Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы 8
1.1 Функция селезенки в норме и патологии 8
1.2 Поражения селезенки у животных различной этиологии 12
1.3 Методы диагностики патологии селезенки 19
1.4 Сравнительная эффективность аутотрансплантации селезенки 24
1.5 Отдаленные последствия аутолиенотрансплантации у животных
2 Материал и методы исследований 33
3 Результаты собственных исследований
3.1 Клинико-биохимические изменения у крыс после спленэктомии 36
3.2 Морфологические изменения в организме крыс после спленэктомии..47
3.3 Клинико-биохимические изменения у крыс после аутосплентранс-плантции 54
3.4 Морфологические изменения в организме крыс через сутки после аутосплентрансплантации 64
3.5 Морфологические изменения в организме крыс через сутки после аутосплентрансплантации 72
3.6 Морфологические изменения в организме крыс через сутки после аутосплентрансплантации 81
3.7 Морфофункциональные изменения в организме собак после спленэктомии и аутосплентрансплантации 89
4 Анализ и обсуждение полученных данных 91
Заключение 112
Рекомендации по использованию научных выводов 114
Список литературы
- Поражения селезенки у животных различной этиологии
- Отдаленные последствия аутолиенотрансплантации у животных
- Клинико-биохимические изменения у крыс после аутосплентранс-плантции
- Морфологические изменения в организме крыс через сутки после аутосплентрансплантации
Введение к работе
Актуальность темы. Селезенка - основной орган фагоцитарной активности, бактериальный фильтр крови элиминирующий поврежденные эритроциты, лейкоциты, тромбоциты и чужеродные элементы. Она принимает участие в процессе свертывания крови, подавляет аутоиммунные процессы, выполняет функцию дифференцировки лейкоцитов и образования антител, тетра-пептида тафтсина. За последние годы исследователи обогатили сведения о структуре селезенки, иммунном и цитокиновом ответе в норме и патологии [Озерный Е.В., 2017; Rose А.Т., Newman M.I., Debelak J. et al., 2000; Power R.E., Kay E.W., Bouchier-Hayes D., 2002; Knezevic S., Stefanovic D., Petrovic M., Djordjevic Z., Matic S., Artiko V., Milovanovic A., Popovic M.A., 2002]. Повреждения селезенки сопровождаются кровопотерей, что способствует широкому распространению спленэктомий [Тимофеев СВ., 2006, 2008; Позябин СВ., 2006...2012; Кузьмичева Е.В., 2008; WhiieS.A. et.al., 2000; Ohanaca Е.С., 2001. Спленэктомия показана при гематологических и аутоиммунных заболеваниях, спленомегалии различного генеза, опухолях, инфарктах селезенки [Popovic М. et.al., 1997]. Описано состояние организма и его иммунной системы после спленэктомии, названное послеспленэктомическим гипоспленизмом, проявляющимся снижением общего тонуса, работоспособности, эмоциональной лабильностью, развитием стойкого тромбоцитоза и моноцитоза, снижением фагоцитарной активности лейкоцитов [Григорьев Е.Г., Апарцин К.А. и др., 2001; Позябин СВ., 2006...2012]. У спленэктомированых животных имеется риск развития крипто-генного сепсиса с коротким и неспецифическим продромальным периодом. Затем следуют септический шок и симптомы диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови [Черненко Н.В., 2006, 2008]. Наблюдений по аутолиено-трасплантации невелико, не разработан алгоритм диагностических мероприятий у разных видов животных. В последние годы начато изучение возможности пересадки эмбриональной селезеночной ткани в экспериментальных моделях. В частности, предлагается ксеногенная и аллогенная трансплантация на лабораторных мышах [Галибин О.В. и др., 2001; Mіко I. et al., 2001]. Однако до настоящего времени функционирование систем, органов и тканей после спленэктомии остаются не конца невыясненными. Все вышеизложенное свидетельствует об актуальности изучения проблем распознавания заболеваний селезенки, ее спленэктомии, пост спленэктомического синдрома, лечения животных с помощью аутолиенотрансплантации.
Цель настоящего исследования - разработать модель аутолиенотрансплантации у крыс, собак после спленэктомиии и на этом основании установить клинико-морфологические изменения.
В соответствие с этим были поставлены следующие задачи:
1.Провести спленэктомию и определить клинико-биохимические изменения в организме крыс и собак.
2.Установита структурно-функциональные изменеиия организма крыс и собак после резекции селезенки.
3.Воспроизвести различными методами аутолиенотрансплантацию у крыс.
