Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 11
1.2. Морфология и интраорганная васкуляризация надпочечников 11
неполовозрелых самок млекопитающих
1.2 Цито- и гистофизиология эндокриноцитов коркового вещества и 9П медулы надпочечников
1.3. Гормональная регуляция продукции гормонов эндокриноцитами клубочковой, пучковой и сетчатой зон коркового вещества и медулы надпочечников млекопитающих
1.4 Влияние стресса и его коррекции на цитофизиологию эндокриноцитов коркового и мозгового вещества адреналовых желёз ...
1.5 Морфологические и биохимические показатели сыворотки крови самок млекопитающих при стрессе и в условиях его коррекции
1.6 Заключение к обзору литературы 43
2. Материал и методы исследования 44
3. Результаты собственных исследований 53
3.1 Анатомо-топографические особенности, источники экстраорганной васкуляризации адреналовых желёз самок кроликов
3.2 Морфофизиология надпочечников неполовозрелых крольчих 59
3.3. Морфофизиология адреналовых желёз крольчих в условиях индуцированной стресс-реакции
3.4 Морфофункциональные реактивные изменения структур надпочечников крольчих при коррекции индуцированной стресс- RR реакции препаратом «Лигфол»
3.53аключение 105
4. Обсуждение полученных результатов 106
5. Практические рекомендации 121
Выводы 123
Библиографический список 125
Приложения 164
- Цито- и гистофизиология эндокриноцитов коркового вещества и 9П медулы надпочечников
- Влияние стресса и его коррекции на цитофизиологию эндокриноцитов коркового и мозгового вещества адреналовых желёз
- Анатомо-топографические особенности, источники экстраорганной васкуляризации адреналовых желёз самок кроликов
- Морфофункциональные реактивные изменения структур надпочечников крольчих при коррекции индуцированной стресс- RR реакции препаратом «Лигфол»
Введение к работе
1.1 Актуальность темы исследования
Современные условия развития промышленного и фермерского кролиководства позволяют получить значительный объем мясной продукции в сравнительно короткий срок. Транспортировка животных из отдалённых регионов России неизбежно приводит к возникновению у них стрессовых реакций, что усугубляется нарушениями норм плотности посадки, гипертермическими воздействиями, вследствие чего у неполовозрелых самок может развиться бесплодие, патология беременности и другие болезни.
Стресс - необходимое звено адаптации организма к многообразным факторам среды - был назван Г. Селье «общим адаптационным синдромом». Концепция стресса получила значительное развитие во множестве работ отечественных и зарубежных авторов (Азарных Т.Д., 2012; Нестеров Ю.В. и др., 2012; Macho L. et al., 2008; Liang Z. et al., 2011; Walker C.-D., Anand K.J.S., Plotsky P.M., 2011; Kondo Y. et al., 2013). Однако недостаточно изученными остаются механизмы, лежащие в основе тканевого адаптогенеза в процессе развития стресс-реакции.
Главной эффекторной железой внутренней секреции при развитии стресс-реакции является надпочечник, клетки кортикального слоя которого секретируют гормон кортизол, отвечающий за адаптацию, резистентность и стрессустойчивость организма животного. Актуально изучение морфофункционального состояния клеточно-тканевого ансамбля адреналовых желёз (Рунов Г.П., Зиновьева О.В., 2006; Дедов И.И., Мельниченко Г.А., Фадеев В.В., 2007; Фадеев В.В., 2008).
Надпочечники - уникальные органы системы эндокринной регуляции жизненно важных процессов в организме млекопитающих (Дедов И.И., Фадеев В.В., Мельниченко Г.А., 2002; Милюков В.Е., Богданов А.В., 2011; Милюков В.Е. и ДР-, 2012).
1.2 Степень изученности темы
Исследованию вопросов морфофункциональной организации надпочечников у животных в норме посвящено много работ (Зеленевский Н.В., 1997; Шевченко Б.П., 2003; Пашинин Н.С., 2006; Кузнецов А.В., 2006; Алексеев В.В., Арестова И.Ю., 2012; Llabres-Diaz F.J., Dennis R., 2003; Bragulla H. et al., 2004; Barberet V. et al., 2010; Jelinek F., Konecny R.P., 2011; Walid A. Farhat, Bryce A. Weber, 2012; de Chalus T. et al., 2013; Erdogan S., Perez W., 2013).
Широко изучены механизмы нейрогуморальной регуляции продукции и секреции гормонов эндокриноцитами коры надпочечника с участием системы гемомикроциркуляции (Акмаев И.Г., 2001; Gallo-Payet N., Payet M.D., 2003; е Diego A.M.G., Gandia L., Garcia A.G., 2008; Matsuoka H., 2008; Henderson I.W., 2011; Sandow J., 2011; Young J.B., Landsberg L., 2011; Seguin В., Brownlee L., Walsh P.J., 2013).
Однако многие вопросы, касающиеся морфофункциональных основ адаптационной пластичности тканей эпителиального, стромального компонентов и
структур системы обеспечения надпочечников при воздействии экзогенных факторов и понимания механизмов реализации гистотипических потенций тканей органа при коррекции стресс-реакций у крольчих требуют дальнейшего изучения, что соответствует запросам современной фундаментальной биологической науки и ветеринарной медицины, имеет большое значение для разработки программ совершенствования технологии выращивания первокролок.
