Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы
2.1. Строение и функции кожи собаки 9
2.2. Заболевания кожи у собак 16
2.3. Дерматиты, вызываемые клещами рода Demodex 22
2.4. Аллергический блошиный дерматит 33
2.5. Заключение по обзору литературы 41
3. Основное содержание работы 46
3.1. Материалы и методы исследования 46
3.1.1. Сбор данных анамнеза 46
3.1.2. Клиническое обследование 47
3.1.3. Исследование фекалий 48
3.1.4. Биопсия печени 48
3.1.5. Гематологические исследования крови 49
3.1.6. Изучение фагоцитарной активности нейтрофилов и оценка эффективности фагоцитоза 50
3.1.7. Изучение морфологии эритроцитов 52
3.1.8. Изучение бактериальной микрофлоры и ее чувствительности к антибактериальным препаратам 52
3.1.9. Изучение особенностей патологического процесса при дерматитах паразитарной патологии по принципу аналогов 53
4. Результаты собственных исследований 55
4.1. Результаты клинического осмотра 55
4.2. Результаты обследования собак на наличие возбудителя демодекоза 59
4.3. Результаты морфологических исследований печени при демодекозе 67
4.4. Результаты гематологических и биохимических исследований щенков в возрасте 6-8 месяцев при демодекозе 71
4.5. Изучение бактериоскопических показателей кожи при аллергическом блошином дерматите у собак 78
4.6. Результаты биохимического исследования сыворотки крови собак 83
4.7. Результаты изучения неспецифической резистентности собак при дерматитах паразитарной этиологии 89
4.8. Результаты изучения морфологии эритроцитов при дерматитах паразитарной этиологии 5. Обсуждение результатов исследований 104
6. Заключение 115
7. Рекомендации, перспективы дальнейшей разработки темы 119
8. Список использованной литературы 121
- Заболевания кожи у собак
- Исследование фекалий
- Результаты обследования собак на наличие возбудителя демодекоза
- Результаты биохимического исследования сыворотки крови собак
Введение к работе
Актуальность темы. Болезни кожи – одна из самых распространенных
патологий собак. По данным М.Ю. Лопатиной (2004), С.И. Лебедько (2004),
Н.И. Левятовой (2008), D.N. Carlotti (2003) и других, более 25% случаев
обращений владельцев собак к ветеринарным специалистам связано с
заболеванием кожи, а ее состояние во многих случаях является показателем
общего здоровья животного. Как свидетельствуют данные литературы, в
этиологии болезней кожи собак дерматиты паразитарного происхождения
регистрируют довольно часто, что объясняется их значительным удельным
весом в структуре кожных болезней, относительно невысокой эффективностью лечебных мероприятий, экологией крупных городов и рядом других факторов (Василевич Ф.И., 2005; Розовенко М.В., 2006).
В крупных городах России при обследовании собак с поражениями кожи, демодекоз выявляли в 34,3-67,4% случаев (Шустрова М.В., 2001; Ф.И. Василевич, 2005; Ларионов С.В., 2009). Городские популяции собак подвергаются интенсивному воздействию "повреждающих" факторов, среди которых обилие стрессов, постоянно ухудшающаяся экологическая обстановка, кормление сухими и другими концентрированными кормами, бесконтрольное разведение и т.д., что способствует возникновению и распространению кожных болезней животных (Медведева М.А., 2003). Необходимо также отметить, что в связи с увеличением в последнее время темпов и объема разведения различных пород собак, зачастую абсолютно бесконтрольного, сопряженного с ввозом из-за рубежа производителей сомнительного качества, а также просто представителей новых пород собак, ситуация с дерматитами паразитарного происхождения резко обострилась.
Паразитирование блох на теле — вторая самая частая причина кожных болезней у собак. Питаясь кровью животного, блоха выделяет в дерму слюну, которая препятствует свертыванию крови. Эта слюна содержит не менее 15 биологически активных веществ, которые могут оказывать раздражающее или аллергизирующее действие. До 80% всех аллергических дерматитов у собак, как установлено, связано с блохами (Paterson S., 1998).
