Мониторинг нежелательных эффектов препаратов на основе фипронила и перметрина и их фармакокоррекция Смыслова Полина Юрьевна

Содержание к диссертации

Введение

2. Обзор литературы 10

2.1. Современный ассортимент синтетических пиретроидов и фенилпиразолов 10

2.2. Противопаразитарная терапия в ветеринарной медицине с использованием фипронила и перметрина в форме капель на холку и инсектоакарицидных ошейников 17

2.3. Фармако- и токсикодинамика противопаразитарных препаратов при накожном нанесении 21

2.4. Токсические и нежелательные эффекты препаратов на основе фипронила и перметрина 26

2.5. Фармакокоррекция токсических и нежелательных эффектов препаратов на основе фипронила и перметрина 35

2.6. Заключение к обзору литературы 38

3. Собственные исследования 39

3.1. Материалы и методы исследования 39

3.2. Нежелательные эффекты препаратов на основе фипронила и перметрина в форме капель на холку и ошейников 51

3.2.1. Морфобиохимические изменения в крови крыс при контакте с инсектоакарицидным ошейником Rolf Club premium для собак 51

3.2.2. Морфобиохимические изменения в крови крыс при профилактической обработке инсектоакарицидными препаратами Дана Ультра и Деликс 55

3.2.3. Морфобиохимические изменения в крови собак при длительном контакте с фипронилом и перметрином в составе инсектоакарицидного ошейника Rolf Club premium 65

3.2.4. Морфобиохимические изменения в крови собак при профилактической обработке инсектоакарицидными препаратами Дана Ультра и Деликс 77

3.2.5. Клиническое проявление нежелательных эффектов фипронила и перметрина у крыс и собак 93

3.3. Определение содержания фипронила и перметрина в органах и тканях животных после однократной профилактической обработки 98

3.4. Фармакокоррекция нежелательных эффектов препаратов на о снове фипронила и перметрина 101

3.4.1. Морфобиохимические изменения в крови крыс, обработанных фипронилом и перметрином, после коррекции Тималином и Гепатоветом 101

3.4.2. Морфобиохимические изменения в крови собак, обработанных фипронилом и перметрином, после коррекции Тималином и Гепатоветом 111

4. Обсуждение результатов исследования 120

5. Заключение .125

6. Выводы .127

7. Практические рекомендации 130

8. Список принятых сокращений 131

Литература 132

• Современный ассортимент синтетических пиретроидов и фенилпиразолов
• Морфобиохимические изменения в крови крыс при профилактической обработке инсектоакарицидными препаратами Дана Ультра и Деликс
• Клиническое проявление нежелательных эффектов фипронила и перметрина у крыс и собак
• Морфобиохимические изменения в крови собак, обработанных фипронилом и перметрином, после коррекции Тималином и Гепатоветом

Введение к работе

Актуальность темы. Одной из актуальных проблем современной ветеринарной медицины является поиск экономически доступных, безопасных и эффективных средств профилактики и лечения инвазионных болезней животных. Паразиты способны вызывать тяжелые патологические состояния у животных, а также являются переносчиками возбудителей опасных болезней, особенно блохи и клещи (М. Ш. Акбаев, А. А. Водянов, Н. Е Косминков, 1998; Ю.С. Балашов, 1998; Э.Б. Кербабаев, 1998; Ю.М. Тохов, 2006). Эктопаразитозы вызывают у животных зуд, беспокойство, воспаление кожи, снижение резистентности организма, что приводит к трансформации полезных качеств и даже гибели и, как следствие, наносит значительный экономический ущерб (Г. М Уркхарт, Дж. Эрмур, 2005; У. Дж Форейт, 2012).

В настоящее время на ветеринарном фармацевтическом рынке представлено большое количество инсектоакарицидных препаратов для лечения и профилактики эктопаразитарных болезней мелких домашних животных. Среди них широко распространены капли на холку, ошейники, аэрозоли, шампуни. Одними из самых популярных форм инсектакарицидных препаратов являются капли на холку и ошейники на основе фипронила и/или перметрина (Н.В. Данилевская , Н.В. Николаев, 2005; А.В. Панфилов, 2009). Многочисленные исследования направлены на изучение эффективности данных препаратов (С.А. Веденеев , 2003; Дж В. Макколл, Р. Альва, Дж. П. Ирвин с соавт., 2004; О.В Головина, 2007; A.A. Зверев , С.А. Шемякова., В.Ю. Абрамов, 2008; А.В. Панфилов, 2009), однако не уделяется особого внимания нежелательным эффектам и отдаленным последствиям их применения.