4.Изучить отдаленные клннико - морфологические последствия аутолие-нотрансплантации на организм животных.
Научная новизна. Представлены новые данные о состоянии организма крыс и собак после спленэктомии и аутолиенотрансплантации. Проведены исследования по оценке сравнительной эффективности методов аутотрансплан-тации селезенки у крыс. Показана несостоятельность у крыс, после спленэктомии и аутолиенотрантации, клеточного иммунитета из-за видовых особенностей кроветворения и нарушения функции мононуклеарномакрофагальной системы. Выявленные клинические, гематологические, биохимические, морфологические изменения в организме животных позволяют рассмотреть особенности механизма структурно-функциональных перестроек после спленэктомии и аутотрансплантации у крыс и собак. Показано влияние спленэктомии на организм собак, декомпенсация защитных механизмов у крыс, что коррелирует с методами аутолиенотрансплантации и продолжительностью жизни животных. На основании гистологических, биохимических исследований выявлена вариабельность в формировании гемомикроциркуляторных структур во внеорган-ных образованиях селезеночной ткани - спленоидах у крыс и собак.
Теоретическая и практическая значимость. Научно обоснована и экспериментально подтверждена эффективность методов аутотрансплантации селезенки у животных различных видов, основанная на изучении клинических, гематологических, биохимических и морфологических особенностей. На крысах разработаны патологические модели для изучения неспецифической и специфической резистентности при сепсисе. На основании результатов исследований предложена методика для базы дальнейших исследований и совершенствований методов повышения резистентности организма и аутотрансплантации.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Универсальность спленэктомии и различие ответной реакции у животных.
2.Клинико-морфологические особенности послеоперационного периода у крыс и собак после спленэктомии.
3.Структурну-функциональиая характеристика в организме крыс е разли-ными методами аутолиенотрансплантацией селезенки.
4.Сравнителвная эффективности методов аутолианотрансплантации селезенки у крыс и патологическая модель септических процессов.
Методология и методы исследования.
Моделирование патологических процессов у крыс проводили современными методами, что позволило контролировать их генез. Клинические, биохимические, морфологические методы отражают состояние организма животных при постспленэктомическом синдроме. Доказана видовая особенность в генезе тромбоцитоза, лейкопении и эритропении после аутолиенотрансплантации. Полученные данные являются базой для возможной оценки эффективности лекарственных средств.
Апробация работы. Основные положения работы доложены, обсуждены и одобрены: на научной конференции молодых ученых ФГОУ ВПО МГАВ-МиБ имени К.И. Скрябина [Москва, 2012]; XX Международном ветеринарном конгрессе [Москва, 2012]; Международной научно - практической конференции: Современная наука: теоретический и практический взгляд, [Уфа, 2014]; Международной научной конференции: Современные аспекты сельскохозяйственной микробиологии, М.: РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева [Москва, 2016]; расширенном заседании кафедр: МГАВМиБ- МВA имени К.И. Скрябина [Москва, 2017].
Производственные испытания проходили на базе СББЖ г. Москвы.
Внедрение результатов исследований. Диссертация выполнена в рамках научно-исследовательской работы и внедрена на кафедре ветеринарной хирургии ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВA имени К.И. Скрябина. Разработанные методики лечения используются в СББЖ г. Москвы.
Публикации. По результатам исследований опубликованы 6 научных работ, 2 из которых в журналах, рекомендованных ВАК РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований (результатов исследований, обсуждения результатов исследований и заключения), выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 200 источников, из которых 78 зарубежных изданий, иллюстрирована 69 рисунками, 22 таблицами.
