Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы
2.1. Строение семенников и особенности протекания в них процесса сперматогенеза 7
2.2. Строение яичников и особенности протекания в них процесса фолликулогенеза 16
2.3. Влияние тяжелых металлов (в том числе и свинца) на репродуктивную систему человека и животных 24
3. Материалы и методы исследования 32
3.1. Общая характеристика экспериментального материала 33
3.2. Характеристика весовых параметров половых желез экспериментальных животных 34
3.3. Морфометрическое исследование семенников самцов белых крыс... 35
3.4. Цитологическая оценка состояния и репродуктивная активность семенников самцов белых крыс 36
3.5. Исследование репродуктивности семенников самцов белых крыс ... 38
3.6. Морфометрическое исследование яичников самок белых крыс 39
3.7. Определение стадий эстрального цикла самок крыс методом влагалищных мазков 40
3.8. Методы статистической обработки результатов исследования 41
4. Результаты собственных исследований 42
4.1. Морфофункциональные изменения семенников самцов белых крыс в норме и при воздействии ацетата свинца 42
4.1.1. Морфологические изменения семенников самцов белых крыс в норме и при воздействии ацетата свинца 42
4.1.2. Функциональные изменения семенников самцов белых крыс в норме и при воздействии ацетата свинца 59
4.2. Морфофункциальные изменения яичников самок белых крыс в норме и при воздействии ацетата свинца 70
4.2.1. Морфологические изменения яичников самок белых крыс в норме и при воздействии ацетата свинца 70
4.2.2. Функциональные изменения яичников самок белых крыс в норме и при воздействии ацетата свинца 88
Обсуждение результатов исследований 96
Заключение 112
Практические предложения (рекомендации) 114
Список использованной литературы 115
- Строение яичников и особенности протекания в них процесса фолликулогенеза
- Влияние тяжелых металлов (в том числе и свинца) на репродуктивную систему человека и животных
- Исследование репродуктивности семенников самцов белых крыс
- Функциональные изменения семенников самцов белых крыс в норме и при воздействии ацетата свинца
Строение яичников и особенности протекания в них процесса фолликулогенеза
Снаружи большая часть яичка покрыта серозной оболочкой - брюшиной, под которой располагается плотная соединительнотканная оболочка, получившая название белочной, которую назвали так из-за большого количества в ней белой фиброзной ткани. Внутренний слой ее богат кровеносными сосудами - это сосудистая оболочка (Артифексов С. Б., Артюхин А. А., 2007; Бойчук Н. В., Исламов Р. Р., Улумбеков Э. Г., Челы-шев Ю. А., 1995). Капсула заднего края яичка резко утолщена и на некоторое расстояние распространяется вглубь железы с образованием прослоек, которые не проходят через всю толщу железы. Поскольку эти неполные перегородки располагаются главным образом в центральной части железы, то их вместе с утолщенным участком капсулы, из которого они исходят, называют средостением яичка (Russell L. D., Ettlin R. A., Hikim А. P. and Clegg E. D., 1990; Самусев P. П., Зубарева E. В., 2011).
Средостение каждого яичка пронизано протоками, выстланными эпителием. Эти протоки образуют сеть яичка. Все семенные канальцы яичка открываются в полость протоков сети яичка (Бойчук Н. В., Исламов Р. Р., Улумбеков Э. Г., Челышев Ю. А, 1995).
От средостения внутрь семенника отходят перегородки, разделяющие семенник на дольки конической формы. Каждая долька содержит от одного до четырех извитых семенных канальцев (Кузнецова Т. Е, Манеева О. А., Рыж-ковская Е. Л., 2006; Малишкін І. Н., 2000).
В семенниках различают два структурно-функциональных компонента: извитые семенные канальцы и интерстициальные клетки Лейдига, располо женные в рыхлой соединительной ткани между семенными канальцами. Генеративная функция (сперматогенез) осуществляется в семенных канальцах (Рузен-Ранге Э., 1980), а эндокринная - клетками Лейдига (гландулоцитами) (Багацька Н. В., 2004; Потапов С. Н., Горголь Н. П., Андреев А. В., 2011).
Семенник состоит из множества извитых семенных канальцев, в которых после наступления половой зрелости происходит созревание сперматозоидов. Причем у многих животных этот процесс имеет сезонный характер, а у других видов, в том числе и человека, происходит постоянно (Нишлаг Э., БереГ. М., 2005).