Степень разработанности проблемы. В настоящее время имеется большой объем данных по исследованию токсических свойств перметрина и фипронила. Описана клиническая картина острой и хронической интоксикации (P. Holmes, 1992, 1993; E.W. Hughes, 1997; E.J. Wozniak., 1997; Д.К. Пламб, 2002; M.S. Roberts, S.E. Cross, M.A. Pellett, 2002; R. Morgan, 2003; R.C. Gupta, 2007; N.M. Sutton, N. Bates, A. Cambell, 2007; J.E. Maddison, 2008; J. A. Romich, 2010; T. R. Miwari, M. Sinha, 2010; G. D. Osweiler, , 2011). Кроме того имеются данные о кумулятивных свойствах данных химических соединений (R.C. Myers, S.M. Christopher 1992; P. Birckel, P. Cochet, P. Bernard, 1996; D.J. Brayden, 2003). Однако не описаны гематотоксические эффекты перметрина и фипронила при нанесении на кожу методом "спот-он" и с применением инсектоакарицидных ошейников, а также не изучено их накопление в организме животных при данных способах применения, что свидетельствует об актуальности проведенных исследований.

Цель и задачи исследования. Цель исследования - провести мониторинг нежелательных эффектов препаратов на основе фипронила и перметрина,

используемых в форме ошейников и капель на холку, и разработать способы их фармакокоррекции.

Для достижения цели были определены следующие задачи:

1. Установить морфобиохимические изменения в крови при однократной обработке инсектоакарицидными препаратами на основе фипронила и перметрина в форме капель на холку и ошейников на модели лабораторных крыс.

2. Выявить морфобиохимические изменения в крови собак при однократной обработке инсектоакарицидными препаратами на основе фипронила и перметрина в форме капель на холку и ошейников.

3. Провести мониторинг клинических проявлений нежелательных эффектов фипронила и перметрина у собак и крыс.

4. Определить содержание фипронила и перметрина в органах и тканях животных после однократной профилактической обработки.

5. Разработать способы фармакокоррекции нежелательных эффектов фипронила и перметрина при профилактической инсектоакарицидной обработке животных.

6. Разработать рекомендации для специалистов ветеринарной службы «Нежелательные эффекты фипронил- и перметринсодержащих препаратов и их фармакокоррекция».

Предмет и объект исследования. Объектом исследования являлись белые беспородные половозрелые крысы, служебные собаки породы немецкая овчарка в возрасте от двух до пяти лет и собаки - компаньоны разных пород в возрасте от двух до пяти лет. Предмет исследования - нежелательные эффекты препаратов на основе фипронила и перметрина в форме полимерных изделий и капель на холку.

Научная новизна результатов исследования. В отличие от проведенных ранее исследований по изучению токсичности фипронила и перметрина установлены их гематотоксичекие эффекты при накожном нанесении, отмечено клиническое проявление нежелательных эффектов в виде местных кожных аллергических реакций, обострения хронического дерматита и развития септических процессов в области контакта с инсектоакарицидными ошейниками, выявлены метаболические нарушения в организме собак и крыс при однократном использовании препаратов, а также доказано длительное сохранение их остаточных количеств в организме животных при использовании в форме капель на холку и инсектоакарицидных ошейников. Разработан способ фармакокоррекции гематото- и гепатотоксических эффектов фипронила и перметрина.

Теоретическая значимость работы. В результате проведенных исследований доказано кожно-резорбтивное действие перметрина и фипронила. Расширены сведения по токсикодинамике препаратов при использовании в форме капель на холку и инсектоакарицидных ошейников. При профилактической

противопаразитарной обработке собак и крыс перметрином и фипронилом в процессе мониторинга установлены гематотоксические, гепатотоксические и иммунотоксические эффекты, отмечено клиническое проявление нежелательных реакций данных препаратов, доказано длительное сохранение их остаточных количеств в организме животных, обоснована возможность фармакокоррекции выявленных изменений.

Практическая значимость работы. На основании экспериментальных данных установлено, что профилактическая противопаразитарная обработка животных перметрином и фипронилом вызывает изменения биохимических показателей сыворотки крови и гемограммы. Доказано, что при накожном нанесении данные химические соединения резорбируются в системный кровоток, о чем свидетельствует определение их остаточных количеств в крови и почках животных. Клиническое проявление нежелательных эффектов в виде септических реакций свидетельствует о снижении иммунной реактивности животных. Показано, что введение Тималина в дозе 1,5 мг/кг внутримышечно один раз в день в течение семи дней приближает количество лейкоцитов к контрольным значениям, снижает гепатотоксический эффект фипронила и перметрина, стимулирует эритропоэз и нормализует тромбоцитопоэз. Введение Гепатовета по 0,5 мл на крысу и 4 мл на собаку с массой тела 30-40 кг два раза в день в течение семи дней нивелирует гепатотоксический эффект препаратов.

Для специалистов ветеринарной службы изданы методические рекомендации «Нежелательные эффекты фипронил- и перметринсодержащих препаратов и их фармакокоррекция», которые одобрены секцией Центра научного обеспечения АПК при Министерстве сельского хозяйства и продовольствия Омской области (протокол № 10 от 14.10.2016).

