Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. Терапия боли в ветеринарии 9
1.1.1. Определение и диагностика боли 9
1.1.2. Классификация и патогенез боли и воспаления 13
1.1.3. Терапия боли 27
1.2 Современные нестероидные противовоспалительные препараты. Классификация. Механизм действия. 30
1.3. Побочные эффекты НПВП 35
1.3.1. Классификация побочных эффектов 35
1.3.2. Патогенез НПВП-индуциронных гастро- и энтеропатий 44
1.4. Новые терапевтические системы доставки лекарственных средств – желатиновые пленки 48
2. Собственные исследования 53
2.1. Материалы и методы исследования 53
2.1.1. Дизайн исследования по изучению токсического действия препаратов 53
2.1.2. Гематологические исследования 58
2.1.3. Биохимия сыворотки крови 59
2.1.4. Исследование скрытых поражений желудочно-кишечного тракта собак 60
2.1.5. Фармакокинетическое исследование препарата 61
2.1.6. Макроскопическая диагностика гастроэнтеропатий 63
2.2. Результаты собственных исследований 65
2.2.1. Результаты гематологических исследований 65
2.2.2. Результаты биохимических исследований 77
2.2.3. Результаты исследования скрытых поражений желудочно-кишечного тракта собак 88
2.2.4. Фармакокинетические исследования 89
2.2.5. Макроскопическая диагностика гастроэнтеропатий 92
2.2.6. Исследование структурных изменений слизистой оболочки органов желудочно-кишечного тракта 103
Изучение местно-раздражающего действия 103
3. Обсуждение результатов исследования 110
4. Заключение 114
4.1 Выводы 114
4.2 Практические предложения 116
Список сокращений 117
Список литературы 118
- Классификация и патогенез боли и воспаления
- Новые терапевтические системы доставки лекарственных средств – желатиновые пленки
- Результаты гематологических исследований
- Макроскопическая диагностика гастроэнтеропатий
Введение к работе
Актуальность работы. Среди заболеваний мелких домашних животных остро
стоит задача безопасного купирования боли различного генеза, а также вопрос
послеоперационной анальгезии. В этой связи, частота и широкий спектр применения
нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП) в ветеринарной медицине
определяются незаменимостью данной группы лекарственных средств при терапии
заболеваний, сопровождающихся воспалением и сильной болью (Ватников Ю.А.,
2012; Ягников С.А., Кулешова О.А., 2012; Позябин С.В., Подскребкина О.А, 2016;
Holloway H., 2012; Allweiler S., 2013; Messenger K., 2015). Препараты этой группы
оказывают специфическое негативное влияние на метаболизм слизистой оболочки
пищеварительного тракта, снижая ее защитный потенциал и устойчивость к
повреждающему агрессивному воздействию экзо- и эндогенных факторов. Наиболее
характерным проявлением системного негативного действия этих препаратов на
органы пищеварительной системы является гастроэнтеропатия - патология,
характеризующаяся появлением геморрагического воспаления слизистой,
кровотечений и эрозий, а также, прием препаратов данной группы оказывает
негативное действие на функционирование печени, почек и сердечно-сосудистую
систему (Насонов Е.Л., Каратеев А.Е с соавт., 2015; Балукова Е.В., 2017; Wooten J.,
Duncan B. et.al., 2012; Monteiro-Steagall B.P., Steagall P.V. et.al., 2013; McIlwraith C.W.,
Frisbie D.D., 2016). На сегодняшний день в ветеринарной медицине широко
применяются препараты с действующим веществом Карпрофен, которые выпускают
в двух лекарственных формах: таблетки и раствор для инъекций, при этом введение
таблеток оказывает раздражающее действие на слизистую оболочку желудочно-
кишечного тракта (ЖКТ), а применение инъекционных форм провоцирует
постинъекционный стресс у животных (Lascelles D. et al., 2014; Mathews K., Kronen P.,
2014; Epstein M., Rodanm I. et al., 2015; Rocca G., Catanzaro A. et al., 2015). В связи с
этим, разработка новых форм лекарственных средств, с повышенной
биодоступностью и минимизирующих нежелательное воздействие на желудочно-кишечный тракт животных представляется актуальной.