По мнению Н.В. Яровой (2010), изучение распространения болезней кожи
паразитарной этиологии в современных условиях мегаполиса,
морфофункциональных изменений организма у собак и разработка методов
комплексной терапии считается актуальной задачей для ветеринарной науки и
практики. Отмечено также, что использование различных химических
соединений без надлежащего контроля и токсикологических исследований, что часто происходит при возникновении кожного зуда, может иметь непоправимые последствия, в том числе индукции опухолей, возникновение эмбриотоксических, тератогенных и мутагенных эффектов у животных.
Патогенез дерматитов паразитарной этиологии у собак не полностью ясен,
поэтому диагностика кожных болезней представляет определенные трудности в
связи со значительным сходством внешних проявлений, отсутствием
комплексного подхода и диагностических алгоритмов. Сбор анамнеза жизни и болезни, а также простое физикальное обследование животного, хотя и остаются необходимым и важным моментом диагностики, однако для диагностики
дерматитов явно недостаточны. Поэтому исследования, направленные на комплексное изучение патогенеза дерматитов паразитарной этиологии и особенности их проявления в зависимости от возбудителя являются актуальными.
Степень разработанности. Дерматитам животных посвящено большое количество работ М.Ю.Лопатиной (2004), С.И.Лебедько (2004), Н.И.Левятовой (2008), D.N.Carlotti (2003), много и продуктивно работали над вопросами демодекоза М.В.Шустрова (2001); Ф.И.Василевич (2005); С.В.Ларионов (2009), но до сих пор данные по дифференциальной диагностике дерматитов паразитарной этиологии являются разобщенными и неоднозначными.
Целью наших исследований являлось изучение морфофункциональных изменений в организме собак при болезнях кожи паразитарной этиологии и разработка алгоритма дифференциальной диагностики демодекоза и блошиного аллергического дерматита.
Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:
– определить частоту выявления кожных болезней паразитарной этиологии и их место в структуре патологии у собак;
– изучить клинические признаки при демодекозе и аллергическом
блошином дерматите в зависимости от интенсивности инвазии и тяжести клинической картины у собак;
– изучить гематологические и биохимические изменения крови у собак при демодекозе и аллергическом блошином дерматите в зависимости от интенсивности инвазии и тяжести клинической картины;
– изучить факторы неспецифической резистентности при демодекозе и аллергическом блошином дерматите;
– изучить состав микрофлоры кожи собак при демодекозе, блошиной инвазии и определить ее чувствительность к антибиотикам;
– изучить морфофункциональные изменения в организме собак при дерматитах паразитарного генеза.
Научная новизна.
Установлены морфологические изменения в организме собак при
дерматитах паразитарной этиологии. Доказано, что данные дерматиты
сопровождаются изменениями гематологических и биохимических показателей
крови, иммунного статуса, изменениями морфологических характеристик в
органах и тканях животных, при этом степень изменений находится в прямой
зависимости от интенсивности инвазии клещами рода Demodex и тяжести
патологического процесса при аллергическом блошином дерматите.
Установлено, что дерматиты паразитарной этиологии вызывают изменения в морфологическом составе крови, сопровождаясь пойкилоцитозом различной степени, что может иметь диагностическое значение для определения степени тяжести патологического процесса и врачебного прогноза исхода болезни.
Данные по морфофункциональным характеристикам клеток крови являются научным обоснованием для контроля над течением патогенеза болезней и эффективностью терапии.
Предложен алгоритм дифференциальной диагностики и прогнозирования как тяжести течения демодекоза и аллергического блошиного дерматита, так и прогноза лечения при дерматитах паразитарной этиологии.
Методология и методы исследования. Методологической основой исследований явились научные положения отечественных и зарубежных авторов. В ходе научных исследований разработана динамичная схема применения методов для изучения закономерностей развития паразитарных систем, основанная на особенностях биологии паразитических клещей и насекомых. Способы исследования были подобраны на основе разных принципов изучения паразитов. В ходе проведения научно-исследовательской работы использовались принципы научного поиска, сравнение, обобщение и анализ полученных результатов. Применялись методы клинического, паразитологического и гистологического обследования собак, страдающих дерматитами.