Поражения селезенки у животных различной этиологии
Изменение картины крови после спленэктомии свидетельствует о нарушении гемопоэтической функции в организме. В крови происходит снижение количества эритроцитов, гемоглобина и гематокрита. Новообразования селезенки приводят к изменению динамики лейкоцитов, у большинства собак происходит сдвиг лейкограммы влево. Однако у животных с лимфоцитарной лимфосаркомой, по сравнению с нормой, увеличивается количество лимфоцитов [Позябин С.В., 2006–2012]. Биохимические процессы, происходящие в организме собак после спленэкто-мии неспецифичны. Однако общий и прямой билирубин, аланин - аспар-татаминотрансферазы, щелочная фосфатаза, мочевина и креатинин больше отражают функциональное состояние печени, поджелудочной железы и почек. Клиническое течение радикальных и органосохраняю-щих операций на селезенке при травматических поражениях у собак различных пород, пола и возраста достаточно изучены. В то же время послеоперационные осложнения при спленэктомии, связанные с новообразованиями, послеоперационным гепатитом и панкреатитом, приводят к увеличению в сыворотке крови общего количества билирубина, АЛТ, но щелочная фосфатаза не повышается даже на 30 сутки после операции [Позябин С.В., 2012]. Продолжительность жизни собак, в зависимости от вида у них патологического процесса в селезенке, представлена впервые Позябиным С.В. [2012]. Он показал, что после удаления доброкачественных новообразований собаки живут до 1, 5 года, а с саркомой селезенки до 6 мес. В последнем случае развиваются метастазы в печени, легких, лимфатических узлах, коже и подкожной клетчатке. Это дополняет данные исследователей, утверждающих, что метастазирование при новообразовании первичной опухоли селезенки происходит только в печень и лимфатические узлы [Тейхман П., 1995; Позябин С.В., 2006– 2012; Batt R., Burrows C., 1994]. Научный подход к данной проблеме и полученные данные о распространенности, семиотике и клиническому течению хирургических патологий селезенки у собак имеют научную и практическую ценность [Позябин С.В., 2012]. Патологические процессы в селезенке у мелких домашних животных требуют ранней диагностики. Немногочисленные клинические и экспериментальные результаты применения аутолиенотрансплантации отмечают ее эффективность в раннем и отдаленном послеоперационном периоде [Абасов Б.Х. и др., 1982; Кузин М.И. и др., 1985; Бобров и др., 1986; Тихомирова и др., 1988; Szendroi Т. et al., 1997; Leemans R. et al., 1999].
Вместе с тем имеется большое количество противоречивых данных, указывающих на неэффективность или недостаточную эффективность этой операции [Eskiturk A. et al., 1995; Zhao В. et al., 1995; Tang W.H., et al., 2003]. Многие авторы отмечают недостаточную изученность, как клинических результатов применения данного метода, так и многих морфологических аспектов приживления и регенерации селезеночной ткани [Pisters P.W., Pachter H.L., 1994; Westermann J., Pabst R., 1997; Power R.E., et. al., 2002]. Ряд авторов показывают особенности иммунного ответа при спленэктомии [Llende M., Santiago-Delpin .A., Lavergne D.,1986].
Вероятно, поэтому до сих пор не существует единого мнения о целесообразности применения аутолиенотрансплантации при спленэкто-мии. В то же время углубленно и всесторонне изучают гетеротопиче-скую аутолиенотрансплантацию, морфофункциональное состояние трансплантата селезенки в отдаленные сроки [Кирпатовский И.Д., Смирнова Е.Д., 1972]. Так, Черненко Н.В. (2008) изучила динамику тканевых изменений трансплантата в течение 60 суток после операции. Биоаминсо-держащие структуры в фрагменте селезенки, уровень серотонина, гиста-мина и катехоламинов изменяются в процессе регенерации. Автор установила, что в процессе ангиогенеза и регенерации ткани трансплантата участвуют тучные клетки. Уже на 15 сутки на периферии трансплантата в сохраненных фолликулах появляются люминесцирующие внутрифолли-кулярные клетки. Регенерация селезеночной ткани сопровождается волнообразным и разнонаправленным колебанием уровня гистамина, серо-тонина и катехоламинов в люминесцирующих структурах трансплантата. Реваскуляризация и восстановление фолликулов происходит ближе к капсуле трансплантата [Черненко Н. В., 2008]. Изучение закономерностей течения постспленэктомического синдрома и аутосплентрансплантации является актуальной задачей современной ветеринарной медицины. Понимание и оценка течения такого процесса в сравнительном аспекте при различных методических подходах и патологических процессах дает возможность отработать алгоритм лечебных мероприятий, прогнозировать результаты лечения и профилактировать осложнения. .
Отдаленные последствия аутолиенотрансплантации у животных
Для проведения аутолиенотрансплантации нами использованы все этапы подготовки животного и оперативного удаления селезенки, которые описаны в предыдушей главе. После спленэктомии селезенку промывали физраствором, разрезали на две части и помещали ее в брюшную полость, к мышце или сосудам брыжейки. При первом способе у крыс после ауто-лиенотрансплантации наблюдается гипотермия, животные после наркоза вялые в течение нескольких часов, слабо реагируют на внешние раздражители. Через 18-24 часа у них возникает гиперпиретическая лихорадка, животные дрожат, съеживаются, шерсть у них вздыблена, дыхание и сердцебиение учащенные. Корм крысы не принимают, они мало двигаются и апатичны. В течение 2-3 суток крысы этой группы погибают. У вскрытых погибших крыс в брюшной полости обнаруживали соломенно-зеленого цвета экссудат. Внутренние органы были с геморрагическим воспалением, местами с участками некроза, особенно это касалось кишечника.