Степень разработанности темы исследования. Развитие ветеринарии и ветеринарной фармакологии требует разработки инновационных форм доставки лекарственных средств в очаг патологического процесса в организме животных (Антипов В.А., Трошин А.Н., 2014; Соколов В.Д., Андреева Н.Л., 2015). Многие заболевания, поражающие животных, сопровождаются развитием болевых симптомов и воспалительного процесса. Для терапии патологии такого рода используют нестероидные противовоспалительные средства, применение которых приводит к развитию нежелательных побочных эффектов (Лазаренко Л.В, Косарева П.В. с соавт., 2015; Scott H., 2012). Сегодня необходимо расширить научный поиск современных форм лекарственных средств, снижающих риск возникновения побочных эффектов и обеспечивающих простоту применения у домашних животных, представляется актуальной.
Цель исследования. Научно обосновать влияние лекарственных форм карпрофена на желудочно-кишечный тракт мелких домашних животных.
Задачи исследования:
1. Представить сравнительную характеристику лекарственных форм
Карпрофена в виде таблетки для перорального применения и пленки для суббукального применения и их биоэквивалентность.
-
Оценить клинико-морфологическую картину органов и клинико-морфологические изменения слизистой оболочки органов ЖКТ при применении лекарственного препарата Норокарп (МНН: Карпрофен) в лекарственной форме таблетки для перорального применения и пленки Карпрофен для суббукального применения на кроликах и морских свинках.
-
Изучить изменение клинико-биохимических показателей крови собак при терапии воспалительных процессов препаратом Норокарп (МНН: Карпрофен) в лекарственной форме таблетки для перорального применения и пленки Карпрофен для суббукального применения.
-
Разработать методические рекомендации по применению новой лекарственной формы пленки Карпрофен в практике ветеринарной медицины.
Научная новизна работы. Впервые в ветеринарии разработана новая
лекарственная форма препарата – пленка желатиновая, на основе действующего
вещества - карпрофен, который входит в группу нестероидных
противовоспалительных препаратов. Получены данные об изменении клинико-
морфологической картины органов желудочно-кишечного тракта при применении
препарата Карпрофен, пленки желатиновые по сравнению с препаратом –
«Норокарп», таблетки. На основании результатов клинико-морфологических
исследований и оценкой биодоступности препарата научно обоснована
эффективность применения препарата Карпрофен в виде новой лекарственной формы – пленка на желатиновой основе. Выявлено снижение патоморфологических изменений слизистой желудочно-кишечного тракта животных при применении исследуемого препарата, по сравнению с препаратом «Норокарп» в виде таблеток. Установлено, что понижается риск развития гастроэнтеропатии при применении препарата Карпрофен, пленка желатиновая по сравнению с таблетированной формой у кроликов, морских свинок и собак. Представлена сравнительная характеристика изменений клинико-биохимических показателей крови животных под влиянием пленок Карпрофен и таблеток Норокарп при выявленной патологии требующей коррекции НПВП.
Теоретическая и практическая значимость работы. Практическое значение
данной работы состоит в сравнительной оценке проявления патоморфологических
изменений при использовании различных лекарственных форм НПВП с
действующим веществом карпрофен на состояние слизистой оболочки желудочно-
кишечного тракта животных. А также, в оценке частоты возникновения и степени
выраженности возможных побочных эффектов при применении данной
лекарственной формы по сравнению с уже имеющейся таблетированной формой лекарственного препарата «Норокарп». Использование полученных результатов позволило разработать оптимальный способ применения пленок и возможность применения этого препарата в ветеринарной практике.
Методология и методы исследования. Методологической основой данного исследования явились научные положения отечественных и зарубежных авторов, оказавших влияние на поиск и разработку новых лекарственных форм препаратов для ветеринарного применения. Основа данного исследования заключалась в разработке новой лекарственной формы нестероидного противовоспалительного препарата и обосновании его применения в ветеринарной практике при купировании боли и воспалительных процессов у животных. Для решения поставленных задач применялись следующие методы исследования: анализ и обобщение литературных данных, клинические, биохимические, гистологические, фармакокинетические
методы исследования, макроскопическая оценка органов, статистический анализ данных.
Апробация работы. Основные положения работы доложены, обсуждены и одобрены: на заседании департамента ветеринарной медицины АТИ РУДН, III Международной научно-практической конференции «Современная парадигма научного знания: актуальность и перспективы», Москва, РУДН, 23 апреля 2015 г., IX Международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития», конкурс молодых ученых на лучшую научно-исследовательскую работу, Москва, Гостиный двор, 20-22 февраля 2017 г.