Практическая значимость работы. Результаты гематологических и иммунологических исследований используются при диагностике и лечении собак с кожной патологией в ветеринарных клиниках «ИмПульс» и «Беланта».
Результаты исследований используются в учебном процессе при чтении
лекций и проведения практических занятий по курсу паразитологии и
инвазионных болезней животных для студентов Института ветеринарно-санитарной экспертизы, биологической и пищевой безопасности ФГБОУ ВПО «МГУПП».
Апробация работы. Результаты научных исследований прошли
апробацию на международных научно-практических конференциях, на
Международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (М., МГУПБ, 2010 г.), научной конференции «Разработка инновационных инструментальных методов исследования внутренних болезней животных (М., МГУПП, 2015), на расширенных заседаниях кафедры «Ветеринарная медицина» (М., МГУПП, 2013; 2014).
Публикации. По материалам научных исследований опубликовано 8 работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертация включает следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, итоги выполненного исследования, рекомендации и перспективы дальнейшей разработки темы и список литературы. Работа содержит 13 таблиц и 26 рисунков. Список литературы включает в себя 130 источников, из них 103 отечественных и 27 зарубежных авторов.
Автореферат отражает основные положения диссертации.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Клинические, гематологические, биохимические и иммунологические показатели собак при дерматитах паразитарной этиологии в зависимости от интенсивности инвазии и тяжести патологического процесса.
-
Морфологические изменения эритроцитов в зависимости от тяжести патологического процесса при дерматитах паразитарной этиологии у собак.
-
Алгоритм дифференциальной диагностики дерматитов паразитарной этиологии у собак.
Заболевания кожи у собак
Последние десятилетия характеризовались бурным накоплением данных о новом классе иммунорегуляторных молекул — цитокинов. Они включают в себя огромное количество различных веществ, в том числе ин-терлейкинов, которые выполняют коммуникативную функцию между им-муноцитами и оказывают различное регуляторное влияние как в рамках иммунной системы, так и в других органах и тканях. В настоящее время в коже обнаружено большинство известных интерлейкинов: их функции связаны с кожей, а нарушение продукции лежит в основе патогенеза ряда кожных заболеваний, в частности псориаза и атопического дерматита (Боровик Т. Э., Макарова С. Г., Дарчия С. Н. и др., 2010; Streilein J. W., 1989).
Кожа играет роль озонового экрана и препятствует неблагоприятному воздействию ультрафиолетовых лучей. Кожа позволяет, наряду с другими механизмами, приспосабливаться к колебаниям внешних температур почти в 100. Именно в коже, играющей роль барьера с внешним миром, расположено наибольшее количество датчиков - нервных окончаний, дающих информацию об окружающей среде.
Ко всему прочему, кожа животного представляет собой резервуар электролитов, воды, витаминов, жира, углеводов, белков и других веществ, а витамин D она вырабатывает под действием солнечных лучей.
В большинстве случаев причиной дерматологической патологии, по мнению А.Н. Валеевой (2000) является то или иное системное заболевание организма. Гиповитаминозы, неадекватное питание, дисбаланс гормонов, сердечная, печеночная и почечная недостаточности - вот далеко не полный перечень соматических заболеваний, влияющих на состояние кожи и сопровождающихся развитием весьма схожих дерматологических нарушений (Карпецкая Н.Л., 1999; Патерсон С., 2006).