Крысы других групп аутолиенотрансплантацию переносили легче, на рисунках 23-25 показана техника такой операции. Крысы находились под наблюдением, у них определяли температуру, пульс и количество дыхательных движений. Уже через 1-2 часа после аутолиенотранспланта-ции они начинали реагировать на раздражители. Однако активность была снижена, соответственно и реакция на пищевой раздражитель. Температура, пульс и количество дыхательных движений в течение первых дней повышались, но затем все показатели резко увеличивались и находились на таком уровне до 14-15 дня (табл. 9-11, рис. 26-28). Полученные данные показывают, что аутолиенотрансплантация не безразлична для организма и развивается с обычной клинической картиной послеоперационного синдрома. Повышение температуры тела и изменение других клинических показателей – это отражение интенсивности воспалительной реакции в организме животных.
По поведению, активности они клинически не отличались от контрольных животных. У крыс после спленэктомии на 12 сутки температура тела понижается до нормы, но через короткое время поднимается выше прежних величин (рис. 26). Частота сердечных сокращений на 22-30% была выше, чем у контрольных животных (рис. 27), а дыхательных движений на 30-50% (рис. 28) во все периоды опыта. Затем у живот 58
ных 2 и 3 групп было отмечено учащение частоты пульса и количества дыхательных движений. Показатели температуры тела крыс в последующие сроки опыта, изменяются неоднозначно.
На 10 сутки после аутосплентрансплантации у крыс, независимо от метода проведенной операции, выражен лейкоцитоз с нейтрофилией, который затем регистрировали во все дни опыта (таблицы 13-18). В то же время количество гемоглобина, эритроцитов, лимфоцитов достоверно снижается.
Из приведенных таблиц видно, что выраженный лейкоцитоз у крыс появляется на трансплантат, находящийся в брыжейке. Анализ биохимических данных показывает, что в эти же сроки происходит сложная перестройка метаболизма. Изменения в крови крыс объясняются диспро-теинемией: регистрируются гиперпротеинемия и гиперальбуминемия, увеличивается количество АЛТ и появляется гипоглобулинемия. Другие биохимические показатели имеют тенденцию к изменениям, но они не характерны. По данным ряда авторов, после спленэктомии восприимчивость к инфекции увеличивается в 60-540 раз. Риск бактериемии возрастает в 8 раз, инфекционные осложнения при одних и тех же заболеваниях возникают в 58 раз чаще, чем у животных с сохраненным органом, а летальность - в 14 раз выше. Благоприятный исход спленэктомии объясняется появлением очагов резидуальной селезеночной ткани. Кроме того, в компенсаторном восстановлении иммунологических реакций, по мнению ряда авторов, принимает участие весь лимфоидный аппарат организма. Авторы достоверной разницы не выявили в восприимчивости к инфекциям и частоте злокачественных заболеваний после спленэктомии, что объясняет увеличением активности эффекторных клеток (Т-киллеров и макрофагов). Таблица 19 - Показатели хромопротеидного обмена у крыс с аутосплен трансплантацией к мышце брюшной стенки
Показатели крови До опыта Через 7 сутокпосле спленэктомии Через 14 сутокпосле спленэктомии Через 21 суткипосле спленэктомии
Общий белок, г/л 64,21± 1,04 68, 86±1,93 78,41 ± 6,88 89,18±3,17 Альбумины, г/л 29,23± 2,04 37,46±1,01 68,01± 4,08 66,11 ± 3,77 Глобулины, г/л 34,98± 2,04 31,40±2,39 10,40± 0.94 23,09± 3.34 Мочевина, ммоль/л 5.58± 0.53 6, 32 ± 0,79 6, 86 ± 0.55 6,84± 0.45
Креатинин, моль/л 59,18 ± 4.16 53,22 ± 4,38 48,55± 3,34 44,22±5,75 Общий билирубин,мкмоль/л 6,59±0,78 12,.23±2.34 17,52± 3,97 16,18±5,01 Прямой билирубин, мкмоль/л 2,02±0,57 5,88±ЗД) 5,93± 3,.15 6,14 ± 1,33 АСТ,нмоль/мл/мин 206,01± 3,04 266,20± 4,11 269,56 ± 6,80 294,18 ± 6,44 АЛТ нмоль/мл/мин 59,66± 1,84 55, 01 ± 2,95 60,32± 3,83 94,22±1,95 Щелочная фосфатаза, ед./л 160,66 ± 10,92 177,10± 22,19 178,92± 32, 01 199,84± 24,88 Примечание: р=0,05, р=0,01, р=0,001 У спленэктомированных крыс третьей группы (с аутрансплантаци-ей) при клиническом исследовании отмечали изменения с 1 по 7 сутки изучаемых показателей. После внесения трансплантатов к брюшине в крови всех животных этой группы выявили лимфоидный лейкоцитоз, что согласуется с данными других авторов. Затем у крыс возникало угнетенное состояние, резко повышалась температура тела, учащался пульс и частота дыхательных движений. У животных появлялись непроизвольные сокращения мышц туловища, животные дрожали и через 24-40 часов они погибали. Нам представляется, что данное состояние приводит к развитию постспленэктомической инфекции и сепсису, тромбозам с высоким процентом тяжелых осложнений и летальности. Это связано с недостатком иммуномодулирующих и биологически активных веществ - лимфо-кинов, монокинов, лейкотриенов, иммуноглобулинов, опсонинов, интер-феронов, лизоцима, пропердина. Недостаток тафтсина - глобулина, который вырабатывается селезенкой, приводит к нарушению стимулирования фагоцитарной активности нейтрофилов и дифференцировке Т- и В-лимфоцитов.
