Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы 11
1.1 Этиология возникновения и патогенез миокардиодистрофии у спортивных лошадей 11
1.2 Диагностика и дифференциальная диагностика миокардиодистрофии у спортивных лошадей 12
1.3 Лечение и профилактика миокардиодистрофии спортивных лошадей 16
1.4 Морфофункциональные особенности миокарда у животных 19
1.5 Фармакологическая эффективность глицирризиновой кислоты 22
2 Собственные исследования 30
2.1 Материалы и методы исследований 30
2.2. Результаты собственных исследований 38
2.1.1 Электрокардиографические и макроскопические исследования миокарда крыс на фоне применении глицирризиновой кислоты при адреналиновой нагрузке 39
2.2.2 Гистологическая и гистохимическая картина миокарда крыс через 24 часа после применения адреналиновой пробы повреждения миокарда 42
2.2.3 Гистологическая и гистохимическая картина миокарда крыс через 30 дней после применения адреналиновой пробы повреждения миокарда 50
2.2.4 Результаты иммуногистохимических исследований миокарда крыс через 30 дней после применения адреналиновой пробы повреждения миокарда 56
2.3 Результаты клинического и электрокардиографического исследования у спортивных лошадей 66
2.4 Результаты гематологических и биохимических исследований крови спортивных лошадей 72
2.5 Диагностические и лечебно – профилактические мероприятия при миокардиодистрофии у спортивных лошадей с применением глицирризиновой кислоты 75
Обсуждение результатов исследований 87
Заключение 96
Предложения производству и перспективы дальнейших исследований 98
Список литературы
Приложения
- Диагностика и дифференциальная диагностика миокардиодистрофии у спортивных лошадей
- Фармакологическая эффективность глицирризиновой кислоты
- Гистологическая и гистохимическая картина миокарда крыс через 30 дней после применения адреналиновой пробы повреждения миокарда
- Диагностические и лечебно – профилактические мероприятия при миокардиодистрофии у спортивных лошадей с применением глицирризиновой кислоты
Введение к работе
Актуальность темы исследования. Система сердца - одна из важнейших систем организма животных и человека. Заболевания этой системы у спортивных лошадей нередко составляют от 4,5 до 35% общего числа внутренних незаразных болезней. Болезни сердца и кровеносных сосудов у животных чаще встречаются как осложнения инфекционных и инвазионных, а также многих незаразных заболеваний. Нередко животные гибнут вскоре после ликвидации основного заболевания из-за необратимых дегенеративных изменений токсической природы, происходящих в сердце и сосудах .
По данным отечественных и зарубежных авторов у 20-34% рысаков и спортивных лошадей обнаруживается миокардиодистрофия (В. Б. Рииф, М. Дж. Реймер, 1992; Ж. В. Вараксина, 2002; О. В. Нижегородова, 2006; Орлова Н. Е. 2010; Гущин А. И., Шестакова А. Н., С. Н. Копылов, 2016, Икаева, К. С., Р. Ш. Омаров, 2017).
Разработка новых лекарственных препаратов для лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы и создание новых методов лечения на основании уже имеющихся препаратов является актуальной проблемой в спортивном коневодстве.
В настоящее время интерес к лечению лекарственными средствами на
растительной основе регулярно растет, так как фитопрепараты имеют хорошую
эффективность и безвредность по сравнению с химическими лекарственными
средствами. Считается, что лекарственные препараты растительного
происхождения представляют ценный биогенетический комплекс, содержащие в себе: витамины, микроэлементы и другие вещества. Именно особенности состава растительных средств являются основой их достоинств перед синтетическими лекарственными средствами (Хисамутдинова Р. Ю., Зарудий Ф. С., 2007; Базекин Г. В., Исмагилова А. Ф, 2010). Данные факты послужили основным фактором создания новых средств лечения миокардиодистрофии спортивных лошадей.
Степень разработанности темы исследования. В изучение аспектов
этиологии, патогенеза, клиники, лечения и профилактики заболеваний сердечно-сосудистой системы у спортивных лошадей большой вклад внесли Вараксина Ж. В. (2002); Нижегородова О. В. (2006); Орлова Н. Е.(2010); Гущин А. И., Шестакова А. Н., С. Н. Копылов (2016), Икаева, К. С., Р. Ш. Омаров (2017) и др.
В изучение фармакодинамики и фармакологических свойств
глицирризиновой кислоты внесли вклад Базекин Г. В., Исмагилова А. Ф. (1999,
2005, 2013, 2015); Хисамутдинова Р. Ю., Зарудий Ф. С. (2007); Балтина Л. А., Столярова О. В., с соавт. (2009, 2012, 2014). Однако, кардиопротекторные свойства глицирризиновой кислоты изучены недостаточно.