Установлено, что приблизительно четверть всего потребляемого организмом животного белка утилизируется кожей и используется для образования новых волос и эпидермиса. Белок секретируется также кожными железами и участвует в ремоделировании дермы (White. P. D., 1991; Scott D.W.; Mueller. R. S., 2000). Для образования новых клеток и обеспечения секреторных процессов коже необходимо снабжение липидами, зависящее, в свою очередь, от обмена жиров в печени. Для поддержания обмена в эпителии и выработки секрета необходимы в качестве кофакторов витамины и минеральные вещества. То есть, состояние кожи и шерсти отражает состояние и функционирование желудочно-кишечного тракта, общий уровень обмена веществ, а также внутренние процессы в самой коже (Lloyd D.H., Marsh R.F., 1999).
В силу своего наружного расположения и способности к проницаемости, наличия в ней сосудов и нервов кожа ограничивает организм от внешней среды, создавая условия для образования внутренней среды.
В состав системы кожных покровов входят: кожа, волосы, сальные, потовые, церуминозные, молочные и некоторые другие железы, являющиеся производными либо сальных, либо потовых желез, либо образованные их комбинацией (Адаскевич В.П., 2006; Старченков С.В., 1999). Каждая из перечисленных частей кожного покрова имеет ярко выраженные органные черты строения: состоит из нескольких (более одного) типов тканей, имеет собственные кровеносную и лимфатическую циркуляторные системы, специфические особенности роста и регенерации. Каждый орган системы кожных покровов имеет свои уникальные черты строения и специфические функции. И вместе с тем, как и любой другой системе организма, в системе кожных покровов наблюдается четкое согласование работы всех со ставляющих ее органов, их взаимодействие как в условиях нормы, так и при патологии и адаптивных перестройках (Бергхоф П.К., 1999).
Кожа собаки состоит из нескольких слоев: надкожицы, собственно кожи и подкожной ткани. В собственно коже находятся луковицы волос, жировые железы, капиллярные сосуды и нервные окончания. Подкожный слой содержит жировую ткань. Из надкожицы вырастают пучки волос, имеющих общее влагалище и состоящих из 3 толстых и длинных остевых волос и 6-12 коротких, образующих подшерсток.
Собственно кожа состоит из двух частей: эпидермиса, представленного плоским многослойным ороговевающим эпителием, который в своих нижних слоях все время дает новые слои клеток, и дермы, являющейся соединительнотканной основой кожи. Эпидермис образует поверхностный слой кожи и в связи с этим подвержен воздействию разнообразных химических, физических и биологических факторов. Он не является механически прочным, однако, обеспечивает свою целостность, благодаря постоянному продуцированию защитных компонентов. От основы кожи эпидермис отделен основной мембраной, на которой располагается производящий слой эпидермиса. Размножаясь, клетки этого слоя передвигаются к поверхности эпидермиса, стареют, высыхают, становятся плоскими, оро-говевают и превращаются в чешуйчатые пластинки. В эпидермисе залегают пигментные клетки, кровеносных сосудов нет, питание эпидермиса происходит осмотическим путем. Через базальную мембрану эпидермис связан с соединительнотканной частью дермы.
В дерме располагаются сальные и потовые железы, артерии, вены, лимфатические сосуды, капилляры, нервные волокна, корни волос и гладкие мышечные волокна. У собак толщина кожи колеблется в зависимости от породы, пола и места расположения на теле.
Исследование фекалий
Происходящие изменения в экологии и особенно окружающей среде, в которых содержатся домашние животные, сильно влияют на состояние их организма. В связи с этим коренным образом изменяется характер многих болезней, а также проявление и течение инвазионного процесса (Кар-пецкая И.Л., 2003). Среди всех заболеваний собак особое место занимают болезни кожи, среди которых превалируют хронические дерматиты различной этиологии, в том числе и паразитарные. Кожа, являясь барьером неспецифической защиты организма, одна из первых реагирует на воздействие неблагоприятных ксенобиотических факторов (Лопатина М.Ю., 2004).
Исследованиями, проведенными среди мелких домашних животных в мегаполисах, выявлены серьезные сдвиги в иммунологическом статусе (Донник И.М., 2004; Федоров Ю.Н., 2011; Черешнев В.А. с соавт., 2003). Большинство заболеваний кожных покровов собак возникает по причине ослабления иммунной системы животного, что в свою очередь снижает защитные функции кожи. Поэтому для лечения всех заболеваний кожи существуют и общие принципы. Лечение должно быть направлено на повышение иммунного ответа, избавление от аллергенов.