Опыты по изучению морфофизиологии надпочечников крольчих при коррекции стресс-реакции препаратом «Лигфол» проводились впервые.
1.3 Цель исследования - выявить закономерности морфофизиологии
надпочечников неполовозрелых крольчих на основе топографо-анатомических
особенностей, источников васкуляризации, гистоархитектоники в норме, и их
адаптационной пластичности в условиях экспериментально индуцированной
стресс-реакции и коррегирующем воздействии препарата «Лигфол».
Для реализации цели перед нами поставлен ряд конкретных задач.
-
Изучить анатомо-топографические особенности, синтопию, источники экстраорганной васкуляризации надпочечников неполовозрелых крольчих породы советская шиншилла.
-
Исследовать абсолютную массу тела, массу и линейные показатели, соотношение зон коры и медулы надпочечников, их цитофизиологические характеристики во взаимосвязи с гематологическим и гормональным профилями крольчих в норме.
-
Экспериментально смоделировать стресс-реакцию у неполовозрелых крольчих и разработать способ её коррекции. Выявить закономерности структурно-функциональных изменений паренхиматозного и стромального компонентов надпочечников во взаимосвязи с показателями системы крови, динамикой гормонов крольчих при воздействии стресс-факторов.
4. Обосновать морфофункциональную адаптационную пластичность гормон-
секретирующего комплекса, сосудов ГМЦР коркового и мозгового вещества
надпочечников, их взаимосвязь с гематобиохимическим профилем крольчих в
условиях коррекции стресс-реакции препаратом «Лигфол».
1.4 Научная новизна работы
Получены новые сведения об анатомо-топографических особенностях, синтопии, источниках васкуляризации, хода и ветвления экстра- и интраорганных сосудов артериального и венозного звеньев и гистоархитектоники надпочечников неполовозрелых крольчих породы советская шиншилла.
Выявлены закономерности реактивных изменений паренхиматозного, стромального компонентов и гемомикрососудов надпочечников крольчих при индуцированной стресс-реакции, их взаимосвязь с динамикой гормонов, морфологическими и биохимическими показателями крови.
Приоритетно обоснование адаптационной пластичности структур гормон-секретирующего комплекса коркового и мозгового вещества надпочечников, сосудов гемомикроциркуляторного русла, уровень их взаимосвязи с показателями
системы крови, динамикой гормонов при коррегирующем влиянии препарата «Лигфол» в условиях стресс-реакции у крольчих.
Полученные результаты позволили разработать практические рекомендации для промышленного кролиководства.
1.5 Теоретическая и практическая значимость работы
Полученные результаты раскрывают закономерности реактивных изменений, адаптационной пластичности, степени реализации гистотипических потенций гормон-секретирующего комплекса надпочечников неполовозрелых крольчих в условиях индуцированной стресс-реакции и её коррекции препаратом «Лигфол». Исследования дополняют имеющиеся представления о топографии, синтопии, экстра- и интраорганной васкуляризации, гистоархитектоники надпочечников, расширяют знания о механизме адаптивного ремоделирования структур паренхиматозного компонента органа крольчих во взаимосвязи с гематобиохимическим профилем в условиях стресс-реакции и её коррекции.
Полученные результаты могут быть использованы в учебном процессе на ветеринарных и других биологических факультетах, на курсах повышения квалификации, а также при написании учебников, учебных пособий и монографий. Материалы диссертации могут быть полезны научным сотрудникам НИИ, занимающимся проблемами экспериментальной и функциональной морфологии эндокринных органов. Предложены в качестве топографических и синтопических ориентиров надпочечников, хода и ветвления их экстра- и интраорганных кровеносных сосудов. Разработаны рекомендации использования препарата «Лигфол» кроликам при стресс-реакциях разной этиологии. Результаты исследования внедрены в крестьянско-фермерском хозяйстве «Зобнин» Кваркенского района Оренбургской области (акт внедрения от 28 августа 2013г.).
1.6 Связь исследований с научной программой
Диссертация выполнена в рамках научно-исследовательской работы в соответствии с планом НИР кафедры морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет». Государственный регистрационный номер темы: 01201161504
1.7 Положения, выносимые на защиту
1. Анатомо-топографические особенности, синтопия, источники
экстраорганной васкуляризации, ангио- и гистоархитектоника надпочечников
неполовозрелых крольчих породы советская шиншилла.
2. Гистофизиология кортикальной и медуллярной зон надпочечников в
связи с количественными морфологическими, биохимическими и гормональными
характеристиками крови крольчих контрольной группы.
3. Закономерности гистотипических потенций гормон-секретирующего
клеточно-тканевого ансамбля коры, медулы надпочечников и системы их
обеспечения во взаимосвязи с гематобиохимическим и гормональным профилями
неполовозрелых крольчих реализуются в условиях индуцированной стресс-
реакции.
4. Адаптационная пластичность эндокриноцитов и микрососудов надпочечников и их корреляция при коррекции стресс-реакции препаратом «Лигфол».