Извитые семенные канальцы открываются в прямые, по которым сперматозоиды попадают в сеть семенника.
Сеть семенника - это система анастомозирующих тонкостенных трубочек, продолжающаяся в выносящие канальцы придатка семенника, в котором накапливаются сперматозоиды (Хэм А., Кормак Д., 1983).
Стенку семенного канальца образует собственная оболочка, состоящая из базального слоя, миоидного слоя и волокнистого слоя. Внутреннюю выстилку канальца образует сперматогенный эпителий, расположенный на ба-зальной мембране.
Базальный слой (внутренний волокнистый слой), расположенный между двумя базальными мембранами (сперматогенного эпителия и миоидных клеток), состоит из сети коллагеновых волокон.
Непосредственно кнаружи от базальной мембраны расположен футляр из рыхлой соединительной ткани, в состав которого входит особый непрерывный слой миоидных клеток (Мирский В. Е., Михайличенко В. В., Заезжал-кинВ. В, 2003; Пальцев М. А., Аничков Н. М., 2001). У крыс и мышей эти клетки хорошо развиты и обладают сократимостью, благодаря чему семенным канальцам присущи небольшие ритмические сокращения (Харченко Т. Н., 1988). Миоидные клетки имеют форму чешуек. У человека они мало напоминают гладкомышечные клетки. Миоидные клетки содержат актиновые микро-филаменты (Мирский В. Е., Михайличенко В. В., Заезжалкин В. В, 2003). Извитые семенные канальцы выстланы сперматогенным эпителием, который содержит клетки двух типов - это гаметы с их предшественниками на различных стадиях дифференцировки (сперматогонии, сперматоциты первого порядка, сперматоциты второго порядка, сперматиды, сперматозоиды) и поддерживающие клетки Сертоли (сустентоциты) (Топка Э. Г, Гор-пинченко И. И., Малышкин И. Н., 1993).
Клетки Сертоли располагаются на базальной мембране, имеют пирамидальную форму и достигают своей вершиной просвета извитого семенного канальца. Они делят сперматогенный эпителий на базальное и адлюми-нальное пространства. В базальном пространстве находятся только сперматогонии. В адлюминальном пространстве располагаются сперматоциты первого и второго порядков, сперматиды и сперматозоиды (Улумбеков Э. Г., Челышев Ю. А., 2001; Павлюченкова С. М., 2014).
Клетки Сертоли обеспечивают развивающиеся гаметы питательными веществами (трофическая функция), фагоцитируют остатки цитоплазмы формирующихся сперматозоидов и дегенерирующие половые клетки, секре-тируют жидкость для транспорта сперматозоидов в семенных канальцах (Држевецкая И. А., 1983).
Клетки сперматогенного эпителия в семеннике половозрелых млекопитающих включены в процесс сперматогенеза, который представляет собой длинную цепь цитологических преобразований, приводящих к формированию из относительно малодифференцированной сперматогонии высокоспециализированной клетки - сперматозоида (Vazquez-Memije М. Е., Capin R., Tolosa A, El-Hafidi М., 2008).
Сперматогенез протекает в четыре периода: период размножения; период роста, в течение которого происходит заметное увеличение размеров половых клеток; период созревания, включающий мейоз; период формирования, завершающийся появлением сперматозоидов (Соколов И. И., 1966; Молнар Е., 1969). Пространство, на котором развертываются все изменения клеток в стенке канальцев, можно подразделить на две обширные области: базальную, прилежащую к мембране, которая ограничивает каналец, и адлюминальную, т. е. расположенную ближе к просвету канальца (Евдокимов В. В., Селиванов Т. О., 2006).
Начальной фазой сперматогенеза является размножение сперматого-ний, занимающих наиболее периферическое (базальное) положение в спер-матогенном эпителии. Согласно современным представлениям, среди сперматогонии можно выделить два типа клеток: 1) стволовые сперматогонии, которые подразделяются на две субпопуляции: долгоживущие, резервные стволовые клетки и быстро обновляющиеся полустволовые клетки, которые делятся один раз в течение цикла сперма-тогенного эпителия; 2) дифференцирующиеся сперматогонии (Волошин Н. А., Тополен-ко Т. А., 2009). Сперматиды представляют собой небольшие округлые клетки со сравнительно крупными ядрами. Скапливаясь около верхушек поддерживающих клеток, сперматиды частично погружаются в их цитоплазму.