Внедрение результатов исследований. Результаты исследований внедрены в учебный процесс в департаменте ветеринарной медицины АТИ РУДН. Изданы методические рекомендации «Применение пленок на желатиновой основе в практике ветеринарной медицины» утвержденные Ученым советом АТИ РУДН.
Публикации результатов исследований. По теме диссертационной работы опубликовано 5 печатных работ, 3 из которых в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту.
1.Анализ клинических и биохимических показателей крови кроликов, морских свинок
и собак на фоне приема препаратов.
2.Исследование гастротоксического влияния различных лекарственных форм НПВП с
действующим веществом карпрофен у собак.
3.Макроскопическая картина клинических изменений органов желудочно-кишечного
тракта экспериментальных животных.
4.Сравнительная оценка проявления патоморфологических изменений при
использовании различных лекарственных форм НПВП с действующим веществом
карпрофен на состояние слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта животных
Объем и структура диссертации. Диссертация выполнена на 137 стр. машинописного текста. Состоит из введения, обзора научной литературы, собственных исследований, материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 199 источников, из них 107 отечественных и 92 иностранных авторов. Работа включает в себя 16 таблиц и 30 рисунков.
Классификация и патогенез боли и воспаления
Биологическое значение боли заключается в предупреждении и сохранении организма животного от угрожающего серьезным повреждением фактора. Таким образом, боль является «контролером» целостности покровных тканей и внутренних органов. Болевой симптом развивается каждый раз, когда возникает опасность нарушения этой целостности.
Существует множество характеристик боли. Классификация боли в большинстве случаев связана с самой причиной, вызвавшей боль, анатомической областью, в которой возникает ноцицептивный импульс, что очень важно для определения причины боли и последующего лечения [16].
В медицинских источниках предлагают классифицировать боль по локализации, месту повреждения структур нервной системы и по по временным характеристикам [16; 24].
Одним из наиболее существенных факторов в понимании феномена боли является разделение боли на острую и хроническую [24].
Острая боль - это новая, недавняя боль, неразрывно связанная с вызвавшим ее повреждением и, как правило, является симптомом какого-либо заболевания. Такая боль исчезает при устранении повреждения.
Хроническая боль часто приобретает статус самостоятельной болезни, продолжается длительный период времени даже после устранения причины, вызвавшей острую боль. Наиболее приемлемым сроком для оценки боли как хронической, считается ее продолжительность более 3 месяцев [16; 24].
Международная ветеринарная ассоциация мелких животных (WSAVA) в 2014 году выпустила «Руководство по диагностике, оценке и терапии боли», в котором опубликована следующая классификация боли.
Восприятие боли представляет собой конечный продукт работы сложной неврологической информационно-вычислительной системы организма, в результате взаимодействия вспомогательных и тормозящих путей периферической и центральной нервной системы.
Существует несколько различных типов боли: ноцицептивная, воспалительная и нейропатическая. Онкологическая боль часто объединяет в себе характеристики как воспалительной так и нейропатической боли.
Современные представления о формировании боли основаны на представлениях о существовании двух систем: ноцицептивной (НС) и антиноцицептивной (АНС) [163].
Термин ноцицепция – это нейрофизиологическое понятие, связанное с распознаванием болевых воздействий в чувствительных рецепторах центральной нервной системы, тем самым обеспечивая обработку информации о повреждении тканей и органов организма [159].
Tranquilli et. аl. определяют ноцицепцию как трансдукцию, трансмиссию, модуляцию и обработку центральной нервной системой сигналов, производимых при воздействии на специфические рецепторы. Передача сигнала происходит через три нейронные цепи. Болевой стимул активирует нейроны первого порядка и по периферическим афферентным волокнам сигнал передается в дорсальные рога спинного мозга. Далее нейроны второго порядка передают сигнал на уровень таламуса. Наконец, нейроны третьего порядка передают болевой сигнал в высшие центры головного мозга, в частности кору головного мозга, для восприятия воздействия [191].
Адаптивная «физиологическая» боль определяет наличие потенциально вредных стимулов и, следовательно, несет важную защитную функцию. Неадаптивная (патологическая) боль не дает биологического преимущества, потому что ее невозможно отделить от действия патогенного стимула или восстановления ткани, и обычно она является постоянной или рецидивирующей [53].
Боль воспалительного характера обычно связана с острой послеоперационной болью, а также воспалительными процессами, протекающими в организме. Интенсивность и длительность такой боли напрямую связаны с тяжестью и продолжительностью повреждения тканей.