1.8 Методология и методы исследования
При исследовании применён комплексный методический подход, включающий: морфометрию, синтопию, световую микроскопию гистологических и трансмиссионную микроскопию ультратонких срезов, гистохимию, цитометрию, гематологические, биохимические исследования, статистическую обработку цифровых данных и системный морфофункциональный анализ.
1.9 Степень достоверности и апробация результатов исследования
В основу работы положен анализ результатов комплексных исследований, выполненных на 45 неполовозрелых трёхмесячных самках кроликов породы советская шиншилла Достоверность представленных в диссертационной работе результатов подтверждается соответствием теоретических заключений статистическим расчетам комплекса проведенных исследований.
Материалы диссертации доложены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы незаразной патологии и терапии» (Оренбург, 2013), на Международной научно-практической конференции «Наука и образование в жизни современного общества» (Тамбов, 2013), на Всероссийской научно практической конференции «Фундаментальные основы научно-технической и технологической модернизации АПК» (Уфа, 2013) на III Международной научно-практической интернет-конференции «Актуальные проблемы современной биологии, морфологии и экологии животных» (Брянск, 2013), на Объединенном XII Конгрессе МАМ и VII Съезде ВНО АГЭ (Тюмень, 2014).
Результаты исследования используются в учебном процессе при чтении лекций, проведении лабораторно-практических занятий и научной работе на кафедрах: морфологии, физиологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Ивановской ГСХА; анатомии и хирургии Воронежского государственного аграрного университета; диагностики, терапии, морфологии и фармакологии Вятской ГСХА; биологии животных и ветеринарии Пензенской ГСХА; анатомии, акушерства и хирургии Самарской ГСХА; морфологии и физиологии животных Мордовского госуниверситета им. Н.П. Огарева.
1.10 Публикации по теме диссертации. По материалам научных
исследований опубликовано шесть печатных работ, из них четыре - в изданиях,
рекомендованных ВАК РФ.
1.11 Личный вклад соискателя. Экспериментальную часть, работу по
систематизации и анализу полученных результатов автор провел лично. Один
научный труд опубликован в соавторстве с A.M. Юсуповым. В диссертационный
совет представлена справка подтверждающая, что в диссертации его данные не
использованы.
1.12 Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 168 страницах компьютерного набора и состоит из оглавления, перечня условных обозначений, используемых в диссертации, введения, обзора литературы, материала и методов исследования, четырёх глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, практических предложений, заключения, библиографического списка и приложения. Библиографический список включает 351 наименование работ, из них 135 - зарубежных авторов. Материалы диссертации иллюстрированы 31 рисунком и 21 таблицей.
Цито- и гистофизиология эндокриноцитов коркового вещества и 9П медулы надпочечников
Надпочечники (адреналовые железы) - одни из наиболее значимых органов системы эндокринной регуляции жизненно важных процессов в организме млекопитающих ( Калинин А.П., Камынина Т.С., Тишенина Р.С, 1998; Дедов И.И., Марова Е.И., Вакс В.В., 2000; Дедов И.И., Фадеев В.В., Мельниченко Г.А.. 2002; Милюков В.Е., Богданов А.В., 2011; Милюков В.Е. и др., 2012). Морфофункциональная организация этих органов в норме как желез внутренней секреции изучена достаточно полно как у животных (Зеленевский Н.В., 1997; Кузнецов А.В., 2006; Алексеев В.В., Арестова И.Ю., 2012; Llabres-Diaz F. J., Dennis R., 2003; Bragulla H. et al, 2004; Barberet V. et all, 2010; Jelinek F., Konecny R. P., 2011; Walid A. Farhat, Bryce A. Weber, 2012; de Chalus T. et al., 2013; Erdogan S. and Perez W., 2013), так и у человека (Артишевский А.А., 1965, 1977; Лазько М.В., 2004; A. Sahdev, R Н. Reznek, 2009; Brook Ch. G. D., Dattani M. Т., 2012; KimK.W. et al, 2012).
Велика роль адреналовых желез в динамике развития целого ряда заболеваний, но в настоящее время данный аспект, особенно при острой хирургической патологии, исследован недостаточно (Ростовцева Т. И., Мусаков А. Н., 1989; Фадеев В.В., 2005, 2008; Рунов Г.П., Зиновьева О.В., 2006; Straub R.H., Besedovsky Н., 2003; Brook Ch.G.D. et al, 2007, 2010; Harvey Ph. W., Everett D. J., Springall C.J., 2007; A. Combes et al, 2012; Chitty J., 2013).
Надпочечник - это небольшая парная эндокринная железа плотной консистенции. Их окраска у большинства копытных красно-коричневая, у человека - желтоватая, у собаки - от светло-серой до белой, у кошек -желтовато-белая, у мелких плотоядных - розоватая. Адреналовые железы располагаются забрюшинно, асимметрично относительно позвоночного столба, у большинства млекопитающих медиально, человека - над верхним полюсом соответствующей почки, у переднего конца почек, в толще околопочечной жировой клетчатки. У крупного рогатого скота правая адреналовая железа примыкает к печени и лежит около полой вены, а левая граничит с аортой. У овец левая железа контактирует с поджелудочной железой, правая - прилежит к медиальной поверхности краниального конца правой почки. У плотоядных левая адреналовая железа расположена в непосредственной близости от брюшной аорты, правая - прилегает к нижней полой вене (Кацнельсон З.С., 1974; Аубакиров Т.И., 1977; Сидоров СВ., 1986; Овчаренко, Н.Д., 2003; Магомедов Г.Р., 2007).