Демодекозный дерматит обусловлен, по мнению многих авторов, иммунными нарушениями у собак. Исследования последнего времени, основанные на определении субпопуляций лимфоцитов, подтвердили теорию о том, что «поломка» иммунной системы происходит на уровне клеточного иммунитета. В частности, было установлено снижение выработки интер-лейкина-2 (IL-2) и отсутствие экспрессии Т-клеточного рецептора (TCR) к данному виду интерлейкина. Учеными было сделано предположение, что у собак с демодекозом понижена реакция Т-хелперов, что, в свою очередь, по-видимому, определяется наследственностью. Это подтверждается в частности и результатами внутрикожных исследований с антигеном, полученным из клеща, возбудителя демодекоза. Так, у здоровых собак и собак, у которых демодекоз самопроизвольно излечивается, результат теста на гиперчувствительность кожи – адекватный замедленный, в то время как у собак с хроническим заболеванием его нет. При демодекозе развивается фолликулит, который может осложняться пиодермией, при этом выделяется экссудат и формируются толстые корки на коже.
Демодекоз следует дифференцировать от иных заболеваний, которые могут вызвать фолликулит. Наиболее распространенными среди них являются собственно пиодермия и дерматомикозы. Вообще, вероятность демо-декоза возможна в каждом случае фолликулита.
При аллергии на укусы блох у собак кожные элементы чаще всего появляются у основания хвоста и затем распространяются в ростральном направлении вдоль спины до области грудной клетки. По форме пораженный участок напоминает треугольник с основанием в области хвоста. Обычно также поражаются каудальные и медиальные поверхности бедер. Часто оказываются увеличенными подколенные лимфоузлы.
Распространение вторичных элементов соответствует расположению тех участков, которые доступны животному, когда оно пытается себя вылизывать и покусывать. Большинство этих вторичных элементов обусловлены самоповреждением и бывают представлены: утолщением и сморщиванием кожи и частичным выпадением волоса, что сопровождается либо появлением серозного экссудата, либо формированием корок. У животных с хроническим течением заболевания кожа становится толще, отмечаются ее лихенизация и гиперпигментация. В очень тяжелых случаях может оказаться пораженной почти вся поверхность кожи в области туловища и задних конечностей. При присоединении вторичной инфекции появляются признаки, характерные для пиотравматического дерматита.
Непосредственно аллергический дерматит в литературе описывается как заболевание кожи аллергического характера, являющееся ответом иммунной системы на влияние раздражителей разного рода, попадающих непосредственно на кожу и вызывающих аллергическую реакцию замедленного типа. В основе аллергического дерматита лежит моновалентная сенсибилизация кожи. Сенсибилизаторы, вызывающие аллергические дерматиты, являются обычно гаптенами. Соединяясь с белками кожи, они образуют конъюгаты, обладающие свойствами полных аллергенов, под влиянием которых стимулируются лимфоциты, что и обуславливает развитие сенсиби-лизационного дерматита как аллергической реакции замедленного типа.
Моновалентная сенсибилизация определяет особенности клиники и течения аллергического дерматита: четкую специфичность, наличие скрытого периода, периода между первым контактом с раздражителем и развитием дерматита, необычную интенсивную воспалительную реакцию кожи, неадекватную концентрацию раздражителя и времени его воздействия, обширность поражения, далеко выходящего за пределы площади воздействия раздражителя.
На месте контакта с аллергеном развиваются покраснение, отечность, папулы и микровезикулы. Часть из них вскрывается, образуя мок-нующие участки. При повторных воздействиях аллергенов может произойти трансформация дерматита в экзему.
Симптомы дерматита проявляются непосредственно на участке кожи, контактирующем с аллергеном.