Изменения в системе ноцицептивных рецепторов обычно являются обратимыми, а нормальное функционирование системы восстанавливается по мере заживления тканей. Однако, в случае воздействия серьезного болевого фактора высокой степени тяжести или хронического воспалительного процесса, болевой синдром будет сохраняться, как это бывает у собак с хроническими воспалительными заболеваниями такими как артрит, отит, гингивит, дерматит [139; 164].
Невропатическая боль инициируется первичным поражением, повреждением или дисфункцией периферической или центральной нервной системы. Далее развиваются множественные изменения в периферической нервной системе, спинном мозге, стволе головного мозга и мозге так как поврежденные нервы спонтанно возбуждаются и на фоне этого развивается гиперчувствительность, как к раздражителям воспалительного характера, так и к нормальным физиологическим раздражителям. Нейропатическая боль мало описана у животных в связи со сложностью ее диагностики. Профилактику боли нейропатического характера часто осуществляют путем правильного выбора и применения соответствующих анальгетиков.
Послеоперационная боль - постоянные боли после хирургического вмешательства являются неблагоприятным прогностическим фактором, оказывающим отрицательное действие на течение послеоперационного периода. Постоянные послеоперационные боли у собак и кошек трудно-выявляемы. Ветеринарные специалисты должны обращать свое внимание на существование риска проявления такого типа боли у мелких домашних животных.
Приступы неконтролируемой боли способны возникать при многих болезненных состояниях. Неконтролируемая боль, по сути, является резким, кратковременным и интенсивным болевым ощущением, которое проявляется даже при обезболивании и направленно на ослабление боли. Следует постоянно следить за назначением анальгетиков и изменять схему по мере необходимости после тщательной повторной диагностики пациента, чтобы убедиться в отсутствии факторов, вызывающих болевой симптом [164].
Не существует прямой связи между длительностью и интенсивностью повреждения, которая приводила бы к переходу острой боли к хронической. Однако, как и при нейропатической боли, первостепенное значение имеют адекватные меры по купированию острой боли для предотвращения переформирования ее в хроническую. Механизмы, связанные с переходом острой боли в хроническую выяснены не до конца. Их связывают с взаимодействием эндокринной, нервной, иммунной систем. Хотя не исключают и воздействия других факторов [9; 16; 53].
Патогенез боли.
На первом этапе формирования боли происходит активация болевых (ноцицептивных) рецепторов при возникновении воспалительного процесса. И болевые импульсы проходят к задним рогам спинного мозга [17].
Далее на сегментарном уровне происходит модуляция ноцицептивной афферентации и болевой импульс передается в ЦНС. В ЦНС происходит обработка и интерпретация информации о характере и локализации боли.
За формирование финального болевого ощущения отвечает антиноцицептивная система (АС).
Первое звено АС представлено воротным контролем боли на уровне заднего рога спинного мозга [32; 164].
Медиаторы антиноцицептивной системы
Эндогенные опиатные системы являются одним из механизмов контроля боли. Эти рецепторы располагаются в терминальных тонких А дельта и С-волоконах, в нейронах задних рогов спинного мозга, в ретикулярных ядрах ствола головного мозга, таламусе, лимбической системе [75]. На сегментарном спинальном уровне происходит модуляция ноцицептивной афферентации, которая осуществляется влиянием нисходящих антиноцицептивных систем на различные опиатные, адренергические, глутаматные, пуриновые и другие рецепторы, расположенные на нейронах заднего рога. Этот болевой импульс затем передается в вышележащие отделы центральной нервной системы (таламус, кора головного мозга), где происходит обработка и интерпретация информации о характере и локализации боли.
Новые терапевтические системы доставки лекарственных средств – желатиновые пленки
Наряду с традиционными лекарственными формами препаратов, характеризующимися неконтролируемым высвобождением ДВ, существуют формы лекарственных средств с модифицированным высвобождением, характеризующиеся изменением механизма и характера высвобождения действующего вещества [181]. Создание инновационных систем и средств доставки действующего вещества лекарственного препарата направлено на повышение терапевтической эффективности, переносимости и снижение риска появления побочных эффектов. Уже в 70-х годах 20 века проводились первые исследования по созданию быстрорастворимых таблеток и капсул, которые в дальнейшем способствовали переходу от простых таблеток к капсулам с модифицированным высвобождением и быстрораспадающимся таблеткам, а затем к быстрорастворимым желатиновым пленкам (ЖП) [31; 96].