Для студентов, обучающихся по специальности 36.05.01 «Ветеринария» и аспирантов, обучающихся по направлению подготовки 36.06.01-«Ветеринария и зоотехния» разработана лекция «Противопаразитарные средства».

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Выполненная диссертация соответствует паспорту научной специальности 06.02.03 – Ветеринарная фармакология с токсикологией, а именно п.1 «Механизм действия лекарственных веществ на организм животных, его отдельные системы и функции (фармакодинамика)»; п.6 «Зависимость фармакологического действия лекарственных средств от их дозы, формы применения, метода введения с учетом видовых особенностей животных, их возраста, пола, физиологического состояния, условий содержания и кормления»; п.8 «Токсичность лекарственных веществ для животных и характер их побочного действия, разработка показания и противопоказания для применения в ветеринарной практике, а также методов устранения побочных эффектов».

Апробация и реализация результатов научных исследований.

Апробация. Основные материалы диссертационной работы были доложены и

одобрены на Х международной научно-практической конференции «Бъдещите изследвания - 2014» (София, 2014 г.); III международном конгрессе ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии», посвященном 25-летию проведения (Ленинград, ЛВИ, 1989 г.) регулярных, ежегодных научно-практических форумов по ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации (Санкт-Петербург, 2014 г.); международной научно-практической конференции «Фармакологические препараты в профилактике и лечении болезней животных», посвященной 110-летию со дня рождения академика ВАСХНИЛ И.Е. Мозгова (Москва, 2016 г.); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарной науки и практики», посвященной 70-летию Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института (Краснодар, 2016 г.).

Реализация. Результаты научно-исследовательской работы внедрены в центре кинологической службы УВД России по Омской области, а также используются в учебном процессе в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего образования «Омский государственный аграрный университет имени П.А.Столыпина».

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 2 из них – в журналах, рекомендованных ВАК («Ветеринария Кубани», «Актуальные вопросы ветеринарной биологии»), в которых отражены основные результаты экспериментальных исследований.

На защиту выносятся следующие положения:

7. Препараты на основе фипронила и перметрина при нанесении на кожу резорбируются в системный кровоток и вызывают изменения морфобиохимических показателей крови у животных.

8. Пик концентрации перметрина и фипронила в органах и тканях животных отмечается через двадцать четыре часа после нанесения на кожу, а остаточные количества перметрина сохраняются в течение четырех недель, фипронила - в течение восьми недель после применения методом "spot-on".

3. Для коррекции нежелательных эффектов фипронила и перметрина
показано курсовое применение Тималина и Гепатовета после
противопаразитарной обработки животных.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах компьютерного текста и включает разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, заключение, выводы, практические рекомендации. Список литературы включает 192 источника, в том числе 97 иностранных авторов и 95 отечественных. Работа иллюстрирована 40 таблицами и 34 рисунками.

Современный ассортимент синтетических пиретроидов и фенилпиразолов

В настоящее время для борьбы с эктопаразитами мелких домашних животных чаще всего используют препараты на основе фипронила, относящегося к группе фенилпиразолов, и синтетических пиретроидов, в частности перметрина, с добавлением синергистов, регуляторов роста насекомых, репеллентов и инсектоакарицидов других групп.

Основная часть популярных инсектоакарицидных препаратов содержит в своем составе фипронил и выпускается в форме капель на холку, на втором месте стоят спреи и ошейники (табл. 1). По мнению многих авторов, фипронил характеризуется высокой безопасностью (Я. Ремся, Б. Теннант, 2005; П. Талкотт, 2005; В.А Степанов., М.В. Арисов, Е.С. Смирнова 2014) и эффективностью (С.А. Веденеев , 2003; A.A. Зверев , С.А. Шемякова, В.Ю. Абрамов, 2007; С.В. Енгашев, Н.А. Кошкина, В.И. Колесников, 2009; Н.А. Кошкина, М.В. Павлова, М.Н. Васильченко с соавт., 2011; М.В. Арисов, Е.Н. Индюхова, 2014). Я. Ремси и Б. Теннант (2005) считают, что фипронил может быть рекомендован щенкам и котятам с двухдневного возраста, а J. M. Patrick (2009) с соавторами не ограничивают применение фенилпиразолов для беременных и лактирующих самок, однако, по данным других источников, его применение начинается с восьминедельного возраста и не рекомендуется больным, ослабленным, беременным и лактирующим животным (П. Талкотт, 2005; S. Koch, S. Torres, D. Plumb,2012).

Фипронил был синтезирован в 1978 году. В России применение препаратов на основе фипронила началось с 1995 года (С.А. Рославцева, 2000).