Цель работы: изучить клинические показатели и функциональную морфологию сердца спортивных лошадей на фоне применения глицирризиновой кислоты.
Задачи исследования:
-
Провести электрокардиографические и макроскопические исследования сердца крыс на фоне применения глицирризиновой кислоты при адреналиновой нагрузке.
-
Изучить гистологические и иммуногистохимические изменения сердечной мышцы крыс при адреналиновой модели повреждения миокарда после применения глицирризиновой кислоты.
-
Провести клинические и электрокардиографические исследования сердца у спортивных лошадей при применении глицирризиновой кислоты.
-
Изучить гематологические и биохимические показатели крови у спортивных лошадей при использовании глицирризиновой кислоты.
-
Провести диагностические и лечебно-профилактические мероприятия при миокардиодистрофии у спортивных лошадей с применением глицирризиновой кислоты.
Научная новизна. На основе клинических, электрокардиографических,
гистологических, гистохимических и иммуногистохимических методов
исследований впервые изучены и установлены кардиопротекторные и антиапоптические свойства глицирризиновой кислоты у экспериментальных крыс при помощи адреналиновой модели повреждения миокарда. Установлено, что применение глицирризиновой кислоты в течение 14 дней в дозе 50 мг/кг предотвращает выраженные патоморфологические изменения в миокарде у экспериментальных крыс, подвергшихся адреналиновой нагрузке (4 мг/кг).
Были разработаны показания к применению и оптимальная доза
глицирризновой кислоты при миокардиодистрофии спортивных лошадей.
Введение в организм спортивных лошадей глицирризиновой кислоты в дозе 50
мг/кг, оказывает наиболее стимулирующее влияние на эритропоэз и лейкопоэз.
Полученные данные расширяют и дополняют представление о
клинико-морфологической характеристике сердца спортивных лошадей на фоне применения глицирризиновой кислоты.
Теоретическая и практическая значимость работы. Практическая ценность результатов исследования заключается в раскрытии гистологических и
иммуноморфологических изменений миокарда крыс при применении
глицирризиновой кислоты на фоне использования адреналиновой нагрузки на
миокард экспериментальных крыс. Глицирризиновая кислота в миокарде крыс
стимулирует повышенную экспрессию клетками тканевого ингибитора
металлопротеиназы-2 (TIMP-2), которая, обладая антиапоптическим эффектом, способствует росту и выживаемости тканеспецифичных клеток (кардиомиоцитов), проявляет и кардиопротекторный эффект.
На основании проведенных исследований, научно обоснована и внедрена методика применения глицирризиновой кислоты при миокардиодистрофии у спортивных лошадей в ветеринарную практику.
Материалы диссертационной работы могут быть использованы при профилактике и лечении спортивных лошадей, при создании методических пособий по гистологии, анатомии, клинической диагностике, а также в учебных процессах на ветеринарных и биологических факультетах.
По результатам научно-производственных исследований разработаны научно-практические рекомендации «Применение глицирризиновой кислоты в спортивном коневодстве при лечении заболеваний сердечно-сосудистой системы», утвержденные Министерством сельского хозяйства Республики Башкортостан.
Методология и методы исследования. В ходе работы использовались методы научного поиска, анализ, сравнение, обобщение, методы современной диагностики, раскрывающие и уточняющие патогенез проявления заболеваний сердечно-сосудистой системы у животных. Объектом исследований являлись подопытные крысы и спортивные лошади породы русский рысак, орловский рысак и ганноверской породы. Обоснования методологических подходов проводили с учетом актуальности, цели, задач исследований, анализа данных отечественной и зарубежной литературы по теме исследований и результатов собственных исследований. Полученные числовые данные подвергали статистической обработке с использованием пакета статистического анализа для Microsoft Excel.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Результаты электрокардиографического и макроскопического
исследования сердца крыс на фоне применения глицирризиновой кислоты при
адреналиновой нагрузке.
2. Гистологические и иммуногистохимические изменения сердечной мышцы
крыс при адреналиновой модели повреждения миокарда после применения
глицирризиновой кислоты.
3. Результаты клинических и электрокардиографических исследований
сердца у спортивных лошадей при применении глицирризиновой кислоты.
4. Гематологические и биохимические показатели крови у спортивных
лошадей при использовании глицирризиновой кислоты.
5. Результаты диагностических и лечебно-профилактических мероприятий
при миокардиодистрофии у спортивных лошадей с применением глицирризиновой
кислоты.