В последние годы многие фармацевтические компании занимаются исследованиями в области быстрорастворимых препаратов. Технология создания таких препаратов развивалась на протяжении последних нескольких лет [71; 110]. Например, пластинки для освежения дыхания широко распространены на рынке препаратов, предназначенных для гигиены полости рта. Технология доставки быстрорастворимых препаратов подходит для тех препаратов, которые подвергаются быстрому первичному метаболизму и используется для повышения биодоступности с одновременным уменьшением дозировки действующего вещества, что, в свою очередь, способно привести к минимизации неблагоприятных/побочных эффектов [97; 149].
Пленки разрабатывались на основе технологии трансдермальных терапевтических систем и представляют собой тонкие пленки по внешнему виду напоминающие почтовые марки, содержащие один или несколько активных и вспомогательных компонентов. Такие пленки размещают на слизистой оболочке полости рта (щеки, небо) и в процессе растворения из них высвобождаются активные компоненты [38; 62; 114; 115].
Пероральная быстрорастворимая пленка – это новый способ системы доставки лекарственных веществ, который обеспечивает быстрое (в течение 2-60 секунд) растворение пленки в ротовой полости без приема воды [182]. В состав таких пленок входят полимеры, активные фармацевтические ингредиенты, пластификаторы, стимуляторы слюноотделения, подсластители, ароматизаторы, консерванты и красители [126; 149].
Технологии быстрорастворимых лекарственных форм создавались для решения проблем глотания ЛП у некоторых групп пациентов [5; 47; 58].
Существующие лекарственные формы для полости рта:
1. сублингвальные (быстрораспадающиеся таблетки, мягкие желатиновые капсулы, которые содержат жидкие формы лекарственных веществ) Создают высокие концентрации ЛВ в сублингвальной области;
2. буккальные (пластыри, пленки) Используются для замедленного высвобождения и всасывания ЛВ.
Такие формы могут быть использованы как для локального действия непосредственно в полости рта, так и для системного действия.
Выделяют ряд важных свойств, которые характеризуют ротовую полость как путь введения ЛС:
- относительная высокая проницаемость слизистой оболочки,
- богатый кровоток, -высокая устойчивость слизистой оболочки к различным повреждениям,
- регенераторная способность,
- образование слюны.
Существуют два механизма проникновения ЛС через слизистую оболочку ротовой полости:
1.Трансцеллюлярный - через клеточные липофильные мембраны, что свойственно липофильным лекарственным веществам;
2.Парацеллюлярный - через гидрофильное межклеточное пространство, что свойственно гидрофильным лекарственным веществам.
Основным механизмом при всасывании в ротовой полости считают преимущественно парацеллюлярную пассивную диффузию [65]. Также выделяют основные физикохимические свойства лекарственных веществ, которые могут оказывать влияние на всасывание через слизистую оболочку ротовой полости: гидрофильность, молекулярная масса и полярность.
Сублингвальные и буккальные формы в свою очередь различаются анатомическим местом всасывания и проницаемостью для них разных отделов слизистой оболочки ротовой полости.
Сублингвальная слизистая оболочка, локализованная на нижней поверхности языка и дне ротовой полости, характеризуется высокой проницаемостью, высокой скоростью всасывания и удовлетворительной биодоступностью для многих ЛС.
Буккальная (защечная) область имеет меньшую проницаемость для ЛВ и не обеспечивает настолько же быстрое всасывание и хорошую биодоступность ЛВ, как сублингвальная область. Однако, с другой стороны, эта область содержит выраженный мышечный слой и менее подвижную слизистую оболочку, что в свою очередь создает условия для применения адгезивных форм лекарственных препаратов, например пластырей или пленок. Для улучшения всасывания ЛВ в буккальной области используют дополнительные вещества [175].
Эти вещества могут быть матриксного типа, в которых ЛВ смешано, растворено или диспергировано в матриксе, и резервуарного типа в виде специального пластыря, имеющего несколько слоев – адгезивный, промежуточный и слой (или полость) с ЛВ [58; 59].