Показатели крови До опыта Через 7 суток после спленэктомии Через 14 суток после спленэктомии Через 21 сутки после спленэктомии
Общий белок, г/л 69,15± 3,00 65, 23±3,35 64,09± 5,15 58,47±2,99 Альбумины, г/л 30,18± 2,04 34,22±4,51 44,22± 3,05 47,35± 5,66 Глобулины, г/л 38,87± 1,97 31,03±3,42 15,67± 1,86 11,12 ± 2,52 Мочевина,ммоль/л 5,89± 079 4, 02 ± 0,49 4, 59± 0,92 3,90± 0,97 Креатинин,ммоль/л 54,13 ± 324 52,00 ± 3,55 45,31± 2,53 51,49±4,13
Показатели крови До опыта Через 7 суток после спленэктомии Через 14 суток после спленэктомии Через 21 сутки после спленэктомии
Общий билирубин, мкмоль/л 6,11±0,59 14,.48±5,02 15,97± 2,88 19,13±4,77 Прямой билирубин, мкмоль/л 2,26±0,34 5,90± 0,97 6,23± 0,15 6,99 ± 1,01 АСТ,нмоль/мл/мин. 201,89± 13,93 258,09± 14,21 296,66 ± 11,44 300,20 ± 26,00 АЛТ,нмоль/мл/мин. 69,01± 2,84 65, 99 ± 4,85 74,13± 5,90 89,92±7,77 Щелочная фосфатаза, ед./л 152,33 ± 14,22 189,44± 19,37 189,96± 21,10 198,99± 22,00 Примечание: р=0,05, р=0,01, р=0,001
Более полувека ученые исследуют значение тафтсина в патогенезе иммунодефицитов и сепсиса, но вопрос об этом остается пока открытым [Najjar V.A., Nishioka K., 1970; Nishioka K., 1979; Wleklik M., Panasiak W., Luszak M., 1988; Phillips J.H., Babcock G.F, Nishioka K., 1981; Nishioka K., Wagle J.R., Minter A.M., 1990; Nairn J.O., Lanzafame R.J., van Oss C.J., 1991; Zhang Y., Ma H., Cai Z., 1996 ]. Следовательно, разная степень интоксикации, временные параметры развития септических процессов приводили животных к гибели в разные сроки после трансплантации. Однако наши данные показывают, что чем ближе к сосудам были подсажены трансплантаты, тем дольшим оказывается срок жизни животных. Полученные нами данные позволяют полнее понять клинико-биохимические изменения у крыс после спленэктомии и трансплантации.
