серозная оболочка и капсула.
Структура печени оленей 2,7-летнего возраста опытной группы. Окраска гематоксилином и эозином (х 200). 1 – междольковая вена; 2 – артерия. Ширина клеток 47-59 мкм, высота 44-62 мкм, ЯЦО 0,68±1,53 мкм (Рисунок 6). Цитоплазма гепатоцитов имеет базофильную зернистость и интенсивность окраски в дольках разная. Кариоплазма разной окраски. Синусоидные капилляры располагаются между печеночными пластинками и выстланы плоскими эндотелиоцитами. Эти капилляры узкие и лучше различаются в центральной части долек. Границы долек определяются. Радиальная локализация печеночных балок выявляется вблизи центральных вен. Лимфоидные клетки в паренхиме органа обнаруживаются не часто. Просвет междольковых вен больше в отличие от центральных вен и имеет округлый контур. Междольковые вены характеризуются большей толщиной стенки, чем центральные вены, но всегда стенка тонкая (Рисунок 11). Центральные вены имеют округлую либо овальную форму сечения. Степень наполнения вен различная. Встречаются артерии разного диаметра. У них стенка всегда толстая. Просвет артерий округлый. Выявляются артерии с малой степенью кровенаполнения, встречаются артерии и запустевшие (Рисунок 12). Стенка желчного протока толстая и выстлана эпителием кубической формы, цитоплазма в них базофильна, ядра, кариоплазма и кариолемма достаточно хорошо определяются (Рисунок 12). Структурных изменений в органе не обнаружено (Рисунок 13).
В капсуле печени, а также в стенке вен большого диаметра и артериях выявляется волокнистая соединительная ткань. Коллагеновые тонкие волокна имеются в капсуле органа, адвентиции вен, артерий и по периферии печеночных балок (Рисунок 14). Стенка вен содержит коллагеновых волокон меньше, чем стенка артерий. В стенке артерий этих волокон много и они имеют штриховой рисунок. Коллагеновые волокна выявляются в виде волнистого рисунка под эпителием желчных протоков. Здесь они тонкие, зигзагообразные, но четкие. Эластические волокна обнаруживаются в стенке артерий, вен и в капсуле печени (Рисунок 15). Обычно эти волокна короткие или длинные и с пониженной четкостью.
Дегустационная оценка, химический состав и гистологическая характеристика мяса северных оленей 2,5-2,7-летнего возраста контрольной и опытной группы при применении разных типов кормления
В условиях становления и стабилизации российской экономики ключевое значение приобретают вопросы качества продукции отечественного производства. Мясо и мясопродукты являются одной из важнейших составляющих в питании человека. Оленина относится к калорийному продукту, который широко использует местное население Ямала. Мясо северных оленей представляет собой совокупность мышечной, жировой и соединительной ткани, с костями или без них. Процентное соотношение тканей в мясе зависит, прежде всего, от породы, пола, возраста, упитанности, условий содержания, а также и от кормления. Мышечная ткань темно-красного цвета и имеет специфический запах. Следует подчеркнуть, что мясо и мясопродукты преимущественно белковый продукт питания, а также является одним из источников животных жиров в питании человека.
При органолептическом исследовании мяса животных контрольной и опытной группы (2,7-летний возраст) отмечаем, что цвет его темно-красный, приятного запаха.
Дегустационная оценка вареного мяса оленей контрольной и опытной группы (2,7-летний возраст) выявила, что оно приятного печеночного запаха и вкуса, сочное, консистенция нежная и существенных различий не имело. Общая оценка качества мяса – очень хорошее.
Пищевая ценность оленины определяется химическим составом мяса и значением отдельных его компонентов в питании человека. Полученные результаты указывают на более высокие показатели в мясе северных оленей опытной группы белка и жира (Таблица 4). Резюмируем, что белки составляют основную часть органических веществ мышечной ткани и главную пищевую ценность ее.
Мышечная ткань у животных контрольной группы представляет собой многоядерную тканевую структуру (Рисунок 49). Структурной единицей является мышечное волокно веретенообразной формы. Мышечные волокна соединяются в мышечные пучки (Рисунок 50). Форма мышечных пучков разная. В мышечных волокнах определяются ядра и встречается поперечная и продольная исчерченность (Рисунок 51). Четкость исчерченности в разных волокнах разная. Внутри мышечных пучков мелкие кровеносные сосуды имеют косое направление. Иногда они направлены вдоль мышечных волокон.
В малых количествах в периваскулярных участках артерий и вен имеется волокнистая соединительная ткань. Коллагеновые волокна обнаруживаются между пучками гладких миоцитов. Иногда они имеются вдоль пучков и в периваскулярной зоне артерий и вен. Интенсивность окраски, локализация и форма коллагеновых волокон разная. По периферии мышечных волокон, в стенке артерий, вен и периваскулярных участках обнаруживаются эластические волокна.
В саркоплазме мышечных волокон имеются в большей степени основные белки (Рисунок 52). Нуклеиновые кислоты в максимальном количестве обнаруживаются в ядрах миоцитов, на что указывает интенсивность окраски (Рисунок 53). В очень малом количестве вблизи артерий и вен выявляется в виде оранжевых включений нейтральный жир.
Морфометрические исследования выявили, что толщина мышечных волокон колебалась от 40 до 90 мкм, при этом средние показатели составили 67,14±4,21 мкм (Рисунок 54).
У оленей опытной группы саркоплазма гладких миоцитов мышечной ткани окрашивается однородно и имеет четко выраженный поперечный и продольный рисунок. Полоски рыхлой соединительной ткани окружающие волокна более выражены, ядра миоцитов погружены в саркоплазму, некоторые ядра находятся по периферии волокна и их ядра лежат глубже. Ядра миоцитов имеют разную
Структура мышечной ткани оленей 2,7-летнего возраста контрольной группы. Локализация нуклеиновых кислот. Окраска по Эйнарсону (х 200). длину (Рисунок 55). Форма мышечных пучков неодинаковая (Рисунок 56). Окраска кариоплазмы ядер миоцитов различная, но они всегда прозрачные. Часто встречаются артерии и вены.
Волокнистой соединительной ткани между мышечными волокнами встречается мало. В форме толстых волокон рыхлая соединительная ткань выявляется между пучками и кровеносными сосудами. По периферии мышечных симпластов имеются коллагеновые волокна в форме штрихов разной толщины (Рисунок 57). В пучках мышечной ткани выявляются толстые коллагеновые волокна. Максимальное количество имеется в стенке кровеносных сосудов и периваскулярных участках. В фасции эти волокна тонкие и спиралевидно изогнутые. Эластические волокна выявляются в основном в фасции.
Общий фон окраски синий с пурпурным оттенком имеет саркоплазма мышечных волокон, что указывает на наличие и основных, и кислых белков (Рисунок 58). ШИК-позитивных веществ в мышечной ткани немного и выявляются они в виде фона (Рисунок 59). В ядрах миоцитов обнаружены нуклеиновые кислоты. Ядра окрашены интенсивно (Рисунок 60). Вблизи кровеносных сосудов в малом количестве имеется нейтральный жир. Однако его количество в опытной группе больше, чем в контроле. Морфометрические исследования показали, что толщина мышечных волокон колебалась от 42 до 100 мкм, однако средние показатели были 70,29±3,87 мкм, (Р 0,05), (Рисунок 54).