Фипронил [5-амино-[2,6-дихлор-4-(трифторметил)фенил]-4-[(1R,S) (трифторметил)сульфинил]-1H-пиразол-3-карбонитрил] относится к группе фенилпиразолов (M. Peterson, P. Talcott, 2013), которая включает в себя помимо фипронила пирипрол (капли на холку «Прак-тик»). В чистом виде представляет собой белый кристаллический порошок с плесневелым запахом, термически стабилен, при рН 5-7 не гидролизируется, при рН 9 растворяется в воде. Фипронил - это контактный и кишечный инсектоакарицид широкого спектра, обладает умеренным системным действием (С.Я. Попов, 2003). Механизм действия заключается в блокировании рецепторов гамма-аминомасляной кислоты, в результате чего передача нервных импульсов нарушается, что приводит к судорогам, параличу и смерти членистоногих (D. Hainzl, L.M. Cole, J.E. Casida, 1998; L.R. Hovda, S.B. Hooser, 2002; T.A. Wismer, 2003; П. Талкотт, 2005; D. Plumb,2008; S. Koch, 2012 ). Особенность механизма действия позволяет использовать фипронил против популяций паразитов, резистентных к ФОС, синтетическим пиретроидам и карбаматам.

Фипронил считается безопасным инсектоакарицидом для ветеринарного применения, однако LD50 для крыс при оральном введении 93 - 102мг/кг, дермальная 2000 мг/кг; для собак при введении в желудок 160 - 640 мг/кг, кур -11,3 мг/кг, для кроликов при нанесении на кожу - 354 мг/кг (Н. Н. Мельников, 1995; В.П. Толоконников, В.И. Трухачев, И.О. Лысенко, 2004; В.А. Зимченко, 2005). При пероральном поступлении фипронил можно считать высокотоксичным для теплокровных животных (В.П. Толоконников, В.И. Трухачев, И.О. Лысенко, 2004). Препараты на основе фипронила относятся ко второму и третьему классам опасности для человека (Государственный каталог пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации, 2012).

Перметрин [(1RS)-цис,транс-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2 диметилциклопропанкарбоновой кислоты 3-феноксибензиловый эфир] - светлая маслянистая жидкость или кристаллы со слабым запахом, растворимость в воде 10мг/кг (В.П. Толоконников, В.И. Трухачев, И.О. Лысенко, 2004). Относится к группе синтетических пиретроидов второго поколения (W.N. Aldridge, 1982; M. Peterson, , 2013) - сложные эфиры галоидзамещённой хризантемовой кислоты и 3 феноксибензилового спирта (В.М. Лубошникова, Г.Н. Зайцева 2007), D.D. Bowman (2014) относит его к третьему поколению . Препарат синтезирован в 1971 году, в практику защиты растений стал внедряться в 1979 (А. Хусид, О. Нефедов,1988; А.В. Ткачев 2004). Перметрин - кишечно-контактный инсектоакарицид с высокой скоростью наступления токсического эффекта, обладает репеллентным действием. Механизм действия заключается в воздействии на потенциал-зависимые натриевые каналы мембран нервных клеток, что приводит либо к повторному разряжению, либо к деполяризации мембраны, при этом происходит поступление натрия по каналам в течение длительного времени и задержка при закрытии «входа инактивации». (П. Шаркези, 1987; S. Hansen, D. Villar, W. Buck, 1994; R. W. Gfeller, S. P. Messonnier, 1998; Г.Г. Галяутдинова, М.Я. Тремасов, 2004; С. Йин, 2008; Дж. Д. Роудер, 2008; S.R. Hansen, 2001; G. D. Osweiler, L. R. Hovda, A. G. Brutlag et al., 2011; S. Koch,2012; M. Peterson,2013). Перметрин считают безопасным инсектоакарицидным препаратом. В различных источниках LD50 варьирует для крыс от 540 до 2690 мг/кг при оральном введении (S.R. Hansen, 2001). По данным EPA (U.S. Environmental Protection Agency, 2006), LD50 для самцов крыс составляет 3580 мг / кг, для самок - 2280 мг / кг при оральном введении, а при нанесении на кожу кроликов LD50 2000 мг/кг. Перметрин относится к третьему классу опасности при попадании внутрь, на слизистые оболочки и к четвертому - при нанесении на кожу (ГОСТ 12.1.007-76).

Применение монопрепаратов в настоящее время считается недостаточно эффективным для профилактики и лечения паразитарных болезней (Дж В. Макколл, Р. Альва, Дж П. Ирвин и др., 2007; Н.В. Данилевская, А.А. Дельцов, М.И. Кузнецова, 2013; М.В. Арисов, Е.Н. Индюхова, 2014), поэтому используют комбицации инсектоакарицидов и/или с добавлением репеллентов, регуляторов роста насекомых, синергистов.

Репелленты - это средства, отпугивающие насекомых и клещей. К ним относятся экстракты растительных масел таких растений, как цитронелла, мангоза, а также химические соединения: диметилфталат, диэтилтолуамид. Данные вещества считаются относительно безопасными (Г.Ю. Тихинов, В.Н. Суворов, А.Г. Тихонов, 2011), однако J. M. Patrick с соавторами (2009) считают, что некоторые эфирные масла растений являются токсичными для кошек.