Степень достоверности и апробация работы. Достоверность результатов, полученных в ходе исследований, установлена на основании количественной и качественной обработки собранного материала и его статистических значений.
Результаты диссертационной работы обсуждены на: Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Приволжского федерального округа, Казань, 2015; конкурсе на лучшую научную работу студентов высших учебных заведений в городе Уфе и Республике Башкортостан, Уфа, 2015; предакселераторе инновационных проектов «Путеводитель по инновациям 2.0», Уфа, 2016; Международном конкурсе работ студентов, аспирантов и молодых ученых «Инновации в агрохимии, ветеринарии, сельском хозяйстве и экологии - 2016», Тамбов, 2016; X Юбилейной Всероссийской научно - практической конференции молодых «», Уфа, 2017; XXVII Международной научно-практической конференции в рамках «Агрокомплекс 2017», Уфа, 2017; XXVIII Международной научно-практической конференции в рамках Агрокомплекс-2018, Уфа, 2018; Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Минсельхоза России Приволжского федерального округа, Казань, 2018.
Внедрение результатов исследования. Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторных занятий на кафедре морфологии, патологии, фармации и незаразных болезней ФГБОУ ВО «Башкирский государственный аграрный университет», на кафедре ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», на кафедре морфологии, патологии животных и биологии ФГБОУ ВО «», а также в ГАУ ипподрома «Акбузат» Республики Башкортостан им. Т. Т. Кусимова.
Публикации.По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ, в том числе в трех журналах, включенных в перечень рецензируемых изданий, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 115 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, заключения, предложения производству и перспективы дальнейших исследований, списка литературы и приложения. В диссертационной работе представлено 8 таблиц, 55 рисунков. Всего использовано 154 литературных источников, в том числе 38 зарубежных авторов.
Диагностика и дифференциальная диагностика миокардиодистрофии у спортивных лошадей
Для постановки правильного диагноза, требуется сравнение данных анамнеза, клинических исследований, лабораторных исследований и результатов специальных исследований.
В. Х. Василенко выделяет 3 стадии развития миокардиодистрофии, в соответствии с которыми проявляются симптомы заболевания:
1) Нейрофункциональная стадия, возникает адаптивное напряжение метаболических процессов, направленные на сохранение функции миокарда. При нейрофункциональной стадии миокардиодистрофии наблюдается повышенная утомляемость, по результатам инструментальных исследований сердца, отклонений от нормы не выявлено;
2) Обменно-структурная стадия, характеризуется наличием признаков изменений миокарда, диагностируемых при инструментальной диагностике, в частности на электрокардиограмме;
3) Сердечная недостаточность, характеризуется выраженным нарушением метаболизма миокарда, его структуры и функции, протекает стойкой рефрактерной недостаточностью кровообращения (Я. С. Вайнбаум, Г. В. Варакина, 1970).
Клинический статус лошадей в определенной степени зависит от стадии миокардиодистрофии, хотя стадийность и ее особенности не всегда четко проявляются. Миокардиодистрофия нередко протекает бессимптомно и проявляется только изменениями электрокардиограммы.
Отсутствие в анамнезе перенесенных воспалительных заболеваний миокарда и наличие повышенных физических нагрузок, которым подвергалась и подвергается лошадь, является основанием для предположительного диагноза миокардиодистрофия (Вараксина Ж. В., 2002; Нижегородова О. В., 2006; Орлова Н. Е., 2010; Икаева, К. С., Омаров Р. Ш., 2017.).
При клиническом осмотре Г. В. Домрачев рекомендует в первую очередь обращать внимание на состояние мышечного тонуса. В покое углы тела и автоматические движения не изменены, однако, при работе мышечный тонус понижается, наблюдается увеличение углов тела, качание головы и ушей в такт ударам передних конечностей при движении, "виляние хвостом". В более тяжелых случаях мышечный тонус все время понижен, после работы выступает бедность движений мышц в области головы (опускание губ, малая подвижность ноздрей, редкие движения ушами) (Г. В. Домрачев, 1950; Дощинин В. Л., Комарова И. В., Романов А, В, 1991; Орлова Н. Е., 2010).
Нередко миокардиодистрофия может формироваться и протекать без существенных клинических признаков, сопровождаясь только снижением переносимости физических нагрузок. Описано немало случаев падежа животных при чрезмерной нагрузке, в частности во время соревнований или интенсивных тренировках. В большинстве случаев, в основе внезапной смерти лежит не выявленное ранее заболевание сердца.