В состав БПР традиционно входят: лекарственное вещество (5-30%); гидрофильный полимер (45%); пластификаторы (0-20%); поверхностноактивные вещества; корригенты вкуса (3-6%); стимуляторы выработки слюны (2-6%); корригенты цвета и запаха и другие вспомогательные вещества (47, 135). В качестве основы пленки могут быть использованы как природные (пуллулан, желатин, модифицированный крахмал и др.), так и синтетические и полусинтетические полимеры (производные целлюлозы, производные акриловой кислоты, полиэтиленоксид и др.) [31; 136].
Далее рассмотрим преимущества и недостатки быстрорастворимых пленок по сравнению с традиционными пероральными формами лекарственных средств.
Преимущества желатиновых пленок:
1. Доступность большой площади взаимодействия с пленкой (слизистая ротовой полости), способствует быстрому растворению пленки и всасыванию активного компонента в кровоток
2. Увеличение биодоступности препарата достигается за счет того, что действующее вещество попадает в кровоток и не подвергается разрушению в агрессивной среде жкт, минует этап пресистемного метаболизма в печени
3. Высокая биодоступность и, как следствие, более быстрое наступление терапевтического эффекта позволяет использовать минимальные дозы действующего вещества, что в свою очередь позволяет снижать проявление побочных эффектов
4. Простота использования и как следствие, удобство применения в практике ветеринарной медицины
5. Точное дозирование действующего вещества в пленке, по сравнению с жидкими формами лекарственных средств
6. Локальное действие при заболеваниях полости рта (травмы слизистой, стоматиты, гингивиты, прорезывание зубов)
Недостатки пленок:
1. Наличие в слюне протеаз, которые могут приводить к деградации лекарственного вещества и снижению их стабильности
2. При применении с целью достижения локального действия – неравномерное распределение активного вещества в слюне и ротовой полости и возможность быстрой элиминации действующего вещества в процессе акта глотания
3. Возможное проявление местнораздражающего действия
4. Трудность включения в состав пленки больших доз активного вещества
5. Гигроскопичность пленки при отсутствии упаковки, т.о. пленки требуют специальной дорогостоящей упаковки
Результаты гематологических исследований
По данным литературных источников, гематологический анализ крови не дает полной картины для выявления побочных эффектов, вызванных применением НПВП [169; 172]. В некоторых случаях можно наблюдать картину, характерную для анемий различного генеза [144].
Гематологические показатели крови подопытных животных, получавших пленки Карпрофен и таблетки «Норокарп» представлены в таблицах 7 а,б для кроликов и 8 а,б для морских свинок. Гематологические показатели крови собак представлены в таблице 9.
Число степеней свободы f=10, p=0,05, t.st.табл.=2,23. В нашем исследовании в группах кроликов не было выявлено отклонения фоновых клинических показателей крови (1-е сутки) от норм для вида, а также от показателей в контрольной группе, кроме показателя уровня Лимфоцитов и Гемоглобина, которые незначительно отличались от нормы. Уровень Лимфоцитов в группах I-V составлял 31,57±1,86; 33,71±1,08; 33±2,84; 30,29±1,64; 31,57±1,86 соответственно при норме 35-76%. Гемоглобин в группах I- IV составлял 103,17±3,95; 102,17±6,13; 103,67±5,49; 103±4 соответственно при норме 105-170г/л. Также уровень гематокрита в группе III на 15,7% ниже по сравнению с контрольной группой, что может быть связано с влиянием экзогенных факторов (адаптации, кормления и содержания животных).
Число степеней свободы f=10, p=0,05, t.st.табл.=2,23. Из полученных результатов видно, что гематологические показатели крови животных при определении на 30-й день исследования после начала дачи препаратов не превышают норм для данного вида (кролики). К 30-м суткам наблюдения мы выявили снижение показателя уровня Эритроцитов в группе I Карпрофен 4 мг/кг на 8,2%, III Норокарп таб. 4 мг/кг на 27,2%, IV Норокарп таб. 8 мг/кг на 2,4%, V Контроль на 10,1% и увеличение в группе II Карпрофен 8 мг/кг на 5,3%. Эти показатели для групп I-V составляли 4,93±0,26; 5,98±0,77; 4,27±0,54; 4,90±0,25; 4,88±0,29 при норме 5-7,6 1012/л. Уровень Лимфоцитов в группе II Карпрофен 8 мг/кг снизился на 14,8%, III Норокарп таб. 4 мг/кг на 18,6%, IV Норокарп таб. 8 мг/кг на 16,0%. Уровень Гемоглобина в группе II Карпрофен 8 мг/кг снизился на 3,5%, III Норокарп таб. 4 мг/кг на 15,9%, IV Норокарп таб. 8 мг/кг на 10,4%, в контрольной группе на 15,2%. Уровень Гематокрита в группе I Карпрофен 4 мг/кг снизился на 5,2%, III Норокарп таб. 4 мг/кг на 8,6%, IV Норокарп таб. 8 мг/кг на 8,3%, V Контроль на 14,5%, увеличился в группе II Карпрофен 8 мг/кг на 1,5% Статистически значимо от показателей контрольной группы, отличаются показатели Распределения эритроцитов (RBC) в крови в группе I, II, III и IV. Этот показатель в группе I на 19,7% ниже по сравнению с контрольной группой, II на 28,2; III на 22,9; IV на 18,9 % ниже соответственно. В группе IV показатель Средней концентрации гемоглобина (Hb) в эритроцитах на 6,9 % выше по сравнению с контролем.