Клинико-биохимические изменения у крыс после аутосплентранс-плантции
При анализе полученных данных на крысах и собаках было интересно сравнить их с аналогичными, которые содержатся в медицинской и ветеринарной литературе, полученными на людях и разных видах животных. Медицинские исследователи занимаются этой проблемой давно. Ими отработаны самые разнообразные методические подходы при ауто-, гомо- и гетеротрансплантации. Современная аппаратура позволила шагнуть далеко вперед и обнадежить больных с патологией селезенки на самые оптимистические прогнозы. Оказалось, что литература по этому вопросу имеется разнообразная, начиная от простых манипуляций до самых совершенных. В ней изложены необычные взгляды и предположения, которые еще следует уточнять. Несмотря на то, что содержится много сведений, но они столь неоднородны, а иногда и противоречивы. В то же время на крысах спленэктомию и аутолиенотрансплантацию практически не выполняли. Почему? Проводя исследования на этом виде животных, мы стали понимать, что это не совсем удобный объект для такого моделирования. В этом разделе постараемся напомнить некоторые анатомические особенности строения селезенки, новые сведения о ней и с этих позиций объяснить полученные данные. В последние десятилетия исследователи изучают гематологические, иммунологические функции селезенки, ее анатомические особенности у человека, собак, кошек, кроликов, крыс, мышей [Гланц Р.М., Рожинский М.М., 1973; Ванько Л.В., Сухих Г.Х, Бабаева А.Г., Юдина Н.В., Сулейманова П.Д., 1984; Гринея М.В., Поташов Л.В., Видук П.И., Гринев К.М., 1986; Narogek, T., 1997; Wester-mann J., Pabst R., 1997; Budras K.-D., McCarthy P.H., Fricke W., 2002; Tang W.H., Wu F.L., Huang M.K., Friess H., 2003]. В связи с этим отношение к селезенке кардинально изменилось, о чем свидетельствует ретроспективный анализ литературы [Юдин М.Я., Лиепиньш М.А., Рубене М.Я., Афанасьев Г.В., 1989; Бордуновский В.Н., 1995; Абакумов М.М., Тверитнева Л.Ф., Титова Т.Н., Илышицкая Т.И., Хирурш Ч.Я., 1998; Григорьев Е.Г., Матинян Н.С., Аларацин К.А. ,1998; Зайцев В.Т., Голобородько М.К., Бойко В.В., 2000; Feeney D.A., Fletcher T.F., 1991; Schwartz S., 1994]. Установлено, что в селезенке вырабатывается большое количество имму-номодулирющих веществ – лимфокинов, монокинов, лейкотриенов, иммуноглобулинов, опсонинов, интерферонов, лизоцима, пропердина и других биологически активных веществ. Этот орган принимает участие в регуляции иммунного клиренса, созревании Т-лимфоцитов, антителогене-зе [Ванько Л.В., Сухих Г.Х, Бабаева А.Г., Юдина Н.В., Сулейманова П.Д., 1984; Strasser-Voge L.B., Belohradsky B.H., 1988], детоксикации бактериальных токсинов [Altamura M. et al., 2001]. Выявлено, что в селезенке содержится около 30% макрофагов всего организма. Причем 1 г селезеночной ткани поглощает микроорганизмов в 8-20 раз больше, чем 1 г печеночной [Бордуновский В.Н., 1995; Абакумов М.М., Тверитнева Л.Ф., Титова Т.Н., Илышицкая Т.И., Хирурш Ч.Я., 1998]. Селезенка элиминирует из кровотока поврежденные и стареющие эритроциты, лейко 92
циты, тромбоциты, продукты распада клеток и чужеродные вещества [Гринея М.В., Поташов Л.В., Видук П.И., Гринев К.М., 1986; Bohnsack J.F., Brown E.J., 1986]. Старые эритроциты подвергаются гемолизу вследствие сниженной осмотической резистентности, увеличения размеров, старения мембраны, а в синусоидах селезенки снижается осмотическое давление плазмы, поэтому макрофагам легче индефицировать патологические формы и фагоцитировать [Абакумов М.М., Тверитнева Л.Ф., Титова Т.Н., Илышицкая Т.И., Хирурш Ч.Я., 1998]. Известно, что в гликока-ликсе цитомембран старых эритроцитов содержится мало сиаловых кислот, благодаря чему они и распознаются макрофагами [Григорьев Е.Г., Матинян Н.С., Аларацин К.А., 1998; Зурнаджанца В.А., Назарочкина Ю.В., 1998]. Процесс фильтрации в селезенке происходит вне сосудистого русла, вследствие чего нет необходимости в выработке специальных фильтрующих элементов. Патологические клетки и чужеродные элементы небольших размеров задерживаются при замедленном токе крови в пульпе системой артерия – синус – вена с малым диаметром [Гланц Р.М., Рожинский М.М., 1973; Ванько Л.В., Сухих Г.Х, Бабаева А.Г., Юдина Н.В., Сулейманова П.