Важным этапом диагностики для поставки диагноза миокардиодистрофия является регистрация статистической электрокардиограммы, разработанная М. П. Рощевским в отведениях от конечностей или туловищных отведениях ( М. П. Рощевский, 1978).
Миокардиодистрофия, которая возникает при несоответствии физических нагрузок функциональным способностям сердца, на ЭКГ проявляется в неспецифических изменениях конечной части желудочкового комплекса -сегмента ST и зубца Т.
По данным С. В. Барабанова, Л. Н. Щелковской в I и во II отведениях зубец Т должен положительным, в III отведении может быть положительным, отрицательным или двухфазным. По данным разных авторов нормальные величины амплитуды зубца Т различны. Н. А. Судаков приводит следующие данные: амплитуда зубца Т в I отведении равна 0,16 мВ, во II отведении 0,32 мВ, в III отведении 0,3 мВ. По данным других авторов амплитуда зубца Т не имеет нормативных значений и изменяется в зависимости от величины R, при этом амплитуда зубца Т не должна превышать амплитуды зубца R. Отклонения сегмента ST вверх или вниз от изолинии не должны превышать 0,5 мм (Никулин И. А., Шумилин К. О., Зернов К. О., 2006; Шестакова А. Н., Копылов С. Н., 2007).
Болезни сердца, от которых необходимо дифференцировать миокардиодистрофию: миокардит, перикардит, эндокардит, миокардиодегенерация имеют свои специфические клинические и электрокардиографические проявления отличные от симптомов миокардиодистрофии (Иноземцева И. Е., 1987). Поскольку от правильной оценки дистрофии миокарда вследствие физического перенапряжения зависит ее рациональная терапия, дифференциальная диагностика ее крайне важна.
Для установления причин развития миокардиодистрофии от физического перенапряжения используют функциональные пробы: пробу с субмаксимальной физической нагрузкой, а так же фармакологические пробы - пробу с нагрузкой хлорида калия, пробу с атропином, обзиданом, изадрином.
Проба с субмаксимальной физической нагрузкой применяется для ранней диагностики миокардиодистрофии, дифференциальной диагностики ее причин, определения прогноза заболевания и оценка лечебного действия многих медикаментов.
Пробу с искусственной гиперкалиемией назначают в основном при наличии изменений конечной части желудочкового комплекса.
Калиевая проба является специфической для миокардиодистрофии физического перенапряжения. Проба с нагрузкой калием рассматривается, как положительная, если под влиянием 5-6-8 г прием калия внутрь натощак происходит нормализация или значительное уменьшение нарушений фазы реполяризации на электрокардиограмме. Начало реакции на гиперкалиемию отмечается через 30 минут. Максимальный ответ на гиперкалиемию при приеме калия внутрь отмечается через 60 минут (Кушаковский М. С., Медведева К. Н., 1972; Г. А. Симонян, Ф. Ф. Хисамутдинов, 1990; С . А. Позов, 2003; А. А. Худолеев, О. Г. Сапожникова, В. А. Оробец, 2009).
Следует обратить внимание на взаимосвязь содержание К+ в сыворотке с электрокардиографическими изменениями. В большинстве случаев при положительной калиевой пробе отмечается нормокалиемия. В плане дифференциальной диагностики миокардиодистрофии интересен вопрос, существует ли связь между степенью реакции электрокардиограммы на гиперкалиемию и состоянием симпатико-адреналовой или парасимпатической регуляция. Электрокардиографическую стадию определяют на основании степени изменений конечной части желудочкового комплекса и их обратимости. Заключение о механизме нарушения реполяризации делают на основании результатов функциональных проб. При оценке сократительной функции выделяют: высокую адаптацию к тренировочным и соревновательным нагрузкам, снижение адаптации, переадаптацию (Челышев А. А., 1974; Копылов С. Н., Ж. В. Вараксина, А. Н. Шестакова, 2000; Maksymovych I., 2014).
Формулируя диагноз, необходимо стремиться к более полной характеристике миокардиодистрофии. Однако полнота заключения зависит то возможностей и условий обследования и поэтому не должна строго регламентироваться (Икаева К. С., Омаров Р. Ш., 2017).
Фармакологическая эффективность глицирризиновой кислоты
Одним из направлений исследований В области новых лекарственных форм является создание комплексов фармакологически активных веществ в целях получения пролонгированных полимерных лекарств или увеличения специфической активности действующею начала.
Глицирризиновая кислота – это основной тритерпеновый гликозид корней солодки, являющийся одним из лидирующих природных соединений. Химическое название — 20-Карбокси-11-оксо-30-норолеан-12-ен-3-ил-2-О--D-глюкопирануронозил-альфа-D-глюкопиранозидуроновая кислота.