Регуляторы роста насекомых - относительно новые средства в борьбе против блох и клещей. По механизму действия они являются аналогами гормонов роста насекомых (ювенильного, личиночного), ингибиторами хитина или антигормональными препаратами. Благодаря их действию прерывается нормальный рост насекомых. S-метопрен, ювемон и перипроксифен являются аналогами ювенильного гормона, они подавляют эмбриогенез и метаморфоз, уничтожают блох и клещей на личиночной стадии путем связывания с рецепторами гормона роста и их активизации. Благодаря этому происходит появление огромных нежизнеспособных личинок, нарушается переход их в стадию имаго (В. Свобода, М. Свобода, 1995; П. Талкотт, 2005). Дифлубензурон нарушает образование хитина, тем самым препятствует выходу личинки из яйца, но он эффективен только в отношении членистоногих, у которых ростовые процессы сопровождаются синтезом хитина (Е.А. Степанычева, А.П. Сазонов, 2010). Регуляторы роста насекомых могут использоваться как самостоятельные средства для борьбы с эктопаразитами (D.R. Young, P.C. Jeannin, A. Boeckh, 2004; M.W. Dryden, V. Smith, P.A. Payne et al. 2005), однако они не эффективны в отношении имаго, поэтому при сильной инвазии взрослыми особями их необходимо сочетать с инсектицидами, эффективными против данной стадии развития насекомых и членистоногих (В. Свобода, М. Свобода, 1995; M.W. Dryden, H.R. Perez, D.M. Ulitchny, 1999; M.C. Cadiergues, J. Steffan, O. Tinembart et al. 1999; L. Maynard, P. Houffschmitt, B. Lebreux, 2001).

Синергисты - это вещества, повышающие инсектоакарицидные свойства других активных компонентов, а также увеличивающие их токсичность за счет замедления метаболизма основного вещества (С. Йин, 2008; Дж. Д. Роудер, 2008; G. D. Osweiler, L. R. Hovda, A. G. Brutlag et al., 2011). Примерами синергистов являются дикарбоксимид и пиперонилбутоксид или MGK 264.

Для улучшения эффективности противопаразитарных препаратов используют комбинации инсектоакарицидов. К фипронилу или перметрину, помимо регуляторов роста насекомых, репеллентов, синергистов, добавляют неоникотиноиды (тиаметоксам, имидаклоприд, динотефуран); синтетические пиретроиды (цифлутрин, D-цифенотрин, этофенпрокс); макроциклические лактоны (ивермектин, моксидектин, эприномектин, аверсектин С); фосфорорганические соединения (фентион); празиквантел, бензилбензоат и другие (табл.1).

Морфобиохимические изменения в крови крыс при профилактической обработке инсектоакарицидными препаратами Дана Ультра и Деликс

Наличие и характер токсических и нежелательных эффектов препаратов зависит от многих факторов : длительности контакта с токсическим веществом, дозы, препаративной формы, возраста и физиологического состояния животных.

Исследование проведено на 15 клинически здоровых, беспородных белых крысах с массой тела 250-270 г, в возрасте 6 месяцев и 15 клинически здоровых, беспородных белых крысятах с массой тела 45-60 г, в возрасте 1,5 месяцев. Было сформировано 6 групп по 5 животных в каждой: 1 группа — взрослые особи (контроль); 2 группа (опытная) — взрослые особи, которым наносили капли на холку Дана Ультра для собак; 3 группа (опытная) — взрослые особи, которым наносили капли на холку Деликс для собак; 4 группа—молодняк (контроль); 5 группа (опытная) — крысята, которым наносили капли на холку Дана Ультра; 6 группа (опытная) — крысята, которым наносили капли на холку Деликс. Животным 2-й и 5-й групп, следуя указаниям в инструкции, наносили капли на холку Дана Ультра в дозе 37,5 мг/кг, животным 3-й и 6-й групп - Деликс в дозе 16,25 мг/кг, контрольным животным 1-й и 4-й групп наносили растительное масло в область холки. Через четыре недели был осуществлен забор крови.

После однократной обработки инсектоакарицидными каплями Дана Ультра для собак через четыре недели у животных 2-й опытной группы было установлено статистически значимое увеличение количества лейкоцитов на 74,5%. При этом отмечено повышение абсолютного содержания нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов и эозинофилов. В процентном отношении доля моноцитов увеличилась на 20%, эозинофилов -на 52,4% (табл. 6).

Как видно из таблицы 7, в лейкограмме животных 1-й опытной группы отмечается снижение процента сегментоядерных нейтрофилов на фоне достоверно значимого увеличения лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов.

Количество лейкоцитов в циркулирующей крови имеет важное диагностическое значение. Благодаря их фагоцитарной активности, участию в формировании иммунного ответа, реализуются не только антимикробные, но и антитоксические механизмы защиты. Активацию лейкопоэза у экспериментальных животных можно рассматривать как адекватный ответ на антигенную стимуляцию (А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл, 2000), о чем свидетельствует увеличение количества эозинофилов в периферической крови. Очевидно, нанесение инсектоакарицидов на кожу не исключает их резорбтивного действия.