Возникающая в ответ на микробное вторжение воспалительная реакция с гибелью многочисленных нейтрофильных лейкоцитов в результате незавершенного фагоцитоза сопровождается разрушением эпидермиса протеолитическими ферментами, выделяющимися на поверхность кожи из распадающихся нейтрофилов.
И действительно, блошиный аллергический дерматит, проявляющийся первоначально лишь как папулезное поражение, затем характеризуется появлением корочек на папулах, постепенным появлением на коже гнойничков, которые, сливаясь друг с другом, образуют различные по форме и величине участки, лишенные эпидермиса. При этом участки с со-44 хранившимся эпидермисом могут приобретать вид островков, располагающихся в центре эрозии. Таким образом, анализ литературных данных свидетельствует, что демодекоз и блошиный дерматит имеют различные механизмы развития и влияния на морфофункционные изменения в организме собак.
Результаты обследования собак на наличие возбудителя демодекоза
Высокая ИИ (интенсивность инвазии) выявлена у 2 собак породы ротвейлер и 1 собаки породы такса. При микрооскопическом исследовании соскобов кожи в поле зрения препарата выявляли от 15 до 20 особей клеща рода Demodex. У 3 собак породы ротвейлер, 3 собак породы такса , 1 собаки породы доберман установлена средняя интенсивность инвазии – 5-10 особей клеща рода Demodex в поле зрения препарата. У 1 собаки породы немецкая овчарка, 1 собаки породы доберман, 3 собак породы боксер, 1 собаки породы бультерьер установлена низкая степень инвазии – 1-4 особи клеща рода Demodex в поле зрения препарата. Рис. 6 Интенсивность инвазии собак в возрасте 3-5 лет клещами рода Demodex: 1 – низкая; 2 – средняя; 3 высокая
По результатам исследований интенсивности инвазии были сформированы 3 опытные группы: первая (n = 6) с низкой ИИ, вторая (n = 7) со средней ИИ, третья (n =3) - с высокой ИИ клещами рода Demodex (рис. 6).
У собак с высокой интенсивностью инвазии в зоне поражения отмечали образования в виде пустул и папул. У этих животных наблюдали дис-кинитическую диспепсию, снижение аппетита, выраженную жажду, беспокойство.
Исследование фекалий собак с различной степенью интенсивности инвазии показало, что в мазках с высокой интенсивностью инвазии клещами рода Demodex у собак в возрасте 3-5 лет установлено наличие мертвых половозрелых демодексов в количестве 2-4 экземпляра в препарате.
Консистенция фекалий неоформленная, кашицеобразная, при запорах плотная, сухая, однако количество фекалий – в пределах нормы или умеренно увеличенное. Цвет темно-коричневый, с наличием слизи на поверхности. Запах специфический.
При микроскопическом исследовании фекалий от собак с ИИ до 20 возбудителей демодекоза установлено, что в мазках выявляются отдельные микробные клетки палочек и кокков в 2-3 полях зрения на мазок (рис. 7). Также обнаруживали значительное количество лейкоцитов, в основном представленных нейтрофилами и редко эозинофилами. Присутствие йодофильной микрофлоры в виде мелких, крупных палочек и коков, окрашенных раствором Люголя в темно-коричневый или черный цвет в количестве 15 клеток в поле зрения, говорит о развитии бродильных процессов в толстом отделе кишечника (Г.М.Крюковская, 2000).
При исследовании мазков фекалий нами выявлены лейкоциты в количестве 10-15 в поле зрения и эозинофилы – до 6 в поле зрения.
Величина рН фекалий колебалась в пределах от 5,0 до 6,5, то есть была умеренно кислая. Возможно, это обусловлено деятельностью микрофлоры, в частности, йодофильной. При исследовании фекалий собак в возрасте 3-5 лет при ИИ до 20 экземпляров возбудителей демодекоза половозрелых мертвых паразитов в количестве от 2 до 3 экземпляров в препарате обнаружили лишь в двух случаях. У 47 собак в возрасте 5-7 лет с кожными манифестациями на спине, в основании хвоста, в пояснично-крестцовой области, на внутренней по верхности бедер и на животе, с эрозивными поражениями кожи в области спины, при микроскопии соскобов кожи клещей рода Demodex в препаратах не обнаружено.