Глицирризиновая кислота является действующим веществом лекарственного растения и основным биологически активным компонентом экстракта корней солодки голой и уральской (Базекин Г. В., Исмагилова А. Ф., 2010).
В настоящее время в клинической практике применяются глидеринин, глицерам, фосфоглив, а также различные медицинские препараты, содержащие производные глицирризиновой кислоты. Солодковый корень является вполне доступным сырьем и используются для лечения язвенных болезней, пародонтита, туберкулеза легких, при заболеваниях мочевого пузыря и дыхательных путей, а также при интоксикациях, связанных е простудными и некоторыми инфекционными заболеваниями. Известно, что гликозиды солодки -ГК и глицерретовая кислота и их производные обладают широкой биологической активностью. Глицирризиновая кислота является антагонистом ацетилхолина, гистамина и других биогенных аминов, участвующих в аллергических реакциях (Балтина А. Л., Сердюк Н. Г., Краснова Л. В., 1994; Базекин Г. В., Исмагилова А. Ф., 2010).
Молекулы глицирризиновой кислоты состоят из агликона и гликозидной цепи. Обилие полярных групп гидрокс-и карбоксильных групп обуславливает способность гликозидов как к самоассоциации в сложные структуры, так и образованию комплексов (клатратов) с органическими молекулами, среди которых основной интерес представляют лекарственные препараты. В результате клатрирования отмечены случаи усиления у фармаконов вторичных фармакологических свойств, а также появление новых свойств. Наряду с широкой биологической активностью глицирризиновая кислота обладает очень низкой токсичностью и не дает нежелательных побочных эффектов, ее применяют для снижения побочного токсического действия основного препарата и для усиления его фармакологического действия. Глицирризиновая кислота пролонгирует рекальфикацию плазмы и время свертывания тромбина и фибриногена. Следовательно, она перспективна для применения при патологических процессах в сердце, сопровождающихся воспалительными и некротическими изменениями миокарда (Хисамутднова Р. Ю., 2007).
В настоящее время в клинической практике применяются различные медицинские препараты, содержащие производные глицирризиновой кислоты, получаемые из корня солодки (Толстиков Г. А., Мышкин В. А., 1996).
Глицирризиновая кислота является растительным селективным ингибитором тромбина; снижает повышение сывороточного уровня маркерных ферментов (креатинфосфаткиназы, лактатдегидрогеназы, аспартатаминотрансферазы) в сыворотке крови, препятствует снижению содержания в миокарде гликогена и повышению содержания общих липидов, активации перекисного окисления липидов и снижению антиоксидантной активности сыворотки крови, улучшает электрокардиографические показатели, перспективна для применения при патологических процессах в сердце, сопровождающихся воспалительными и некротическими изменениями миокарда, в частности, при миокардитах и инфаркте миокарда (Толстиков Г. А., Балтина Л. А., Гранкина В. П., 2007).
Доказана антиаритмическая, противоаллергическая, противовирусная и противовоспалительная активность глицирризиновой кислоты. Глицирризиновая кислота способна подавлять повышение уровня глюкозы крови натощак и инсулина, снижает толерантность к глюкозе. Количество побочных реакций, наблюдаемых при применении глицирризиновой кислоты, невелико. Также, глицирризиновая кислота может прямо влиять на работоспособность сердца и играет роль в защите миокарда и венечных сосудов при кардиоваскулярных заболеваниях. Следовательно, глицирризиновая кислота является средством, заслуживающим внимания при рассмотрении стратегии лечения заболеваний сердца (Балтина А. Л., Сердюк Н. Г., Краснова Л. В., 1994; Хисамутднова Р. Ю., 2007). Установлен, антиатерогенный эффект у нового комплексного соединения симвастатина с глицирризиновой кислотой — симваглизина. Механизм которого связан с ингибированием З-гидрокси-З-метилглутарил-коэнзим А редуктазы (Стахнёва Е. М., 2009).
Исследования глицидипина (комплекса нифедипина с глицирризиновой кислотой в молеулярном составе 1:4), показали его высокую гипотензивную и антиаритмическую активность в сочетании с безвредностью применения (Хвостов М. В., 2009).
Интерес к производным глицирризиновой кислоты вызван высокой и разнообразной биологической активностью и низкой токсичностью (Базекин Г. В., Исмагилова А. Ф., 2010).
Сладковатый вкус солодковому корню придает тритерпеновый гликозид – глицирризиновая кислота, присутствующая в корнях в виде смешанной калиево-кальциево-магниевой соли, состав которой зависит от вида корней и места произрастания. Анализ различных образцов корней показывает, что среднее значение для соли составляет K0,6 Mg0,5 Ca0,2 глицирризиновая кислота.