Д., 1984; Гринея М.В., Поташов Л.В., Видук П.И., Гринев К.М., 1986; Юдин М.Я., Лиепиньш М.А., Рубене М.Я., Афанасьев Г.В., 1989]. Частицы, не проходящие через стенку синусов в кровяное русло, остаются в краевой зоне и в красной пульпе до 10-15 недель, где фагоцитируются макрофагальными клетками селезенки [Зурнаджанца В.А., Назарочкина Ю.В., 1998; Van Wyck D.B., et al., 1986]. Только этот факт наталкивает на мысль, что септические процессы в организме животных со спленэктомией будут иметь место. В какой степени изменяется ответная системная реакция животных на удаление селезенки – к сожалению, методы, которыми мы располагаем, не дают полного ответа на это. Селезенка способна вырабатывать антитела против всех бактерий, вирусов, многих простейших, токсинов, аутоантигенов. В ней вырабатывается антителообразующих клеток во много раз больше, чем в лимфатических узлах, и никакой другой орган не может компенсировать утраченной функции [Гланц Р.М., Рожинский М.М., 1973; Юдин М.Я., Лиепиньш М.А., Рубене М.Я., Афанасьев Г.В., 1989; Бордуновский В.Н., 1995]. Вот почему ее удаление приводит к многочисленным последствиям в организме [Григорьев Е.Г., Матинян Н.С., Аларацин К.А., 1998; Зайцев В.Т., Голобородько М.К., Бойко В.В., Голобородько В.М., 2000]. Функциональное состояние макрофагов, осуществляющих элиминацию старых и поврежденных эритроцитов, можно определить гистохимически при помощи реакции Перлса, которая выявляет содержание гемосидерина в макрофагах [Зайцев В.Т., Голобородько М.К., Бойко В.В., 2000; Мasuda Т. еt аl., 1993]. Установлено, что основной зоной, поглощающей гемоси-дерин, является красная пульпа, а в белой пульпе и краевой зоне накапливается лишь небольшой объем гемосидерина. Достаточно подробно изучены различные структурные изменения красной и белой пульпы, перифолликулярной и краевой зоны [Бордуновский В.Н., 1995; Григорьев Е.Г., Матинян Н.С., Аларацин К.А., 1998]. В последние годы для изучения морфофункциональных взаимоотношений селезенки предложены методы разделения красной и белой пульпы, перифолликулярной зоны. Некоторые авторы считают это важным, так как последняя расположена между красной зоной и красной пульпой. Эта зона является динамическим регионом, характеризующим клеточную и фенотипическую активность. В большинстве случаев перифолликулярная зона появляется как отделение красной пульпы, с эритроцитами, в отличие от типичной красной пульпы, состоящей из синусоидов [Григорьев Е.Г., Матинян Н.С., Аларацин К.А., 1998]. Лимфоциты могут мигрировать из белой пульпы в красную, и наоборот, но в селезенке существует сеть, состоящая из ретикулярных волокон, которые соединяют краевую зону с фолликулами и красной пульпой. Поэтому не все клетки могут осуществлять такие переходы [Гринея М.В., Поташов Л.В., Видук П.И., Гринев К.М., 1986; Голобородько М.В., 2000]. На наших гистопрепаратах хорошо видны вышеописанные зоны в трансплантатах и достаточно четко, по срокам опыта, изменяются соотношение и структура красной и белой пульпы. Правда, в основном это характеризуется уменьшением всех структур. Это говорит о резорбции селезеночной ткани в спленоиде, нарушении созревания клеток крови и уменьшении площади узелков. На 21 сутки опыта видны даже своеобразные тяжи еще функционирующей ткани. Исследователи пытаются выяснить механизмы иммунологической активности органа, связанной с циркуляцией крови в селезенке. К сожалению, остаются вопросы, связанные с выяснением взаимодействия Т- и В-лимфоцитов при выработке гуморального ответа на инфекционный агент и взаимоотношения внеклеточных и клеточных структур [Григорьев Е.Г., Матинян Н.С., Аларацин К.А., 1998; Зурнаджанца В.А., Назарочкина Ю.В., 1998]. Н.Л. Куш (1986) установил, что результат спленэктомии у детей при закрытых повреждениях селезенки зависит от закономерности послеоперационного периода. В частности, автор показал, что в отдаленном послеоперационном периоде имеется сходное состояние, названное им постспленэктомическим гипоспленизмом. Гипоспленотическое состояние характеризуется наличием в кровотоке измененных эритроцитов в соотношении более 12% от нормы. Некоторые авторы дополнили эту процедуру помещением в полость кисты сальника [Барр Ф., 1999; Бек А., 2001].