Сперматиды больше не делятся, но путем сложной перестройки. Вблизи просвета канальца они подвергаются метаморфозу, превращаясь в сперматозоиды. В ходе такого превращения они отделяются друг от друга и становятся «свободноживущими» клетками (Молнар Е., 1969; Плехова Е. И., Хиж-няк О. О., Левчук Л. П., 2000; Топка Э. Г., Горпинченко И. И., Малыш-кин И. Н., 1993).
После того, как завершено превращение сперматиды в сперматозоид, неиспользованный при таком метаморфозе избыток цитоплазмы отбрасывается клеткой в виде остаточного тельца, которое фагоцитируется клеткой Сертоли (Дроздов А. Л., Иванков В. Н., 2000).
Влияние тяжелых металлов (в том числе и свинца) на репродуктивную систему человека и животных
При введении морским свинкам-самкам водного раствора ацетата свинца в дозе 50 мг/кг ежедневно в течение 25 суток были обнаружены структурные изменения яичников (дегенерационная атрезия примордиаль-ных и растущих фолликулов, образование крупных, функционально-активных желтых тел или редких в стадии регрессии, образование кист) (Вылегжанина Т. А., Кузнецова Т. Е., Рыжковская Е. Л., 2008). Свинец в концентрации 0,1 мг/м вызывал изменение структуры яичников у самок и снижение жизнеспособности их потомства, а в концентрации 1,0 мг/м -уменьшение количества сперматогоний и увеличение числа патологических сперматозоидов у самцов (Хмелевская Г.В., 1978).
Экспериментальные и клинические исследования свидетельствуют о том, что высокое содержание свинца в организме матери приводит к задержке психомоторного развития плода, к различным морфофункциональ-ным нарушениям его развития (Мудрый И.В., Петрова Р.П., 1993; ЧэнФ. Ю., ЦунЛ. Ю., 1996; Чухловина М. А., 1997; LuJ., Petroianu G., Widjaja В., Rufer R., 1997; Novak D. A., Beveridge M. J., Malandro M., Seo J., 1996; Richter J., Hajek Z., Pfeifer I., Subrt P., 1997).
В начале XX века не было прямых экспериментальных доказательств нарушения эмбрионального развития при свинцовой интоксикации. С. Weller (1915) проводившая наблюдение на морских свинках, сделала заключение, что свинец обладает специфическим неблагоприятным действием на эмбриональную ткань. Однако результаты последующих экспериментов в одних случаях подтверждали нарушение воспроизводства, в других такие нарушения не обнаруживались. Эта разноречивость отмечается и в отношении влияния свинца на развитие плода человека (Динерман А. А., 1980). Результаты экспериментальных исследований многих авторов указывают на нарушение процессов репродукции при воздействии свинца. В этих экспериментах свинец вводили как до спаривания, так и на протяжении беременности. При такой постановке опытов нарушение эмбрионального развития является результатом гонадотоксического, так и эмбриоток-сического действия (Харченко Т. Н., Андреева С. К., 1987).
Изучение эффекта свинцовой интоксикации (300 мг/л) самок крыс в течение всей беременности и периода лактации на развитие репродуктивных органов потомства показало угнетение функций семенников, придатков, семенных пузырьков и сдвиги биохимических процессов в этих органах (Rondia D., 1999; Yang Ying, Dong Sheng-zhang, Lin Zhong-ning, 2003). Высказано предположение, что ядра сперматозоидов крыс, подвергшихся воздействию свинца, содержат такое количество этого металла, которое достаточно для свинцовой интоксикации зиготы с последующим нарушением в ней обменных процессов (Stowe Н. О. etal., 1973). В эксперименте при введении свинца в организм неполовозрелых самок морских свинок и обезьян резус отмечено замедление постнатального развития яичников, нарушение люте-альной функции, падение уровня прогестерона в крови, ускорение процессов атрезии фолликулов, нарушение полового цикла (Miller R. К., Genbacev О., Turner М. A. et al., 2005). При пероральном введении свинца мышам и крысам в период беременности, а также лактации в гонадах плодов обоего пола отмечены дегенеративные изменения первичных половых клеток, снижение в них количества сперматогенных элементов (Нарбутова Т. Е., 2011).