Форма желез видоспецифична. У крупного рогатого скота левая -подковообразная или имеет вид цифры 9, правая железа серповидной формы; у козы левая железа чаще бобовидная, правая - сердцевидная, у овцы левый надпочечник имеет эллипсоидную форму, правый - округло-овальную, у большинства оленьих левая железа удлиненно овальной формы, правая -округлая или треугольная; у лошади железы продолговатой плоской формы; у свиньи адреналовые железы представляют собой продолговатые плоские тельца с бороздками на поверхности; у плотоядных адреналовые железы овальной формы, в частности, у собаки железы удлиненные, сплющенные в дорсо-вентральном направлении, а у кошки - овальные и дискообразной формы; у человека правая железа за счет более выраженного верхнего угла спереди больше похожа на треугольник с закругленными углами, а левая напоминает полумесяц, удлиненный в поперечном направлении со сглаженным верхним углом (Боброва Г.Е., 1970; Безруков Н.И., Кожевникова Л.Н., 1971; Кацнельсон З.С., 1973; Шишкин А.П., 1996; Антипин И.А., 1999; Медведева О. А., 2001; Кузнецов А.В., Шевченко Б.П., 2005; Алексеев В.В., Арестован. Ю., 2010; Сорокин Д.А., 2011;).
Масса и размеры адреналовых желез весьма вариабельны даже в пределах одного вида и зависят от условий содержания и физиологического состояния животных. Масса пары адреналовых желез у крупного рогатого скота составляет 8 г, оленьих - 14 г, лошади - 5-40 г, овцы и козы - менее 2 г, свиньи - 4 г, собаки - 0,06-1,6 г, кошки - 0,04-0,4 г, человека - 4-7г.
Размеры правой и левой желез разнятся. По длине правая железа превышает левую и в среднем они составляют у крупного рогатого скота 2,5 и 5 см, лошади - 4 и 9 см, овцы и козы - 2 и 2,4 см, свиньи - 5 и 8 см, собаки - 0,8 и 3,3 см, кошки - 0,8 и 1,5; человека - 4 и 6 см (Сапин М.Р., 1974; Майстренко Н.А., 2000; Афанасьева И. А., Попова И. Ю., 2001; Кеттайл В.М., Арки Р.А., 2001; Медведева О. А. ,2001; Александров И.Д., 1976-1978; А.П. Шишкин, 1997).
Снаружи надпочечник заключен в соединительнотканную капсулу, состоящую из большого количества пучков коллагеновых и эластичных волокон, нескольких слоев фиброцитов и гладкомышечных клеток. Ряд авторов отмечает, что непосредственно под капсулой находится тонкий слой мелких малодифференцированных клеток, из которых, возможно, образуются добавочные тельца, обнаруживаемые иногда на поверхности железы (Тараканов Е.И., 1960; Артишевский А.А., 1974; 2000; Zimmer С, Horauf A., Reusch С, 2000).
Наружный слой капсулы состоит из волокнистой соединительной ткани с малым количеством клеток и более богат кровеносными и лимфатическими сосудами, чем плотный внутренний слой с большим числом клеток. От капсулы вглубь органа в виде радиально направленных перекладин отходят пучки соединительнотканных волокон, вплетающихся в оболочку центральной вены и ее крупных притоков. Перекладины связаны между собой такими же, но косо и поперечно направленными перемычками, формирующими ячеистую соединительнотканную строму. В ячейках стромы располагаются группы эндокринных клеток, составляющих паренхиму органа, которая резко разделяется на две разные по происхождению, строению и значению зоны: корковое (по периферии органа) и мозговое вещество (в центре) (Артишевский А.А., 1972; Майстренко Н.А., 2000; Реу et al, 2011; Schwarz Т., Saunders J., 2013). Соединительнотканный каркас, образующий трехмерную пространственную сеть и являющийся носителем кровеносных, лимфатических сосудов и нервных волокон надпочечника, является связующим звеном между корковым и мозговым веществами, обеспечивая общность всего органа (Сапин М.Р., 1974; Дедов И.И,. Марова Е.И., Вакс В.В., 2000; Рунов ГЛ., Зиновьева О.В., 2006). На поперечном разрезе адреналовой железы корковое вещество отличается окраской от мозгового вещества. Ряд авторов отмечает, что эти два слоя иногда разделены темной, тонкой и частично прерывающейся соединительнотканной прослойкой, так называемым промежуточным слоем Вирхова (Майстренко Н.А., 2000; Сапин М.Р., 1974).
Корковое вещество составляет 80-90 % всей железы состоит из трех зон: клубочковой (наружной), пучковой (средней) и сетчатой (на границе с мозговым веществом) (Дедов И.И., Марова Е.И., Вакс. В.В., 2000; Фадеев В.В., 2008; Vaidya В., Pearce S., Kendallaylor P.,2000; Mooney СТ., Rand J.S.,FleemanL.M.,2008).