Число степеней свободы f=14, p=0,05, t.st.табл.=2,15. Из полученных результатов видно, что гематологические показатели крови животных при определении до начала дачи препаратов (1-е сутки) не превышают норм для данного вида (морские свинки). Показатели животных экспериментальных групп статистически значимо не отличаются от показателей животных в контрольной группе. Статистически значимо отличаются показатели количества Лимфоцитов и Тромбоцитов в крови при сравнении между собой групп II Карпрофен 8 мг/кг и IV Норокарп 8 мг/кг. Уровень Лимфоцитов во II группе на 19,3% выше, чем в IV, но статистически достоверно не отличается от контрольной группы. Что может быть связано с индивидуальными особенностями животных. А уровень тромбоцитов в IV группе на 16,5% выше, чем во II и также статистически достоверно не отличается от контрольной группы. Повышение уровня Тромбоцитов в крови можно связать со стрессом, который испытывает животное во время процедуры забора крови.
Число степеней свободы f=14, p=0,05, t.st.табл.=2,15. На 30 день после начала исследования мы выявили отклонения уровня Эритроцитов, Гемоглобина, Гематокрита и Лимфоцитов. Уровень Эритроцитов группе I Карпрофен 4 мг/кг к 30-му дню снизился на 10,8%, II Карпрофен 8 мг/кг на 12,4%, III Норокарп таб. 4 мг/кг на 15,9%, IV Норокарп таб. 8 мг/кг на 20,2%. Уровень Гемоглобина в группе I Карпрофен 4 мг/кг снизился на 5,8%, II Карпрофен 8 мг/кг увеличился на 14,9%, IV Норокарп таб. 8 мг/кг увеличился на 4,9%. Уровень Гематокрита в группе II Карпрофен 8 мг/кг уменьшился на 8,9%, III Норокарп таб. 4 мг/кг на 7,8%, IV Норокарп таб. 8 мг/кг на 11,7%. Уровень Лимфоцитов в группе I Карпрофен 4 мг/кг уменьшился на 4,6%, II Карпрофен 8 мг/кг на 11,9%, III Норокарп таб. 4 мг/кг на 8,7%, IV Норокарп таб. 8 мг/кг на 0,4%, в контроле увеличился на 1,1%Показатели животных экспериментальных групп статистически значимо не отличаются от показателей животных в контрольной группе, кроме уровня эритроцитов в крови. Этот показатель в группе IV Норокарп 8 мг/кг на 25,6% ниже по сравнению с контрольной группой животных и на 16,3% ниже минимального значения нормы для данного показателя у морских свинок (4,5-6,4). Снижение уровня Эритроцитов в крови может быть связано с развитием анемии в связи с дачей препарата «Норокарп» в дозе превышающей терапевтическую в 2 раза.
В первой группе собак (N=7), получавших Карпрофен пленки на 3-и сутки наблюдали снижение показателей уровня гематокрита на 4,9%, лимфоцитов на 7,9%, лимфоцитов на 40,9% (р0,05) и увеличение уровня эритроцитов на 3,3%. Во второй группе собак (N=5) получавших Норокарп таблетки снижение уровня эритроцитов на 12,0% (р0,05), лимфоцитов на 30,1% (р0,05) и увеличение уровня гематокрита 6,4%. В третьей группе собак (N=6) на 8-е сутки после дачи пленок наблюдали увеличение уровня эритроцитов на 3,5% и снижение уровня лейкоцитов на 34,8% (р0,05) и лимфоцитов на 29,2% (р0,05). В группе 4 на 8-е сутки применения Норокарпа наблюдали снижение показателей уровня эритроцитов на 2,1%, гемоглобина на 10,5%, лейкоцитов на 36,0% (р0,05) и лимфоцитов на 18,9%.