Влияние тяжелых металлов, и в частности соединений свинца, приводит к нарушению различных систем органов репродуктивной системы. Наиболее часто проявляемые последствия воздействия тяжелых металлов на органы репродукции - это дегенерационная атрезия примордиальных и растущих фолликулов, образование крупных, функционально-активных желтых тел или редких в стадии регрессии, образование кистоподобных структур (Колосова И. П., 2013). Эмбриотоксическое действие оказывало однократное введение 50 мг/кг нитрата свинца, что выразилось в снижении плодовитости и числа живых эмбрионов в помете и увеличении числа резорбции, общей и пост-имплантационной смертности. В наибольшей степени эмбриотоксические нарушения были выражены при однократном введении на 4 день беременности. Накопление свинца в целом эмбрионе при ежедневном воздействии на протяжении 20 суток беременности 0,005 мг/кг сопровождается нарушением процессов биоэнергетики. В гомогенате плаценты достоверно увеличивается потребление фруктозодифосфата без значимого изменения прироста молочной кислоты. Окислительное фосфорилирование в митохондриях эмбриональной печени достоверно не изменяется (Динерман А. А., 1980).
Сходный тип строения плаценты у человека и белых крыс, у которых выявлено эмбриотоксическое действие свинца и его прохождение через плаценту, свидетельствуют о потенциальной опасности действия свинца для эмбрионального развития человека. Были исследованы плаценты женщин, имевших производственный или бытовой контакт со свинцом, и плаценты крыс, получавших энтерально уксуснокислый свинец в дозе 75 мг/кг/сутки. Действие на организм животных солей свинца приводило к развитию плацентарной недостаточности, наиболее интенсивно проявляющейся в лабиринтной зоне плаценты, и сопровождалось приближением кровеносных сосудов лабиринта к краю трофобластической балки, истончением цито- и синцитиотрофобласта, вакуолизацией и просветлением ци-топлазматического матрикса, деструкцией митохондрий, образованием крупных полостей и цитоплазме компонентов трофобласта на месте скоплений гранул гликогена, уменьшением межклеточных контактов между цито- и синцитиотрофобластическими элементами (Шубина О. С, Грызлова Л. В., 2004; Шубина О. С, Грызлова Л. В., Киреева Ю. В., 2007; Тельцов Л. П., Шубина О. С, Киреева Ю. В. и соавт., 2010). Изучение состояния новорожденных показало, что у женщин с вредными факторами производства, достоверно выше процент рождения детей с признаками недоношенности, гипотрофии внутриутробного инфицирования, детей в состоянии асфиксии. У женщин же отмечались такие осложнения беременности, как гестоз II половины беременности, преждевременные роды на фоне длительной угрозы прерывания беременности, а также анемия беременных и сочетанные виды патологии (Патутин В. Н., Костючек Д. Ф., 2003; Ба-ряеваО. Е.,2005).
Исследование репродуктивности семенников самцов белых крыс
В ходе проведенных исследований было выявлено, что после 7 суток воздействия ацетата свинца происходит увеличение массы семенников самцов белых крыс, по сравнению с контролем, с 0,588±0,014 г. до 0,798±0,012 г., т. е. на 35,71% (Р 0,05). Причем масса левого семенника несколько превышает массу правого. Увеличение массы семенных желез самцов белых крыс свидетельствует, возможно, о их отеке.
Установлено, что после 7 суток воздействия ацетата свинца весовой индекс семенника, по сравнению с контролем, увеличивается с 0,235±0,006% до 0,319±0,005%, т. е. на 26,33% (Р 0,05).
Морфометрические исследования показали, что в опытной группе животных, по сравнению с контролем, происходит уменьшение толщины белочной оболочки семенника с 35,23±3,42 до 20,35±4,73, т. е. на 42,24% (Р 0,05).