Содержание глицирризина в корнях солодки колеблется от 2 до 24 %.
На территории стран СНГ произрастает около 12 видов солодкового корня. Род Glycyrrhiza разделяется на 2 секции: солодок настоящих и солодок ложных. К секции настоящих солодок относят 5 видов, к секции ложных – 8 видов. В СНГ произрастают 4 вида из секции настоящих солодок и 3 вида из секции ложных (Балтина А. Л., Сердюк Н. Г., Краснова Л. В., 1994; Базекин Г. В., Исмагилова А. Ф., 2015).
В качестве основного сырья для получения глицирризиновой кислоты из видов настоящих корней солодок представляют 4 вида: солодка голая (Glycyrrhiza glabra L.) и с. уральская (Gl. uralensis Fisch.), с. Коржинского (Gl. Korshinskyi Grig.) и с. шиповатая (шероховатая) (Gl. aspera Pall) семейства бобовых (Leguminosae). Официальные источники глицирризиновой кислоты в России и СНГ- корни и корневища солодки голой и солодки уральской. Корни и корневища солодки голой являются основным сырьем, из которого получают глицирризиновую кислоту с 1843 г. Солодка голая (гладкая)- многолетнее травянистое растение высотой до 1-1,5 м из семейства бобовых (Leguminosae) порядка Fabaceae. Лекарственным сырьем являются корни.
Глицирризиновая кислота в дикорастущей солодке составляет от 9,1 до 22,5 % и зависит от многих факторов, таких как влажность, солевой состав, степень засоления, механический состав почвы.
Различные органы солодок содержат различные количества глицирризиновой кислоты. Надземная (зеленая) часть солодки голой (листья и стебли) практически не содержит глицирризиновая кислота, цветках и семенах обнаружены небольшие количества глицирризиновой кислоты (0,097 и 0,3 % соответственно). Максимальное количество глицирризиновой кислоты содержится в основных корнях солодки голой в период созревания плодов. Содержание глицирризиновой кислоты в надземных органах солодки уральской достигает 0,58-1,26 %. Содержание глицирризиновой кислоты и других биологически активных веществ в подземных органах солодки носит сезонный характер и зависит от типов почв и места произрастания растения . Содержание глицирризиновой кислоты в корнях солодки уральской колеблется от 9,2 до 10,9 % на боровых песках и составляет 8,9-10 % на солонцах. Условия местообитания также существенно влияют на накопление ценных веществ в солодковом корне. Для медицинских целей заготавливают корни и корневища растения.
Биосинтез глицирризиновой кислоты происходит в надземной части солодки, что было показано с помощью радиоактивных предшественников- 214С ацетата и 214С-мевалоната. Там же образуется агликон- глицирретовая кислота по общему для тритерпеноидов изопреновому правилу, а также глюкуроновая кислота, входящая в состав углеводной цепи гликозида. Транспорт гликозида из листьев в корни, в которых он накапливается, сопровождается дезацетилированием и замена глюкозы и галактозы, обнаруженных в листьях, на глюкуроновую кислоту. На накопление ГК в корнях существенно влияет возраст растений. Так, 1-2х-летние корни с. уральской содержат 2-3 % ГК, 4-8ми-летние-4-7,8 %, 10-11ти-летние-6,9-9,3 %.
Гистологическая и гистохимическая картина миокарда крыс через 30 дней после применения адреналиновой пробы повреждения миокарда
Далее, через 30 дней после проведения опыта, остальные крысы были декапитированы, чтобы увеличить срок наблюдения и посмотреть морфологию миокарда в отдаленные сроки в контрольной и опытных группах.
После проведения опыта через 30 дней в I опытной группе после воздействия глицирризиновой кислоты на фоне применения адреналина в реактивных зонах миокарда наблюдали рыхлую волокнистую соединительную ткань, в виде тонких прожилок, которая проникала в эндомизий и перимизий, практически не изменяя функционального синцитиального строения и векторной направленности сердечных волокон. Это могло указывать на сохранение прежней функциональной активности миокарда, что согласуется с физиологическими методами исследования.
В миокарде не обнаруживались очаги воспалительно-клеточной инфильтрации. Гистопластических процессов в данный момент в миокарде не происходило.
Реакция со стороны кровеносных сосудов спокойная: признаков спазма или дилятации не отмечалось. В просвете сосуда обнаруживались форменные элементы крови, тромбоз и сладж эритроцитов не обнаруживались.