Исходя из полученных результатов, можно сделать вывод, что данные клинического анализа крови, действительно, не дают четких представлений о возможных поражениях слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта при применении препаратов группы НПВП с ДВ: Карпрофен в течение 30 дней. Однако, по результатам анализа полученных данных, можно говорить о начале развития анемического процесса в группах животных, принимавших Норокарп в виде таблеток, о чем свидетельствует достоверное снижение уровня эритроцитов у кроликов III и IV группах на 27,2 и 2,4%, у морских свинок в аналогичных группах на 15,9 и 20,2%, у собак, получавших Норокарп таблетки на 12,0% на 3-и сутки и на 2,1% на 8-е сутки.
Макроскопическая диагностика гастроэнтеропатий
Результаты макроскопической оценки гастро-энтеротоксичности препаратов представлены в таблицах 16-19.
У кроликов в группе III Норокарп 4 мг/кг частота встречаемости патологии слизистой оболочки желудка в 2,75 раза превышает аналогичный показатель в группе I Карпрофен 4 мг/кг. В группе IV Норокарп 8 мг/кг – в 2,60 раза.
У кроликов в группах тест препарата Карпрофен чаще всего диагностировали гиперемию слизистой оболочки желудка и петехии. В группе кроликов IV Норокарп 8 мг/кг диагностировали также петехии у всех животных в группе и эрозии (50,0%). В контрольной группе кроликов у 2 из 6 (33,3%) животных обнаружили незначительную по степени выраженности гиперемию слизистой оболочки желудка.
У кроликов из III и IV групп наблюдали гиперемию слизистой оболочки желудка, множественные петехии, расположенные на слизистой тела желудка, а также эрозии антрального отдела (рис. 11, 12, 13).
У морских свинок в группе III Норокарп 4 мг/кг частота встречаемости патологий слизистой оболочки желудка в 3,75 раза превышает аналогичный показатель в группе I Карпрофен 4 мг/кг. В группе IV Норокарп 8 мг/кг – в 2,12 раза.
У морских свинок в группах Карпрофен диагностировали гиперемию, петехии и эрозии. В группе 4 мг/кг – 25,0%, 25,0% животных, в группе 8 мг/кг – 37,5%, 50,0%, 12,5% животных соответственно. В группе III Норокарп 4 мг/кг – гиперемия 37,5%, петехии 75,0%, эрозии 25,0%. В группе IV Норокарп 8 мг/кг – гиперемия 62,5%, петехии 75,0%, эрозии 75,0%. В контрольной группе у двух животного была выявлена гиперемия слизистой оболочки желудка.
У кроликов в группах тест препарата Карпрофен диагностировали гиперемию слизистой оболочки тонкого кишечника, в группе II гиперемию и петехии. В группе кроликов, получавших таблетки Норокапр также диагностировали гиперемию и петехии. Более выраженных и значительных поражений слизистой обнаружено не было. В контрольной группе кроликов патологий не было обнаружено.
У морских свинок в группах Карпрофен диагностировали гиперемию и петехии. В группе 4 мг/кг – 12,5%, 12,5% животных, в группе 8 мг/кг – 12,5%, 12,5% животных соответственно. В группе III Норокарп 4 мг/кг – гиперемия 25,0%, петехии 25,0%. В группе IV Норокарп 8 мг/кг – гиперемия 37,5%, петехии 25%. В контрольной группе животных патологий не выявили.
Таким образом, гастротоксичность пленок по сравнению с таблетками в 2,60 у кроликов и 2,63 у морских свинок раза ниже (по количеству диагностированных поражений) в группах животных, получавших дозу в два раза выше терапевтической. И в 2,75 и 3,75 раза ниже у групп животных, получавших терапевтическую дозу препарата. Что касается энтеротоксичности препаратов, то непродолжительный курс приема НПВП (в различных лекарственных формах) не оказывает значительного эффекта на слизистую оболочку тонкого кишечника.
Прием НПВП в течение 30 дней оказывает значительное влияние на слизистую оболочку желудка животных. При этом наблюдается явное снижение гастротоксичности препарата в леарственной форме пленки желатиновые, по сравнению с таблетированной формой, даже в дозе превышающей в 2 раза терапевтическую.