В процессе эмбрионального развития надпочечник развивается из разных зародышевых листков: корковое вещество имеет мезодермальное, мозговое — эктодермальное происхождение и являются производными клеток нервного гребня (Ehrhart-Bornstein М., Hinson J. P., Bornstein S. R. et al, 1998; Kuo B. R., Erickson С A., 2010). Корковое вещество относится к так называемой интерреналовой системе, а мозговое вещество - к адреналовой системе. (Сапин М.Р., 1974; Дедов И.И., Марова Е.И., Вакс В.В., 2000; Дедов И.И., 2005; Фадеев В.В., 2008).
Влияние стресса и его коррекции на цитофизиологию эндокриноцитов коркового и мозгового вещества адреналовых желёз
Изменение среды обитания организма (стресс), вызывает определенные ответные реакции, сопровождаемые немедленными биохимическими реакциями крови и изменениями количества в ней форменных элементов. Степень изменения находится в прямой зависимости от силы и продолжительности действия стресс-фактора (Дигурова И.И., 2009; Сотникова Е.Д., 2009; Максимов А.Г., 2010; Карпунина Л.В., Кикалова Т.П., Сметанина М.В., 2010; Вишневская Т.Я., Абрамова Л.Л., 2012; Вишневская Т.Я., 2012; А.В. Севрюков, Т.С. Колмакова, Ю.И. Левченко и др., 2014).
Хронический стресс влияет незначительно на количество клеток (в пределах нормы), при остром стрессе наблюдаются изменения, выходящие за пределы среднестатистических показателей. Острая стресс-реакция сопровождается кратковременным (сутки) повышением стероидогенеза корой надпочечников. При это отмечается выраженное резкое падение числа лимфоцитов и эозинофилов в белой крови, значительным увеличением числа юных и палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, эритроцитов. Количество гемоглобина повышается незначительно, вследствие выработки положительных условных рефлексов уменьшает содержание гемоглобина. Стресс стимулирует выброс эритроцитов в кровь, что приводит к увеличению содержания гемоглобина в крови, дает возможность для менее травмирующей адаптации. Данные изменения выходят за пределы физиологической нормы, что свидетельствует о развитии стресс-реакций при остром стрессе (Архипенко Ю.В. и др., 1999; Зинчук В.В., Глебов А.Н., 2007; Романова Т.П. и др., 2013).
Стрессиндуцированное кратковременное увеличение количества лейкоцитов возникает в результате их «выброса» в кровь из костного мозга или других тканей, носит реактивный характер и исчезает вместе с обусловившей его причиной. Под действием катехоламинов гранулоциты вымываются со стенок сосудов, что повышает количество свободно циркулирующих клеток (Федоров Б.М., 1990; Дигурова И.И., Гущин А.Г., Карева Ю.В., 2007; Цымбал А.А. и др., 2011).
Хронический стресс, приводящий к истощению симпатического отдела ЦНС, провоцирует уменьшение количества лейкоцитов, связанное также с торможением и угнетением продукции созревания и выхода лейкоцитов из костного мозга, а также с их перераспределением в кровяном русле. Это свидетельствует о снижении иммунитета. Восстановление нормального количества лейкоцитов может длиться несколько месяцев и обусловлено с истощением сосудистого и костномозгового гранулоцитарных резервов (Шилов Ю.И., Орлова Е.Г., 2002; Шилов Ю.И., Лапин Д.В., Орлова Е.Г., 2005).
Увеличение числа палочкоядерных нейтрофилов и некоторое ускорение созревания сегментоядерных нейтрофилов при остром стрессе связано с увеличением поступления в циркуляцию костномозговых нейтрофилов, рекрутирование которых потенцируется глюкокортикоидами и
катехоламинами. Хронический стресс также вызывает рост числа клеток за счет поддержания повышенной продуктивности костного мозга. При длительном стрессе количество нейтрофилов может снижаться (Мерзлякова Е.А., Трошин Е.И., Васильев Ю.Г, 2006).
Уменьшение количества эозинофилов вызвано влиянием АКТГ и связано с выходом этих клеток из крови в соединительную ткань (Дигурова И.И., 2009; Сотникова Е.Д., 2009).
Одним из универсальных стресс-реализующих факторов является тромбопластинемия и тромбонемия. Стресс провоцирует повышенную мембранодеструкцию и насыщение циркулирующего кровотока обломками плазматических мембран и мембран органелл клеток крови или других тканей, которые в результате гемолиза или цитолиза превращаются в тромбопластические субстанции. Тромбопластины активируют более ранние этапы плазмокоагуляции, фибринолиз, систему комплемента, противосвертывающую и другие плазменные ферментные системы, изменяя реологию крови. Тромбин изменяет метаболизм полинасыщенных жирных кислот в тромбоцитах и эндотелиоцитах и, способствуя выбросу вазотропных субстанций, определяет микроциркуляцию в органах и тканях. В ответ на тромбонемию эндокринные структуры активно выделяют в кровь гормоны стрессорного ряда (Сотникова Е.Д., 2009).