После применения адреналина во II опытной группе, где применяли адреналин, через 30 дней были выявлены многочисленные зоны кардиосклероза левого желудочка. В миокарде отмечались признаки разрастания аваскулярной плотной волокнистой соединительной ткани.
Также выявлялась воспалительно-клеточная и макрофагально фибробластическая инфильтрация, клетки Аничкова. В сосудах микроциркуляторного русла обнаруживался сладж эритроцитов. То есть через 30 дней в миокарде не затухали пластические процессы, связанные с ремоделяцией миокарда.
Обнаруживались очаги обширного очагового кардиосклероза с жировым перерождением (рисунок 27).
Часто встречались зоны с плотной волокнистой соединительной тканью, образованной на месте погибших кардиомиоцитов. Причем кардиомиоциты располагались в толще плотных пучков коллагеновых волокон, что может спровоцировать вторичную волну некроза, связанную с механическим давлением на них окружающего коллагена и прогрессированием кардиосклероза. Выявлялись признаки выраженного периваскулярного склероза, утолщения сосудистой стенки за счет гиперплазии гладкомышечных клеток. Данное состояние может привести к стенозу и редукции кровеносных сосудов.
Патоморфологические изменения были зафиксированы в миокарде левого желудочка, преимущественно в мышечной стенке основания и средней трети сердца. В области верхушки сердца воспалительных явлений и склеротических не зафиксировано.
Подсчет клеток производили в 22-и полях зрения каждого блока каждого образца (до формирования устойчивой дисперсии) при увеличении 200. На парафиновых срезах осуществлялся подсчет площади, занимаемой коллагеновыми волокнами при окраске по Ван-Гизону в левом желудочке – в зоне наиболее подверженной патоморфологическим преобразованиям.
При количественном определении степени фиброза в сердцах экспериментальных животных выявлено, что в группе 2 площадь разрастания коллагеновых волокон занимала 67218±19804 мкм2. В опытной группе 1 площадь разрастания коллагеновых волокон занимала8019 ± 3883 мкм2, что в 8,4 раз меньше (рисунок 30).
Диагностические и лечебно – профилактические мероприятия при миокардиодистрофии у спортивных лошадей с применением глицирризиновой кислоты
Диагноз миокардиодистрофия у спортивных лошадей установили комплексно: по специфическим клиническим признакам, данным электрокардиографии, гематологическим и биохимическим анализам крови.
Данные клинических исследований: вялость, понижение аппетита, работоспособности, понижение мышечного тонуса, расстройство периферического кровоснабжения (снижение артериального и повышение венозного давления (частое переступание конечностями), ночные отеки в области подгрудка.
Данные анализа электрокардиограмм: неполная АВ блокада, снижение амплитуды зубцов, малый вольтаж зубца R при сравнительно большом зубце Т, деформация зубца Р, Т. В дифференциальном отношении миокардиодистрофию лошадей дифференцировали от миокардита и миокардиофиброза. При миокардиодистрофии в отличие от миокардита общее состояние животного меньше изменено, температура тела нормальная, нет болезненности сердечной области, частота сердечных сокращений соответствует верхним пределам физиологических колебаний или несколько увеличена по сравнению с выраженной тахикардией при миокардите. Если для миокардита характерны аритмии сердца вследствие нарушения функции возбудимости (экстрасистолия, мерцательная аритмия) то для миокардиодистрофии – аритмии от нарушения функции проводимости (блокада синуса). При миокардите застойные отеки развиваются быстро в тяжелых случаях заболевания резко выражены, а при миокардиодистрофии они развиваются медленнее, выражены слабее, часто имеют перемежающийся характер.
После обоснования диагноза мы провели ряд ветеринарно-зоотехнических мероприятий, направленных на оздоровление спортивных лошадей. Животных перевели на легкую работу. Кормовой рацион сбалансировали по содержанию и соотношению основных питательных веществ. Лошадям стали включать в рацион легкопереваримые углеводистые корма (морковь, нарубленную кормовую свеклу), минеральные подкормки, содержащие основные микро – и макроэлементы.
Животным назначили тетравит, внутримышечно по 10 мл один раз в 7 дней в течение трех недель.
После согласования с главным ветеринарным врачом ипподрома увеличили время активного моциона животных до одного часа.