При осмотре животных мы обнаружили на теле 25 (53,19 %) собак блох и их фекалии, у остальных животных блох не выявляли и диагноз устанавливали по результатам анамнеза (отсутствие обработки против насекомых), клинических признаках и микроскопии мазков-отпечатков с пораженных участков кожи.
Микроскопия мазков-отпечатков с пораженных участков кожи 43 (91,49 %) собак выявила наличие перивазальных эозинофильных клеточных инфильтратов, которые образовывали довольно крупные очаги в отдельных случаях . Клеточный инфильтрат включал также значительное количество тканевых базофилов, большинство из которых имели нечеткие контуры, а их цитоплазма не содержала специфических гранул. Такая картина характерна для подострого аллергического дерматита.
Нейтрофилы и кокки на цитологическом препарате кожи собаки У 4 (8,51) собак с эрозивными поражениями кожи при микроскопии мазков отпечатков выявляли значительное количество лимфоцитов, единичные эозинофилы, нейтрофилы и клетки эпидермиса.
Таким образом, нами установлено, что при подостром дерматите, вызванном паразитированием блох, отмечается умеренная лейкоцитарная реакция, а так же десквамация эпителия – от 10 до 60 нейтрофилов в поле зрения, единичные эозинофилы (рис. 8).
При эрозивных поражениях кожи у собак с блошиным дерматитом отмечена выраженная лейкоцитарная реакция, явная десквамация эпителия – по всем полям зрения нейтрофилы, имеются эритроциты, в мазке встречаются лимфоциты, эозинофилы, единичные макрофаги и плазматические клетки.
Таким образом, простое физикальное обследование животных и сбор данных анамнеза, хотя и являются важным моментом диагностики, но при кожных заболеваниях явно недостаточны. Результаты наших исследований еще раз подтвердили, что клинические изменения кожи являются однотипными при многих кожных заболеваниях.
Для исследования морфологических изменений в печени при демодекозе исследовали био-птаты, полученные от собак всех опытных групп.
При изучении биоптатного материала печени от щенков в возрасте 6-8 месяцев и собак в возрасте 3-5 лет с низкой интенсивностью инвазии (1-2 и 1-4 экземпляра клещей рода Demodex в препарате соответственно) установлены однотипные морфологические изменения в органе.
При исследовании биоптатов печени при слабом увеличении микроскопа у всех собак с низкой ИИ в отдельных участках печеночных клеток наблюдались пустоты, которые соответствовали местам отложения жира. Печеночные клетки имели округлую форму, неравномерно увеличены в объеме. В отдельных гепатоцитах имелись ядра с узким ободком, сохранившиеся цитоплазмы были сдавлены и смещены к одному из полюсов клетки (так называемые «перстневидные клетки»). Из-за сдавливания внутридольковых капилляров увеличенными в объеме ожиревшими печеночными клетками балочное строение становится неразличимо, что характеризуется как диффузная мелкокапельная жировая дистрофия (рис. 9 и 10).
Результаты биохимического исследования сыворотки крови собак
Исследования клеток гемопоэза представляют интерес, так как ни в одной другой ткани организма состояние клеточной поверхности не отвечает в подобной степени за развертывание ряда явлений, происходящих в организме, как в норме, так и при патологических состояниях. Проведенные различными авторами исследования позволили установить, что топография поверхностей претерпевает существенные изменения при различных состояниях клеткок, например при их трансформации, при нахождении клетки в различных фазах клеточного цикла или при воздействии различных химических агентов и пр. Эритроциты в силу своей эластичности способны принимать самые разнообразные конфигурации, приспосабливаясь к форме сосуда или меняясь под действием текущей плазмы. В связи с этим, способность к деформации и к образованию агрегатов являются главными свойствами эритроцита.