В первую кратковременную фазу стресса происходит общая мобилизация защитных механизмов для противодействия стресс-факторам. В настоящее время установлено существование в организме сложной многоуровневой макрофагально-лимфоцитарно-гипоталамо-гипофизарной стресс-реализующей системы, в состав которой входят регуляторные механизмы, работающие по принципу отрицательной обратной связи. Глюкокортикоиды способны ингибировать экспрессию цитокиновых генов в макрофагах и ограничивают участие лейкоцитарных клеток в активации симпато-адреналовой системы (Бекман Э.М. и др., 2006; ДремзаЯ.К, 2006). Уменьшение популяций Т-лимфоцитов, связанное с выбросом из депо в кровоток малодифференцированных форм лимфоцитов, является адекватной неспецифической реакцией организма на любой стресс, направленной на быструю компенсацию состояния. Увеличение концентрации в сыворотке крови основных медиаторов стресс-реализующих систем - катехоламинов и глюкокортикоидов - является ответной реакцией на активацию мононуклеарных фагоцитов и лимфоцитарного звена системы иммунобиологического надзора при стрессе (Матюшичев В.Б., Усманова СР., ШамратоваВ.Г., 2009).
Глюкокортикоиды опосредованно, через действие цитокинов, стимулируют развитие «лимфоидного пика» в костном мозге. Кроме того, глюкокортикоидные гормоны потенцируют миграцию Т-лимфоцитов в лимфоузлы и в тимус, где тимоциты вступают в кооперацию с макрофагами. В результате происходит усиление продукции различных цитокинов, обладающих гемопоэтической активностью, что и обусловливает активацию кроветворения. Наибольшей гемопоэтической активностью и способностью стимулировать симпатоадреналовую систему обладает Ил-1 (Гумен А.В. и др., 2006; Lauc G. et al, 1998).
Анатомо-топографические особенности, источники экстраорганной васкуляризации адреналовых желёз самок кроликов
Системным анализом с использованием коэффициентов парной корреляции выявлена высокая положительная и существенная взаимосвязь для диаметров прекапилляров (г=0,97)— капилляров (г=0,93) мозгового вещества и посткапилляров сетчатой зоны (г=0,92) характеризует активный артериальный приток в них, вследствие чего увеличивается ширина пучковой (г=0,97), сетчатой зон (г=0,81) и, в целом, коркового вещества (г=0,92) (Прил. табл.2). При этом для диаметров прекапилляров сетчатой зоны специфична обратная взаимосвязь (г=-0,97), равно как и для посткапилляров клубочковой зоны (г=-0,77), что связано с отсутствием активного кровотока в них.
Одновременно с этим аналогичные корреляты проявляются для диаметров ядра эпителиоцитов клубочковой (г=-0,87) и пучковой зон (г=-0,87), что характеризует «выключение» в них ядерно-белковых синтезов, тогда как отрицательная взаимосвязь для диаметров эндокриноцитов пучковой зоны (г=-0,87) отражает процесс экструзии глюкокортикоидов.
При активном притоке крови в сосуды капсулы надпочечника (г=0,92) — в прекапилляры клубочковой зоны (г=0,95) — в капилляры (г=0,95) — посткапилляры пучковой зоны (г=0,77) инициируется увеличение диаметра эпителиоцитов клубочковой зоны (г=1,00), что отражает активный синтез минералокортикоидов в них, увеличивается и толщина клубочковой зоны (1=1,00) (Прил. табл.2).
При слабом кровотоке в прекапиллярах пучковой зоны (г=-0,97) и капиллярах сетчатой зоны (г=-0,95), но умеренном - в прекапиллярах мозгового вещества (г=-0,87) в эндокриноцитах последнего завершается экструзия катехоламинов (г=-0,97), а в эндокриноцитах сетчатой зоны -андрогенов (г=-0,97). Одновременно «включаются» ядерно-белковые синтезы в них (г=0,80). Уменьшается ширина эпителиальных тяжей мозгового вещества (г=-0,95). В эпителиоцитах клубочковой зоны слабоинтенсивно идёт синтез минералокортикоидов (г=0,80), незначительно увеличивается ширина клубочковой зоны (г=0,80) (Прил. табл.2).
Высокая достоверная положительная взаимосвязь диаметра прекапилляра (г=0,90) — капилляра (г=0,79) пучковой зоны, посткапилляра сетчатой зоны (г=0,85) с диаметрами эндокриноцитов сетчатой зоны (г=0,91) и мозгового вещества (г=0,90) характеризует нарушенный, местами малоинтенсивный, кровоток в них, инициирующий «выключение» ядерного-белкового синтеза в эпителиоцитах мозгового вещества (г=-0,97) и сетчатой зоны (г=0,85) и начало синтеза катехоламинов (г=0,85) и андрогенов (г=0,92), при этом увеличивается ширина эпителиальных тяжей мозгового вещества (г=0,92) и ширина пучковой зоны (г=0,85) (Прил. табл.2).