В ходе исследований, нами было проведено изучение влияния глицирризиновой кислоты на больных животных. Больные животные были разделены на три опытные и контрольную группу по 6 лошадей в каждой. При формировании групп учитывали стадию развития миокардиодистрофии, возраст и клинико-физиологическое состояние. В течение опыта животные содержались в аналогичных условиях. Лошадям I опытной группы выпаивали глицирризиновую кислоту в дозе 50 мг/кг ; II опытная группа получала глицирризиновую кислоту в дозе 75 мг/кг; III опытная группа получала глицирризиновую кислоту в дозе 25 мг/кг; IV опытной группе применяли стандартную схему лечения. Дача глицирризиновой кислоты осуществлялась в течение 14 дней.
Глицирризновая кислота обладала кардиопротекторным действием. В результате проведенного лечения у животных I группы обнаружили повышение аппетита уже на 2-3 сутки, улучшение работоспособности - на 4 день, по сравнению с другими животными. Животные стали более активны, в результате повышения их мышечного тонуса. При исследовании кожи у выздоравливающих лошадей было отмечено увеличение ее эластичности.
Шерсть исследуемых животных стала блестящей, волосы стали плотно прилегать к коже и перестали быть ломкими. Ночные отеки у лошадей исчезли на 3-4 дни после применения глицирризиновой кислоты.
Артериальный пульс у лошадей снизился до средних показателей и составлял от 28 до 39 ударов в минуту. Повысилось и артериальное кровяное давление.
При анализе электрокардиограммы было обнаружено увеличение вольтажа зубца R, уменьшение деформации зубца Т, интервала P – Q.
Гематологические и биохимические исследования крови лошадей в конце проведенного лечения подтвердили нормализацию обмена веществ у лошадей.
Из таблицы 5 видно, после проведенного лечения во всех опытных группах, кроме контрольной, величина зубцов и продолжительность интервалов находится в пределах физиологической нормы. Наиболее лучший показатель в I опытной группе, где глицирризиновую кислоту назначали в дозе 50 мг/кг.
Анализ данных показывает, что введение в организм спортивных лошадей глицирризиновой кислоты в дозе 50 мг/кг (I опытная) демонстрирует тенденцию увеличения количества эритроцитов в 1,34 раза (на 2,71012/л) по сравнению с интактными лошадьми. Наибольшая концентрация гемоглобина установлена у лошадей I опытной группы - 142,8 г/л, что превышает таковые показатели у лошадей контрольной группы, II опытной группы и III опытной группы в 1,2 раза (на 20,6 г/л), в 1,07 раза (на 9,6 г/л) и в 1,0 раза (на 0,4 г/л).
При этом очевидно и достоверное увеличение в I опытной группе концентрации гематокрита по сравнению с контролем в 1,6 раза (на 15,8%) (Р0,05), в т.ч. в 1,5 раза (на 12,5%) и 1,4 раза (на 9,0%) по сравнению с II опытной и III опытной группами лошадей.
Аналогичная тенденция наблюдается и по содержанию в крови лошадей лейкоцитов: их содержание у лошадей I опытной группы составляет - 9,5109/л, что является нормой для данного вида животных. По сравнению с контролем у лошадей I опытной группы количество лейкоцитов увеличилось в 1,9 раз (на 4,4109/л), во II понизилось на 0,9 раза (на 0,4109/л), в III опытной группе повысилось 1,0 раз (на 0,4109/л). Количество лимфоцитов в крови у лошадей всех опытных групп демонстрирует тенденцию достоверного увеличения по сравнению с контролем. В I опытной группе содержание лимфоцитов увеличивается в 3,2 раз (на 3,1109/л) (Р0,05). Во II опытной группе содержание лимфоцитов увеличивается в 1,9 раз (на 1,3109/л) (Р0,05). Во III опытной группе содержание лимфоцитов увеличивается в 2,3 раз (на 1,8109/л) (Р0,05).
Повышение уровня лимфоцитов в крови говорит об усилении специфического иммунитета лошадей, поскольку лимфоциты являются основным исполнительным звеном в проявлении клеточной и гуморальной защиты организма. В картине лейкограммы установлено, что количество нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов в течение всего срока исследований изменялось незначительно и находились в пределах физиологической нормы. Подобная динамика наблюдалась и при исследовании количества тромбоцитов в крови лошадей всех групп.
Таким образом, полученные данные указывают о положительном влиянии глицирризиновой кислоты на организм лошадей, больных миокардиодистрофией. Глицирризиновая кислота в дозе 50 мг/кг, оказывает наиболее стимулирующее влияние на эритропоэз в 1,34 раза, по сравнению с контрольной группой. При применении глицирризиновой кислоты в дозе 50 мг/кг нормализуется гематокрит и концентрация гемоглобина 1,2 и 1,6 раза соответственно. Введение в организм лошадей глицирризиновой кислоты стимулировало лейкопоэз.