Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время, несмотря на значительные успехи в разработке эффективных методов биотехнологии получения эмбрионов in vitro, остается нерешенной проблема создания систем дозревания ооцитов и развития эмбрионов, наиболее приближенных к их условиям завершения мейоза, оплодотворения и предимплан-тационного эмбриогенеза in vivo. Многочисленные исследования, проведенные в этой области, посвящены изучению влияния различных биологически активных веществ (гормонов, факторов роста и т.д.) на полноценное созревание яйцеклеток,подбору их концентраций и времени введения в системы культивирования ооцитов. Однако подобные исследования не позволяют стандартизировать условия завершения мейоза на основе введения в культу-ральную среду всех этих многочисленных факторов, регулирующих мейоз в организме. Вот почему все больше исследователей (Tellez-Martinez М.С., 1994; Sun F.J., 1994) возвращается к идее использования в качестве среды для дозревания ооцитов фолликулярной жидкости (ФЖ), как модели наиболее адекватно отражающей физиологические процессы in vivo. С другой стороны, систему ткань фолликула — ФЖ можно оценить как максимально характеризующую взаимодействие структурных элементов фолликула и продуктов их секреции, и с этой точки зрения ее использовать в качестве модели изучения процессов мейоза и раннего эмбриогенеза.
Цель и задачи исследований. Цель наших исследований состояла в создании системы дозревания и оплодотворения ооцитов на основе использования в качестве модели культуральной среды жидкости и ткани фолликулов. В соответствии с поставленной целью решали следующие задачи:
— выяснить характер влияния интактной и термически обработанной гомологичной ФЖ из фолликулов диаметром 15—18 мм на завершение мейоза и оплодотворение ооцитов коров in vitro;
изучить эффект совместного использования ткани и жидкости фолликулов (в качестве системы дозревания яйцеклеток) на созревание ооцитов и раннее развитие эмбрионов;
провести цитоморфологическую характеристику эмбрионов коров, полученных в условиях применения структурных элементов фолликула и ФЖ;
изучить содержание мембрансвязанного Са в ооцитах и эмбрионах;
сравнить концентрацию пролактина (ПРЛ), как одного из гипофизарных гормонов, выполняющих гонадотропную функцию, в нативной ФЖ и подвергшейся высокотемпературному воздействию (при 56С и 100С).
Научная новизна. Впервые показана возможность оплодотворения ооцитов коров, созревших в 100% гомологичной ФЖ. Выявлен положительный эффект введения ткани фолликула в ФЖ на созревание и оплодотворяе-мость ооцитов. Показано, что использование термически обработанной ФЖ (30 мин при 56С, 20 сек при 100С) не оказывает отрицательного влияния на скорость ядерного созревания и частоту дегенерации хромосом, оплодотво-ряемость ооцитов и раннее развитие эмбрионов.
Практическая значимость. Разработан способ дозревания и оплодотворения ооцитов коров в 100% ФЖ. Показана возможность совершенствования разработанного способа путем введения добавок, в частности, ткани фолликулов.
Апробация работы. Основные результаты исследований доложены и обсуждены на отчетных сессиях аспирантов (СПГАУ, 1993 — 1994), на 1-й Международной научной конференции молодых ученых и специалистов (Киев, 1994), на 2-й Международной научной конференции "Актуальные проблемы биологии в животноводстве" (Боровск, 1995).
Публикации. По теме исследований опубликовано 4 работы.
Объем и структура диссертации. Диссертация со-
стоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и предложений, списка использованной литературы, включающего 146 источников, в т.ч. 101 иностранный. Работа изложена на 97 страницах машинописного текста и содержит 14 таблиц, 10 рисунков, 6 микрофотографий.