У животных 2-й опытной группы отмечено статистически значимое повышение уровня гемоглобина и гематокрита на фоне незначительного увеличения количества эритроцитов, при этом установлено снижение общего белка в сыворотке крови на 15,2% в том числе снижение альбуминов на 24,2% (табл. 6, 8), что свидетельствует о наличии гиперосмолярных нарушений водно–электролитного обмена в организме крыс опытной группы (В.В. Михайлов, 2001).

При однократном нанесении на кожу взрослых крыс инсектоакарицидных капель Деликс для собак через четыре недели у животных 3-й опытной группы было установлено статистически значимое увеличение на 63,5% абсолютного содержания эозинофилов (табл. 6,7), что может указывать на повышение уровня гистамина в крови (Г. Тведтен, Г. Торнвальд, М. Уиллард, 2004) при резорбции действующего вещества препарата.

При этом отмечено увеличение содержания тромбоцитов на 23,5%, снижение среднего объема тромбоцитов на 11,9% и, как следствие, снижение тромбокрита на 25,6% (табл. 6). Такие изменения указывают на возможность снижения ангиотрофической функции тромбоцитов и повышение их способности к агрегации и адгезии (В.В. Михайлов, 2001).

Результаты исследований указывают на снижение общего белка в сыворотке крови на 17,1% за счет снижения альбуминов на 38,1% и увеличения глобулинов на 31,1% в опытной группе крыс по сравнению с контролем (табл. 8). Наличие гипопротеинемии с гиперглобулинемией (Г. Тведтен, Г. Торнвальд, М. Уиллард, 2004) указывает на возможную связь белков плазмы с перметрином, что ведет к нарушению коллоидно осмотического равновесия и увеличению вязкости крови (В.В. Михайлов, 2001; Г. Тведтен, Г. Торнвальд, М. Уиллард, 2004). Диспротеинемия характерна для патологии печени (В.Н. Денисенко, Е.А. Кесарева, 2011).

При нанесении на холку взрослых крыс инсектоакарицидных капель ДанаУльтра и Деликс во 2-й и 3-й опытных группах отмечается снижение активности аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы (табл. 8). В данном случае фипронил и перметрин, входящие в состав исследуемых препаратов, действуют как ингибиторы АлАТ и щелочной фосфатазы, что необходимо учитывать при диагностических исследованиях крови. Снижение уровня креатинина на 16,2% в группе крыс, подвергавшихся обработке каплями Деликс, свидетельсвует о белковом дисбалансе в организме животных, который влечет за собой дополнительный расход белка из мышечной ткани (M.G. Kerr,2002)

После накожного нанесения препарата ДанаУльтра для собак молодняку крыс через четыре недели у животных 5-й опытной группы установлено статистически значимое увеличение лейкоцитов на 133,9%, при этом повысилось количество нейтрофилов на 133,3 %, лимфоцитов - на 141%, моноцитов - на 166,5%, однако в процентном отношении увеличилась только доля моноцитов на 66,6% (табл. 9). Данные результаты аналогичны изменениям в крови взрослых крыс (табл. 6,7), однако количество эозинофилов у молодняка крыс после контакта с препаратом не изменилось, а процент сегментоядерных нейтрофилов снижен незначительно. Гранулоциты молодых животных обладают более сильной фагоцитарной активностью, чем взрослых, но способность иммунной системы распознавать и уничтожать чужеродные соединения ниже. Многие функции эозинофилов изучены недостаточно (П.Е. Игнатов, 2002; M.J. Day, R.D. Schultz, 2011).

Клиническое проявление нежелательных эффектов фипронила и перметрина у крыс и собак

Анализ клинических проявлений нежелательных эффектов препаратов, содержащих фипронил и/или перметрин, проводили на базе ветеринарного центра ООО "Петан". За период с апреля по октябрь 2013 гг. 18 животных было подвергнуто обработке препаратами указанных групп, клинически выраженные нежелательные эффекты выявлены у следующих собак - компаньонов декоративных пород:

1. Стаффордширский терьер, кобель, кастрированный, 5 лет. В анамнезе аллергические реакции на куриное мясо и хлорсодержащие средства бытовой химии.

2. Стаффордширский терьер, сука, стерилизованная, 4 года. В анамнезе хронический холецистит и панкреатит.

3. Чихуахуа, кобель, кастрирован, 3 года. Клинически здоров.

4. Беспородный, кобель, 1,5 месяцев. Клинически здоров.

5. Китайская хохлатая, сука, 8 лет. Клинически здорова.

6. Карликовый пинчер, кобель, 11 лет. В анамнезе дисплазия тазобедренных суставов.