В состоянии стрессового десинхроноза системы умеренная достоверная отрицательная взаимосвязь диаметра прекапилляра— капилляра— посткапилляра клубочковой зоны (г=-0,96) и капилляра — посткапилляра мозгового вещества (г=-0,97) характеризует слабый кровоток в них, при котором завершается экструзия минералокортикоидов, выражающаяся уменьшением диаметра эндокриноцитов клубочковой зоны (г=-0,90), а в эпителиоцитах пучковой зоны завершается малоинтенсивная экструзия глюкокортикоидов (кортизола) (г=-0,82), одновременно с этим «выключаются» ядерно-белковые синтезы в эндокриноцитах мозгового вещества (г=-0,95), клубочковой (г=-0,82) и пучковой (г=-0,82) зон и, как следствие, уменьшается толщина клубочковой зоны (г=-0,90) и капсулы (г=-0,75) (Прил. табл.2).
Итак, активный приток крови в мозговое вещество — совпадает с «выключением» ядерно-белковых синтезов в эндокриноцитах клубочковой и пучковой зон и началом экструзии глюкокортикоидов (кортизола). Снижение интенсивности кровотока в посткапилляры клубочковой зоны (г=0,86) инициирует «включение» ядерно-белковых синтезов в эндокриноцитах клубочковой и пучковой зон (г=1,0), а также менее интенсивно в эпителиоцитах сетчатой зоны (г=0,78). При этом в эпителиоцитах пучковой зоны активно синтезируются глюкокортикоиды (кортизол) (г=1,0), однако уменьшается ширина пучковой зоны (г=-0,87) и в целом коркового вещества (г=-0,82) (Прил. табл.2).
Таким образом, после 14 суток индуцированной стресс-реакции у трёхмесячных крольчих в надпочечниках развиваются характерные морфофункциональные изменения: истончение соединительнотканной капсулы, нарастание гетерогенности кортикоцитов, особенно в сетчатой зоне, делипидизация их цитоплазмы, нарушения гемодинамики (полнокровие, сладж эритроцитов, стаз), вакуолизация цитоплазмы эндокриноцитов с последующим оппоптозом и элиминацией их макрофагами, фиброзирование соединительнотканной стромы в сетчатой и клубочковой зонах.
В условиях продолжительного воздействия стрессирующих факторов, стрессогенно обусловленный регенераторный потенциал адренокортикоцитов проявляется гиперплазией базофильных субкапсулярных клеток (камбиального слоя), эндомитозами с появлением двухядерных эндокриноцитов. Выявлены закономерности гиперпластических реакций адренокортикоцитов, ремоделирования коркового вещества и адреналовой зоны надпочечника, выражающиеся, главным образом,
диспропорциональным характером изменений ширины структурно-функциональных зон коры. Особенности атрофии коркового вещества надпочечника у крольчих в 1,58 раза (относительно контроля) реализуется за счет уменьшения ширины пучковой и сетчатой зон, но сопровождается увеличением ширины клубочковой зоны. Увеличение площади мозгового вещества более чем в три раза (относительно контроля) происходит за счёт увеличения хромаффинных клеток и их ядер, проникновения тяжей гландулоцитов в сетчатую и пучковую зоны коры. Местами выявляется врастание тяжей эпителиоцитов сетчатой зоны в медулу.
Особенности ремоделирования коры надпочечников крольчих при развитии общего адаптационного синдрома обусловлены генетически детерминированными изменениями метаболизма. При продолжительном воздействии стресс факторов восстановление ультраструктуры адренокортикоцитов при уменьшении резервов предшественников синтеза кортикостероидов характеризует развитие стойкого адаптивно-компенсаторного фенотипа клеток коры и медулы надпочечника.
Десинхроноз в цитофизиологии эндокриноцитов коркового и мозгового вещества надпочечника при стрессе проявляется в преобладании достоверных положительных взаимосвязей, при этом на фоне слабого кровотока осуществляются синхронные экструзии катехоламинов эндокриноцитами мозгового вещества и андрогенов - эндокриноцитами сетчатой зоны коркового вещества. Аналогично синхронизированы процессы малоинтенсивных экструзий минералокортикоидов и глюкокортикоидов (кортизола) эндокриноцитами клубочковой и пучковой зон, что характеризует их, как клетки с морфологическими признаками существенного истощения и деструкции, находящимися на пределе реализации адаптационной пластичности.
Если цитофизиология надпочечника в норме предполагает максимальную взаимосвязь структур клубочковой зоны с сетчатой, а пучковой - с мозговым веществом, то после 14 суток стрессорного воздействия наибольшее количество существенных положительных коррелятов проявляют между собой структуры клубочковой зоны с таковыми пучковой и аналогично - структуры сетчатой зоны с мозговым веществом.
Морфофункциональные реактивные изменения структур надпочечников крольчих при коррекции индуцированной стресс- RR реакции препаратом «Лигфол»
Гематологические и биохимические показатели неполовозрелых крольчих на 14 сутки стресса при воздействии препарата «Лигфол» приближались к референсным значениям, что согласуется с данными B.C. Бузламы (2005). Уровень внутриклеточных ферментов АсАТ был ниже на 7,04 , АлАТ - на 26,1%, показатель коэффициента Де Ритиса увеличился в 1,3 раза, относительно стресса, что свидетельствует о нормализации процессов метаболизма в печени и согласуется с данными B.C. Бузламы (2005), Л.В. Карпуниной (2010); А.В. Севрюкова (2014), но противоречит результатам исследований Т.Я. Вишневской (2012).