В извитых семенных канальцах происходят следующие изменения: 1) уменьшается количество извитых семенных канальцев в одном поле зрения на 25,14% (Р 0,05) (табл. 1); 2) увеличивается площадь поперечного сечения извитых семенных канальцев и их просвета соответственно на 13,72% (Р 0,05) и 58,01% (Р 0,05) (табл. 1); 3) уменьшается площадь сперматогенного эпителия и его толщина соответственно на 13,76% (Р 0,05) и 21,19% (Р 0,05) (табл. 1); 4) уменьшается количество миоидных клеток в стенке извитого семенного канальца на 35,80% (Р 0,001), при этом увеличивается площадь миоид ных клеток на 44,26% (Р 0,05), площадь ядра - на 22,45% (Р 0,05), диаметр ядра - на 20,44% (Р 0,05), площадь цитоплазмы - на 44,89% (Р 0,05) (табл. 1); 5) уменьшается количество клеток Сертоли в сперматогенном эпителии извитого семенного канальца на 22,48% (Р 0,05) (табл. 1); 6) уменьшается площадь и ширина базальной части клеток Сертоли соответственно на 19,81% (Р 0,05) и 7,39%, увеличивается высота их апикальной части на 10,54% (табл. 1); 7) уменьшается площадь и диаметр ядер клеток Сертоли соответственно на 36,35% (Р 0,05) и 33,41% (Р 0,05) (табл. 1); 8) уменьшается площадь цитоплазмы клеток Сертоли соответственно на 21,11% (Р 0,05) (табл. 1); 9) уменьшается количество стволовых сперматогониев в сперматогенном эпителии извитого семенного канальца, их площадь и диаметр, площадь и диаметр их ядер, а также площадь цитоплазмы соответственно на 12,30% (Р 0,05), 3,56%, 1,73%%, 9,00%, 2,49%, 3,20% (табл. 1); 10) уменьшается количество дифференцирующихся сперматогониев в сперматогенном эпителии извитого семенного канальца, их площадь и диаметр, площадь и диаметр их ядер, а также площадь цитоплазмы соответственно на 6,31%, 29,77% (Р 0,05), 16,36% (Р 0,05), 33,33% (Р 0,05), 18,11% (Р 0,05), 28,87% (Р 0,05) (табл. 1); 11) уменьшается количество сперматоцитов, их площадь и диаметр, площадь и диаметр их ядер, а также площадь цитоплазмы соответственно на 8,43%, 19,83% (Р 0,05), 10,50%, 12,24% (Р 0,05), 6,31% и 20,53% (Р 0,05) (табл. 1); 12) уменьшается количество сперматид в сперматогенном эпителии извитого семенного канальца, их площадь и диаметр, площадь и диаметр их ядер, а также площадь цитоплазмы соответственно на 17,36% (Р 0,05), 12,27% (Р 0,05), 6,36%, 28,67% (Р 0,05), 15,54% (Р 0,05) и 10,68% (табл. 1); 13) увеличивается длина жгутика поздних сперматид на 20,06% (Р 0,05), при одновременном уменьшении его толщины на 12,30% (Р 0,05) (табл. 1); 14) уменьшается количество сперматозоидов в просвете извитого семенного канальца, площадь головки сперматозоида и его ядра, а также ширина шейки соответственно на 26,70% (Р 0,05), 12,41% (Р 0,05), 25,97% (Р 0,05), 10,11%. В тоже время обнаружено увеличение длины его хвостовой части на 8,05% (табл. 1).
Наружный осмотр семенников крыс-самцов показал, что они розовато-белого цвета, мягко-эластической консистенции, эллиптической формы.
При малом увеличении микроскопа заметна розовая полоса, идущая по краю препарата - это белочная оболочка, состоящая из плотной неоформленной соединительной ткани. Основную массу семенника образуют извитые семенные канальцы, разрезанные поперек или косо (тангенциально), округлой или эллипсовидной формы. Извитые семенные канальцы отделены друг от друга тонкой оболочкой интерстициальной соединительной ткани. Стенка канальца представлена сперматогенным эпителием на разных стадиях развития. Участки интерстиция между извитыми семенными канальцами расположены равномерно. Они преимущественно треугольной формы. В центре извитого канальца имеется просвет, куда выходят образованные спермин. Даже при слабом увеличении заметно, что в разных канальцах идут разные стадии сперматогенеза (рис. 1).
На базальной мембране изолировано от других клеток лежат стволовые сперматогонии. Они имеют округлую форму (рис. 2). Таблица 1 - Морфометрические показатели извитых семенных канальцев белых крыс.