Механизм появления гематологических нарушений при дерматитах паразитарной этиологии у собак изучен недостаточно и раскрытие его механизма имеет важное значение для целенаправленной патогенетической терапии больных животных. Являясь важнейшими компонентами внутренней среды организма, клетки крови чутко реагируют на различные физиологические и патологические процессы в организме, что позволяет активно использовать изменения показателей крови в качестве дифференциально-диагностических тестов при самых разнообразных нозологических формах (Сысуева А.В., 2009). Поэтому исследование количественного состава крови и морфологии эритроцитов является одним из условий изучения воздействия на организм различных токсинов.
Морфология эритроцитов изменяется при многих гематологических заболеваниях и синдромах и проявляется изменением формы, уменьшением размеров эритроцитов, интенсивности и характера их окрашивания, появлением патологических включений. Одним из важнейших признаков патологического состояния эритроцитов является пойкилоцитоз — изменения различной степени выраженности формы эритроцитов, которая становится отличной от дисковидной – овалоциты, шизоциты, сфероциты и др..
Трансформация эритроцита (дискоцита) в эхиноцит начинается с нарушения контура двояковогнутой структуры эритроцита, а затем и появляются грубые выросты сначала по окружности диска, далее – по всей поверхности клетки, после чего эритроцит начинает принимать в основном сферическую форму. Выросты постепенно становятся тоньше и начинают равномерно распределяться по клеточной поверхности в количестве от 30 до 50 на одну клетку. В конечной стадии клетка теряет часть выростов при снижении метаболизма, что фактически являет собой потерю частей мембраны эритроцита (Крюковская Г.М., 2015).
Трансформация эхиноцита является обратимой до стадии потери мембранного вещества и от объема не зависит. Нарастающее снижение способности эхиноцитов к деформации происходит в параллели с накоплением кальция, уменьшением АТФ и изменением формы эхиноцита и превращением его в стоматоцит.
Стоматоцит представляет собой чашеобразный эритроцит. Процесс начинается со сглаживания контура дискоцита с одной его стороны, и сохранении вогнутости клетки с другой. В области углубления начинает формироваться везикулярное образование, разделяющее центральную часть, оставшуюся слегка вогнутой, и периферическую до тех пор, пока клетка не станет сферической формы. Наблюдаемые на электронной микрофотографии ямки при срезе представляют собой везикулярные образования. Трансформация дискоцит-стоматоцит является обратимой до стадии потери мембранного вещества.
В норме большинство эритроцитов в периферической крови представлено дискоцитами (нормоцитами) и любые изменения их морфологии может иметь диагностическое значение и нести дополнительную информацию о патогенезе заболевания. В крови здоровых животных на долю нормоцитов приходится 70-75 % от общего числа эритроцитов, количество микро- и макроцитов примерно одинаково (12-15%) (рис. 19). Рис. 19 Морфологическая картина нативного препарата крови собаки
Изучение морфологии форменных элементов в окрашенных мазках крови имеет большое диагностичесское значение. Эти исследования позволяют определить соотношение многочисленных клеточных элементов, оценить степень их морфологической зрелости, определить патологию. Качественный анализ необходим в первую очередь в тех случаях, когда имеют место изменения числа лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов крови. Определенную диагностическую значимость эти исследования приобретают и при нормальных количественных показателях крови.
При исследовании препаратов крови щенков с низкой и средней интенсивностью клещами рода Demodex выявляли агрегацию эритроцитов в виде появления монетных столбиков в количестве 4-7 в поле зрения. Увеличение их числа обычно бывает следствием повышение содержания фибриногена и гамма-глобулинов при воспалительных процессах (рис. 20).
При высокой интенсивности инвазии в крови щенков мы наблюдали выраженный пойкилоцитоз - изменения различной степени выраженности формы эритроцитов, которая становится отличной от дисковидной. Это важнейший признак патологического изменения эритроцитов. Патологические формы эритроцитов регистрировали в виде стоматоцитов, элипто-цитов, сфероцитов (рис.21, 22).