7. Американский бульдог, сука, стерилизованная, 5 лет. В анамнезе БАД, пиодерма, пододерматит. Пододерматит отмечался исключительно в зимнее время, предположительно причиной данного заболевания служили химические вещества для борьбы с гололедом.

8. Мопс, сука, 2 года. Клинически здорова.

Собаки под номерами 2 и 5 носили инсектоакарицидный ошейник Rolf Club premium; 3 и 6 подвергались обработке инсектоакарицидными каплями Дана Ультра; 1 и 8 подвергались обработке инсектоакарицидными каплями Деликс. Собаке под номером 7 хозяйка применяла инсектоакарицидный ошейник Rolf Club premium и при прогулках в лесу дополнительно наносила на конечности содержащий 0,25% фипронила спрей Фронтлайн. Профилактической обработке по данной схеме собака подвергалась впервые. Собака под номером 4 была доставлена на прием в клинику с признаками отравления после применения ошейника Чистотел с нарушением рекомендаций, указанных в инструкции по применению.

Модельные опыты по изучению клинического проявления нежелательных эффектов фипронила и перметрина были проведены на лабораторных крысах, из которых были сформированы 4 группа по 3 головы в каждой: 1 группа - интактные животные; 2 группа - крысы, обработанные инсектоакарицидными каплями Деликс; 3 группа - крысы, обработанные инсектоакарицидными каплями на холку Дана Ультра; 4 группа - крысы, подвергавшиеся воздействию фипронила и перметрина в составе инсектоакарицидного ошейника Rolf Club premium. На протяжении срока действия препаратов, а именно в течение 30 дней при использовании капель на холку и 60 дней при применении ошейника, проводили визуальное наблюдение.

У собак под номером 1, 2, 3 и 6 отмечали покраснение, слабый зуд и шелушение кожи в области контанка с инсектоакарицидами, после тщательного мытья с шампунем и отмены препарата данные симптомы отсутствовали.

У собаки под номером 5 через семь суток после применения препарата отмечалась аллергическая реакция, сопровождающаяся зудом, дерматитом и эритемой (рис. 33).

Владелец собаки под номером 4 обратился в клинику с жалобами на сниженный аппетит и угнетенное состояние животного. Из анамнеза следовало, что сутки назад владелец надел щенку инсектоакарицидный ошейник Чистотел, при этом пренебрег требованиями инструкции по применению, в частности не учел возрастные ограничения и дозировку препарата. Длина ошейника не была сформирована по размеру и составляла 45 см. При клиническом осмотре температура тела составляла 38,5С, отмечали угнетение, тремор мышц конечноcтей. При проведении биохимического анализа крови было выявлено снижение активности щелочной фосфатазы, а в лейкограмме увеличение относительного содержания лимфоцитов на фоне снижения доли нейтрофилов. Остальные показатели находились в пределах физиологических колебаний. Владельцу щенка было рекомендовано снять инсектоакарицидный ошейник, помыть животное с небольшим количеством шампуня для щенков с целью удаления инсектицидов с поверхности кожи и шерсти. В качестве сорбента был назначен Полисорб ВП в дозе 0,2г/кг 3 раза в течение суток. Для повышения детоксикационной функции печени был введен 1 мл Эссенциале Н струйно внутривенно. С целью снижения интоксикации был использован витаминно-аминокислотный комплекс Витам в дозе 5мл/кг подкожно. При повторном приеме животного через сутки температура тела составляла 38,6 С, тремор не отмечался, щенок был активный, аппетит восстановился. По словам владельца, через 6 часов после оказанной ветеринарной помощи состояние щенка нормализовалось, а через 8 часов восстановился аппетит. При повторном биохимическом анализе крови через 7 дней уровень щелочной фосфатазы был в пределах физиологической нормы, изменений в лейкограмме не отмечали.

У собаки под номером 7 после 14-дневного контакта с инсектоакарицидным ошейником Rolf Club premium и двукратной обработки конечностей спреем Фронтлайн с интервалом 7 суток отмечалось обострение пододерматита (рис. 34) в летний сезон, что не случалось ранее, по словам хозяйки.

Морфобиохимические изменения в крови собак, обработанных фипронилом и перметрином, после коррекции Тималином и Гепатоветом

Исследование проведено на 20 клинически здоровых собаках породы немецкая овчарка, в возрасте от двух до пяти лет, привитых по возрасту, подвергнутых дегельминтизации по плану. По принципу аналогов животных разделили на 4 группы: 1- собаки, подвергавшиеся воздействию 5% раствора фипронила в составе инсектоакарицидных капель Дана Ультра в дозе 4,5 мл для собак с массой тела от 20 до 40 кг; 2 - собаки, подвергавшиеся воздействию препарата Дана Ультра с последующей фармакокоррекцией Тималином в дозе 1,5 мг/кг; 2 – собаки, подвергавшиеся воздействию 5% раствора перметрина в составе инсектоакарицидных капель Деликс в дозе 2 мл для собак с массой тела от 20 до 40 кг; 4 - собаки, подвергавшиеся воздействию препарата Деликс с последующей фармакокоррекцией Тималином в дозе 1,5 мг/кг; 4 – собаки, подвергавшиеся воздействию препарата Дана Ультра с последующей фармакокоррекцией Гепатоветом в дозе 4 мл на голову; 5 – собаки, подвергавшиеся воздействию препарата Деликс с последующей фармакокоррекцией Гепатоветом в дозе 4 мл на голову.