Количество извитых семенных канальцев в одном поле зрения 34,68±0,94 25,96±0,69 2 Площадь поперечного сечения извитого семенного канальца, мкм2 45469,74±1746,76 52701,15±2703,18 3 Площадь просвета канальца, мкм2 8878,17±832,41 21146,15±1091,75 4 Площадь сперматогенного эпителия, мкм2 36591,57±1243,36 31554,72±2526,31 5 Толщина сперматогенного эпителия, мкм 36,62±2,34 28,86±1,77 6 Количество миоидных клеток в стенке извитого семенного канальца 19,44±1,42 12,48±1,49 7 Площадь миоидной клетки, мкм2 10,63±2,55 19,07±4,49 8 Площадь ядра миоидной клетки, мкм2 1,14±0,30 1,47±0,29 9 Диаметр ядра миоидной клетки, мкм 1,09±0,08 1,37±0,12 10 Площадь цитоплазмы миоидной клетки, мкм2 9,70±0,98 17,60±1,25 11 Количество клеток Сертоли в сперматогенном эпителии извитого семенного канальца 23,84±3,16 18,48±2,52 12 Площадь клетки Сертоли, мкм 189,73±18,59 152,15±13,96 13 Ширина базальной части клетки Сертоли, мкм 13,39±1,04 12,40±1,38
Функциональные изменения семенников самцов белых крыс в норме и при воздействии ацетата свинца
Из-за широкого распространения свинцового загрязнения, практически все население подвергается риску его воздействия, независимо от социально-экономического статуса, расовой и этнической принадлежности или места проживания (сельская местность, город или пригород). Хроническое свинцовое отравление создает угрозу, прежде всего, здоровью и умственному развитию подрастающего поколения и тем самым - будущему всего человечества (Печкурова Е. А., Новикова О. Н., 1997; Сетко Н. П., Захарова Е. А., 2008; Столяров И. Д., Огурцов Р. П., Вотинцева М. В. и соавт., 1998; Трахтен-бергИ. М., 1997). Повышенное внимание к данной проблеме обусловлено тем, что из профессиональной плоскости она перешла в экопатологическую, из-за глобального распространения свинца (Колосова И. И., 2013).
Свинец способен поражать жизненно важные органы и системы организма, в том числе и репродуктивную систему (Измеров Н. Ф., 2000; Зубарев И. В., 2012; Ласьков Д. С, 2014).
Экзогенное воздействие свинца на репродуктивную систему организма является очень важным и актуальным аспектом в прогнозировании и предупреждении возможного его влияния на течение беременности и развитие плода (Волощенко О. И., Мудрый И. В., 1991; Савельева Г. М. и соавт., 1991; Saxena D. К. et al., 1994; Gupta G. S., Singh J., Gupta A., 1997; Schneider H., 1997; Tony D. S., Tony R. J., 1997; ReichrtovaE., DorociakF., PalkovicovaL., 1998).
В связи с этим представляется весьма актуальным изучение влияния ацетата свинца на мужские и женские половые железы.
Объектом нашего исследования были взяты семенники и яичники половозрелых белых крыс с экспериментальным свинцовым поражением организма.
Установлено, что при воздействии ацетата свинца вес семенников самцов белых крыс увеличивается на 35,71% (Р 0,05), а вес яичников самок белых крыс увеличивается на 7,77%, по сравнению с контролем. После 7 суток воздействия ацетата свинца весовой индекс семенника, по сравнению с контролем, увеличивается на 26,33% (Р 0,05), а весовой индекс яичника - на 6,12%.
Таким образом, при воздействии ацетата свинца на организм экспериментальных животных наблюдаются признаки нарушения весовых параметров семенников и яичников, что может свидетельствовать о нарушении строения и функций данных органов.
Гистологическое изучение сперматогенного пласта семенных канальцев показал, что в норме стволовые сперматогонии лежат на базальной мембране изолировано от других клеток. Они имеют округлую форму.
Дифференцирующиеся (зрелые) сперматогонии с темным оптически плотным ядром и узким ободком цитоплазмы. Между ними видны клетки Сертоли, имеющие крупные бледно-розовые ядра. Основания клеток Сер-то ли лежат на базальной мембране между сперматогониями. Апикальная часть клетки обращена к просвету семенного канальца и имеет треугольную или пирамидальную форму. Ближе к центру канальца располагаются сперма-тоциты. Это крупные клетки с большим ядром и широким ободком цитоплазмы. Они имеют округлую или овальную форму.