Морфологические изменения в организме крыс через сутки после аутосплентрансплантации
По мнению большинства исследователей, после спленэктомии развивается иммунный дефицит, что предрасполагает к генерализации инфекции и возникновению синдрома отягощенной первичной постспле-нэктомической инфекции, так называемый ОРSi-sindrome [Dujmovic F., 1993]. Этот термин был введен в 1969 году L.K.Diamond. По данным R.N. Davidson, R.A. Wall (2001) вероятность развития данного синдрома в настоящее время составляет 5%. Характерная картина синдрома постс-пленэктомической инфекции: лихорадка, тошнота, головная боль, общий упадок сил [Гланц Р.М., Рожинский М.М., 1973; Зайцев В.Т., Голобо-родько М.К., Бойко В.В., Голобородько, 2000].
Таким образом, нами установлено, что жизнедеятельность крыс с удаленной селезенкой по клиническим, гематологическим, биохимическим и морфологическим показателям отличается от контрольных. В первую очередь у экспериментальных животных изменяются в сторону увеличения показатели температуры тела, пульса и числа дыхательных движений. Особые проявления имеют гематологические показатели, которые после спленэктомии и к 210 суткам опыта имеют дисбаланс по соотношению форменных элементов крови. Эритропения и лейкопения у крыс несет за собой отрицательные последствия; в частности, такие животные имеют пониженный обмен веществ, резистентность, и они подвержены различным заболеваниям. Это закономерно, так как по сравнению с нормой снижается количество лимфоцитов, глобулинов. Наши клинико-экспериментальные исследования показывают, что после ауто-лиенотрансплантации косвенные показатели состояния иммунной системы у крыс, по сравнению со спленэктомированными, имеют отличия. В данном случае, вероятно, сказывается недостаток активного вещества, вырабатываемого селезенкой, тетрапептида – тафтсина. Он обладает гор-моноподобным, иммуномодулирующим свойством, усиливает резистентность, фагоцитоз, оказывает действие на моноциты / макрофаги, нейтро-филы, натуральные киллеры, т.е. на все клетки, где есть Fс-рецептор к IgG. Морфологические изменения в органах крыс после аутотрансплан-тации, в различные сроки после операции, продемонстрировали системную ответную реакцию организма. В частности, когда у крыс извлеченную из брюшной полости селезёнку, разрезали на части и снова располагали свободно в брюшной полости, результаты были отрицательные. Животные переносили оперативное вмешательство, отходили от наркоза, но в течение первых-вторых суток с клиническими признаками гипер-пиретической лихорадки погибали. При вскрытии павших животных обнаруживали геморрагическое воспаление кишечника, наличие в пери-тонеальной полости экссудата, изменение цвета печени. Следовательно, у крыс селезёнка после её удаления и последующего свободного введения в брюшинную полость не отторгается. Кроме того, она, лизируясь, губительно влияет на организм животного. Можно предположить, что была передозировка препаратов для наркоза, но препарат и дозы во всех сериях были одинаковыми. В литературе отмечается, что через 10-20 минут после введения золетила, УЗ, видимых изменений в органах не обнаруживается [Wleklik M., Panasiak W., Luszak M., 1988]. Так, в печени изменяется выраженность сосудистого рисунка и увеличиваются линейные гиперэхогенные структуры (стенки и диаметр каудальной полой вены, отходящие от неё печеночные вены). Визиализируются ранее не определяемые в паренхиме мелкие ветви кровеносных сосудов. Указанные изменения достигают максимума через 30-60 минут после введения золе-тила, но через 2,5-3 часа они возвращаются к первоначальным значениям. Нам представляется возможным сделать предположение, что ткань селезенки, богатая лимфоцитами, помещенная в брюшинную полость, подвергается аутолизу. В результате этого образуется большое количество биологически активных веществ, в частности интерлейкинов и тафтсина. Временное приживление селезеночной ткани к мышце и сосудам брыжейки происходит с формированием структурных элементов, которые не имеют дальнейшего развития и подвергаются некрозу. Нарушение функции мононуклеарномакрофагальной системы, различных барьерных приспособлений организма приводят к повышенному проникновению из крови к трансплантату пневмококков, ишерихий и других микроорганизмов. Условия некроза и лизиса трансплантата оказываются благоприятными для перехода асептического воспаления в септическое. Микроорганизмы, эндотоксины, биологически активные вещества первичного очага инфекции с синдромом системной реакции и полиорганной дисфункцией приводят к полиорганной недостаточности и сепсису. У собак процессы аутолиенотрансплантации проявляются достаточно выраженной функциональной активностью спленоида. Таким образом, спленэктомия и аутолиенотрансплантация у крыс и собак проявляется определенными стохастическими свойствами в организме, но позволяет проводить коррекцию реорганизации функций в послеоперационный период. Полученные данные являются базовыми для сравнительных исследований спленэктомий и аутолиенотрансплантаций у животных разного вида.