Реактивные изменения надпочечников выразились характерным соотношением ширины их коркового вещества к мозговому как 2,3:1, и процентным соотношением структурно-функциональных зон коры: клубочковой, пучковой и сетчатой как 13:60:27, что отчасти характеризует адаптогенный эффект воздействия препарата «Лигфол» при экспериментальном стрессе, что подтверждает результаты исследования И.И. Кошина (2003).
Клубочковая зона коркового вещества в 1,46 раза мощнее, чем таковая при стрессе. Целостность клубочков на 80% этой зоны надпочечника сохранена. Гландулоциты крупные, с просветленной, слабо базофильной цитоплазмой, насыщенной мелкодисперсной зернистостью и светлым ядром с преобладанием эухроматина, что является морфологическими признаками их секреторной активности. Местами под капсулой видны скопления мелких, базофильных, малодифференцированных клеток. На ограниченной площади этой зоны клубочки деформированы за счет выраженной наполненности сосудов. Отдельные клубочки капсулированы мощными пучками коллагеновых волокон. В других участках надпочечника ширина клубочковой зоны компенсаторно увеличена, клубочки хорошо выражены, микрососуды существенно расширены с признаками гемостазов.
По всему объему коркового вещества пучковая зона неоднородна, её ширина в 1,13 раза больше, чем при стрессе, что согласуется с данными A.M. Берковича, B.C. Бузламы (2004). На 50% ее площади структура сохранена, местами она вытесняет клубочковую зону и распространяется до капсулы. Тяжи эндокриноцитов имеют характерную архитектонику, хорошо выражена дифференцировка на крупные светлые и мелкие темные гландулоциты. Последние с умеренно базофильными ядрами и выраженной пылевидной зернистостью цитоплазмы.
За счет существенного расширения микрососудов пучковой зоны местами с признаками гемостазов и периваскулярными отеками отмечается уплотнение пучков, часть эпителиоцитов в них оказываются деформированными, заметно преобладание мелких темных гландулоцитов с ядром, насыщенным гетерохроматином и базофильной цитоплазмой с мелкодисперсной зернистостью. Если ближе к клубочковой зоне крупные эндокриноциты с умеренно базофильным ядром и светлой цитоплазмой встречаются относительно редко, то в участках пучковой зоны, где деградация не выявляется, они преобладают. В гипертрофированной части пучковой зоны преобладающие эпителиоциты имеют четко выраженную плазмалемму, умеренно базофильные ядра, базофильную цитоплазму с пылевидной зернистостью.
Ширина сетчатой зоны в среднем в 1,76 раза больше, чем при стрессе, местами визуализируется её четкое обособление соединительнотканной перегородкой от мозгового вещества. Хаотически расположенные эпителиальные тяжи в основном содержат клетки средних размеров, с темной цитоплазмой, насыщенной пылевидными гранулами. Крупные эндокриноциты со светлой цитоплазмой и умеренно базофильным ядром встречаются реже, и, главным образом в участках, прилежащих к границе с мозговым веществом.
Топография сетчатой зоны и мозгового вещества нарушена таким образом, что часть эпителиальных тяжей сетчатой зоны заполняет центральную часть надпочечника, при этом тяжи хромаффинных клеток вытеснены в корковое вещество и часто доходят до его клубочковой зоны.
В отдельных участках сетчатой зоны коры, имеющей островковую архитектонику, визуализируются тяжи или скопления хромаффинных клеток, обособленных соединительнотканной капсулой. Среди них встречаются группы клеток с лизированными ядрами.
Воздействие препарата «Лигфол» обеспечивает сохранение целостности эндокриноцитов на 80-90% площади клубочковой зоны, в ней преобладают крупные светлые клетки с признаками секреторной активности. В пучковой зоне на 50% площади отмечено сохранение структуры гландулоцитов, а в сетчатой - на 90% площади эпителиальные тяжи имеют характерную архитектонику. Мелкие базофильные эндокриноциты в тяжах пучковой зоны составляют 70%, а в сетчатой - 80%.
В зоне мозгового вещества микрососуды, особенно венулы, расширены без признаков гемостаза. В тяжах хромаффинных клеток 85% составляют крупные светлые эндокриноциты, темные клетки группами встречаются на периферии зоны.
При воздействии препарата «Лигфол» в течение 14 суток развивающейся стресс-реакции значительные структурно-функциональные изменения в надпочечниках крольчих не выражены, кортикоциты и мозговые эндокриноциты не испытывают дефицита пластических материалов, как при стрессе, что создаёт условия для реализации ими адаптационно-компенсаторных возможностей, сохранения взаимосвязей структур гормонэпителиального комплекса и системы обеспечения, особенно в клубочковой и сетчатой зонах, и в меньшей степени - в пучковой зоне и мозговом веществе.
Ритмичный характер функционирования структур паренхиматозного и сосудистого компонентов коркового и мозгового вещества надпочечника у крольчих на фоне воздействия препарата «Лигфол» при индуцированном стрессе обеспечивает более раннюю экструзию в интраорганное сосудистое русло глюкокортикоидов (кортизола) эндокриноцитами пучковой зоны, затем экструзию катехоламинов эндокриноцитами мозгового вещества и только потом - экструзию минералокортикоидов и андрогенов эндокриноцитами клубочковой и сетчатой зон.