Самый внутренний слой извитого канальца составляют сперматиды, мелкие со светлым ядром клетки, лежащие в несколько рядов. Ранние сперматиды округлой формы со сферическим ядром, находятся в средних слоях сперматогенного эпителия. Поздние сперматиды лежат в слое, прилегающем к просвету канальца, имеют вытянутую форму. У некоторых поздних спер-матид обнаруживается жгутик. В некоторых канальцах видны сформированные сперматозоиды. Их темные вытянутые головки направлены на периферию канальца в сторону клеток Сертоли, а хвосты свисают в просвет канальца. Сперматозоиды в просвете извитого семенного канальца располагаются группами в количестве 6-8 по всему контуру просвета.
В ходе проведенных исследований отмечено, что сперматогонии, по сравнению с контролем, имеют меньший размер. Стволовые сперматогонии имеют неправильную форму. Сперматоциты приобретают овальную, реже сферическую форму. Ранние и поздние сперматиды практически не различаются между собой. Они преимущественно овальной формы. Их ядра смещаются в центр клетки.
После 7 суток воздействия ацетата свинца, по сравнению с контролем, отмечено беспорядочное расположение сперматозоидов в просвете канальца. Уменьшаются размеры и форма головки сперматозоида. На гистопрепаратах наблюдаются обрывы хвостов и агглютинация сперматозоидов. Были обнаружены извитые семенные канальцы, в просвете которых отсутствовали сперматозоиды.
При оценке структурных особенностей семенников экспериментальных животных нами использовались следующие морфометрические показатели: количество извитых семенных канальцев в одном поле зрения, площадь поперечного сечения извитого семенного канальца, его просвета, а также площадь сперматогенного эпителия и его площадь. По мнению ряда авторов, данные показатели служат достоверным критерием, отражающим структурно-функциональное состояние мужских гонад (Creasy D. М., 2001; Orth J. М., 1993; Сизоненко М. Л., Брюхин Г. В., 2012). Установлено, что площадь извитых семенных канальцев у самцов крыс при свинцовой интоксикации увеличивается на 13,72% (Р 0,05), по сравнению с контролем, при одновременном уменьшении площади сперматогеннного эпителия и его толщины соответственно на 13,76% (Р 0,05) и 21,19% (Р 0,05).
Изменения размеров извитых семенных канальцев являются важными количественными показателями, указывающими на изменения процесса сперматогенеза (Саяпина И. Ю., 2013). Увеличение размеров извитых семенных канальцев является распространенным изменением со стороны мужской репродуктивной системы при различных интоксикациях (Волков В. П., 2014), особенно ярко развивается при гиперандрогинемии (Васильева С. Г. и соавт., 2011), а также асептических воспалениях (Шепитько В. И., Стецук Е. В., 2007). Подобные изменения обычно сопровождаются истончением сперматогенного пласта и уменьшением количества клеток в его составе (Васильева С. Г. и со-авт., 2011; Creasy D. М., 2001), что мы и наблюдали в наших исследованиях.
Для анализа цитологического профиля сперматогенеза нами производился подсчёт суммарного количества сперматогенных клеток в поперечных срезах извитых семенных канальцев, а также подсчёт отдельных видов сперматогенных клеток: сперматогоний различной степени зрелости, а также их суммарного количества, первичных и вторичных сперматоцитов, ранних и поздних сперматид, сперматозоидов.
Изучение содержания сперматогенных клеток в семенных извитых канальцах позволило установить, что у экспериментальных животных в извитых семенных канальцах наблюдается увеличение процентного содержания сперма-тогониальных клеток в сперматогенном эпителии к общему количеству половых клеток на 4,45%, по сравнению с контролем, что может свидетельствовать о усиленной пролиферацией гоноцитов (Васильева С. Е., 2011).
Подсчёт сперматогоний вели, начиная с 60-го дня постнатального онтогенеза, поскольку, согласно современным представлениям о процессах сперматогенеза, у крыс в период новорожденности практически все сперм а-тогенные клетки являются гоноцитамии (Zoghi С. et al., 2012) образование первых сперматогоний датируется 3-6 сутками постнатального онтогенеза (De Rooij D. G., 1998; Morales A. et al, 2007; Saito K., O Donnell L., McLachlanR. I., Robertson D. M., 2000; Zoghi С et al, 2012), хотя, согласно отдельным сообщениям, даже у 15-суточных животных часть клеток, морфологически идентичных сперматогониям, в действительности являются гоно-цитами (Zoghi С. et al, 2012).