Собакам наносили инсектоакарицидные капли на холку согласно инструкции, перед этим за тридцать суток проводили забор крови для определения фоновых показателей, через неделю после обработки проводили коррекцию Тималином и Гепатоветом, далее через четыре недели после нанесения препаратов Дана Ультра и Деликс проводили забор крови для определения гематологических и биохимических показателей.

После профилактической однократной обработки собак фипронилом, входящим в состав инсектоакарицидных капель Дана Ультра, установлено статистически значимое повышение общего количества лейкоцитов при увеличении абсолютного содержания гранулоцитов. В процентном отношении возросла доля гранулоцитов. Также установлено повышение таких показателей, как средняя концентрация гемоглобина в эритроците, среднее содержание гемоглобина в эритроците, средний объем тромбоцитов, средний показатель анизоцитоза, из биохимических показателей отмечено увеличение уровня АлАТ, общего белка и альбуминов в сыворотке крови (табл 34, 35). Однако при проведении рангового дисперсионного анализа по Фридману с последующим парным сравнением с использованием непараметрического критерия Вилкоксона и построением диаграмм размаха было установлено, что действительно достоверно значимыми изменениями гематологических показателей являются увеличение количества лейкоцитов, в том числе абсолютного содержания гранулоцитов, а также среднего показателя анизоцитоза, уровня АлАТ и общего белка крови (табл. 17,19,20).

После семидневной коррекции Тималином у собак отмечается снижение уровня лейкоцитов на 44,4%, лимфоцитов - на 50%, гранулоцитов - на 45,2% по сравнению с собаками, обработанными препаратами Дана Ультра без коррекции. Установлено также повышение количества эритроцитов на 20,3%, уровня гемоглобина на - 6,4%, гематокрита - на 7%, снижение среднего показателя анизоцитоза на 29,1%, а также увеличение количества тромбоцитов на 18,9% (табл. 34), что свидетельствует о способности пептидов тимуса стимулировать эритропоэз и тромбоцитопоэз (Т. Е. Белокриницкая, Б. И. Кузник, 1993).

При обработке собак фипронилом повышаются уровни АлАТ и белков крови. После семидневной коррекции Тималином установлено снижение уровня АлАТ на 15,2%, общего белка - на 13,6%, при этом уровень альбуминов увеличился на 22,3%, а глобулинов снизился на 39,1%, что свидетельствует о гепатопротективных свойствах пептидов тимуса (табл. 35).

После профилактической обработки собак инсектоакарицидным препаратом на основе перметрина (Деликс) установлено увеличение доли лимфоцитов, моноцитов, гранулоцитов, в том числе эозинофилов в лейкограмме, а также среднего содержания гемоглобина в эритроците и средней концентрации гемоглобина в эритроците, среднего показателя анизоцитоза, при проведении биохимического анализа сыворотки крови выявлено повышение уровней АлАТ, общего белка, глобулинов и снижение уровня щелочной фосфатазы (табл. 21, 22, 23).

Однако при проведении рангового дисперсионного анализа по Фридману с последующим парным сравнением с помощью непараметрического критерия Вилкоксона и поправкой Бонферрони было установлено статистически значимое увеличение средней концентрации гемоглобина в эритроците, доли эозинофилов в лейкограмме и уровня АлАТ, а также снижение щелочной фосфатазы в сыворотке крови (табл 24). Средняя концентрация гемоглобина в эритроците без изменения других эритроцитарных индексов не рассматривается как адекватный показатель нарушения гемоглобинообразования (M.G. Kerr, 2002; М.А. Медведева, 2009).

После коррекции Тималином в течение семи суток в крови собак отмечено снижение уровня лейкоцитов на 13,1% и относительного содержания лимфоцитов на 22%, что приблизило показатели к контрольным цифрам. На фоне применения Тималина установлено увеличение количества эритроцитов на 20%, уровня гемоглобина - на 15,9%, гематокрита - на 15,1%, количество тромбоцитов увеличилось на 38,1%, а тромбокрит повысился на 36,5%, средняя концентрация гемоглобина в эритроците снизилась на 3,8%, что приблизило данный показатель к контрольным значениям (табл. 36).

После однократной обработки собак препаратом Деликс установлено достоверное увеличение доли эозинофилов в лейкограмме, семидневная коррекция Тималином приближает данный показатель к уровню контроля. При этом отмечается статистически значимое увеличение доли лимфоцитов в лейкограмме (табл. 37).